BD FACScanto ll白血病免疫分型六色试剂搭配
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。
白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。
白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。
采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。
准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。
已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。
目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。
鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。
一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
急性淋巴白血病L2的治疗方法
急性淋巴白血病L2的治疗方法简介急性淋巴白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）是一种源于淋巴造血细胞的恶性肿瘤。
根据法国-美国-英国（FAB）分型系统，急性淋巴白血病可分为L1、L2和L3三个亚型。
本文将重点介绍急性淋巴白血病L2的治疗方法。
治疗策略急性淋巴白血病L2的治疗策略主要包括化疗、放疗和造血干细胞移植等综合治疗手段。
具体治疗方案应根据患者年龄、病情、分子遗传学和免疫学特征等因素来确定。
1. 化疗化疗是急性淋巴白血病L2的主要治疗方式。
化疗方案一般包括诱导治疗、巩固治疗、延续治疗和中枢神经系统预防治疗。
常用的化疗方案有VDCP（长春新碱、多柔比星、环磷酰胺、泼尼松）和Hyper-CVAD（环磷酰胺、维生素C、长春新碱、泼尼松、阿霉素、达卡巴嗪）等。
1.1 诱导治疗诱导治疗的目的是迅速减少白血病细胞数量，使患者达到完全缓解状态。
常用的药物包括长春新碱、多柔比星、雷公藤碱等。
1.2 巩固治疗巩固治疗旨在巩固诱导治疗的效果，继续减少残留白血病细胞。
常用的化疗方案有高剂量的甲氨蝶呤（MTX）、阿霉素等。
1.3 延续治疗延续治疗是为了避免白血病的复发，保持缓解状态。
常用的药物包括6-MP（巯基嘌呤）、MTX、达卡巴嗪等。
1.4 中枢神经系统预防治疗中枢神经系统预防治疗是为了预防白血病细胞侵犯中枢神经系统。
一般采用局部注射或腰椎穿刺给药，常用药物包括阿霉素。
2. 放疗放疗主要用于中枢神经系统预防和治疗，在化疗过程中或化疗后，采用局部照射或全身照射的方式。
放疗常常与化疗联合应用，以提高治疗效果。
3. 造血干细胞移植对于高危或复发的急性淋巴白血病L2患者，造血干细胞移植是一种有效的治疗手段。
移植来源可以是自体或异体的造血干细胞。
预后评估与监测根据患者的临床特征和治疗反应等因素，可以对急性淋巴白血病L2的预后进行评估。
常用的预后分层方案包括欧洲预后评估系统（EORTC）和德国预后评估系统（GMALL）等。
利用BDCANTOII流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势
龙源期刊网 利用BD CANTO II流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势作者：刘裔军韩蕊来源：《健康必读（上旬刊）》2018年第05期【摘要】目的：探讨利用BD CANTO II流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势。
方法：选取慢性淋巴细胞白血病患者（病例组）、健康人群（对照组）各20例用于模型建立，采用BD CANTO II流式细胞仪鉴别69例粒细胞增多的非急性白血病的患者反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势。
结果：流式细胞仪检测鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的灵敏度、特异性分别为96.00%、95.45%。
结论：BD CANTO II流式细胞仪可有效鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的趋势。
【关键词】流式细胞仪；慢性粒细胞白血病；粒细胞增多【中图分类号】R733 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）05-0095-02引言流式细胞术是在流动的状态中检测细胞或颗粒的各项特性，特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析。
流式细胞术已成为生物学和医学中不可缺少的工具，对血液学有重要影响。
迄今为止，急性淋巴细胞白血病（ALL）的诊断和分类依赖于白血病细胞克隆的流式细胞术描述。
本研究旨在探讨BD CANTO II流式细胞仪鉴别反应性和慢性粒细胞白血病肿瘤性粒细胞增多的准确性。
1 资料与方法1.1一般资料本研究选取2018年3月至2018年9月期间我院收治的20例慢性淋巴细胞白血病患者（病例组）以及20例健康人群（对照组）用于模型建立，另选取69例粒细胞增多的非急性白血病的患者（测试组）为研究对象。
1.2研究方法BD CANTO II流式细胞仪分选细胞：即从复杂的细胞群体中得到高纯度的靶细胞。
高速分选的原理：分选时，液流自驱动力的作用下断成高度均一的液滴。
在喷嘴下的几毫米处，液。
BD流式试剂选择及常见问题解答
BD流式试剂选择及常见问题解答发布日期：2009年6月22日编辑：技术部阅读次数：450一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。
如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1）BD流式细胞仪（06版目录第614页）流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：流式细胞仪有哪些激光。
比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur (FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-Tex asRed, PE-Cy5, PerCP。
Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。
Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的搭配荧光素原则搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意1、每个通道只能选择1种荧光素。
以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择A lexaFluro488，或者选择了Alexa Fluro488就不能选FITC Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texa s Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
我国急性白血病免疫分型的四色方案
我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。
因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。
但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。
⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。
本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红⽩⾎病（AML-M6）z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病1.6 混合表型⽩⾎病1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进⾏初步判断。
髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL 患者）。
迈瑞BriCyte E6 流式细胞仪介绍
FITC 530/30 PE 585/40
真实 实测 FITC通道信号
=
+
真实 实测 PE通道信号 =
+
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• 当CD4+ / CD8+比值持续升高且大于1.2时应当考虑排斥 发生；当CD4+ / CD8+比值持续降低表明移植后出现感
染；若CD4+ / CD8+比值小于0.2时，应立即停用免疫抑
制剂；
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2019/2/19
23
常见疾病的淋巴细胞亚群变化
测试原理 计量
抗原抗体反应 物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
宏观和微观
测定宏观对象（细胞）上的宏 测量微观物质（可溶性成 观物质（物理、复杂度、含量， 分和一些小分子物质，看 看得见、摸得到） 不见、摸不到）
测量微观物质（小分子 物质，看不见、摸不到）
输出
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研究对象：生物颗粒；
检测信号：光信号（散射光，荧光）；
分析特点：快速，特异，准确，客观，多参数；
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2019/2/19
4
流式细胞仪基本构造
液流系统 光学系统 电子系统 数据分析系统
①
③
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碧迪FACS CantoⅡ流式细胞仪性能评价及实验室应用
碧迪FACS CantoⅡ流式细胞仪性能评价及实验室应用方佩琪;孙林;顾梅秀;吴蕙;潘柏申;郭玮;王蓓丽【摘要】目的评估碧迪FACS CantoⅡ(BD FACS CantoⅡ)流式细胞仪的性能及实验室应用.方法依据中华人民共和国医药行业新版标准《YY/T0588-2017流式细胞仪》[1]对BD FACS CantoⅡ流式细胞仪进行性能评价,评价内容包括:荧光检出限、荧光线性、前向角散射光(forward scatter resolution,FSC)检出限、仪器分辨率、FSC分辨率、侧向角散射光(side scattering resolution,SSC)分辨率、倍体分析线性、表面标志物检测的准确度、表面标志物检测的重复性、携带污染率和仪器稳定性.完成性能评价后,分别用BD FACS CantoⅡ流式细胞仪及其配套的BD 六色淋巴细胞亚群试剂盒和BD FACS Calibur流式细胞仪及其配套的BD四色淋巴细胞亚群试剂盒分别检测20份全血标本,比较两台仪器在标本前处理、上机检测、分析结果所用时间和结果比较的差异.结果该流式细胞仪对异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)通道荧光检出限为40.18等量可溶性荧光分子数(molecules equiva-lent soluble fluorochrome,MESF),对藻红蛋白(P-phycoerythrin,PE)通道荧光检出限为23.77MESF,两者的决定系数(R square,r)均为0.999 9;FSC最小可检测0.22 μm微球;仪器分辨率FSC,FITC和PE荧光通道的变异系数(coeffivirnt of cariation,CV)分别为2.3％,2.4％和2.4％;FSC/SSC散点图可明显区分外周血中红细胞和血小板,同时能区分白细胞中的淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞;倍体分析线性中G2/M期(四倍体细胞峰)与G0/G1期(二倍体细胞峰)的平均荧光强度比值为1.98;表面标志物检测值的平均值均在质控品说明书给定的靶值参考范围内;表面标志物检测重复性CV分别为CD3∶2.75％,CD4∶1.86％,CD8∶ 5.14％,CD16/CD56∶7.33％和CD19∶11.26％;携带污染率最大为0.05％;该仪器开机8h检测FSC及各荧光通道峰值荧光道数偏差值(B)分别为-0.40％,-0.55％,1.57％,1.88％,1.66％,7.44％,7.23％,6.63％和6.21％;BD FACS CantoⅡ流式细胞仪及其配套试剂盒较BD FACS Calibur流式细胞仪及其配套试剂盒在总体检测速度上有显著提高;两台仪器所得的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),且前者检测结果的离散程度小于后者.