分枝杆菌属及检验
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证明
• 全球性卫生问题
– 是艾滋病高发区人群的首要死因
• 世界防治结核病日
– 3月24日
结核分枝杆菌 －－形态染色
• 细长略弯，丝状或分 枝生长
• 无芽孢，无鞭毛，无 荚膜,无菌毛
• 革兰染色阳性，不易 着色
• 抗酸染色阳性,菌体被 染成红色
• 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～ 4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的 细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特 别是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包围在肽聚糖层
※液体培养基：形成菌膜， 有毒株呈索状生长
• 初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏 （Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、 甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑
制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质
生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般 2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜 状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中
教学大纲
• 掌握内容
– 结核分枝杆菌主要生物学性状；致病物质及 致病机制；结核菌素试验原理及应用；微生 物学检查法
• 了解内容
– 麻风分枝杆菌的形态染色特性、致病性及微 生物学检查法
• 全世界有1/3人口，19亿人已感染结核分枝杆 菌，15岁以下儿童感染者达1.8亿，每秒种就有一 人感染，全球有2 000万活动性患者，新发病例 1 000万人，每年有300万人死于结核，死于结核的 人数超过AIDS疾病、腹泻及热带病死亡人数的总 和，是传染病死亡最多的。近年来AIDS的发病率 上升，伴随结核病上升。我国解放前结核严重流 行，发病率大于1%，有十痨九死之称，建国后人 民生活水平提高，卫生条件的改善，抗痨药物的 发现，特别是积极开展防痨工作，接种BCG，发 病率和死亡率大大降低，但近年来有抬头趋势。
分枝杆菌属主要特点
• 是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的 杆菌。无鞭毛、无芽胞、无荚膜
• 主要特点：细胞壁含有大量脂质，主要 为分枝菌酸。
• 具有抗酸性，革兰染色阳性,但不易着色， 常用抗酸染色。
• 专性需氧营养要求特殊，大多数生长 缓慢。
• 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物 质，所致疾病呈慢性。
• 结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别 在于结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而
牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆
菌与非结核分枝杆菌有重要意义。结核分枝杆菌 大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性; 非结核 分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验
检查方法是将浓的细菌悬液置68 ℃水浴加温
长期用药容易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性 <5%。
变异性
• 结核分枝杆菌可发生形态、菌落、毒力、 免疫原性和耐药性等变异。卡介苗（BCG） 就是Calmette和Guerin 2人(1908)将牛结核分 枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基 中经13年230次传代而获得的减毒活疫苗株， 现广泛用于预防接种
62～63 ℃ 15min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌
对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死， 可用于结核患者衣服、书等的消毒。
四怕
乙醇 湿热 紫外线
四不怕
干燥 酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱（4% NaOH) 有抵抗力 碱性染料 青霉素等抗生素
抗痨药物（链
霉素、异烟肼、
利福平等）
的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐 尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以5% 石炭酸复红 加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。
若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他 细菌和背景中的物质为蓝色。
结核分枝杆菌－－培养特性
• 生长条件： 专细性胞需内氧寄、生在菌8、%-最12适%p的HC6O.42～环6境.8中、可营刺养激要其求生高长、。
• 结核分枝杆菌对酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱 （4% NaOH) 有抵抗力，15min不受影响。可在分 离培养时用于处理有杂菌污染的标本和消化标本 中的粘稠物质。结核分枝杆菌对1：13 000孔雀绿 有抵抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长。结核
分枝杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、 乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等敏感，但
可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一 般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固 体培养的阳性率高数倍。
结核分枝杆菌－－生化反应
• 生化反应不活泼，不发酵糖类，耐热触酶试
验－（非结核分枝杆菌＋） ；
人型结核分枝杆能合成烟酸，烟酸试验＋， 硝酸盐还原+，烟酰胺酶试验+。脲酶试验 ＋，中性红试验+。
分枝杆菌属及检验
分枝杆菌是一类细长略带弯曲的杆菌， 含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势 而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌。
人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲 分枝杆菌对人类致病。人型结核分枝杆菌 感染的发病率最高。
由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病 率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康 的一个严重的全球性公共卫生问题。
分枝杆菌属种类
结核分枝杆菌
结核分枝杆菌复合群 牛分枝杆菌、
非洲分枝杆菌
田鼠分枝杆菌
分
枝
光产色分枝杆菌
杆
非典型分枝杆菌
菌
暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌
属
迅速生长分枝杆菌
麻风分枝杆菌
结核分枝杆菌
Mycobacterium tuberculosis Tubercle bacilli
流行病学
• 结核病的病原菌 – 1882年德国细菌学家郭霍（Koch）
培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、孔雀绿等专 性需氧。最适温度为37℃，低于30 ℃不 生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较 高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。 在一般培养基中每分裂1代需时18～24h， 营养丰富时只需5h。
• 生长现象： ※生长缓慢（最快分裂速 度为18小时一代） 所以初 次分离一般2~4周 ※改良罗氏培养基菌落特 征：干燥、米黄色，菌落 粗糙，边缘不整齐， 质地较硬的R型菌落，形似 菜花
20min，然后再加H2O2。 观察是否产生气泡，有 气泡者为阳性。
抵抗力
• 结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感， 在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体 水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘 埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8 个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热
