串联质谱法两种扫描方式检测干血滤纸片上氨基酸含量的精密度和准确度
串联质谱检测氨基酸试验流程
串联质谱检测氨基酸试验流程英文版：Procedure for Amino Acid Analysis using Tandem Mass Spectrometry1. Experimental SetupBefore commencing the amino acid analysis using tandem mass spectrometry, it is crucial to prepare the required instrumentation and reagents. This includes the mass spectrometer, chromatography equipment, amino acid standards, buffers, and solvents necessary for sample preparation. Additionally, suitable mass spectrometry parameters and analytical conditions must be established to ensure the accuracy and reliability of the experiment.2. Sample PreparationSample preparation is a crucial step in amino acid analysis using tandem mass spectrometry. Initially, the sample must be diluted and cleaned to remove interfering substances and impurities. Subsequently, chromatographic techniques are employed to separate the amino acids, yielding individual amino acid components.3. Mass SpectrometryDuring the mass spectrometry phase, the separated amino acid components are introduced into the mass spectrometer for analysis. The mass spectrometer ionizes the amino acid molecules and separates them using electric and magnetic fields, resulting in a mass spectrum of the amino acids.4. Data InterpretationBy interpreting the mass spectrum, information such as the molecular weight, structure, and sequence of the amino acids can be obtained. Furthermore, by comparing the results with amino acid standards, the concentrations and ratios ofvarious amino acids in the sample can be determined.5. Result ReportingFinally, the experimental results are collated and summarized to form a comprehensive experimental report. The report should include the objectives, methods, results, and conclusions of the experiment, detailing the operational procedures and result interpretations from each step.中文版：1. 试验准备在开始串联质谱检测氨基酸试验之前，需要准备相关仪器和试剂，如质谱仪、色谱仪、氨基酸标准品、样品处理所需的缓冲液和溶剂等。
高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸
高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸作者：李鹏飞等来源：《分析化学》2013年第09期摘要：建立了以12种同位素标记氨基酸做内标，采用衍生化方法，LC-MS/MS采用MRM方式同时定量30种氨基酸的检测方法。
生物样本加入含有同位素内标的甲醇溶液，沉淀蛋白后氮气吹干加入衍生试剂，样本氨基酸与同位素氨基酸内标同步衍生，减小实验误差。
选用TC-C18色谱柱，以水-乙腈（均含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸）为流动相，采用梯度洗脱进行分离，30种氨基酸及其中的同分异构体都能基线分离。
选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测（MRM）扫描方式进行检测。
本方法用于实时监测恶性血液病患者血浆氨基酸谱的变化，可以直接反映机体的代谢及营养状况，对患者的移植成功率及改善移植后患者的生存质量均有重要意义。
关键词：高效液相色谱-串联质谱；氨基酸；高通量定量；同位素内标；恶性血液病1 引言氨基酸是生命的基石，是人体基本营养物质，也是蛋白质的组成单位。
生命的产生、存在和消亡，均与蛋白质有关，而氨基酸是蛋白质的基本单位，如果人体缺乏氨基酸，就会导致生理功能异常，影响机体代谢的正常进行，导致疾病。
检测复杂样本中氨基酸的含量对临床和科研等都具有重要意义。
目前，氨基酸检测技术繁多，1958年Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸[1]，实现了氨基酸分析的自动化[2]。
其后，新的氨基酸分析方法不断涌现，柱前衍生反相高效液相色谱法[3～5]、毛细管电泳法[6]、质谱法等相继应用于氨基酸分析[2，7～14]。
液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）充分整合了液相色谱对复杂样本的高分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度等优势，在生物体内源性小分子定性与定量方面有广泛应用，LC-MS/MS用于体内外氨基酸的检测在一定程度上解决了复杂基质干扰问题，极大地提高了检测水平和检测灵敏度，并实现了高通量检测。
串联质谱法和荧光分析法检测滤纸干血片苯丙氨酸的比较
