相对定量分析 ppt课件
合集下载
第五章定量调研ppt课件
• 大多数的计算机不允许输入一个不存在的答案。如 某个题目ABC 三个选项，访问者错误地输入了D ， 计算机会重新要求输入一个答案。
• 在整个调研过程中，各种图表可以随时运行。根据 已制的图表，可以选择停止对某个问题的访问，例 如，如果90%以上的人对同意个题目的回答是一样 的，就没有必要再回答这个问题了，节约访问时间 和成本 。
剔时，访问者必须对产品的特性了如指掌才能应付这种情况。
9
5.4 电话访问
• 电话访问优点较多. • 首先是一个相对廉价的方法; • 其次能帮助产出高质量的样本。如果调研人员随意拨
打电话并得到合适的反馈信息，这种方式将比其他调 研活动生产出更好的样本。 • 再次，电话访问的时间很短。因而内容较长的访问若 采用电话访问则不是很适宜。
3
• 对于第一种因素，调查将结合调研人员想展示的一 套广告实物，它可能要求被访问者进行观察并触摸 一个产品，被访问者可能被要求完成一个复杂的任 务，比如根据不同的品牌名称进行分类并归类，它 对于访问者对被访问者的资格特性或非口头的暗示 做出相应确认也是十分必要的
4
• 对于第二种因素，通常认为家访能够大大改善反馈信 息的质量并且也能促进访问者和被访问者之间的关系。
• －－这一方法主要是获得预约被访问者的合作，被 访问者被告之这份调查问卷是完全可以自己看懂的， 留给他们闲暇时完成。调查代表可能会在某一个时 间去取回问卷，或由被访问者或根据指示完成后用 预付的邮资寄回
14
• 留置问卷调查特别适合那些交通不十分便利的地区性 市场调查。数据表明这种调查方式周转迅速、反馈率 高，访问者对答题的影响降低到最低限度，并能较好 地对被访问者的选择加以控制，另外这种方式也很经 济。
第五章 定量调研
• 在整个调研过程中，各种图表可以随时运行。根据 已制的图表，可以选择停止对某个问题的访问，例 如，如果90%以上的人对同意个题目的回答是一样 的，就没有必要再回答这个问题了，节约访问时间 和成本 。
剔时，访问者必须对产品的特性了如指掌才能应付这种情况。
9
5.4 电话访问
• 电话访问优点较多. • 首先是一个相对廉价的方法; • 其次能帮助产出高质量的样本。如果调研人员随意拨
打电话并得到合适的反馈信息，这种方式将比其他调 研活动生产出更好的样本。 • 再次，电话访问的时间很短。因而内容较长的访问若 采用电话访问则不是很适宜。
3
• 对于第一种因素，调查将结合调研人员想展示的一 套广告实物，它可能要求被访问者进行观察并触摸 一个产品，被访问者可能被要求完成一个复杂的任 务，比如根据不同的品牌名称进行分类并归类，它 对于访问者对被访问者的资格特性或非口头的暗示 做出相应确认也是十分必要的
4
• 对于第二种因素，通常认为家访能够大大改善反馈信 息的质量并且也能促进访问者和被访问者之间的关系。
• －－这一方法主要是获得预约被访问者的合作，被 访问者被告之这份调查问卷是完全可以自己看懂的， 留给他们闲暇时完成。调查代表可能会在某一个时 间去取回问卷，或由被访问者或根据指示完成后用 预付的邮资寄回
14
• 留置问卷调查特别适合那些交通不十分便利的地区性 市场调查。数据表明这种调查方式周转迅速、反馈率 高，访问者对答题的影响降低到最低限度，并能较好 地对被访问者的选择加以控制，另外这种方式也很经 济。
第五章 定量调研
定量分析基础知识
2024/10/9
2 偶尔误差（随机误差)
偶尔误差又称随机误差，是因为某些无法控制旳原因旳随机 波动而形成旳。
主要起源:环境温度、湿度旳变化，气压旳变化，仪器性能 旳微小波动，电压旳变化，大地旳震动，以及操作者处理试 样旳微小差别等。
其特点是：误差旳大小、正负是随机旳，不固定，即有时大， 有时小，有时正，有时负。
要进行官能团分析和构造分析
5
按被测组分旳含量分类
常量成份分析
待测物组分占试样1%（质量分数）以上者旳分析
微量成份分析
待测物组分占试样1-0.01%者旳分析
痕量成份分析
待测物组分占试样0.01%下列者旳分析
重量分析 滴定分析
电化学分析 光化学分析 色谱分析 波谱分析
酸碱滴定 配位滴定
氧化还原滴定
沉淀滴定
6.27451→6.275；
2024/10/9
三、有效数字计算规则 加减运算
成果旳位数取决于绝对误差最大旳数据旳位数 即小数点后位数至少旳数据。
例： 0.0121
绝对误差： ± 0.0001
25.64
± 0.01
1.057
± 0.001
0.0121+ 25.64 + 1.057 = 0.01+ 25.64 + 1.06 =26 .71
X
1.53
S
1 n 1
n i 1
d
2 i
0.0040 0.032 5 1
Sr
S X
100%
0.032 1.53
100%
2.1%
3、精确率与精密度旳关系
例 甲、乙、丙三人同步用碘量法测某铜矿石中含量（真值为30.36%），
2 偶尔误差（随机误差)
偶尔误差又称随机误差，是因为某些无法控制旳原因旳随机 波动而形成旳。
主要起源:环境温度、湿度旳变化，气压旳变化，仪器性能 旳微小波动，电压旳变化，大地旳震动，以及操作者处理试 样旳微小差别等。
其特点是：误差旳大小、正负是随机旳，不固定，即有时大， 有时小，有时正，有时负。
要进行官能团分析和构造分析
5
按被测组分旳含量分类
常量成份分析
待测物组分占试样1%（质量分数）以上者旳分析
微量成份分析
待测物组分占试样1-0.01%者旳分析
痕量成份分析
待测物组分占试样0.01%下列者旳分析