• 全球性卫生问题
– 是艾滋病高发区人群的首要死因
• 世界防治结核病日
– 3月24日
结核分枝杆菌 －－形态染色
• 细长略弯，丝状或分 枝生长
• 无芽孢，无鞭毛，无 荚膜,无菌毛
• 革兰染色阳性，不易 着色
• 抗酸染色阳性,菌体被 染成红色
• 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～ 4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的 细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特 别是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包围在肽聚糖层
※液体培养基：形成菌膜， 有毒株呈索状生长
• 初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏 （Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、 甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑
制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质
生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般 2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜 状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中
教学大纲
• 掌握内容
– 结核分枝杆菌主要生物学性状；致病物质及 致病机制；结核菌素试验原理及应用；微生 物学检查法
• 了解内容
– 麻风分枝杆菌的形态染色特性、致病性及微 生物学检查法
• 全世界有1/3人口，19亿人已感染结核分枝杆 菌，15岁以下儿童感染者达1.8亿，每秒种就有一 人感染，全球有2 000万活动性患者，新发病例 1 000万人，每年有300万人死于结核，死于结核的 人数超过AIDS疾病、腹泻及热带病死亡人数的总 和，是传染病死亡最多的。近年来AIDS的发病率 上升，伴随结核病上升。我国解放前结核严重流 行，发病率大于1%，有十痨九死之称，建国后人 民生活水平提高，卫生条件的改善，抗痨药物的 发现，特别是积极开展防痨工作，接种BCG，发 病率和死亡率大大降低，但近年来有抬头趋势。
分枝杆菌属主要特点
• 是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的 杆菌。无鞭毛、无芽胞、无荚膜
• 主要特点：细胞壁含有大量脂质，主要 为分枝菌酸。
• 具有抗酸性，革兰染色阳性,但不易着色， 常用抗酸染色。
• 专性需氧营养要求特殊，大多数生长 缓慢。
• 不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物 质，所致疾病呈慢性。
• 结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别 在于结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而
牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆
菌与非结核分枝杆菌有重要意义。结核分枝杆菌 大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性; 非结核 分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验
检查方法是将浓的细菌悬液置68 ℃水浴加温
长期用药容易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性 <5%。
变异性
• 结核分枝杆菌可发生形态、菌落、毒力、 免疫原性和耐药性等变异。卡介苗（BCG） 就是Calmette和Guerin 2人(1908)将牛结核分 枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基 中经13年230次传代而获得的减毒活疫苗株， 现广泛用于预防接种
62～63 ℃ 15min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌
对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死， 可用于结核患者衣服、书等的消毒。
四怕
乙醇 湿热 紫外线
四不怕
干燥 酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱（4% NaOH) 有抵抗力 碱性染料 青霉素等抗生素
抗痨药物（链
霉素、异烟肼、
利福平等）
的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐 尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以5% 石炭酸复红 加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。
若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他 细菌和背景中的物质为蓝色。
结核分枝杆菌－－培养特性
• 生长条件： 专细性胞需内氧寄、生在菌8、%-最12适%p的HC6O.42～环6境.8中、可营刺养激要其求生高长、。
• 结核分枝杆菌对酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱 （4% NaOH) 有抵抗力，15min不受影响。可在分 离培养时用于处理有杂菌污染的标本和消化标本 中的粘稠物质。结核分枝杆菌对1：13 000孔雀绿 有抵抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长。结核
分枝杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、 乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等敏感，但
可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一 般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固 体培养的阳性率高数倍。
结核分枝杆菌－－生化反应
• 生化反应不活泼，不发酵糖类，耐热触酶试
验－（非结核分枝杆菌＋） ；
人型结核分枝杆能合成烟酸，烟酸试验＋， 硝酸盐还原+，烟酰胺酶试验+。脲酶试验 ＋，中性红试验+。
分枝杆菌属及检验
分枝杆菌是一类细长略带弯曲的杆菌， 含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势 而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌。
人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲 分枝杆菌对人类致病。人型结核分枝杆菌 感染的发病率最高。
由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病 率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康 的一个严重的全球性公共卫生问题。
分枝杆菌属种类
结核分枝杆菌
结核分枝杆菌复合群 牛分枝杆菌、
非洲分枝杆菌
田鼠分枝杆菌
分
枝
光产色分枝杆菌
杆
非典型分枝杆菌
菌
暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌
属
迅速生长分枝杆菌
麻风分枝杆菌
结核分枝杆菌
Mycobacterium tuberculosis Tubercle bacilli
流行病学
• 结核病的病原菌 – 1882年德国细菌学家郭霍（Koch）
培养基含鸡蛋、马铃薯粉、甘油、孔雀绿等专 性需氧。最适温度为37℃，低于30 ℃不 生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较 高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。 在一般培养基中每分裂1代需时18～24h， 营养丰富时只需5h。
• 生长现象： ※生长缓慢（最快分裂速 度为18小时一代） 所以初 次分离一般2~4周 ※改良罗氏培养基菌落特 征：干燥、米黄色，菌落 粗糙，边缘不整齐， 质地较硬的R型菌落，形似 菜花
20min，然后再加H2O2。 观察是否产生气泡，有 气泡者为阳性。
抵抗力
• 结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感， 在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体 水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘 埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8 个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热