串联质谱法和荧光分析法检测滤纸干血片苯丙氨酸的比较田国力;王燕敏;许洪平;郭静;周卓;姚静【摘要】目的比较荧光分析法和串联质谱法检测滤纸干血片上苯丙氨酸(Phe)水平的分布和差异,为实验室开展新生儿高苯丙氨酸血症(HPA)的筛查提供方法学依据.方法选择进行遗传代谢病筛查的滤纸干血片样本62 510例.采用荧光分析法和串联质谱法同步检测新生儿滤纸干血片的Phe浓度,同时还用串联质谱法检测酪氨酸(Tyr)浓度.采用配对Wilcoxon检验和等级相关分析评价2种方法间的差异和相关性,采用Bland-Altman一致性分析评价2种方法间的一致性.结果荧光分析法和串联质谱法均在62 510例新生儿滤纸干血片样本中检出3例HPA,敏感性均为100％.荧光分析法的阳性预期值为33.3％,串联质谱法的阳性预期值为18.8％,若联合Phe/Tyr比值,串联质谱法的阳性预期值可达100％.正常新生儿Phe浓度呈偏态分布,荧光分析法和串联质谱法检测结果＜60 μmol/L者分别占96.31％和95.08％,≥120 μmol/L者仅占0.01％和0.03％.荧光分析法的测定值先低于串联质谱法,至97％位点(Phe≈63 μmol/L)处基本持平,然后逐渐高于串联质谱法,2种方法的测定值呈正相关(r=0.43,P＜0.01).以不同浓度的Phe测定值作Bland-Altman分析,Phe浓度越高,2种方法的偏移越小,Phe＞120 μmol/L的19个样本点全部落在95％的一致性限内,2种方法有很好的一致性,检测结果有可替代性.结论荧光分析法和串联质谱法检测Phe在低浓度时有差异,高浓度时一致性好.2种方法对于HPA的临床判断无影响,均能用于新生儿筛查.串联质谱法可同时检测Phe和Tyr浓度,若联合Phe/Tyr比值,检出HPA的阳性预期值很高.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)009【总页数】6页(P814-819)【关键词】苯丙氨酸;串联质谱法;荧光分析法;滤纸干血片样本【作者】田国力;王燕敏;许洪平;郭静;周卓;姚静【作者单位】上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040;上海交通大学附属儿童医院新生儿筛查中心,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R446.1高苯丙氨酸血症（hyperphenylalaninemia，HPA）是一种常见的遗传代谢病，是由于体内苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PA H）活性降低或其辅酶四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）缺乏，导致苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）向酪氨酸（tyrosine，Tyr）代谢受阻，血液和组织中Phe浓度增高，Tyr浓度降低。
液相色谱-串联质谱法检测干血点中的同型半胱氨酸
液相色谱-串联质谱法检测干血点中的同型半胱氨酸韩吉春;李广林;王小臣;骆亦奇【摘要】A high-throughput method to measure homocysteine( Hcy ) in dried blood spots ( DBS) by liquid chromatography-tandem mass spectrometry ( LC-MS/MS ) was established. The DBS sample processing includes adding homocystine-D8 as internal standard,dithiothreitol( DTT)as reducing agent for bound Hcy forms,acetonitrile containing 0. 1%( v/v)formic acid and 0. 05%( v/v)trifluoroacetic acid for Hcy extraction. This procedure was carried out in a 96-well plate format in an automated liquid handling platform to facilitate high-throughput analysis. The processed samples were separated on a Phenomenex CN column and quantitated by LC-MS/MS in multiple reaction monitoring( MRM)mode. The limit of detection was 0. 12μmol/L( S/N=3)and the limit of quantification was 0. 46 μmol/L( S/N=10). The linear range was 1. 16-148.00 μmol/L ( R2 = 0. 994 ). The average recoveries were ( 103. 0 ± 4. 97 )% -(112. 0±2. 13)%. The intra-day relative standard deviations( RSDs)were 1. 9%-4. 6% and the inter-day RSDs were 1. 5%-7. 1%. DBS sample stability was confirmed by measuring same DBS samples stored for 0,1,2,3,4,5,6 and 14 days at -4,-20,22 and 37 ℃,and an overall sample RSD﹤15% was found under each temperature. Processed sample stability within 48 hours was also confirmed with an overall sample RSD﹤5%. The comparison of this method with conventional biochemistry assay was made by measuring 47 blood samples both in an automa-ted biochemistry analyzer( samplesin plasma form)and with the LC-MS/MS method( samples in DBSform),which showed excellent correlation(R2=0. 982).%建立了一种高通量液相色谱-串联质谱技术检测干血点（ DBS）中同型半胱氨酸（ homocycteine，Hcy）的方法。
血氨基酸酰基肉碱串联质谱
血氨基酸酰基肉碱串联质谱
血氨基酸酰基肉碱串联质谱是一种利用串联质谱技术（tandem mass spectrometry，TMS）检测新生儿滤纸干血片中数十种氨基酸、游离肉碱及酰基肉碱的水平，筛查氨基酸代谢障碍、有机酸血症及脂肪酸氧化代谢障碍等多种遗传代谢病的方法。
它是一种高效、灵敏、快速的新生儿疾病筛查技术，已广泛应用于新生儿出生缺陷的防治。
血氨基酸酰基肉碱串联质谱的原理是：首先，将采集的新生儿足跟干血斑（dried blood spot，DBS）样本进行提取或衍生化处理，使目标分析物（例如，氨基酸、酰基肉碱）与对应的同位素内标物混合；然后，将混合物经流动注射方式引入到质谱仪中进行分析，无需对分析物进行前期层析分离；接着，质谱仪通过组合三台四极杆质量分析器对目标分析物进行检测和碎裂处理，得到目标分析物的特征离子信号；最后，根据目标分析物与对应同位素内标物之间的信号强度比率计算出目标分析物的浓度，并根据预设的限值判断是否异常。
血氨基酸酰基肉碱串联质谱的优点是：可以同时检测多种遗传代谢病的标志物，提高筛查效率和覆盖率；可以减少假阳性和假阴性结果，提高筛查准确性和可靠性；可以节省样品
量和试剂量，降低筛查成本和资源消耗；可以缩短分析时间和报告时间，加快筛查速度和反馈速度。
血氨基酸酰基肉碱串联质谱的缺点是：需要专业的仪器设备和技术人员，维护成本较高；需要规范的样本采集、处理和运输技术，避免样品污染或变质；需要参考国内外最新文献和指南，制定合理的筛查项目和限值。
串联质谱如何定量
串联质谱如何定量串联质谱（tandem mass spectrometry, MS/MS）是质谱技术的一种高级形式，能提供比传统单段质谱更准确和详细的结构信息和定量分析。
串联质谱通过将两个或多个质谱过程连接在一起，可以同时获取目标化合物的质荷比和结构信息，从而实现定量分析。
本文将详细讨论串联质谱的定量方法和技术。
串联质谱的定性分析方法包括以下几种：预先设定法、无损失扫描法、选离子扫描法、多级质谱扫描法以及峰面积比法。