结论 BD FACS CantoⅡ流式细胞仪各项性能均符合行业标准,仪器各项技术指标达标,可有效保障实验室检测结果的准确性,能为临床诊疗提供可靠支持.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2019(034)002【总页数】6页(P94-99)【关键词】BD FACS CantoⅡ;流式细胞仪;性能评价【作者】方佩琪;孙林;顾梅秀;吴蕙;潘柏申;郭玮;王蓓丽【作者单位】复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032;复旦大学附属中山医院检验科,上海200032【正文语种】中文【中图分类】R446流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种利用流式细胞仪对单细胞或生物颗粒进行多参数、快速分析的技术[2]。
急性髓系白血病免疫表型特征与预后相关性分析
急性髓系白血病免疫表型特征与预后相关性分析郑源海;林元峰;许瑞元;张志坚;文晓芳【摘要】目的探究伴CD56,CD7表达的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者免疫表型特征.方法收集2007年1月～2016年12月来漳州市医院就诊的525例AML患者骨髓,应用四色流式细胞术,以CD45/SSC设门,检测525例AML患者白血病细胞的免疫表型.CD56+AML和CD7+AML作为实验组,CD56-AML和CD7-AML作为对照组,两组间样本率的比较用χ2检验.结果CD56+AML组CD11 b,CD19和CD4表达率高于CD56-AML组,分别为31.72％vs 16.05％,22.76％vs 4.74％和35.86％vs 4.74％,差异均具有统计学意义(χ2=14.93,36.84,85.32,P<0.01).CD7+AML组CD34,HLA-DR和CD117表达率高于CD7-AML组,分别为83.20％vs 57.86％,74.81％vs 51.27％和96.18％vs 89.34％,差异均具有统计学意义(χ2=26.37,21.29,4.84,P<0.01 orP<0.05);CD7+AML组CD38,CD64,CD15和CD19表达率低于CD7-AML组,分别为68.70％vs 82.99％,19.85％vs 41.11％,9.92％vs 25.13％和2.30％vs 12.18％,差异均具有统计学意义(χ2=11.43,18.43,12.65,9.87,P<0.01).结论白血病的免疫表型特征对于白血病诊断、判断预后和临床治疗有重要的意义.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2018(033)004【总页数】5页(P90-94)【关键词】急性髓系白血病;免疫表型;CD56;CD7;预后【作者】郑源海;林元峰;许瑞元;张志坚;文晓芳【作者单位】福建医科大学附属漳州市医院,福建漳州 363000;福建医科大学附属漳州市医院,福建漳州 363000;福建医科大学附属漳州市医院,福建漳州 363000;福建医科大学附属漳州市医院,福建漳州 363000;福建医科大学附属漳州市医院,福建漳州 363000【正文语种】中文【中图分类】R552;R392.11白血病细胞抗原的跨系表达是白血病免疫分型中常见的现象。
PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术
某一亚群活化百分比升高见于该亚群的淋巴细胞功 能亢进或活性被调动起来了
某一亚群活化百分比降低则为其功能低下，或被过 量消耗、或被严重“误伤”（因为许多抗癌药物和 免疫抑制剂都是针对处于增值状态的细胞的）
活化淋巴细胞亚群严重降低者应当关注全身化脓性 感染的危险！
汪子伟 主任技师 迪安诊断管理部
原 杭州市第一人民医院 中心实验室主任 曾 浙江省临检中心 实验室主任
浙江浙江省人民医院 中心实验室主任
1997年第一次使用流式细胞仪，浙江省人民医院中心实验 室购买了Coulter Epics，主要用于淋巴细胞亚群、活化血小 板、MRD、白血病免疫分型及临床科研等
CD4/CD8 6.9±3.12 0.2±0.04 1.3±0.05 0.7±0.13
（中华检验医学杂志. 2000, 23: 214-216）
肺部疾病表现出局部免疫功能环境发生改变；结节病是以CD4细胞占绝对优势 的淋巴性肺泡炎，4/8显著升高，提示CD4免疫细胞功能亢进；特发性肺间质纤 维化有学者认为是中性粒细胞性肺泡炎，但CD8细胞显著增多，4/8显著下降， 与结节病表现完全不同；八年制内科学（上册）（第2版），人民卫生出版社， 2013年已将支气管肺泡灌洗液检查是鉴别诊断结节病和IPF的重要依据；肺部肿 瘤机体免疫功能移植，CD8细胞升高，但没有IPF明显
• 肾脏和心脏移植后接受预防排斥的免疫调节药物OKT-3的患 者
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(2015年版)-2-
·270·中华血液学杂志2015年4月第36卷第4期Chin J Hematol ，April 2015，Vol.36，No.4CD117、CD25、CD9、类胰蛋白酶，部分细胞表达CD22和nTdT ，可对这些抗原进行检测。
4.混合表型：如果既表达髓系标志，又表达CD7或CD19，则可首先检测MPAL 的第3管，确定表7鉴别白血病的系列性及需要检测的抗体系列髓系T 系B 系需要检测的抗体cMPO +（FCM 、免疫组化或细胞化学）或单核细胞分化（至少2个标志：NSE 、CD11c 、CD64、CD14、溶菌酶）cCD3（FCM 应用的是抗ε链抗体，而免疫组化检测使用的是多克隆抗体，可与CD3的ζ链结合，后者不是T 细胞特异性的）或膜CD3（很少表达）强CD19和cCD79a 、cCD22、CD10中至少1个标志强表达；或弱CD19和cCD79a 、cCD22、CD10中至少2个标志强表达注：FCM ：流式细胞术图21例典型急性T 淋巴细胞白血病第1~2管抗原表达结果:CD45+CD7+CD117-CD33-CD19-CD10-CD34part+图31例急性髓系白血病M 2型第1~2管抗原表达结果：CD117+CD33+CD7dim+CD34+CD19-CD10-中华血液学杂志2015年4月第36卷第4期Chin J Hematol，April2015，Vol.36，No.4·271·是哪个系列的白血病，然后再完善检测该系列的其他标志。
