微生物学实验课件
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二、基本原理
通过机械作用滤去液体或空气中的 细菌
微孔滤膜过滤除菌
器材
培养基、2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板 注射器、微孔滤膜过滤器、0.22um滤膜、无菌
试管、镊子、玻璃刮棒
操作步骤
组装滤膜、灭菌 连接 压滤 无菌检查 清洗
试验报告
记录无菌检查结果
实验二 微生物的染色与形态结 构的观察
6.加塞 7.包扎 8.灭菌 9.搁置斜面
注意事项
1.蛋白胨易吸水，称取要迅速 2.琼脂溶化过程中注意温度，勿
使过热溢出
消毒与灭菌
消毒与灭菌的概念
消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养 体
灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子
消毒与灭菌的主要方法
加热法 过滤法 照射法 化学药品
步骤
培养基的制备原理
牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广 泛的、最普通的细菌培养基,也称 普通培养基
组成
牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维 生素
蛋白胨：氮源、维生素 NaCl: 无机盐 水 琼脂：塑型
培养基的制备方法
1.称量(牛肉膏,蛋白
胨,NaCl)
2.溶化 3.调pH 4.过滤 5.分装
无菌生长则可用
试验报告
检查灭菌是否彻底
紫外线灭菌
一、目的要求：
了解紫外线灭菌的基本原理及方法
二、基本原理
紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、 DNA链的交联，抑制DNA的复制
幅射使空气中的氧电离产生[o],使o2生成 臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用 O3H2O2的氧化杀菌作用
间歇灭菌法
加热法－－湿热灭菌
煮沸消毒法
注射器、解剖器械等 10-15 min可杀死细菌所有营养体、
部分芽孢
超高温杀菌
135-150℃、2-8s 牛奶及其他液态食品 杀死微生物、保存营养
其他方法
过滤除菌
血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消 毒灭菌
辐射灭菌
紫外线照射
化学药品灭菌
2.增加显微镜的分辨率
油镜的使用方法
1.准备工作（复习）
显微镜的放置 光源的调节 目镜的调节 聚光器的调节
油镜的使用方法
2.显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察
寻找观察目标
油镜观察
在观察目标区域滴加香柏油，仔细微 调，认真观察
油镜的使用方法
3.显微镜使用完毕的处理
上升镜筒，取下载玻片 用擦镜纸檫去油 用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇 用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜 还原各部分
水蒸气的穿透性强 湿热的蒸汽有潜热
高压蒸汽灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅
操作步骤
取出内层锅，向外层锅内加适量的水 放置内层锅及待灭菌物 加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽 加热同时打开排气阀 灭菌所需时间到后关闭电源，降温 取出灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，检查
紫外线灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外 线灯
操作步骤
紫外线灯直接照射30min、检查培养基 37℃温箱培养24小时，无菌生长则可用
化学消毒剂与紫外线照射结合使用
试验报告
检查灭菌是否彻底
微孔滤膜过滤除菌
一、目的要求：
１.了解过滤除菌的基本原理。 ２.掌握过滤除菌方法。
重金属离子、抗生素、来苏尔、７５％ 的乙醇。
干热灭菌
目的要求：
１.了解干热灭菌的原理和应用范围 ２.学习干热灭菌的操作技术
基本原理：
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝 固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当 环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之，含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌 相比，干热灭菌所需温度高（１６０～１７０ ℃），时间长。
微生物学实验
实验一 微生物学实验基础
普通光学显微镜的使用 培养基的制备 消毒与灭菌 细菌三型的观察
普通光学显微镜的使用
目的要求 1.学习并掌握油镜的原理及使用
方法 2.复习普通台式显微镜的结构、
各部分的结构、使用方法
基本原理（油镜的原理）
1.增加照明亮度
在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相 近的介质（如：香柏油）减少光线的 折射与反射损失
加热法
干热灭菌
火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、 金属用具、无菌操作时在火焰上短 暂灼烧瓶口等
热空气灭ห้องสมุดไป่ตู้：玻璃器皿
加热法－－湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅 15-30min 培养基、工作服、橡皮物品、玻璃
器皿等
常压蒸汽灭菌
某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基 不具备高压蒸汽灭菌条件的 仅能杀死大多数微生物、可用常压
干热灭菌
器材：
培养皿，试管，吸管，电烘箱等
操作步骤：
装入待灭菌的物品：避免物品太挤妨碍空气
流通
升温 恒温 降温 开箱取物：温度未降至70℃前勿开箱，防爆
高压蒸汽灭菌
一、目的要求：
１.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用 范围。
２.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。
二、基本原理
高压使水的沸点增高，产生超过100℃的 高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性
电荷，而碱性染料电离时其分子的染色部分带正 电荷，染料易使细菌着色。
细菌的简单染色法
器材
菌种：枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液
操作步骤
涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操 作挑少许菌苔涂成薄膜
干燥：室温自然干燥 固定：热固定 载玻片涂面朝上通过火焰2-3次 染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min 水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液 干燥镜检
主要内容
细菌的简单染色法 革兰氏染色法 细菌的芽孢染色法 荚膜染色法
细菌的简单染色法
一、目的要求：
１.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细 菌的简单染色法。
２.初步认识细菌的形态特征。 3. 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技
术。
二、基本原理
常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等 在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负
注意：切勿用手、其他纸擦拭镜 头
实验观察内容及实验报告
内容：观察金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌的染色标本
试验报告：绘出金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。
链球菌
杆菌