其中，预先设定法是基于连接两个或多个质谱过程，目标化合物将在每个过程中选择性地分离并产生特定的质谱峰。
实验者需要预先了解化合物的反应特性，然后设置适当的质谱条件来获取需要的信息。
例如，一种常用的方法是利用电子轰击（electron impact, EI）产生的质谱碎片特征来进行预先设定。
无损失扫描法是一种通过串联质谱实现碰撞诱导解离（collision-induced dissociation, CID）和多级质谱（multiple stage mass spectrometry, MSn）来分析和确认目标物的结构和组成的方法。
在这种方法中，化合物经过主谱的质谱过程后，在碰撞池中与分子间或分子内发生碰撞，产生与化学反应相关的碎片，然后在子谱中通过CID进一步产生新的碎片，并获得更多的结构信息。
选离子扫描法是通过选择目标离子的特定质荷比进行扫描，在质谱中只记录特定离子质荷比（m/z）范围内的质谱峰。
这种方法可以在样品中进行高选择性和高灵敏度的分析。
多级质谱扫描法是将多个串联质谱过程连接在一起，以获取更详细的结构信息。
例如，通过对前体离子进行CID产生新的碎片离子，然后对新的碎片离子再进行CID。
这种方法可以提供更丰富的结构信息，用于更准确地确定目标化合物。
除了以上定性分析方法外，串联质谱还可以用于定量分析。
串联质谱的定量分析方法包括靶向定量和无靶定量。
靶向定量是通过调整仪器的质谱参数以选择性地监测目标化合物的特定离子峰，从而实现无损失或有损失的定量分析。
串联质谱技术新生儿遗传代谢病筛查
临床特征
多在新生儿期、幼儿或儿童期发病。某些可至成人期开始发病。 新生儿期发病：呕吐、喂奶困难、反应力低下、呼吸暂停、急促等
儿童期发病：可表现为全身多器官受累
以神经肌肉系统、呼吸系统、消化系统等症状为主
乏力、智力发育迟缓、肌张力增高或降低、癫痫、黄疸、肝脾肿大、 呼吸困难
代谢性酸中毒、容貌异常、毛发皮肤色素改变、特殊体味 饮食、应激反应、体能消耗等为疾病急性发作诱因。
遗传代谢病诊断困难
临床症状和体征：缺乏特异性
常规检测：缺乏特异标志物
特殊试验检测
氨基酸分析：氨基酸自动分析仪，高效液相色谱
酰基肉碱分析
串联质谱技术 气相质谱技术
酶学分析
基因诊断 组织活检、成纤维细胞组织培养、脑脊液培养、其他神经病学检查
将分析物离子化为各种质荷比(m/z)不同的带电粒子 应用电磁学原理, 带电粒子按m/z在空间或时间上产生分离排
列成的图谱
根据它们所形成的谱图、离子峰强度对分析物进行鉴定 若同时加入被检测物质对应的内标或外标，既可以进行定
量检测。
MS/MS的基本原理
两个MS经碰撞室(CID)串联而成 最常应用于NBS的是三重四极杆，由两个MS经碰撞室
OH、C18、C18-OH
标本前处理方式
衍生化标本前处理方法
样品处理过程中加入盐酸正丁醇，引入丁基
改变分子结构（除去羧酸功能团），消除潜在负离子，提高正离子模式下
的离子化效率 酯化作用可以减少潜在的溶剂或其他干扰物质 降低分析物极性—更好的去溶剂化，样品更加容易进入仪器真空环境 酯化作用可以引入测量酰基肉碱和氨基酸方式（游离酸形式）无法检测到
需要氮吹设备 丁醇盐酸具有强烈腐蚀性 对实验室环境要求高
串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测中的应用
串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测中的应用作者：崔芸菲来源：《中国科技纵横》2019年第15期摘要：串联质谱技术具有灵敏度高、特异性高、选择性高等多种优良性能，在新生儿代谢疾病检测领域具有突出的优势。
本文综述了串联质谱技术的工作原理以及检测方法，讨论了串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测领域的优越性，并展望了串联质谱技术在该领域的发展前景。
关键词：串联质谱；新生儿代谢疾病；检测中图分类号：O657.63 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）15-0202-020 引言新生儿代谢疾病在新生儿疾病的检测中十分特殊，这一类疾病大多没有特异性的临床表现，且部分患儿在确诊患该疾病之前就已经发病，新生儿代谢疾病不仅给患儿身体及家长的心灵带来莫大的痛苦，此外也极大地增加了家庭负担和社会损失，因此新生儿代谢疾病的有效诊断越早越好。
根据目前的临床医学诊断结果来看，当前新生儿代谢疾病的主要类型有三类，分别是氨基酸代谢疾病、脂肪酸代谢疾病以及有机酸代谢疾病，现在医学领域已发现了多达1000余种新生儿代谢疾病，提早诊断和预防新生儿代谢疾病对家庭和社会具有重要意义。
目前医疗上主要以串联质谱技术来检测新生儿代谢疾病，该技术只需通过一次实验检测过程，便能快速高效地筛查出新生儿是否存在氨基酸代谢异常、有机酸代谢紊乱等疾病，因此广泛应用于临床检测中，成为新生儿代谢疾病检测的有效技术手段。
1 串联质谱技术工作原理及检测方法1.1 串联质谱技术工作原理及检测仪器组成1.1.1 串联质谱技术工作原理质谱技术的工作原理是，通过将被测的化合物分子离子化，使其变成具有不同质荷比（m/z）的带电离子，利用电磁场将具有不同的质荷比的带电粒子分离，进而完成对化合物的成分和结构的分析。
1.1.2 质谱检测仪器组成质谱仪的主要结构包含离子源、分析器、检测器三部分。
其中，离子源的功能是将分子实现离子化形成带电粒子，而分析器的作用则是将离子化后的分子在合适的电场或磁场中在空间或时间上按照质荷比的大小进行有效的分离，再由检测器接收并检测出离子的相关信息。
串联质谱筛查实验室技术管理规范（征求意见）
串联质谱筛查实验室技术管理规范（征求意见）串联质谱新生儿遗传代谢病筛查实验室技术管理规范(草案）通过串联质谱法检测新生儿滤纸干血片中数十种氨基酸、游离肉碱及酰基肉碱的水平，筛查氨基酸代谢障碍、有机酸代谢障碍和脂肪酸氧化代谢障碍等数十种遗传代谢病。
本规范适用于承担串联质谱新生儿遗传代谢病的医疗机构。
一、基本要求（一）机构要求1. 医疗机构已取得《医疗机构执业许可证》者。
2. 建立了串联质谱筛查实验室的新生儿遗传代谢病筛查中心，由省级卫生行政部门指定，其实验室年筛查量应达3万以上。
3. 医学检验所开展新生儿遗传代谢病串联质谱技术筛查检测，必须与当地新生儿遗传代谢病筛查中心建立合作关系，并在省级卫生行政部门备案。
（二）人员要求和职责1. 业务负责人：全日制医学及相关专业本科或以上学历，具有临床、检验工作经验，从事新生儿遗传代谢病筛查工作5年以上，具有高级职称，掌握新生儿遗传代谢病筛查网络运作和管理，及相关法律法规、伦理知识。
职责：新生儿疾病筛查网络运作和质控管理。
2. 实验室技术人员：全日制医学及相关专业本科或以上学历，从事实验室检测技术工作3年以上，具有技师或以上职称，接受过省级卫生行政部门组织的新生儿遗传代谢病串联质谱筛查相关知识和技能培训并取得技术合格证，包括：（1）新生儿遗传代谢病筛查的目的、原则、方法及网络运行；（2）串联质谱遗传代谢病筛查生化指标意义及与疾病的关系；（3）滤纸干血片采集、保存、处理的相关知识；（4）检测技术的基本知识和技能操作，包括仪器的维护清洗和保养；（5）新生儿遗传代谢病筛查结果的定量和定性判断；（6）实验室质量控制的基本技能；（7）生物安全等相关知识。
职责：标本验收、检测、检测结果定量和定性判断、室内质控与室间质控、实验室数据统计、分析、信息上报。
3. 临床医师：临床医学专业本科或以上学历，从事儿科临床工作5年以上，具有主治医师或以上职称，接受过省级卫生行政部门组织的串联质谱新生儿遗传代谢病筛查和代谢病诊治相关知识和技能培训，包括：（1）遗传代谢病咨询；（2）遗传代谢病发病机制与特点；（3）串联质谱遗传代谢病筛查生化指标意义及与疾病的关系及报告解读；（4）筛查阳性结果的解释和跟踪处理；（5）遗传代谢病的诊断（含各种辅助诊断报告解读）；（6）遗传代谢病阳性病例的治疗和随访管理。
苯丙酮尿症诊疗指南【2019版】
