菌种报告-黑曲霉

菌种报告—黑曲霉

一、黑曲霉简介

①、黑曲霉（Aspergillus niger）属于半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，曲霉属真菌中的一个常见种。可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等，是重要的发酵工业菌种。

②、培养温度23～28℃，好氧

二、使用注意事项

①、是四类病原微生物，即在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。但由于生长快速，极易通过空气扩散污染环境，对产品的生产检验人员与环境构成威胁。故操作过程要在阳性室生物安全柜中进行。

②、所有的培养物、储存物及其它的废物在释放前，均应121℃，30min湿热蒸汽灭菌。实验结束后，用0.1%的新洁尔灭擦拭台面，照紫外消毒。

菌种保存方案—黑曲霉（Aspergillus niger）

1、实验材料：

器具：-80℃冰箱，2～8℃冰箱，试管，电动助吸器，锥形瓶，恒温培养摇床，1ml移液管，10ml移液管，冷冻管，振荡器，棉塞，接种环，250ml盐水瓶，500ml 盐水瓶

试剂：冻干菌种，改良马丁培养基，改良马丁琼脂培养基，TSA平板，SDA平板，20%甘油，含0.05%（v/v）聚山梨酯80的生理盐水

2、实验步骤：

2.1 菌种复苏和复壮（改良马丁培养基）

2.1.1 将干菌种（0代）按上述步骤转移到装有100ml改良马丁液体培养基的锥形瓶中复苏（第1代），23～28℃摇床震荡培养5天。

2.1.2 用接种环挑起活化后的孢子悬液，划线到改良马丁琼脂斜面复壮，接种10支试管（第2代），23～28℃静置培养5～7天。

2.1.3 向每支试管中加入5ml含0.05%（v/v）聚山梨酯80的生理盐水，反复吹打洗脱孢子。将孢子悬液全部转移至250ml盐水瓶中，2～8℃冻存备用。

2.2 稀释倍数探索

2.2.1 取1ml孢子悬液加入9ml生理盐水中，混匀得10-1管，同法依次稀释至10-6。

2.2.2 取10-3～10-6梯度稀释孢子悬液，1ml涂布SDA平板，各做3个平行。23～28℃静置培养5～7天。

2.2.3 培养结束计数，推算孢子悬液浓度和合适稀释倍数。

2.3 菌种保存

2.3.1 从冰箱中取出孢子悬液，根据孢子悬液初始浓度，用生理盐水稀释至400CFU/ml。

2.3.2 取稀释后孢子悬液加无菌甘油使终浓度为15%混合均匀，孢子悬液浓度为200CFU/ml。分装至冷冻保存管1ml/管。

2.3.3 分装好的冷冻管，置于-80℃冰箱冻存。同时取3支分别涂布SDA平板，置于23～28℃培养计数，以验证冻存效果。

2.3.4 使用时取出冻存管，39℃温水迅速解冻，接种至培养基培养（第3代）。

2.3.5 每季度取3支菌悬液解冻涂布改良马丁琼脂平板，培养计数以验证冻存效果。