培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的制备 目的要求 1.明确培养基的制备原理 2.掌握配置培养基的一般方法与
通过机械作用滤去液体或空气中的 细菌
微孔滤膜过滤除菌
器材
培养基、2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板 注射器、微孔滤膜过滤器、0.22um滤膜、无菌
试管、镊子、玻璃刮棒
操作步骤
组装滤膜、灭菌 连接 压滤 无菌检查 清洗
试验报告
记录无菌检查结果
实验二 微生物的染色与形态结 构的观察
6.加塞 7.包扎 8.灭菌 9.搁置斜面
注意事项
1.蛋白胨易吸水，称取要迅速 2.琼脂溶化过程中注意温度，勿
使过热溢出
消毒与灭菌
消毒与灭菌的概念
消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养 体
灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子
消毒与灭菌的主要方法
加热法 过滤法 照射法 化学药品
步骤
培养基的制备原理
牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广 泛的、最普通的细菌培养基,也称 普通培养基
组成
牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维 生素
蛋白胨：氮源、维生素 NaCl: 无机盐 水 琼脂：塑型
培养基的制备方法
1.称量(牛肉膏,蛋白
胨,NaCl)
2.溶化 3.调pH 4.过滤 5.分装
无菌生长则可用
试验报告
检查灭菌是否彻底
紫外线灭菌
一、目的要求：
了解紫外线灭菌的基本原理及方法
二、基本原理
紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、 DNA链的交联，抑制DNA的复制
幅射使空气中的氧电离产生[o],使o2生成 臭氧（O3）或使H2O生成H2O2,利用 O3H2O2的氧化杀菌作用
间歇灭菌法
加热法－－湿热灭菌
煮沸消毒法
注射器、解剖器械等 10-15 min可杀死细菌所有营养体、
部分芽孢
超高温杀菌
135-150℃、2-8s 牛奶及其他液态食品 杀死微生物、保存营养
其他方法
过滤除菌
血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消 毒灭菌
辐射灭菌
紫外线照射
化学药品灭菌
2.增加显微镜的分辨率
油镜的使用方法
1.准备工作（复习）
显微镜的放置 光源的调节 目镜的调节 聚光器的调节
油镜的使用方法
2.显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察
寻找观察目标
油镜观察
在观察目标区域滴加香柏油，仔细微 调，认真观察
油镜的使用方法
3.显微镜使用完毕的处理
上升镜筒，取下载玻片 用擦镜纸檫去油 用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇 用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜 还原各部分
水蒸气的穿透性强 湿热的蒸汽有潜热
高压蒸汽灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅
操作步骤
取出内层锅，向外层锅内加适量的水 放置内层锅及待灭菌物 加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽 加热同时打开排气阀 灭菌所需时间到后关闭电源，降温 取出灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，检查
紫外线灭菌
器材：
牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外 线灯
操作步骤
紫外线灯直接照射30min、检查培养基 37℃温箱培养24小时，无菌生长则可用
化学消毒剂与紫外线照射结合使用
试验报告
检查灭菌是否彻底
微孔滤膜过滤除菌
一、目的要求：
１.了解过滤除菌的基本原理。 ２.掌握过滤除菌方法。
重金属离子、抗生素、来苏尔、７５％ 的乙醇。
干热灭菌
目的要求：
１.了解干热灭菌的原理和应用范围 ２.学习干热灭菌的操作技术
基本原理：
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝 固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当 环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之，含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌 相比，干热灭菌所需温度高（１６０～１７０ ℃），时间长。
微生物学实验
实验一 微生物学实验基础
普通光学显微镜的使用 培养基的制备 消毒与灭菌 细菌三型的观察
普通光学显微镜的使用
目的要求 1.学习并掌握油镜的原理及使用
方法 2.复习普通台式显微镜的结构、
各部分的结构、使用方法
基本原理（油镜的原理）
1.增加照明亮度
在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相 近的介质（如：香柏油）减少光线的 折射与反射损失
加热法
干热灭菌
火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、 金属用具、无菌操作时在火焰上短 暂灼烧瓶口等
热空气灭ห้องสมุดไป่ตู้：玻璃器皿
加热法－－湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅 15-30min 培养基、工作服、橡皮物品、玻璃
器皿等
常压蒸汽灭菌
某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基 不具备高压蒸汽灭菌条件的 仅能杀死大多数微生物、可用常压
干热灭菌
器材：
培养皿，试管，吸管，电烘箱等
操作步骤：
装入待灭菌的物品：避免物品太挤妨碍空气
流通
升温 恒温 降温 开箱取物：温度未降至70℃前勿开箱，防爆
高压蒸汽灭菌
一、目的要求：
１.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用 范围。
２.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。
二、基本原理
高压使水的沸点增高，产生超过100℃的 高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性
电荷，而碱性染料电离时其分子的染色部分带正 电荷，染料易使细菌着色。
细菌的简单染色法
器材
菌种：枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液
操作步骤
涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操 作挑少许菌苔涂成薄膜
干燥：室温自然干燥 固定：热固定 载玻片涂面朝上通过火焰2-3次 染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min 水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液 干燥镜检
主要内容
细菌的简单染色法 革兰氏染色法 细菌的芽孢染色法 荚膜染色法
细菌的简单染色法
一、目的要求：
１.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细 菌的简单染色法。
２.初步认识细菌的形态特征。 3. 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技
术。
二、基本原理
常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等 在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负
注意：切勿用手、其他纸擦拭镜 头
实验观察内容及实验报告
内容：观察金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌的染色标本
试验报告：绘出金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。
链球菌
杆菌
培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的制备 目的要求 1.明确培养基的制备原理 2.掌握配置培养基的一般方法与