90. 苯丙酮尿症概述苯丙酮尿症（phenylketonuria,PKU）是由于苯丙氨酸羟化酶（phenyalanine hydroxylase，PAH）缺乏引起血苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）浓度增高，并引起一系列临床症状的常染色体隐性遗传病。
苯丙酮尿症是高苯丙氨酸血症的主要类型。
病因和流行病学PAH 基因变异导致PAH 活性降低或缺乏是PKU 的主要病因。
苯丙氨酸是人体必需氨基酸，其代谢所需的苯丙氨酸羟化酶（PAH）活性降低或缺乏，使苯丙氨酸不能转化为酪氨酸(tyrosine，Tyr)，酪氨酸及其他正常代谢产物合成减少，血液中Phe 含量增加，影响中枢神经系统发育。
同时次要代谢途径增强，生成苯丙酮酸、苯乙酸和苯乳酸，并从尿中大量排出，苯乳酸使患儿的尿液具有特殊的鼠尿臭味。
PAH 缺乏症发病率在不同种族和地区有差异。
爱尔兰约为1/4500，北欧、东亚约为1/10 000，日本约为1/143 000。
我国平均发病率为1/11 800。
根据血Phe 浓度将PAH 缺乏症分为：轻度HPA(120~360μmol/L) 、轻度PKU(360~1200μmol/L)、经典型PKU(≥1200μmol/L)。
临床表现PKU 患儿在新生儿期多无临床症状，出生3～4 个月后逐渐出现典型症状，1 岁时症状明显。
出生数月后因黑色素合成不足，其毛发和虹膜色泽逐渐变浅，为黄色或棕黄色，皮肤白。
由于尿液、汗液含有大量苯乳酸而有鼠尿臭味。
随着年龄增长，逐渐表现出智能发育迟缓，以认知发育障碍为主、小头畸形、癫痫发作，也可出现行为、性格等异常，如多动、自残、攻击、自闭症、自卑、忧郁等神经系统表现。
婴儿期还常出现呕吐、湿疹等。
辅助检查1.血苯丙氨酸测定（1）荧光定量法：检测干血滤纸片中Phe 浓度，正常血Phe 浓度<120μmol/L （2mg/dl），血Phe 浓度>120 μmol/L 提示高苯丙氨酸血症。
高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸
高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸一、本文概述随着现代生物技术和分析化学的飞速发展，对于生物体内复杂化学成分的分析和测定要求越来越高。
氨基酸作为生物体内蛋白质的基本构成单元，其种类、数量及代谢状态的检测对于理解生命活动的本质、疾病的诊断与预防等方面具有重要意义。
高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）作为一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，已被广泛应用于生物样品中氨基酸的定量分析。
本文旨在探讨利用高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法。
文章将首先介绍氨基酸的重要性及其在人体内的代谢过程，随后详细阐述HPLC-MS/MS技术的基本原理及其在氨基酸分析中的优势。
接着，文章将重点描述样品的采集与处理、色谱条件的优化、质谱条件的设定以及数据分析方法等实验步骤。
文章还将对实验结果的可靠性进行验证，并讨论该方法在临床医学、营养学及药物研发等领域的应用前景。
通过本文的阐述，读者可以对高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法有一个全面、深入的了解，为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。
二、实验原理高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种先进的分析技术，结合了高效液相色谱（HPLC）的高分离能力和质谱（MS/MS）的高灵敏度和高选择性，从而实现对复杂生物样品中多种氨基酸的高效、快速和精确测定。
在HPLC-MS/MS分析中，样品首先通过高效液相色谱进行分离。
高效液相色谱利用不同氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数差异，将它们从复杂的生物样品中分离出来。
然后，分离后的氨基酸被引入质谱系统进行进一步的分析和检测。
在质谱系统中，氨基酸分子被离子化并产生带电离子，这些离子在电场的作用下被加速并通过一个或多个质量分析器。
质量分析器根据离子的质荷比（m/z）将它们分离，形成质谱图。
通过对比标准品的质谱图，可以确定样品中氨基酸的种类。
通过选择特定的母离子和子离子对，可以实现多重反应监测（MRM）模式，进一步提高方法的特异性和灵敏度。
液相色谱_串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用
分子诊断与治疗杂志2012 年 1 月第4卷第 1 期J Mol Diagn Ther January 2012 Vol. 4 No. 1 59 综述液相色谱- 串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用陶蓓蓓1 李鹏飞2 张绪得1 安卓玲2 王燕2 刘丽宏2 ★摘要全谱氨基酸检测是指利用液相色谱串联质谱技术、采用同位素内标的方法，精确测定人体内42 种氨基酸含量。
全谱氨基酸失衡是众多疾病的诱因或表现形式，涉及代谢、肿瘤、免疫、病毒、心脑血管、神经系统、肾病、糖尿病、亚健康、老年病等各类疾病和儿童生长发育、营养健康、肌肉骨骼生长、激素分泌、解毒功能等人体各种健康环节。
关键词全谱氨基酸；液相色谱；串联质谱Liquid chromatography-tandem mass spectrometry in the full spectrum of amino aciddetectionTAO Beibei1 LI Pengfei2 ZHANG Xude1 AN Zhuoling2 WANG Yan2 LIU Lihong2 ★1. Beijing Amino Medical Research CO. LTD Beijing 100088 China 2. Pharmacy Department of the SecondArtillery General Hospital Beijing 100088 China ABSTRACT Liquid chromatography combined with tandem mass spectrometry and isotope internalstandard method can be used for accurate determination of 42 kinds of amino acids in human body. Theimbalance of the full spectrum of amino acids is one of incentives or manifestationsof many diseases involvedin metabolism cancer immune viral cardiovascular nervous system kidney disease diabetes sub-health oldage diseases and other diseases and child growth and development nutrition and health musculoskeletal growthhormone secretion and detoxication functions. KEY WORDS The full spectrum of amino acids Liquid chromatography Tandem mass spectrometry 全谱氨基酸在体内是一个平衡状态，这一状态的高效阴离子交换色谱- 积分脉冲安培检测法、毛细管失衡是众多疾病的诱因或表现形式。
氨基酸常用的检测方法和原理
氨基酸常用的检测方法和原理氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