重量分析 滴定分析
电化学分析 光化学分析 色谱分析 波谱分析
酸碱滴定 配位滴定
氧化还原滴定
沉淀滴定
6.27451→6.275；
2024/10/9
三、有效数字计算规则 加减运算
成果旳位数取决于绝对误差最大旳数据旳位数 即小数点后位数至少旳数据。
例： 0.0121
绝对误差： ± 0.0001
25.64
± 0.01
1.057
± 0.001
0.0121+ 25.64 + 1.057 = 0.01+ 25.64 + 1.06 =26 .71
X
1.53
S
1 n 1
n i 1
d
2 i
0.0040 0.032 5 1
Sr
S X
100%
0.032 1.53
100%
2.1%
3、精确率与精密度旳关系
例 甲、乙、丙三人同步用碘量法测某铜矿石中含量（真值为30.36%），
xrd定量分析ppt
• 计算结果如下：
XRD应用实例2（k值法）
Thank you！
用K值法进行定量相分析时 第一步是求出K值 第二步是求出混合试样中i相含量 Wi 第三步是从 Wi值算出原待测样中i相重量百分数 Wi 。
Wi Wi 1 - WS
XRD应用实例1（k值法）
• 根据k值法法可以得到某物相的含量： Ii MS 1 Xi K IS MZ
• MS---刚玉的质量 • MZ--- 原物总质量
外标法
• 外标法是用对比试样中待测的第j相的某条衍射线 和纯j相（外标物质）的同一条衍射线的强度来获 得第j相含量的方法。
• 标准物质不加到待测试样中，且通常以某纯待测 物相为标样，制成一系列外标试样，测绘出工作 曲线，进行定量相分析的方法叫外标法。
• 外标法优点是待测样中不混入标准物质。 缺点是强度不同时测量，会影响测量准确度。
K值法
• K值法也是内标法的一种，只是对内标法做 了修改，使常数C与标准物质的掺入量无关， 并称之为基体冲洗法，也就是k值法。 • k值法的优点： • 1.K值与内标物质加入量的多少无关； • 2.不用绘制定标曲线，分析手续简化。
• 研究方法》第一次汇报
第八组 研究方法：XRD
XRD定量分析
XRD定量相分析
• X射线物相定量分析是根据混合相试样中各 相物质的衍射的强度来确定各相物质的相 对含量。
• 从衍射线的强度理论可知，多相混合物中 某一相的衍射强度，随该相的相对含量的 增加而增加。因而，可通过衍射强度的大 小求出混合物中某相参与衍射的体积分数 或重量分数。
衍射仪法的衍射强度：
I0 表示入射线强度，各参数都是单相物质的衍射参量。 对多相混合物，μl应为混合物的吸收系数μm 其余均与含量无关（记为K，未知常数）。则：
实时荧光定量PCR技术全面分析ppt课件
定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，最终 精确的对起始模板的定量分析
4
常规vs实时
优缺点比较 定量PCR
常规PCR
灵敏度高 高精确度 安全省时
只能进行半定量或定性 分析 不安全易污染 费时费力
5
定量PCR三个基本概念
扩增曲线
背景期
指数增 长期
相关系数(R2) ---大于0.99
平行管重复性 ---SD小于0.167
58
标准曲线差
可能的影响因素
稀释精度 加样精度 反应体系的优化 模板降解
59
定量PCR的新 运用
60
等位基因分型（SNP研究) MicroRNA分析 基因拷贝数（CNV)分析 蛋白质分析
61
62
相对定量的问题 样品材料不均一造成的差别
内标基因 内标通常是b-actin、GAPDH、18SrRNA等看家基因 （内标基因的表达要相对恒定，表达不受处理因素影响） 对目的基因进行均一化：去除样本间加样量不同带来的 误差
19
SYBR Green I法进行相对定量的问
题
问题：
SYBR Green I可以与非特异性双链结合 信号 结果不准确
理想的PCR反应： 非X理n=X想0×的2PnCR反应：
Xn=X0(1+Ex)n
方程式两边同时取对数得:
log Xn=log (X0 (1+Ex)n)
整理方程式得:
n：扩增反应的循环次数
Xn：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率
log X0= (- log(1+Ex) )×n+ log Xn
结合双链DNA分子小沟 延伸结束，形成双链DNA，SYBR Green结合到双螺旋小沟中，当受到适 合光源激发，发射出荧光，反映产物 浓度
4
常规vs实时
优缺点比较 定量PCR
常规PCR
灵敏度高 高精确度 安全省时
只能进行半定量或定性 分析 不安全易污染 费时费力
5
定量PCR三个基本概念
扩增曲线
背景期
指数增 长期
相关系数(R2) ---大于0.99
平行管重复性 ---SD小于0.167
58
标准曲线差
可能的影响因素
稀释精度 加样精度 反应体系的优化 模板降解
59
定量PCR的新 运用
60
等位基因分型（SNP研究) MicroRNA分析 基因拷贝数（CNV)分析 蛋白质分析
61
62
相对定量的问题 样品材料不均一造成的差别
内标基因 内标通常是b-actin、GAPDH、18SrRNA等看家基因 （内标基因的表达要相对恒定，表达不受处理因素影响） 对目的基因进行均一化：去除样本间加样量不同带来的 误差
19
SYBR Green I法进行相对定量的问
题
问题：
SYBR Green I可以与非特异性双链结合 信号 结果不准确
理想的PCR反应： 非X理n=X想0×的2PnCR反应：
Xn=X0(1+Ex)n
