电化学发光免疫分析法 ppt课件
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《化学发光免疫分析》课件
内分泌疾病诊断
在内分泌疾病的诊断中，化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等，有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果， 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术，可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程，为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度， 能够检测到极低浓度的目标物质，如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ，不易降解，提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围，能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代，随着酶标记技术的发展，研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展，化学发光免疫分析技 术不断完善，成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现，提 高了检测的灵敏度和特异性，拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物，如激素、细胞 因子、生长因子等，有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术，化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析，检测基因表达 产物的蛋白质水平，从而研究基因功 能和调控机制。
在内分泌疾病的诊断中，化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等，有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果， 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术，可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程，为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度， 能够检测到极低浓度的目标物质，如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ，不易降解，提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围，能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代，随着酶标记技术的发展，研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展，化学发光免疫分析技 术不断完善，成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现，提 高了检测的灵敏度和特异性，拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物，如激素、细胞 因子、生长因子等，有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术，化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析，检测基因表达 产物的蛋白质水平，从而研究基因功 能和调控机制。
化学发光免疫分析技术【检验科】--ppt课件
是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光
免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病 、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面 的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
• 灵敏度高
• 参考范围： FT3：2.3—4.0pg/mL FT4：0.6—1.2ng/dL
• 临床意义：
血清FT3和FT4升高：⑴甲亢；⑵低T3综合征，由于5’脱碘酶受抑制，T4外 周脱碘作用障碍使FT4升高；⑶甲状腺素不敏感综合征， FT3和FT4升 高，而无甲亢表现；⑷某些药物，胺碘酮、肝素等可使FT4升高；FT3 适合于甲亢和左旋甲状腺素治疗中药物是否过量的判断。
电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统 主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的 酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心 性能达到了国际同类产品先进水平。
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
HRP
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
电化学发光免疫分析法课件
案例总结
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
电化学发光免疫检测项目临床应用PPT课件
（5）多种药物可通过不同的环节影响TT4水平，如 含碘药物、雌激素、避孕药、β受体组织剂等，在 测定甲状腺激素时，应注意排除其干扰。
21
游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）
【指标简介】FT3是血中以游离状态存在的，可 直接与T3受体结合而具有生理作用的三碘甲状 腺原氨酸，约占TT3的0.3%。其测定不受含碘 杂质和TBG浓度的影响，因而比TT3更为灵敏。 正常参考值：3.95-6.8pmol/L或2.574.43pg/ml
25
常见甲状腺疾病及相应激素变化
甲状腺疾病
新生儿甲低 重度甲状腺功能减退症 轻度甲状腺功能减退症 下丘脑－垂体性甲状腺功能减低症 正常人 T3型甲亢 服用外源性T3过多 甲亢复发前驱 Graves病甲亢 代偿性T3升高 1 亚临床型甲低 2 耳聋甲状腺综合症 3 地方性甲状腺肿 TBG结合量增加 服用过多外源性T4
12
【临床意义及鉴别诊断】
（3）慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者可出现血清TSH升高， 是因为甲状腺滤泡破坏，甲状腺激素分泌减少，对TSH的 负反馈调节作用减弱的结果。其血中甲状腺激素可正常， 而TSH较前升高。
（4）血清TSH升高尚可见于地方性甲状腺肿、垂体分泌促 甲状腺激素腺瘤、甲状腺激素应用过量等情况；降低尚可 见于肢端肥大症、柯兴氏综合症以及应用多巴胺、糖皮质 激素的患者。
13
总三碘甲状腺原氨酸（TT3）
【指标简介】3-5-3′-三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，T3） 是含碘的酪氨酸衍生物，体内的T3 65%由甲状腺合成分泌， 35%由T4在肝肾等外周组织经5′-脱碘酶作用下脱碘后形成。T3 与甲状腺结合球蛋白（TBG）结合的亲和力比T4小，且其游离度 约比T4大10倍左右，故其生物活性大于T4。T3具有广泛和重要 的生物效应，与机体碳水化合物、脂肪、蛋白质、维生素、水和 电解质等物质的代谢，以及全身多系统的功能密切相关。甲状腺 激素是中枢神经系统的发育所必需，儿童缺乏甲状腺激素可影响 生长发育，以至形成克汀病。 正常参考值：1.3-3.1nmol/l或0.8-2.0ng/ml(2.5-97.5%;n=514)
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游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）
【指标简介】FT3是血中以游离状态存在的，可 直接与T3受体结合而具有生理作用的三碘甲状 腺原氨酸，约占TT3的0.3%。其测定不受含碘 杂质和TBG浓度的影响，因而比TT3更为灵敏。 正常参考值：3.95-6.8pmol/L或2.574.43pg/ml
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常见甲状腺疾病及相应激素变化
甲状腺疾病
新生儿甲低 重度甲状腺功能减退症 轻度甲状腺功能减退症 下丘脑－垂体性甲状腺功能减低症 正常人 T3型甲亢 服用外源性T3过多 甲亢复发前驱 Graves病甲亢 代偿性T3升高 1 亚临床型甲低 2 耳聋甲状腺综合症 3 地方性甲状腺肿 TBG结合量增加 服用过多外源性T4
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【临床意义及鉴别诊断】
（3）慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者可出现血清TSH升高， 是因为甲状腺滤泡破坏，甲状腺激素分泌减少，对TSH的 负反馈调节作用减弱的结果。其血中甲状腺激素可正常， 而TSH较前升高。
（4）血清TSH升高尚可见于地方性甲状腺肿、垂体分泌促 甲状腺激素腺瘤、甲状腺激素应用过量等情况；降低尚可 见于肢端肥大症、柯兴氏综合症以及应用多巴胺、糖皮质 激素的患者。
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总三碘甲状腺原氨酸（TT3）
【指标简介】3-5-3′-三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，T3） 是含碘的酪氨酸衍生物，体内的T3 65%由甲状腺合成分泌， 35%由T4在肝肾等外周组织经5′-脱碘酶作用下脱碘后形成。T3 与甲状腺结合球蛋白（TBG）结合的亲和力比T4小，且其游离度 约比T4大10倍左右，故其生物活性大于T4。T3具有广泛和重要 的生物效应，与机体碳水化合物、脂肪、蛋白质、维生素、水和 电解质等物质的代谢，以及全身多系统的功能密切相关。甲状腺 激素是中枢神经系统的发育所必需，儿童缺乏甲状腺激素可影响 生长发育，以至形成克汀病。 正常参考值：1.3-3.1nmol/l或0.8-2.0ng/ml(2.5-97.5%;n=514)