因此，准确、快速地检测氨基酸的方法和原理是科学研究和实际应用中的关键问题之一。
本文将介绍几种常用的氨基酸检测方法及其原理。
一、纸层析法纸层析法是一种简单、快速的氨基酸检测方法。
其原理是根据氨基酸在纸上的迁移速度差异来分离和检测氨基酸。
首先，将待测样品与色谱溶剂混合，然后将混合液滴在纸上，待溶剂上升至一定高度后，根据不同氨基酸的迁移距离和颜色变化，可以判断样品中是否含有特定的氨基酸。
二、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种精确、灵敏的氨基酸检测方法。
其原理是利用氨基酸在液相中的分配系数差异来实现分离和检测。
首先，将待测样品通过色谱柱进行分离，然后通过检测器检测样品中各种氨基酸的浓度。
由于不同氨基酸的分配系数不同，它们在色谱柱中的停留时间也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。
三、毛细管电泳法毛细管电泳法是一种高效、快速的氨基酸检测方法。
其原理是利用氨基酸在电场作用下在毛细管中的迁移速度差异来实现分离和检测。
首先，将待测样品注入毛细管中，然后施加电场，通过检测器检测样品中各种氨基酸的浓度。
由于不同氨基酸的电荷性质和大小不同，它们在电场作用下的迁移速度也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。
四、质谱法质谱法是一种高精确度、高灵敏度的氨基酸检测方法。
其原理是利用氨基酸分子在质谱仪中的质量-电荷比差异来实现分离和检测。
首先，将待测样品通过质谱仪进行分离，然后通过检测器检测样品中各种氨基酸的质量-电荷比。
由于不同氨基酸的分子量不同，它们在质谱仪中的质量-电荷比也不同，从而实现了氨基酸的分离和检测。
纸层析法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和质谱法是常用的氨基酸检测方法。
每种方法都有其独特的原理和优势，可以根据实际需要选择合适的方法进行氨基酸的检测。
这些方法的应用不仅在科学研究中具有重要意义，也在食品、医药等领域有着广泛的应用前景。
串联质谱技术在儿童有机酸代谢疾病鉴别诊断中的应用
串联质谱技术在儿童有机酸代谢疾病鉴别诊断中的应用摘要】目的探讨串联质谱技术在儿童有机酸代谢疾病鉴别诊断中的应用。
方法对1200例遗传性代谢疾病高危儿童的干血滤纸片进行串联质谱分析比较。
结果确诊患有有机酸血症的儿童患者有64例（占5.3%），其中甲基丙二酸尿症（MMA）26例，丙酸血症（PA）11例，生物素酶缺乏症5例，全羧化酶合成酶缺乏症10例；3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症（MCC）2例，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症（HMG）2例，β-酮硫解酶缺乏症（BKT）3例，异戊酸血症（IVA）1例，戊二酸血症（）GA-I型3例，戊二酸血症GA-II型1例。
结论串联质谱技术在诊断儿童有机酸代谢疾病、早期干预与预防遗传性代谢疾病的发生具有重要的作用。
【关键词】串联质谱有机酸酰基肉碱鉴别诊断Application of Tandem Mass Spectrometry in Organic Acid Metabolism in Children with Differential Diagnosis of Diseases【Abstract】Obbjective: Discussion on Application of tandem mass spectrometry in organic acid metabolism in children with differential diagnosis of diseases. Methods: Tandem mass spectrometry was used for comparative analysis in dry blood filter paper 1200 cases of hereditary metabolic disease in high-risk children. Results: Diagnosed with organic acidemia children patients 64 cases (5.3%), wherein the methylmalonic aciduria (MMA) in 26 cases, propionic acidemia (PA) in 11 cases, biotinidase deficiency in 5 cases, holocarboxylase synthetase deficiency in 10 cases; 3- tiglyl coenzyme A carboxylase deficiency disease (MCC) in 2 cases, 3- hydroxy -3- methyl amyl two acyl coenzyme A lyase deficiency (HMG) in 2 cases, beta ketothiolase deficiency (BKT) in 3 cases, isovaleric acidemia (IVA) in 1 cases, glutaric acidemia (GA-I) in 3 cases, 1 cases of glutaric acidemia type GA-II.Conclusion: Tandem mass spectrometry technology plays an important role in diagnosisof children's organic acid metabolism disease, early intervention and prevention of inherited metabolic diseases.【keywords】]Tandem mass spectrometry organic acid acyl carnitine differential diagnosis 串联质谱技术（tandem mass spectrometry，MS/MS）是一种高效、快速和准确检测物质含量的技术。
串联质谱技术的基本情况
技术的基本情况1. 技术原理：（包括技术方法、所采用的仪器设备及技术的先进性、科学性等）质谱技术的基本原理是将被测的化合物分子电离成不同质量电荷比（m/z）的带电离子，按其质荷比的不同进行分离，从而对化合物的成分和结构进行分析的一种方法，并通过测定离子峰的强度计算出待测化合物的浓度。
串联质谱（MS/MS）是由2个质谱仪串联而成，一级质谱将化合物按不同质荷比进行分离并对化合物进行能量修饰，二级质谱检测被测物质及惰性气体碰撞后的碎片离子的子离子，由被测物质的质荷比及其碎片子离子的质荷比共同对一个物质进行定性、定量分析，串联质谱是一种特异性更高，更准确的物质定性、定量分析技术。
串联质谱用于新生儿代谢病的筛查的实际操作中通过利用含有稳定同位素内标的溶液对滤纸干血片样本进行萃取，然后用串联质谱系统进行检测。
每个分析物的检测结果及它们对应的稳定同位素内标相关并及分析物浓度成正比。
串联质谱分析中数据的采集是通过中性粒子丢失、母离子扫描和多反应监测三种模式来完成，获得的数据通过串联质谱系统中的软件处理完成。
应用液相串联质谱联用仪测定新生儿外周血液中40余种氨基酸、游离肉碱和酰基肉碱，根据外周血液血液中氨基酸、游离肉碱和酰基肉碱浓度的变化筛查出氨基酸代谢病、有机酸代谢病和脂肪酸代谢病共三大类40余种遗传性代谢病，并对其中一部分疾病做出诊断和鉴别诊断。
仪器选用了国内目前在新生儿遗传代谢病筛查和诊断中普遍采用的AB SCIEX API 3200型液相串联质谱联用仪,该款仪器具有较高的灵敏度和超宽的动态范围和极高的可靠性，完全适用于遗传代谢病的筛查及诊断。