方程式两边同时取对数得:
log Xn=log (X0 (1+Ex)n)
整理方程式得:
n：扩增反应的循环次数
Xn：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率
log X0= (- log(1+Ex) )×n+ log Xn
结合双链DNA分子小沟 延伸结束，形成双链DNA，SYBR Green结合到双螺旋小沟中，当受到适 合光源激发，发射出荧光，反映产物 浓度
定量分析方法ppt正式完整版
二、霍尔和切克兰德的系统方法论
霍尔的“三维结构”模式
实质：将专家群体、数据和各种信息与计算机仿真有机结合，把各种学科的理论和人的经验与知识结合起来，发挥整体优势。 了解领导对目标的偏好，喜欢什么模型和评价标准 WSR系统方法论中常用的方法 综合集成（Meta-Synthesis）工程是从整体上考虑并解决复杂问题的方法论。 协调，有效，尽可能平滑 将各种术语变为用户能懂和喜欢的语言 头脑风暴法，讨论分析会，认知图等 较难用数学模型描述，因其加入了人的直觉和判断，往往只能用半定量、半定性或者只能用定性的方法来处理问题。 协调各方面的利益、观点、关系，即利益协调 基于还原论的西方科学体系经过几百年的发展已经非常庞大和完整，在它的基础上诞生的工程技术，创造了空前繁荣的人类文明。 协调所有模型、软硬件、数据的关系，即技术协调 协调模型和知识的合理性，即知识协调 了解领导对目标的偏好，喜欢什么模型和评价标准
定量分析方法
第2章 系统方法论
主要内容 一、系统思想的产生 二、霍尔和切克兰德的系统方法论 三、综合集成方法学 四、物理-事理-人理（WSR）系统方法论 五、“5W1H”方法
第2章 系统方法论
重点问题 ●还原论与整体论 ●霍尔的三维结构模式 ●切克兰德的“调查学习”模式 ●WSR系统方法论 ●解决问题的“5W1H” ●从定性到定量的综合集成方法
✓ 整体的运动特征只有在比其部分（要素）所处 层次更高的整体层次上才能进行描述；
✓ 整体与部分（要素）遵从不同描述层次上的规 律。
二、霍尔和切克兰德的系统方法论
霍尔的“三维结构”模式
•时间维：六个阶段，按时间顺序 •逻辑维：每一阶段分为七个步骤，思维程序 •专业维：完成各阶段的思维程序时所需的专业知识 •三维结构的理论基础：
绝对定量和相对定量课件
03
相对定量的应用
数据分析
描述性统计分析
相对定量可以用于描述数据的分 布、集中趋势和离散程度，例如 计算平均值、中位数、众数、标
准差等。
比较不同组数据
通过相对定量，可以比较不同组 数据的差异，例如两组之间的均
值比较、比例比较等。
数据分类和聚类
相对定量可以用于将数据分成不 同的类别或集群，例如通过Kmeans聚类算法将数据分成K个
在此添加您的文本16字
结果可比性差：不同实验条件下相对定量结果的可比性较 差。
05
绝对定量和相对定量的选 择依据
研究目的
了解疾病发生机制
如果研究目的是深入了解某种疾 病的发病机制，通常需要采用绝 对定量方法，以准确测量特定蛋 白质的表达量。
寻找生物标志物
在寻找潜在的生物标志物时，相 对定量方法可以帮助比较不同样 本中蛋白质的表达差异，从而筛 选出有意义的标志物。
绝对定量和相对定量是基因或蛋白质表 达分析中常用的两种分析方法，它们各
有优缺点，适用于不同的研究目的。
绝对定量可以提供更准确的定量结果， 适用于确定基因或蛋白质的实际含量， 有助于深入了解生物过程的分子机制。
相对定量可以快速比较不同样本之间的 基因或蛋白质表达差异，适用于比较不 同实验条件或处理对基因或蛋白质表达 的影响，有助于发现潜在的生物标志物
和治疗靶点。
02
绝对定量的应用
科学研究
生物学研究
在生物学研究中，绝对定量可以用于 测量基因、蛋白质等生物分子的表达 量，有助于深入了解生物过程的机制 和调控。
化学研究
环境监测
在环境监测中，绝对定量可以用于测 定空气、水体等环境介质中的污染物 浓度，有助于评估环境质量和制定环 境保护措施。
定量分析基本操作(共79张PPT)
37
1、滴定操作
38
滴定管的使用
❖ 1、用前检查：酸式滴定管，塞子涂凡士林油，检 漏(等2min)；聚四氟乙烯活塞不需涂油
❖ 2、洗涤：自来水洗净后，蒸馏水洗2～3次； ❖ 3、润洗：用少量滴定液润洗2～3次(约10mL)； ❖ 3、装液：装液到0刻度以上，赶气泡，使液面位于
0.00刻度以下；
❖ 4、滴定：连续滴加，间隙式滴加，溶液悬而不 落，半滴加入；
将称量瓶放入秤盘中央，显示的质量减少量即为试样质量。
1、4d法：也称“4乘平均偏差法”
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
待溶液流毕，等15s后，取出移液管。
离子选择电极，流动注射法（B）；
COU
点数功能
0141 —氯化钠标准溶液的浓度（mol/L）。
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
加入，最后半滴加入，以防过量。
40
碱式滴定管
41
酸式滴定管
42
滴定操作姿势及读数
一般称量使用普通托盘天平即可。
水质氯化物的测定（硝酸银滴定法），要求在规定时间内完成分析方法全过程。
4乘平均偏差法仅适用于测定4-8个数据的检验分析。
预热：接通电源，预热20~30 min以获得稳定的工作温度。
运算过程中，为减少舍入误差，可多保留一位有效数字（不修约），算出结果后，再修约至应有的有效数字位数。
2
基本内容