《化学发光免疫技术》课件
总结词
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
电化学发光检验的原理PPT课件
特点
1.高特异性 ↆ
高度特异性结 合
2.高敏感性 ↆ
4个结合位点 3.高稳定性
ↆ 亲和常数高， 解离常数很低。
15
4 最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
编辑版pppt
16
5 反应杯中的复合物被转移至测量池
测量池中启动磁场，吸附磁颗粒连接的免疫复合物。
加入Procell溶液，去除反应体系杂质并提供三丙胺TPA 。
编辑版pppt
23
编辑版pppt
8
2.电化学发光反应原理
顾名思义，电化学发光（ECL）是电场参与化学发光所产生的结果，是指通过施加一定的电压进行电 化学反应：
[Ru(bpy)3]2+：三联吡啶钌，是一种电化学发光剂 TPA：三丙胺，电子供体。
失电子
(阳离子自由基,不稳定) ↆ
TPA－e¯→TPA+·－ H+ → TPA·（强还原剂）
电化学发光原理及应用
• 2017.10
编辑版pppt
1
目录
1 免疫检测技术的发展 2 电化学发光系统及其原理 3 电化学发光技术的优势
编辑版pppt
2
一.免疫检测技术的发展
电化学发光
放免
酶免 荧光免疫 化学发光
1959 1970~80‘S
2000‘S
免疫检测技术三个重要的历程
编辑版pppt
3
放射免疫分析
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
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38
ELIA优越性
也能标记，使检测的菜单大大丰富，更重要的是为其检测 菜单的开发前景提供了广阔空间。
25
电化学发光原理图
T P A +●
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R
u(bp
基态
y
)
2 3
+
激发态
R u ( b p y )3 *
不稳定
光 子 (620nm)
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
21
电化学发光剂
定义：指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。 特点
反应在电极进行 化学发光剂：三联毗啶钌 电子供体为：三丙胺（TPA）
22
三联毗啶钌分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N
O
O
23
三联吡啶钌 （EC[LR分析u中(b采p用y[R)u3(b]p2y+)3]）2+作特为标点记物，其活化衍生物
化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间 体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激 发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。
10
化学发光 反应包括 两个关键 步骤，即 化学激发 和发光。
化学发光反应能级图
化学发光分析
根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发 光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为 化学发光分析。
36
方法评价
“链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共价相互作用 的一对化合物，具有牢固而特异的结合，应用此放大系统， 使检测的灵敏度大大提高；
37
方法评价
利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结合态和游离态， 方便迅速，实现了精确的全自动化；
标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易 于测定。
电化学发光免疫分析
(Electro-Chemiluminescence Immunoassay, ECLI)
ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨荧 光免疫技术（TRFIA）之后的新一代标记
免疫测定技术； ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物； ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术之一。
14
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
化学发光免疫分析
chemiluminescence immunoassay（ CLIA）
CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一 种新的免疫分析技术。
这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的 高度特异性。
12
化学发光分析优点
化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免 了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，
并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害， 是一种非常优秀的定量分析方法。
13
化学发光分析缺点
虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但 化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。
16
化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按分离方法不同分
微粒子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定
17
化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按发光剂不同分为
发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） 化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） 电化学发光免疫测定技术（electro－chemiluminescence immunoassay， ECLI ）
18
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形 的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体 系中共存组分反应产生化学发光的现象。
20
电致化学发光（ECL)
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通 过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制， 具有灵活性。
3
免疫学检测历史演进
放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于 县级以上医院）；
酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍 使用）；
以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术（20世 纪90年代开始推广使用，产品步入成长期）三个阶段。
4
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电化学发光免疫分析法
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免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
免疫分析
基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质
标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强 放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。
发光现象
萤火虫发光
深海鱼发光
发光分类
光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激发态， 当回复至基态时发出较长波长的可见光。
生物发光：反应底物在荧光素酶的 催 化 下 利 用 ATP 产 能 ， 生 成 激 发 态 的氧化荧光素，后者在回复到基态 时多余的能量以光子形式放出。
化学发光
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化学发光 Chemiluminescence (CL)
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ECLI原理
在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化 学 发 光 剂 三 联 吡 啶 钌 [Ru(bpy)3]2+ 标 记 Ab ， 通 过 Ag-Ab 反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光 强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。
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方法评价
采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙 烯微粒。其特点是反应面积比板式扩大20－30倍，吸 附效率高；在液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快；
是[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS） ，该衍生物 具有水溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和 稳定，而且避免了本底噪声的干扰。