试剂采用广州市丰华生物工程有限公司提供的氨基酸、肉碱检测试剂，试剂盒采用了目前国内外应用普遍的先进非衍生化测定技术，临床应用于新生儿外周血氨基酸和肉碱的测定有较高的精密度和准确性，能极大限度的通过一次实验筛查出40余种遗传代谢病。
2. 技术在国内外的应用（包括该项技术在国内外的应用时间、范围、例数及该项技术的相关综述、参考文献，最好能提供准入批件）目前欧、美、澳洲及中国台湾地区都已经普及串联质谱疾病筛查方案，此方案可以更有效的一次性检测多达40余种遗传代谢性疾病，为针对性治疗提供有效依据，开辟了新的代谢病预防领域。
串联质谱检测干血滤纸片中氨基酸质控分析
串联质谱检测干血滤纸片中氨基酸质控分析高晓岚;王瑜;韩连书;顾学范【期刊名称】《中华实用儿科临床杂志》【年(卷),期】2007(022)014【摘要】目的通过对近3年的质控结果进行分析,探讨影响检测结果的因素及应对措施.方法美国疾病控制和预防中心(CDC)每年提供4批氨基酸质控干血滤纸片,利用串联质谱技术检测干血滤纸片中氨基酸水平.以美国CDC检测结果为标准,分析本实验室氨基酸质控结果偏差及其他实验室质控结果(213个实验室的均值)偏差之间的差异.结果本实验室每次质控结果所有氨基酸均在美国CDC检测结果95%可信区间内,且每一批结果的临床评价与美国CDC质控临床评价完全一致.本实验室质控结果偏差与其他实验室质控结果偏差比较,苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸和缬氨酸均无显著性差异,瓜氨酸有显著性差异(Z＝-2.945 P＜0.005).结论本实验室氨基酸质控结果,达到美国CDC的质控要求,瓜氨酸检测值偏低,其阳性判断切割值设定也相应降低.【总页数】3页(P1087-1089)【作者】高晓岚;王瑜;韩连书;顾学范【作者单位】上海交通大学医学院附属新华医院,上海市儿科医学研究所,小儿内分泌、遗传代谢病研究室,上海,200092;上海交通大学医学院附属新华医院,上海市儿科医学研究所,小儿内分泌、遗传代谢病研究室,上海,200092;上海交通大学医学院附属新华医院,上海市儿科医学研究所,小儿内分泌、遗传代谢病研究室,上海,200092;上海交通大学医学院附属新华医院,上海市儿科医学研究所,小儿内分泌、遗传代谢病研究室,上海,200092【正文语种】中文【中图分类】R725.8【相关文献】1.串联质谱检测干血滤纸片氨基酸方法的建立 [J], 韩连书;高晓岚;叶军;邱文娟;顾学范2.串联质谱法快速检测干血滤纸片酰基肉碱含量 [J], 蔡燕娜;彭敏芝;赵小媛;吴冬燕;盛慧英;范莉萍;刘丽3.同位素内标物工作浓度和保存时间对于串联质谱法检测干血滤纸片上氨基酸含量的影响 [J], 李启亮;宋文琪;徐樨巍4.串联质谱分析干血滤纸片中酰基肉碱质控 [J], 高晓岚;王瑜;韩连书;叶军;邱文娟;周建德;顾学范5.液-质联用串联质谱检测干血滤纸氨基酸水平的影响因素 [J], 李启亮;宋文琪;徐樨巍;周敏;金芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
串级质谱 氨基酸检测应用方案
串级质谱（MS/MS）是一种用于氨基酸检测的应用方案。
以下是该方案的一般步骤：
1. 样品制备：从待测样品（如血液、尿液等）中提取目标分子。
可以使用有机溶剂（如甲醇、乙腈）或
盐溶液（如磷酸盐缓冲液）进行提取。
2. 样品前处理：根据需要，可以使用化学方法（如酶切、酸解等）对样品进行前处理，以提高目标分子
的浓度或去除干扰物。
3. 质谱仪设置：将质谱仪设置为串级质谱模式（MS/MS）。
调整离子源和质谱仪参数，以达到最佳的信
号强度和分辨率。
4. 氨基酸序列测定：通过测定肽段的质量来推断氨基酸序列。
质谱技术具有高灵敏度、高分辨率、广泛
的质量范围和多样性的分析模式等优势，使其成为生物制药领域中氨基酸序列测定的首选方法。
5. 质量控制：在生物药物的生产过程中，质量控制是至关重要的一环。
质谱技术可以用于验证生产过程
中的每个阶段，确保生物药物的质量和一致性。
通过测定氨基酸序列，质谱技术可以检测和定量可能存在的变异、修饰和杂质，提供了关键的质量控制信息。
HHH 综合征(高鸟氨酸血症-高氨血症-同型瓜氨酸尿症)诊疗指南【2019版】
49.高苯丙氨酸血症概述高苯丙氨酸血症（hyperphenylalaninemia，HPA）是由于苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase ，PAH ）缺乏或其辅酶四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）缺乏，导致血苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）增高的一组最常见的氨基酸代谢病。
血Phe浓度＞120μmol/L（＞2mg/dl）及血Phe与酪氨酸（tyrosine，Tyr）比值（Phe/Tyr）＞2.0统称为HPA。
病因和流行病学HPA 的病因分为PAH 缺乏症（又称苯丙酮尿症PKU）和BH4 缺乏症（BH4D）两大类，均为常染色体隐性遗传病。
PAH 缺乏症是由于PAH 基因发生致病变异，导致PAH 活性下降，Phe 不能转换为Tyr，使得Tyr 及正常代谢产物合成减少，血Phe 浓度增高，最终影响中枢神经系统发育。
四氢生物喋呤（BH4）是三个芳香族氨基酸苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸羟化酶的辅酶。
BH4 代谢途径中任何一种酶的缺陷均可导致BH4D，不仅阻碍Phe 代谢，还会影响脑内神经递质的合成，患者出现严重的神经系统损害。
各个国家与地区HPA 的发病率不同。
我国1985—2011 年3500 万新生儿筛查资料显示，发病率为1:10 397。
2000—2007 年我国新生儿筛查资料显示，HPA 中12.9％为BH4D，并存在显著的地域差异，南部地区BH4D 发病率较高。
根据血Phe 浓度将PAH 缺乏症分为：轻度HPA（120～360μmol/L）、轻度苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）（360～1200μmol/L）、经典型PKU（≥ 1200μmol/L）。
临床表现HPA缺乏症患儿在新生儿期多无临床症状，出生3～4个月后逐渐出现典型症状：头发由黑变黄，皮肤颜色浅淡，尿液、汗液鼠臭味。
随着年龄增长，逐渐表现出智力发育落后、小头畸形、癫痫发作，也可出现行为、性格、神经认知等异常。
串联质谱法快速检测干血滤纸片酰基肉碱含量
串联质谱法快速检测干血滤纸片酰基肉碱含量蔡燕娜;彭敏芝;赵小媛;吴冬燕;盛慧英;范莉萍;刘丽【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2011(026)004【摘要】目的建立一种串联质谱法对干血滤纸片中的酰基肉碱进行快速分析,以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果的监测.方法取8种不同浓度的酰基肉碱的干血滤纸片(直径5 mm),用甲醇(含已知浓度的相应酰基肉碱同位素内标)对其进行萃取,不进行衍生化,萃取物过滤后直接进入ESI+-MS/MS上机分析测定;采用多反应监测模式(MRM),以标准品制作标准曲线,同位素内标法定量建立分析方法,进行回收试验、精密度试验、干扰试验及准确度试验.结果各标准曲线相关系数r2>0.994.低浓度各种酰基肉碱回收率为85 %～103.5%,准确度在91.8%～110.0%;中浓度各种酰基肉碱回收率为85%～96%,准确度在87.6%～110.1%;高浓度酰基肉碱回收率为94%～100.1%,准确度在95.7%～110.1%.实测值与加入浓度之间的相关系数(r)为:0.997～1.000.各种酰基肉碱批内变异系数(CV)1%～10%和批间变异系数(CV)5%～13%.