一、天平的使用及称量操作 二、滴定分析基本操作（滴定管、容量瓶、移液管
与吸量管的使用）
三、滴定法（以水质氯化物的测定为例） 四、有效数字及运算规则
6
一、天平的使用及称量操作
1、滴定操作
38
滴定管的使用
❖ 1、用前检查：酸式滴定管，塞子涂凡士林油，检 漏(等2min)；聚四氟乙烯活塞不需涂油
❖ 2、洗涤：自来水洗净后，蒸馏水洗2～3次； ❖ 3、润洗：用少量滴定液润洗2～3次(约10mL)； ❖ 3、装液：装液到0刻度以上，赶气泡，使液面位于
0.00刻度以下；
❖ 4、滴定：连续滴加，间隙式滴加，溶液悬而不 落，半滴加入；
将称量瓶放入秤盘中央，显示的质量减少量即为试样质量。
1、4d法：也称“4乘平均偏差法”
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
待溶液流毕，等15s后，取出移液管。
离子选择电极，流动注射法（B）；
COU
点数功能
0141 —氯化钠标准溶液的浓度（mol/L）。
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
加入，最后半滴加入，以防过量。
40
碱式滴定管
41
酸式滴定管
42
滴定操作姿势及读数
一般称量使用普通托盘天平即可。
水质氯化物的测定（硝酸银滴定法），要求在规定时间内完成分析方法全过程。
4乘平均偏差法仅适用于测定4-8个数据的检验分析。
预热：接通电源，预热20~30 min以获得稳定的工作温度。
运算过程中，为减少舍入误差，可多保留一位有效数字（不修约），算出结果后，再修约至应有的有效数字位数。
2
基本内容
一、天平的使用及称量操作 二、滴定分析基本操作（滴定管、容量瓶、移液管
与吸量管的使用）
三、滴定法（以水质氯化物的测定为例） 四、有效数字及运算规则
6
一、天平的使用及称量操作
《相对定量分析》课件
主观判断
在相对定量分析中，需要基于一定的主观判断进行比较和解释，这些判断可能影响结果的准确性。
主观标准
不同的分析者可能采用不同的主观标准进行相对定量分析，导致结果存在差异。
CHAPTER
06
相对定量分析的发展趋势
1
2
3
大数据处理技术为相对定量分析提供了强大的数据存储、处理和分析能力，提高了分析的效率和准确性。
CHAPTER
05
相对定量分析的局限性
数据来源
数据来源的可靠性、准确性和完整性对相对定量分析的结果产生直接影响。如果数据来源不可靠，分析结果可能存在偏差。
数据处理
数据处理过程中的误差或错误，如数据清洗、异常值处理等，也可能影响分析结果的准确性。
数据采集方法
不同的数据采集方法可能产生不同的数据质量，从而影响相对定量分析的准确性。
数学模型
聚类分析法通常基于距离度量或相似性度量来计算对象之间的相似性或差异性。
应用领域
聚类分析法广泛应用于数据挖掘、图像处理、市场细分等领域，用于
总结词
判别分析法是一种有监督学习方法，用于根据已知分类的数据建立分类模型，并对新数据进行分类预测。
数学模型
判别分析法通常基于概率模型或统计模型来建立分类器，并使用优化算法来求解分类器的参数。
应用领域
判别分析法广泛应用于模式识别、机器学习、生物信息学等领域，用于分类、回归、异常检测等。
详细描述
判别分析法通过使用已知分类的数据来训练分类器，并基于分类器的预测结果对新数据进行分类。常见的判别分析算法包括线性判别分析、支持向量机等。
CHAPTER
04
相对定量分析的应用
相对定量分析通过收集和分析市场数据，将市场划分为不同的细分市场，帮助企业了解不同消费群体的需求和行为特征，从而制定更有针对性的市场策略。
在相对定量分析中，需要基于一定的主观判断进行比较和解释，这些判断可能影响结果的准确性。
主观标准
不同的分析者可能采用不同的主观标准进行相对定量分析，导致结果存在差异。
CHAPTER
06
相对定量分析的发展趋势
1
2
3
大数据处理技术为相对定量分析提供了强大的数据存储、处理和分析能力，提高了分析的效率和准确性。
CHAPTER
05
相对定量分析的局限性
数据来源
数据来源的可靠性、准确性和完整性对相对定量分析的结果产生直接影响。如果数据来源不可靠，分析结果可能存在偏差。
数据处理
数据处理过程中的误差或错误，如数据清洗、异常值处理等，也可能影响分析结果的准确性。
数据采集方法
不同的数据采集方法可能产生不同的数据质量，从而影响相对定量分析的准确性。
数学模型
聚类分析法通常基于距离度量或相似性度量来计算对象之间的相似性或差异性。
应用领域
聚类分析法广泛应用于数据挖掘、图像处理、市场细分等领域，用于
总结词
判别分析法是一种有监督学习方法，用于根据已知分类的数据建立分类模型，并对新数据进行分类预测。
数学模型
判别分析法通常基于概率模型或统计模型来建立分类器，并使用优化算法来求解分类器的参数。
应用领域
判别分析法广泛应用于模式识别、机器学习、生物信息学等领域，用于分类、回归、异常检测等。
详细描述
判别分析法通过使用已知分类的数据来训练分类器，并基于分类器的预测结果对新数据进行分类。常见的判别分析算法包括线性判别分析、支持向量机等。
CHAPTER
04
相对定量分析的应用
相对定量分析通过收集和分析市场数据，将市场划分为不同的细分市场，帮助企业了解不同消费群体的需求和行为特征，从而制定更有针对性的市场策略。
GC-MS数据处理和定性定量分析(共42张PPT)
• GC／MS和GC／MS／MS联用方法常被作为定量
检测的最终确证方法。因此质量保证／质量控
制(QA／QC)是定量分析不可缺少的重要环节
