结合、非结合胆红素的临床价值

准确测定血清中各种不同胆红素组份的浓度，对于协助临床医师进行诊断、治疗和病情监控都具有重要意义。如今利用HPLC已可以详细鉴定血清中各种胆红素组份及其分子形态。

目前大多数临床实验室都采用传统的重氮化合物方法测定总胆红素和直接胆红素指标，并计算出间接胆红素指标。实验室人员和临床医师也习惯于采用术语直接胆红素来表示与葡萄糖醛酸结合的胆红素，而用术语间接胆红素来表示未结合胆红素。然而，由于其测试方法学的局限性，直接胆红素与结合胆红素、间接胆红素与未结合胆红素之间的对应只能是近似的。此外，由于未结合胆红素是经由计算得出的，因而当参与计算的被测组份在测定中的任何变异与差错均可能导致间接胆红素计算结果的明显误差。

Ortho-Clinical Diagnostics的VITROS 950和250临床化学分析系统采用干化学技术，可直接测定总胆红素（TIBL）、结合胆红素（Bc）、未结合胆红素（Bu）三种不同的胆红素组份，并与HPLC分离检定结果相匹配。利用VITROS BuBc测试干片可以直接测定未结合胆红素（Bu），并且对样品的光降解和溶血等干扰因素具有较低的敏感性，因而使其具有较好的分析特异性。这种检测方法的改进为病人的诊断和监护提供了显著的便利。

目录

一、胆红素的组分

二、胆红素的传统检测方法以及VITROS干化学检测方法

1、胆红素的传统检测方法

2、胆红素的VITROS干化学检测方法

三、胆红素的临床效果

四、胆红素的临床应用实例

1、对新生儿用BuBc检测的说明

2、非结合胆红素（B u）升高

3、结合胆红素（B c）升高

4、δ-胆红素检测的临床意义

5、为什么直接和总胆红素不会快速下降

6、真实的结合胆红素优于直接胆红素

一、胆红素的组分

采用传统的重氮化合物方法测定胆红素,可以得到如下指标：

➢总胆红素（T-BIL），测定

➢直接胆红素(D-BIL)，测定

➢间接胆红素(I-BIL= T-BIL－D-BIL)，计算

以前，人们并不了解直接胆红素是结合型的，而间接胆红素是未结合型的。这种区分纯粹是经验性的，并因其与疾病相关而具有临床价值。

如今我们对于血清胆红素组份及其各种存在形式都已非常了解。利用高效液相层析（HPLC）可将胆红素分离成4个组份：

➢Alpha峰，未结合胆红素；

➢Beta峰，单一结合胆红素，通常与葡萄糖醛酸结合；

➢Gamma峰，双重结合胆红素；

➢Delta峰，与白蛋白共价结合的胆红素。

应用Ortho-Clinical Diagnostics的VITROS 950和250临床化学分析系统可测定总胆红素（TIBL）、结合胆红素（Bc）、未结合胆红素（Bu）三种不同的胆红素组份，并可计算得出直接胆红素（D-BIL）、Delta胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)等指标。VITROS检测方法所测定的胆红素组份与经HPLC分离鉴定的胆红素分子类别相符合：

➢总胆红素（TIBL），用TBIL干片测定，包括所有胆红素组份（对新生儿不推荐）

➢结合胆红素（Bc），用BuBc干片测定，单－双葡萄糖醛酸酯胆红素➢未结合胆红素（Bu），用BuBc干片测定，未结合胆红素

➢直接胆红素（D-BIL＝TBIL－Bu），计算，结合胆红素和Delta胆红素➢Delta胆红素(DELB＝TBIL－[Bu+Bc])，计算，白蛋白共价结合的胆红素➢新生儿胆红素(NBIL＝Bu+Bc)，计算，未结合胆红素和结合胆红素

不同的检测方法所测定的胆红素组份的分类对比见下表。

(请见下一页)

表1 —胆红素检测方法与胆红素测定组份的对比

二、胆红素的传统检测方法以及VITROS干化学检测方法

1、胆红素的传统检测方法：

目前大多数临床实验室所采用的胆红素测定技术是基于Jendrassikz和Gróf 在1938年首次提出的重氮化合物方法。该方法依据未结合胆红素在水溶液中的相对不溶性来判定结合与未结合胆红素的组成比例。未结合胆红素不会与重氮化合物试剂反应，除非其中包含一种“加速剂”（在Jendrassikz-Gróf 方法中为咖啡因和安息香酸钠）以增加其溶解度。结合胆红素具有较大的溶解性，可以“直接”与重氮化合物试剂反应而无需加速剂。不含加速剂时，只有结合胆红素参与反应，故检测结果称为“直接胆红素”。含有加速剂时，所有胆红素均参与反应，其结果为“总胆红素”。未结合胆红素通过总胆红素与直接胆红素之间的差值“间接”判定。

从严格意义上看，上述方法只在测量第一个近似值时是正确的，因为即使在没有加速剂时，未结合胆红素也确实参与了反应，尽管非常缓慢。通过选择测定直接胆红素的反应条件可以使未结合胆红素对反应的参与率最小化，但在这些条件下，与结合胆红素的反应也无法完全进行。经过如此交换，对于含有大量未结合胆红素的样品和基本上不含结合胆红素的样品（例如对新生儿而言），进行直接胆红素检测时就会报告含有少量的直接胆红素，而且大多数直接胆红素检测都会低估结合胆红素。为了保证所有结合胆红素完全参与反应，同时避免未结合胆红素参与反应，在调整反应条件（时间、温度、pH、试剂浓度等）方面已经做了许多努力。这种理想状态至今尚未达到。所以，基于溶解度将胆红素区分为直接与间接二个组份始终是一个近似值。

2、胆红素的VITROS干化学检测方法：

HPLC法虽可精确地分析各种分子形态的胆红素组份，但不适用于对胆红素的日常检测。Ortho-Clinical Diagnostics的VITROS 350临床化学分析系统可分别测定总胆红素、结合胆红素、未结合胆红素，它们与HPLC所鉴定的分子类别相符合。

VITROS的胆红素检测方法由2个单独的测试干片组成。VITROS TBIL测试干片采用重氮化合物法测定总胆红素。VITROS BuBc测试干片则通过使用一种媒染剂（一种用于纺织和照相工业，使染料与织物、胶片等固体支持物相结合的物质）技术，同时测定未结合（Bu）与结合（Bc）胆红素。当存在媒染剂时，结合与未结合胆红素的可见光光谱是不同的，因此可以在同一张测试干片上对二者进行测定。

采用VITROS胆红素检测方法时：（见表1）

➢总胆红素（TBIL）包括全部HPLC组份；

➢未结合胆红素（Bu）与HPLC的alpha峰相对应；

➢结合胆红素（Bc）则对应于beta峰与gamma峰之和；

➢TBIL与Bu＋Bc之和的差值对应于HPLC的delta峰。