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[Ru三 点(bpy联)3]2吡+衍啶生物钌与免（疫球[R蛋白u结(b合p的y分)子3比]2超+过）20仍特 不会影响抗体的可溶性和免疫活性； [Ru(bpy)3]2+分子量小，空间位阻小 ，即便小分子的核酸
ELIA优越性
也能标记，使检测的菜单大大丰富，更重要的是为其检测 菜单的开发前景提供了广阔空间。
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电化学发光原理图
T P A +●
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R
u(bp
基态
y
)
2 3
+
激发态
R u ( b p y )3 *
不稳定
光 子 (620nm)
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电化学发光剂
定义：指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。 特点
反应在电极进行 化学发光剂：三联毗啶钌 电子供体为：三丙胺（TPA）
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三联毗啶钌分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N
O
O
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三联吡啶钌 （EC[LR分析u中(b采p用y[R)u3(b]p2y+)3]）2+作特为标点记物，其活化衍生物
化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间 体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激 发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。
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化学发光 反应包括 两个关键 步骤，即 化学激发 和发光。
化学发光反应能级图
化学发光分析
根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发 光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为 化学发光分析。
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方法评价
“链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共价相互作用 的一对化合物，具有牢固而特异的结合，应用此放大系统， 使检测的灵敏度大大提高；
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方法评价
利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结合态和游离态， 方便迅速，实现了精确的全自动化；
标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易 于测定。
电化学发光免疫分析
(Electro-Chemiluminescence Immunoassay, ECLI)
ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨荧 光免疫技术（TRFIA）之后的新一代标记
免疫测定技术； ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物； ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术之一。
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化学发光免疫分析
chemiluminescence immunoassay（ CLIA）
CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一 种新的免疫分析技术。
这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的 高度特异性。
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化学发光分析优点
化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免 了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，
并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害， 是一种非常优秀的定量分析方法。
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化学发光分析缺点
虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但 化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。
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化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按分离方法不同分
微粒子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定
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化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按发光剂不同分为
发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） 化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） 电化学发光免疫测定技术（electro－chemiluminescence immunoassay， ECLI ）
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电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形 的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体 系中共存组分反应产生化学发光的现象。
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电致化学发光（ECL)
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通 过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制， 具有灵活性。
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免疫学检测历史演进
放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于 县级以上医院）；
酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍 使用）；
以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术（20世 纪90年代开始推广使用，产品步入成长期）三个阶段。
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电化学发光免疫分析法
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免疫分析
基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质
标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强 放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。
发光现象
萤火虫发光
深海鱼发光
发光分类
光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激发态， 当回复至基态时发出较长波长的可见光。
生物发光：反应底物在荧光素酶的 催 化 下 利 用 ATP 产 能 ， 生 成 激 发 态 的氧化荧光素，后者在回复到基态 时多余的能量以光子形式放出。
化学发光
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化学发光 Chemiluminescence (CL)
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ECLI原理
在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化 学 发 光 剂 三 联 吡 啶 钌 [Ru(bpy)3]2+ 标 记 Ab ， 通 过 Ag-Ab 反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光 强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。
29
方法评价
采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙 烯微粒。其特点是反应面积比板式扩大20－30倍，吸 附效率高；在液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快；
是[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS） ，该衍生物 具有水溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和 稳定，而且避免了本底噪声的干扰。
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[Ru三 点(bpy联)3]2吡+衍啶生物钌与免（疫球[R蛋白u结(b合p的y分)子3比]2超+过）20仍特 不会影响抗体的可溶性和免疫活性； [Ru(bpy)3]2+分子量小，空间位阻小 ，即便小分子的核酸