(二)定量方法
• GC／MS联用分析常用的定量方法和色谱一样，
有归一化法、外标法、内标法等。各有其优缺 点和使用范围，不适当的运用必然造成较大的 误差。
• 根据不同要求正确选择定量方法十分重要。定 量方法中响应值的计算可以用峰高法也可以用 峰面积法，要看在线性范围内哪一个测量的准 确性和重复性更好。
将样品中所有组分含量之和作为100，计算各个组分的相对百分含量，称为归一化法。 缺点为：样品制备很耗时；
二、质量色谱法的应用
• (2)目标化合物追踪 • 邻苯二甲酸酯类是常见的增缩剂，在分析试验
室中几乎无所不在，各种塑料包装、塑料瓶盖、 样品预处理用的一些试剂、硅胶、树脂等都含 有此类化合物
• 它们的沸点较高，容易残留在色谱柱中，柱温升 高到200℃以上就会流出。往往在GC／MS分析前做
量。尤其用同位素标记化合物做内标进
行定量分析更是GC／MS联用技术的独
到之处。
三、GC/MS定量分析
• GC／MS联用技术定量分析的特点是先定性， 后定量
• 对于一个化合物，首先根据其保留时间和质谱 图特征离子鉴定，确认它是目标化合物之后再 进行定量，因而避免假阳性检出。其次，GC／
MS联用定量一般不用总离子流色谱图，而是用特 征离子的离子流图。因为离子流图相对稳定而且 不受干扰，定量结果更可靠。
一、质谱图的提取
• 质谱库检索和谱图解析都需要获得好的质谱图。 质谱图的提取不仅要保证谱图的质量，还要不 丢失可鉴定的组分，包括共流出组分的分离。 背景扣除没有固定的要求
• 例如：是取色谱峰顶对应的一张质谱图还是几张 质谱图平均，需不需要扣除背景，是扣除前面还 是后面的谱图等。主要的是根据出峰情况，结合 样品信息和实验条件进行判断。知识和经验的积 累是必需的。
检测的最终确证方法。因此质量保证／质量控
制(QA／QC)是定量分析不可缺少的重要环节
(二)定量方法
• GC／MS联用分析常用的定量方法和色谱一样，
有归一化法、外标法、内标法等。各有其优缺 点和使用范围，不适当的运用必然造成较大的 误差。
• 根据不同要求正确选择定量方法十分重要。定 量方法中响应值的计算可以用峰高法也可以用 峰面积法，要看在线性范围内哪一个测量的准 确性和重复性更好。
将样品中所有组分含量之和作为100，计算各个组分的相对百分含量，称为归一化法。 缺点为：样品制备很耗时；
二、质量色谱法的应用
• (2)目标化合物追踪 • 邻苯二甲酸酯类是常见的增缩剂，在分析试验
室中几乎无所不在，各种塑料包装、塑料瓶盖、 样品预处理用的一些试剂、硅胶、树脂等都含 有此类化合物
• 它们的沸点较高，容易残留在色谱柱中，柱温升 高到200℃以上就会流出。往往在GC／MS分析前做
量。尤其用同位素标记化合物做内标进
行定量分析更是GC／MS联用技术的独
到之处。
三、GC/MS定量分析
• GC／MS联用技术定量分析的特点是先定性， 后定量
• 对于一个化合物，首先根据其保留时间和质谱 图特征离子鉴定，确认它是目标化合物之后再 进行定量，因而避免假阳性检出。其次，GC／
MS联用定量一般不用总离子流色谱图，而是用特 征离子的离子流图。因为离子流图相对稳定而且 不受干扰，定量结果更可靠。
一、质谱图的提取
• 质谱库检索和谱图解析都需要获得好的质谱图。 质谱图的提取不仅要保证谱图的质量，还要不 丢失可鉴定的组分，包括共流出组分的分离。 背景扣除没有固定的要求
• 例如：是取色谱峰顶对应的一张质谱图还是几张 质谱图平均，需不需要扣除背景，是扣除前面还 是后面的谱图等。主要的是根据出峰情况，结合 样品信息和实验条件进行判断。知识和经验的积 累是必需的。
FQPCR技术的原理及应用ppt课件
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
Producer
•
•
•
•
•
Roche
ABI
Thermo
Stratgene
Biorad
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
平台PCR仪介绍
ABI 7500 fast
特征：
使用96孔板，样品量大，仪器稳定，结果分析直
观
ABI试剂ROX校正物理方面的误差：枪的误差
（如试剂体积）、耗材质量（如管盖厚度、透光
性能不一致）所导致的光能损失、仪器稳定性
（如孔间、批间温度的波动）
Rn= Normalization = Reporter / Referenc
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
2、TaqMan探针法
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
TaqMan作用机理
软件操作简单
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
• StepOneTM
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
Biorad
火灾袭来时要迅速疏散逃生，不可蜂 拥而出 或留恋 财物， 要当机 立断， 披上浸 湿的衣 服或裹 上湿毛 毯、湿 被褥勇 敢地冲 出去
《LCMS定量分析》课件
面临的挑战与解决方案
基质效应
基质对LCMS分析的影响是一个重要挑战。通过开发新型的基质匹配标准品、优化样品处理和稀释方法等手段，可以 降低基质效应的影响。
复杂样品分析