内标液保存1～21天的检测均值均在CDC提供的参考范围内,而批内CV%均＜10%.263例0～6岁健康儿童血滤纸片中酰基肉碱浓度因受年龄因素影响,按不同年龄组划分各种肉碱参考范围.结论非衍生化串联质谱法分析干血滤纸片中的酰基肉碱含量,样本前处理简单,能够达到较高的精确度和准确度,无常规串联质谱中的衍生化、氮吹和复溶等步骤,大大节省了的标本处理时间,是一项简便、快捷、准确的检测方法,可以用于脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断及治疗效果监测.【总页数】5页(P16-20)【作者】蔡燕娜;彭敏芝;赵小媛;吴冬燕;盛慧英;范莉萍;刘丽【作者单位】广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623;广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科,广州,510623【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.0~6岁健康儿童干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱水平研究 [J], 蔡燕娜;彭敏芝;江敏妍;刘丽2.同位素内标物工作浓度和保存时间对于串联质谱法检测干血滤纸片上氨基酸含量的影响 [J], 李启亮;宋文琪;徐樨巍3.串联质谱分析干血滤纸片中酰基肉碱质控 [J], 高晓岚;王瑜;韩连书;叶军;邱文娟;周建德;顾学范4.北京地区新生儿全血13种酰基肉碱串联质谱法参考区间的调查 [J], 李启亮;宋文琪;徐樨巍;葛群5.应用串联质谱法建立正常儿童干血斑氨基酸及酰基肉碱的参考区间 [J], 李娴; 李林飞; 李东晓; 宋银森因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ａ
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ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
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ＰＣＲ—ｒｅｖｅｌ３［，ｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ
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ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｏｇｅｎｉｔａｌ
ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｎｍｖｉｍｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９９，３７：２５０８－２５１７．
方法学评价方面的研究。本文旨在通过分析中性丢失法和 多反应监测法检测干血滤纸片上氨基酸含量的精密度和准 确度性能验证情况，选择最适扫描方式，为实验室开展该项 目检测提供方法学依据。 一、材料与方法 １．标本来源：美国疾病控制中心质控部门提供的 ２００９年度用于大规模室间质评的定值质控纸片，批号分别 为９２１、９２２、９２３、９２４。定值纸片上含有５种定值氨基酸，分 别为蛋氨酸（Ｍｅｔ）、异亮－亮氨酸（Ｌｅｕ—ｔｉｅ）、苯丙氨酸（Ｐｈｅ）、
ｏｔｈｅｒ ＨＰＶ ｔｙｐｅｓ．Ｊ
Ｄｉｓ，２００１．１８３：８－１５．
ｏｆ ２７
【５］Ｇｒａｖｉｔｔ ＰＥ，Ｐｅｙｔｏｎ ＣＬ，Ａｐｐｌｅ ＲＪ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ
ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｍｓ ｔｙｐｅｓ ｂｙ
ｕｓｉｎｇ
ｈｕｍａｎ
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Ｌ１
ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ
ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ
ｓｉｎｇｌｅ・ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｌｉｎｅ ｂｌｏｔ Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，１９９８。３６：３０２０－３０２７．
本岛津公司），ＡＰｌ２０００型质谱分析仪（美国ＡＢＩ公司），
万方数据
主堡捡笙医堂盘查垫！Ｑ生垒月筮塑鲞筮鱼翅￡坠！』！坐丛鲤：』婴！垫！Ｑ，！些箜：盟璺§ ９６孔板氮吹仪（北京众益中和生物技术有限公司）。５种氨 基酸同位素内标（２Ｈ３．Ｍｅｔ
２Ｈ３．Ｌｅｕ、１３ Ｃ６－Ｐｈｅ、１３ ｃ６－Ｔｙｒ、
Ｂ＝ ４
）。根据美国ＣＤＣ提供的靶值，计算两种方
１００％］、平均相对偏倚（ｂ％＝型一，ｎ＝２０）以及平均相对
表ｌ
一∑ｂｉ％
中性丢失法和多反应监测法检测氨基酸水平精密度结果（ｉｚｍｏＶＬ）
万方数据
・５“・
旦坐捡殓医堂盘盍垫！Ｑ生§旦箍！！鲞筮！翅垡！垫』！坐丛鲤：』！塑垫！Ｑ：！丛塑：盟垒！ 表２ 中性丢失法和多反应监测法检测氨基酸水平准确度结果
［９］Ｃａｓｄｅ ＰＥ，Ｓｃｈｉｆｆｍａｎ Ｍ，Ｂｕｒｋ
ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｈｙｂｒｉｄ
ｃａｐｔｕｒｅ ２ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ
ＲＤ，ｅｔ
ａ１．Ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ
ｎｏｎｏｎｃｏｇｅｎｉｃ
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ｗｉｔｈ
ｈｕｍａｎ
ｔｙｐｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ
Ｆｘ，ｄｅ ｈｕｍａｎ
・５６２・
主堡捡堕匡堂盘盍垫！Ｑ堡垒旦筮箜鲞筮！期垡堕！』地丛鱼：』！塑垫！Ｑ，！！ｋ塑，堕垒鱼
参 ［１］ｄｅ 考 文 献
对序列中不一致碱基数为１１个。 讨 论
Ｖｉｌｌｉｅｍ ＥＭ，Ｆａｕｑｕｅｔ Ｃ，Ｂｒｏｋｅｒ ＴＲ．ｅｔ ａ１．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｍａｅａ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００４，３２４：１７－２７．
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．Ｊ Ｃｌｉｎ
［６］Ｔｉｅｂｅｎ
ＬＭ，ｔｅｒ
Ｓｃｈｅｇｇｅｔ Ｊ，Ｍｉｎｎａａｒ
ｔｙｐｅｓ
ｌｉＰ。ｅｔ
ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｃｕｔａｎｅｏｕｓ
ａｎｄ ｇｅｎｉｔａｌ ＨＰＶ
ｉｎ ｃｆｉｍｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ
ｃｏｎｇｅｎｓｉｌ８ ｐｒｉｍｅｎ．Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９３，４２：２６５－２７９． ［７］Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｕｌｅ ＡＪ，Ｐｏｌ Ｒ，Ｆｒａｎｓｅｎ－Ｄａａｌｍｅｉｊｅｒ Ｎ，ｅｔ ａ１．ＧＰ５＋／６ ＋ＰＣＲ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｒｅｖｅｌ＇Ｂｅ ｌｉｎｅ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｅｎａｂｌｅｓ ｒａｐｉｄ ａｎｄ
