石杉碱甲提取工艺研究(1)

浙江大学学报(农业与生命科学版)　28(6):

591～595,2002

Journal of Zhej i ang Un iversity (A gric 1&L ife Sci 1)

收稿日期:2001205230

作者简介:沈生荣(1963—),男,浙江湖州人,博士,教授,主要从事植物有效成分的提取及其生物学活性研究和天然产物的安全性评价Λ

文章编号:100829209(2002)0620591205

石杉碱甲提取工艺研究

沈生荣,于海宁,金超芳,徐月荣

(浙江大学茶学系,浙江杭州310029)

摘　要:系统研究了石杉碱甲的提取工艺Λ系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲Λ结果表明:①pH 对石杉碱甲的存在形态有很大影响;②一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;③活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;④低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲Λ关　键　词:石杉碱甲;提取;纯化;pH ;影响中图分类号:R 282.71 文献标识码:A

SH EN Sheng 2rong ,Yu H ai 2ning ,J I N Chao 2fang ,XU Yue 2rong (D ep t .of T ea S ciences ,Z hej iang U niv .,H ang z hou 310029,Ch ina )

and pur if ication of Huperz i ne A .Journal of Zhejiang U niversity (A gric 1&L ife Sci 1),2002,28(6):5912595

Abstract :T echnique of iso lati on and purificati on of H uperzine A from H uperzia serrata (T hunb )T rev .w as studied in th is paper .To get rid of som e p igm ents and o ther i m purities ,som e of chem ical tech 2niques fo r separati on such as extracti on w ith o rganic acid ,abso rp ti on w ith charco l and re 2crystallizati on w ith ch lo rofo r m w ere emp loyed .T he results suggested that :①pH value seri ously influenced H u 2perzine A in so luti on ;②T here are ideal p rocedures w ith extracti on under the certain environm ent of pH value ;③Charco l p lays an i m po rtant ro le in the p rocess ;④T he m easurem ent of re 2crystallizati on had crucial ro le in p romo ting the purity of H uperzine A .Key words :H uperzine A ;extracti on ;purificati on ;pH ;effect

石杉碱甲(H uperzine A ,简称H up A ),又

名福定碱,是从石杉科石杉属蛇足杉(千层塔)中分离得到的一种天然生物碱,属强效的可逆性乙酰胆碱酯酶(A ChE )抑制剂,对早老性痴

呆症,单纯记忆障碍以及重症肌无力症治疗有显著疗效,且药效持续时间较长,无严重不良反应[1～6],是目前国内外上述病症最有效的药物,深受关注Λ由于它的治疗指数高,且作用时间长,在国际上已被列为第二代胆碱酯酶的抑制剂之一[7～9]Λ但H up A 在自然界中存在量极低,且含有大量杂质,至今国内外有大量研究人员正在探索寻找理想的分离方法Λ曾有人利用溶剂萃取、硅胶柱层析等方法进行分离,虽然能

获得少量产品,但终因费时(一个生产周期超过一个月),得率低(低于百万分之一),难于规模化生产Λ而人工合成品难于获得理想的疗效[10～12]Λ本试验巧妙地利用H up A 在不同pH 值下存在形态的变换特性,系统研究了H up A 高效提取的分离纯化技术,为天然H up A 的批量生产提供了技术支持Λ

1　材料与方法

1.1　材　料

千层塔购于浙江安吉,经鉴定符合药典规定,用前磨成干粉Λ酒石酸、氯仿、氢氧化钠、浓盐酸、三乙醇胺均为国产分析纯试剂,甲醇为色谱纯ΛH up A 纯品由宁波立华制药公司馈赠Λ1.2　分析方法

采用日本岛津L C 210A 型高效液相色谱仪检测H up A ;日本岛津UV 22110型紫外可见分光光度计进行紫外扫描Λ高效液相色谱分析条件如下[13]:

流动相:甲醇 三蒸水 三乙醇胺= 500 1,等比例洗脱,流量为0.8mL m in ;柱温35℃;色谱柱:OD S 2C 18(150mm ×6mm i .d .);灵敏度:0.01aufs ,紫外检测波长:310nm Λ上述条件下的H up A 分离效果如图1

Λ

图1　对照品Hup A 的HPLC 色谱图

F ig .1　H PL C ch rom atogram of H up A standard samp le

2　提取工艺

2.1　提取工艺流程

千层塔干粗粉→①氯仿流浸膏总碱→②萃取除杂→③脱色→④重结晶→成品

2.2　工艺分析

2.2.1　氯仿流浸膏总碱的制备 取千层塔

干燥粗粉,用1%酒石酸溶液浸泡24h ,放出浸液,再加原1 3用量的1%酒石酸液浸提12h ,放出溶液并浓缩,离心分离得上清液,用稀氨水调pH 至弱碱性后用氯仿反复萃取,浓缩氯仿萃取液,并用1%N aOH 水溶液反复萃取,至萃取颜色很淡为止,合并萃取液,用浓盐酸调pH 至弱酸性,再用氨水调pH 至碱性,此液用氯仿反复萃取,合并氯仿相,并浓缩至流浸膏总碱,其H PL C 分析结果如下(图2)

Λ

图2　总碱氯仿溶液的HPLC 色谱图

F ig .2　H PL C ch rom atogram of alkaline m ixture

in ch lo rofo r m

上述提取过程中,氨水浓度及其调节的pH 值影响着石杉碱甲在溶液中的存在形态,以石杉碱甲形成分子态为佳,过多或过少的氨水调pH 值均不利于氯仿的完全萃取,由于该化合物能溶于弱酸性的水中,通过在不同pH 条件下不同形态间的转换,达到去杂浓缩富集石杉碱甲的目的Λ

由图2可知,在所用色谱分析条件下,总碱中的主成分明显,纯度约为15%Λ该步平均回收率约为92%Λ

2.2.2　萃取除杂 总碱氯仿溶液是颜色深暗的粘稠状液体,其中的色素及H PL C 图谱中1号和3号峰是影响其纯度的重要杂质Λ用等体积的碱性蒸馏水萃取,并经适当稀释后的总碱氯仿溶液,水层呈红色透明,经H PL C 分析检验可较多地除去1号杂质峰,但对3号峰影响不大Λ用不同pH 值的氨水溶液萃取总碱的

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浙江大学学报(农业与生命科学版)

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