对于生物体、环境等复杂样品中的化合物分析，LCMS需要面临样品前处理、背景干扰和低丰度化合物检测等挑战。 通过优化样品前处理方法、采用内标校正和背景消除技术等手段，可以提升复杂样品中化合物的定量准确性。
《LCMS定量分析》PPT课件
contents
目录
• LCMS定量分析概述 • LCMS定量分析的原理 • LCMS定量分析的实验技术 • LCMS定量分析的实例 • LCMS定量分析的展望与挑战
01 LCMS定量分析概述
定义与特点
定义
LCMS定量分析是一种基于液相色谱 -质谱联用技术的方法，用于对样品 中的化合物进行定性和定量分析。
高效分离技术
随着色谱技术的不断发展，LCMS 将进一步提高分离效率和分辨率 ，为复杂样品分析提供更好的分 离效果。
高灵敏度检测技术
随着检测器技术的进步，LCMS的 检测灵敏度将得到进一步提升， 能够检测更低浓度的化合物，满 足更严格的分析要求。
多维度联用技术
未来LCMS将与多种检测技术联用 ，如CE、GC、NMR等，实现多 维度的分离和检测，提供更全面 的化合物信息。
应用拓展
将LCMS定量分析技术拓展到更多领域，如药物代谢、环境监测、 食品安全等，为各领域提供可靠的化合物定量分析方法。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
液相色谱与质谱通过接口技术联接， 实现样品的分离与检测的连续进行。
质谱原理
通过电离源将样品分子转化为带电离 子，然后在电场和磁场的作用下，使 离子发生空间和能量聚焦，从而实现 样品的分离和检测。
定量分析方法验证PPT课件
验证方法
可以通过绘制标准曲线来验证检测限和定量限。在标准曲线上，各点应呈线性分布，且响应 值与浓度之间的线性相关系数（r）应接近于1。同时，可以通过比较空白样品和低浓度样品 的响应值来评估检测限和定量限的实际效果。
特异性
特异性
指在特定条件下，一种分析方法能够区 分不同物质的能力。在定量分析中，特 异性要求待测物质与其他物质能够完全 分离，且不受干扰物质的影响。
精密度
精密度
指在相同条件下多次重复测定结果之间的接近程度。在定量分析中，精密度通常用 相对标准偏差（RSD）来表示，计算公式为：RSD = [SD / 平均值] × 100%。精密 度要求越低越好，一般要求RSD≤±5%。
影响因素
精密度受到仪器性能、操作过程中重复性的影响。为了提高精密度，需要定期对 仪器进行维护和校准，同时加强操作规范，减少人为误差。
定量分析方法验证ppt课件
目录
• 引言 • 定量分析方法验证概述 • 验证的参数和标准 • 验证的实际操作 • 验证的挑战和解决方案 • 案例研究
01 引言
目的和背景
目的
确保定量分析方法的准确性、可靠性 和可重复性，为科学研究、工业生产 和质量控制等领域提供可靠的测量数 据。
背景
随着科技的发展和测量需求的增加， 定量分析方法在各个领域得到广泛应 用，但方法的准确性、可靠性和可重 复性是至关重要的，需要进行验证。
结果解读
对分析结果进行解读，解释其意义和 影响，并提出相应的建议或改进措施。
结果呈现
采用图表、表格等形式，清晰地呈现 分析结果，以便更好地理解和交流。
结果评估
对分析结果进行评估，判断其准确性 和可靠性，并提出进一步改进和完善 的方法。
05 验证的挑战和解决方案
可以通过绘制标准曲线来验证检测限和定量限。在标准曲线上，各点应呈线性分布，且响应 值与浓度之间的线性相关系数（r）应接近于1。同时，可以通过比较空白样品和低浓度样品 的响应值来评估检测限和定量限的实际效果。
特异性
特异性
指在特定条件下，一种分析方法能够区 分不同物质的能力。在定量分析中，特 异性要求待测物质与其他物质能够完全 分离，且不受干扰物质的影响。
精密度
精密度
指在相同条件下多次重复测定结果之间的接近程度。在定量分析中，精密度通常用 相对标准偏差（RSD）来表示，计算公式为：RSD = [SD / 平均值] × 100%。精密 度要求越低越好，一般要求RSD≤±5%。
影响因素
精密度受到仪器性能、操作过程中重复性的影响。为了提高精密度，需要定期对 仪器进行维护和校准，同时加强操作规范，减少人为误差。
定量分析方法验证ppt课件
目录
• 引言 • 定量分析方法验证概述 • 验证的参数和标准 • 验证的实际操作 • 验证的挑战和解决方案 • 案例研究
01 引言
目的和背景
目的
确保定量分析方法的准确性、可靠性 和可重复性，为科学研究、工业生产 和质量控制等领域提供可靠的测量数 据。
背景
随着科技的发展和测量需求的增加， 定量分析方法在各个领域得到广泛应 用，但方法的准确性、可靠性和可重 复性是至关重要的，需要进行验证。
结果解读
对分析结果进行解读，解释其意义和 影响，并提出相应的建议或改进措施。
结果呈现
采用图表、表格等形式，清晰地呈现 分析结果，以便更好地理解和交流。
结果评估
对分析结果进行评估，判断其准确性 和可靠性，并提出进一步改进和完善 的方法。
05 验证的挑战和解决方案
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
multigene family; 10-30 genes; > 200 in mouse mostly pseudogenes
pseudogenes
no pseudogenes
G6PDH
no pseudogenes
PBGD aldolase HPRT U3, U8, ... ornithin decarboxylase ...