［２］Ｄｅｌｌ Ｇ，Ｇａｓｔｏｎ Ｋ．Ｈｕｍｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖ／ｒｎｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ
目前国内外对ＨＰＶ进行分型的方法主要采用 以通用引物扩增为基础的检测和ＨＣ．ＩＩ检测技术。 目前常用几种通用引物都设计位于基因组Ｌｌ区保
ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ ｓｃｉ．２００１。５８：１９２３．１９４２．
（收稿日期：２眄－１１－３０）
（本文编辑：唐栋）
串联质谱法两种扫描方式检测干血滤纸片上
氨基酸含量的精密度和准确度
李启亮徐樨巍宋文琪
遗传代谢病是指参与体内代谢的某种酶、运载蛋白、膜 受体等编码基因发生突变，使其编码的产物功能不良而引发 代谢失常的一组疾病…。许多种类的遗传代谢病已有特效 治疗方法，降低病死率及远期神经系统后遗症发生率依赖于 早期快速诊断前提下的及早干预治疗旧１。国内外的大型实 验室主要通过串联质谱技术来辅助临床医师进行遗传代谢 病诊断¨…。目前，主要应用中性丢失法或多反应监测法检 测氨基酸含量，但国内很少有关于这两种方法检测氨基酸的
【４］ＬｉａｗＫ
ｈｕｍａｎ
ａ１．Ａ １６
ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ
ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｂｙ
Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕａ（ＨＰＶ）ｔｙｐｅ
ｒｅａｃｔｉｏｎ
ＤＮＡ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
Ｐｏｌｙｍｅｒａｓ ｃｈａｉｎ
ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ
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ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｉｎｆｅｃｔ
ｗｉｔｈ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ
ｈｉ出－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐａｐｉＵｏｍａｖｉｒｕｓ
Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉ０１．２００２。４０：７７９－７８７．
ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．
［８］Ｋｌｅｔｅｒ Ｂ，Ｖａｎ
ｌｉｎｅ ｐｒｏｂｅ
Ｄｏｏｍ ＬＪ，Ｓｃｈｍｕｗｅｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
［３］Ｃｌｉｆｆｏｒｄ
ｍｅｔａ
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Ｔ。ｅｔ
ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＨＰ、ｒ
ｔｙｐｅ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉａｎ ｉｎ ｈｉ出一ｇｒａｄｅ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｌｅｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｅｒｖｉｃａｌ
ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００３，８９：１０１．１０５． Ｌ，Ｈｉｌｄｅｓｈｅｉｍ Ａ，Ｂｕｒｋ
中性丢失法检测氨基酸的过程是在样品经过质谱仪的 第一个质量分析器时扫描一定质荷比（ｍ／ｚ）范围的母离子， 在第二个质量分析器扫描丢失了ｍ／ｚ为１０２的中性分子的 子离子（仅限于中性和酸性氨基酸），最终形成一个氨基酸 质谱图１８１；多反应监测法检测氨基酸的过程是在第一个质量 分析器处只允许特定ｍ／ｚ的母离子通过，在第二个质量分析 器处只允许特定ｍ／ｚ的子离子通过，凡符合两次筛选条件时 即可得到一个信号，最终形成一个氨基酸质谱图。目前，对 于质谱法检测氨基酸的推荐扫描方式尚无定论，为了客观的 评价两种方法，本研究采用美国临床实验事标准化协会推荐 的ＥＰ．１５Ａ［７１文件中提供的关于方法学精密度和准确度验证 方案对两种方法做出比较客观的评价。 本研究用于精密度验证的主要指标是批内不精密度和 总不精密度（通常用标准偏差来衡量）。与传统的单批次检 测批内不精密度的方法不同，本研究的批内不精密度指标是 由多次检测的批内标准偏差合并得到，代表着日常条件下的 重复特性，这样可确保评估更有说服力和代表性。而总不精 密度指标虽然需要一些繁琐的计算，但不依赖于评价的天数 和一天内的批数（与传统的方法不同）。在综合考虑了样本 预处理环节、测试物稳定性、携带率和漂移等因素的基础上， 可正确的合并批内、批间和日间的影响，从而使实验设计和 指标的计算更加合理。而准确度的高低则主要以相对偏倚 的大小衡量。通过将检测结果与美国疾病控制中心提供的 验证参数进行比较，以判断精密度和准确度的可接受性。 本研究发现，两种方法检测到的所有氨基酸精密度和准 确度结果均在美国疾病控制中心的允许范围之内，所有结果 均可接受。但总体而言，两者均存在各自的优点和不足。例 如，中性丢失法的优势在于方便、简洁，尤其是检测多种类似 化合物时，其在参数设置方面比多反应监测法简便，对优化 参数时所使用的标准物质的要求不高。但是，中性丢失法的
ＲＤ，ｅｔ
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守区段。使用的通用引物有ＭＹ０９／１Ｉ引物∞１和ｃｐ
Ｉ／Ⅱ引物∞Ｊ，另外还有含错配碱基的Ｇｐ５＋／６＋引 物ｒ刊和ＳＰＦ引物哺１等。ＨＣ．ＩＩ是Ｄｉｇｅｎｅ公司的一 种新型ＨＰＶ ＤＮＡ检测技术，该法所使用的是含 ＨＰＶｌ６、１５、３１、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９和６８等 １３种ＨＰＶ型的全长ＲＮＡ探针物一Ｊ。本研究所建 立的ＨＰＶ分型质控品除了ＨＰＶ ＣＰ８３０４外均包含 有不同型别Ｌ１基因全长，ＨＰＶ ＣＰ８３０４为ＭＹ０９／１ｌ 引物扩增产物。国内凯普公司的ＨＰＶ分型试剂可 以区分２１种型别，上海透景公司的试剂盒可以区分 ２６种型别，深圳亚能公司的可以区分２３种型别，北 京金菩嘉公司的可以区分２４种型别等，国内试剂盒 所能区分的型别绝大多数均包含在本研究所建立的 质控品中。因此，该质控品能基本满足不同试剂盒 的评价。根据国际癌症研究协会的研究，ＨＰＶｌ６、 １８、４５、３１、３３、５２、５８、３５、５９、５６、３９、５１、７３、６８、６６等 型别最常见¨０｜，本研究建立了包含３０种不同型别 的ＨＰＶ基因分型质控品包含了所有最常见型别，为 临床实验室质量评价提供了可靠的质控品。
提供；总精密度验证参数＝半，其中盯总由美国疾病控
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）【２，ｘ，，Ｘ４），计算每个样本测定结果的批均值瓴＝孕）、每
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个批号样本的总均值（詹）以及批内不精密度（ｓ批内＝√警，