荧光定量PCR
相对定量的原理 相对定量实验的分析方法 相对定量实验设计 总结
2
PCR定量实验 概述
绝对定量
典型应用领域: 特定物种鉴定(e.g. bacteria, virus) 特定核酸样本检测(e.g. oncology research) 检测病原体载量(e.g. legionella, anthrax) 筛选抗生素抗性基因(e.g. MRSA, VRE) 水质监测…
（目标基因浓度） （参比基因浓度）
• 利用内参基因 (=内源性对照) 对样本间的差异进行归一化处理
参比基因可以修正：
T = 100 = 2 R = 50
T = 10 = 2 R= 5
T = 1=00.2 R = 50
• 样品起始量的差别
• 样品中核酸回收率的差别
• 样品中可能的RNA降解
• 不同样品中核酸质量的差别
精确值 = 带扩增效率校正
-method
校正目标基因和内参基因
实
际上不同的扩增效率
相对定量计算公式 = ET CpT (C) - CpT (S) X ER CpR (S) - CpR (C)
PCR 定量实验
N = N0 x 2En
N
number of amplified molecules
N0 initial number of molecules
n
number of amplification cycles
11
相对定量结果的计算方法
N = No x ECp
EFFICIENCY 扩增效率 ET = ER = 2 ???
相对定量方法 (1) ∆∆Cp 法
• 默认扩增效率 E=2， (-ΔΔCp)方法
Calibrator Normalized Ratio = 2CpT(C) – CpT(S) x 2CpR(S) – CpR(C) = 2[CpT(C)-CpR(C)] - [CpT(S)-CpR(S)] = 2[ΔCp(C)- ΔCp(S)] = 2- Δ ΔCp
Gene
Genomic structure / pseudogenes
ß-acting-ac源自in GAPDH5.8S,18S, 28S RNA ß2-microglobulin
multigene family; > 20 genes; 1 active locus 20 pseudogenes
multigene family; pseudogenes
• 校准品样本： – 未处理的细胞系 – 起始时间点的样本 – 正常组织样本
相对定量的原理 相对定量实验的分析方法 相对定量实验设计 总结
9
相对定量
常规的两种分析模式
相对定量 (以校正样本归一化处理)
近似值 = 没有扩增效率校正
ΔΔCT 法
全部假设: E = 2
相对定量计算公式 = 2 -ΔΔCT
相对定量方法 (1) ∆∆Cp 法
该方法假设： • 目标基因和内参基因的PCR扩增效率相同 • 扩增过程在整个PCR反应中保持恒定不变 (E = 2)
归一化的相对比率 = 2 -ΔΔCp
• 无需标准曲线
PCR 扩增效率的影响因素
实际上 不是所有的PCR反应都能达到E＝2的理想扩增效率 不是所有的PCR反应在整个过程中的扩增效率都保持恒定
Relativ相e Q对u定an量tification
典型应用领域: mRNA 表达水平的检测(e.g. 细胞因子, 肿瘤) 基因定量 (e.g. 染色体缺失) 研究疾病的微小残留病灶(MRD) GMO 检测…
3
相对定量PCR实验
目的和要求
• 相对定量实验的目的是用于研究样本中某个或某些核酸表达水平的差异。 • 优点：能够检测目的基因“量”的细微变化
: Non-Hodgkin lymhoma abnormal expression in tumors
: kidney, stomach tumor : hormones, oxidant stress,
growth factors
: tumors
相对定量
原理 (II)
• 使用校准品样本 (calibrator) 对最终分析结果进行进一步的均一化 – 校准同次实验中目的基因与参比基因的检测灵敏度 – 校正不同次实验间 run to run & 不同试剂批号lot to lot 差异
no pseudogenes pseudogenes pseudogenes Pseudogenes
Regulation e.g.
: hormones of tyroid gland : stomach tumor
: lung, pancreatic, colon cancer : insulin, EGF
• 目标基因和内参基因之间的PCR效率差异是由于: – 探针复性的差异 – 染料淬灭系数的差异 – 荧光共振能量传递效应（FRET）的效率差异 – cDNA合成效率的差异
• 目标基因与内参基因之间的PCR效率差异会造成实验的显著误差 • 当前有且仅有LightCycler相对定量软件的独特算法可对效率差异进行校正
长期实验及不同实验体系中所得数据能够进行比较
目标 内参
需要进行研究的核酸 (特定的RNA或DNA序列) 在研究的所有样本中，拷贝数恒定不变的核酸序列 (内源性对照)
4
相对定量
原理 (I)
Step 1: 相同样品中的目标基因和参比基因的浓度 Step 2: 不同样品中目的基因的含量差别由参比基因校正
PCR 扩增效率
• PCR 扩增效率的差异存在于： – 不同模板及引物序列的差异 – 不同的PCR体系 – 不同次的PCR实验
= calibrator
treated cell 2
• 加样差
5
参比基因的选择
• 理想的参比基因:
– 表达水平在所有样品中是持续、稳定的：正常组织 vs. 肿瘤组织 – 表达水平不受实验条件变化的影响：处理样本 vs. 未处理的样本
• 看家基因(Housekeeping genes)：编码有基础细胞功能的蛋白质
pseudogenes
no pseudogenes
G6PDH
no pseudogenes
PBGD aldolase HPRT U3, U8, ... ornithin decarboxylase ...
荧光定量PCR
相对定量的原理 相对定量实验的分析方法 相对定量实验设计 总结
2
PCR定量实验 概述
绝对定量
典型应用领域: 特定物种鉴定(e.g. bacteria, virus) 特定核酸样本检测(e.g. oncology research) 检测病原体载量(e.g. legionella, anthrax) 筛选抗生素抗性基因(e.g. MRSA, VRE) 水质监测…
（目标基因浓度） （参比基因浓度）
• 利用内参基因 (=内源性对照) 对样本间的差异进行归一化处理
参比基因可以修正：
T = 100 = 2 R = 50
T = 10 = 2 R= 5
T = 1=00.2 R = 50
• 样品起始量的差别
• 样品中核酸回收率的差别
• 样品中可能的RNA降解
• 不同样品中核酸质量的差别
精确值 = 带扩增效率校正
-method
校正目标基因和内参基因
实
际上不同的扩增效率
相对定量计算公式 = ET CpT (C) - CpT (S) X ER CpR (S) - CpR (C)
PCR 定量实验
N = N0 x 2En
N
number of amplified molecules
N0 initial number of molecules
n
number of amplification cycles
11
相对定量结果的计算方法
N = No x ECp
EFFICIENCY 扩增效率 ET = ER = 2 ???
相对定量方法 (1) ∆∆Cp 法
• 默认扩增效率 E=2， (-ΔΔCp)方法
Calibrator Normalized Ratio = 2CpT(C) – CpT(S) x 2CpR(S) – CpR(C) = 2[CpT(C)-CpR(C)] - [CpT(S)-CpR(S)] = 2[ΔCp(C)- ΔCp(S)] = 2- Δ ΔCp
Gene
Genomic structure / pseudogenes
ß-acting-ac源自in GAPDH5.8S,18S, 28S RNA ß2-microglobulin
multigene family; > 20 genes; 1 active locus 20 pseudogenes
multigene family; pseudogenes
• 校准品样本： – 未处理的细胞系 – 起始时间点的样本 – 正常组织样本
相对定量的原理 相对定量实验的分析方法 相对定量实验设计 总结
9
相对定量
常规的两种分析模式
相对定量 (以校正样本归一化处理)
近似值 = 没有扩增效率校正
ΔΔCT 法
全部假设: E = 2
相对定量计算公式 = 2 -ΔΔCT
相对定量方法 (1) ∆∆Cp 法
该方法假设： • 目标基因和内参基因的PCR扩增效率相同 • 扩增过程在整个PCR反应中保持恒定不变 (E = 2)
归一化的相对比率 = 2 -ΔΔCp
• 无需标准曲线
PCR 扩增效率的影响因素
实际上 不是所有的PCR反应都能达到E＝2的理想扩增效率 不是所有的PCR反应在整个过程中的扩增效率都保持恒定
Relativ相e Q对u定an量tification
典型应用领域: mRNA 表达水平的检测(e.g. 细胞因子, 肿瘤) 基因定量 (e.g. 染色体缺失) 研究疾病的微小残留病灶(MRD) GMO 检测…
3
相对定量PCR实验
目的和要求
• 相对定量实验的目的是用于研究样本中某个或某些核酸表达水平的差异。 • 优点：能够检测目的基因“量”的细微变化
: Non-Hodgkin lymhoma abnormal expression in tumors
: kidney, stomach tumor : hormones, oxidant stress,
growth factors
: tumors
相对定量
原理 (II)
• 使用校准品样本 (calibrator) 对最终分析结果进行进一步的均一化 – 校准同次实验中目的基因与参比基因的检测灵敏度 – 校正不同次实验间 run to run & 不同试剂批号lot to lot 差异
no pseudogenes pseudogenes pseudogenes Pseudogenes
Regulation e.g.
: hormones of tyroid gland : stomach tumor
: lung, pancreatic, colon cancer : insulin, EGF
• 目标基因和内参基因之间的PCR效率差异是由于: – 探针复性的差异 – 染料淬灭系数的差异 – 荧光共振能量传递效应（FRET）的效率差异 – cDNA合成效率的差异
• 目标基因与内参基因之间的PCR效率差异会造成实验的显著误差 • 当前有且仅有LightCycler相对定量软件的独特算法可对效率差异进行校正
长期实验及不同实验体系中所得数据能够进行比较
目标 内参
需要进行研究的核酸 (特定的RNA或DNA序列) 在研究的所有样本中，拷贝数恒定不变的核酸序列 (内源性对照)
4
相对定量
原理 (I)
Step 1: 相同样品中的目标基因和参比基因的浓度 Step 2: 不同样品中目的基因的含量差别由参比基因校正
PCR 扩增效率
• PCR 扩增效率的差异存在于： – 不同模板及引物序列的差异 – 不同的PCR体系 – 不同次的PCR实验
= calibrator
treated cell 2
• 加样差
5
参比基因的选择
• 理想的参比基因:
– 表达水平在所有样品中是持续、稳定的：正常组织 vs. 肿瘤组织 – 表达水平不受实验条件变化的影响：处理样本 vs. 未处理的样本
• 看家基因(Housekeeping genes)：编码有基础细胞功能的蛋白质