在AML中有30%左右患者表达CD7，但通常表达较弱，多同时表达CD33和CD117。
而T-ALL中CD7多数表达较强，并多不表达CD33，20%左右表达CD117。
另外AML伴t（8;21）（q22;q22）/AML-ETO阳性患者中，60%左右表达CD19（弱），同时表达CD34、CD117、CD33（弱）、CD56，与典型B-ALL 可以鉴别。
PDF版-淋巴细胞亚群和流式细胞术
• 恶性肿瘤、自身免疫性疾病（SLE和RA等）、先天性免疫 缺陷病、艾滋病、接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激 素等免疫抑制剂资料的患者
T细胞增多，常见于：见于慢性活动性肝炎、重症肌无力
等自身免疫病活动期
即辅助性T细胞无论对于细胞免疫还是体液免疫都非常重要，
（Kuby Immunology, 7th,2013）
目 录
48
1
免疫系统和淋巴细胞
2 淋巴细胞亚群分析演变
3 淋巴细胞亚群的应用 4 流式分析进展
流式细胞术是以高能量激 光照射高速流动状态下经 荧光标记的单细胞（生物 颗粒），通过检测产生的 散射光和荧光素发射荧光 的强度，从而对细胞进行 定性或者定量检测，实现 对目的细胞分析或分选的 技术。
例数
14 16 6 7
CD3+ 91.8±5.62 94.5±3.91 74.3±5.61 67.5±10.4
BALF淋巴细胞亚群（%）
CD4+
CD8+
70.6±11.2 14.5±8.4
14.7±3.12 78.4±7.92
42.3±1.92 32.1±1.21
24.3±5.24 35.1±9.62
成人及15岁以上青少年HIV/AIDS的临床分期及其分期标准
CD4细胞计数 HIV抗体 HIV核酸
（个数/mm3） 检测
检测
主要临床表现
一般持续时间
6个月~12个月
＞500戒一过 性降低
﹣戒±
＋
急性HIV感染综 合征戒无症状
1周~3周
≥500
血清阳转 戒＋
＋
无症状戒PGL 6个月~12个月
人白血病抑制因子(LIF)说明书
人白血病抑制因子（LIF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白血病抑制因子（LIF）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白血病抑制因子（LIF）水平。
用纯化的白血病抑制因子（LIF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白血病抑制因子（LIF），再与HRP标记的白血病抑制因子（LIF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白血病抑制因子（LIF）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白血病抑制因子（LIF）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成孔配置孔配置说明书份份封板膜（48）（96）密封袋个个酶标包被板×48×96-8保存：2700ng/L×1瓶×1瓶-8保存标准品稀释液×1瓶×1瓶-8保存酶标试剂×1瓶×1瓶-8保存样品稀释液×1瓶×1瓶-8保存显色剂A液×1瓶×1瓶-8保存显色剂B液×1瓶×1瓶-8保存终止液×1瓶×1瓶-8保存浓缩洗涤液20ml×20）×1瓶20ml×30）×1瓶-8保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
BD FACSCantoⅡ流式细胞仪方法学性能验证
BD FACSCantoⅡ流式细胞仪方法学性能验证陈淑英;陈健;林勇;时朝辉【摘要】Objective To verify the main performance of BD FACSCantoⅡflow cytometry analyzer. Methods According to the Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI)documents and projects provided from other literatures,the analytical performance of BD FACSCantoⅡflow cytometry analyzer was evaluated by precision,accuracy,linearity and reference range of common test items(peripheral blood lymphocyte subtypes:CD3+Tcell,CD3+CD4+T cell,CD3+CD8+T cell,B cell and NK cell). The results were compared with the claims of manufacturers.Results Theprecision,accuracy,linearity and reference range of BD FACSCantoⅡflow cytometry analyzer in the determination of peripheral blood lymphocyte subtypes were in line with the performance parameters of manufacturers.Conclusions BD FACSCantoⅡflow cytometry analyzer has a good performance,accurate measurement and a high repeatability in the determination of peripheral blood lymphocyte subtypes,which can satisfy the need in clinics.%目的：对BD FACSCantoⅡ流式细胞仪的主要分析性能进行方法学验证。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
CD13和/或CD33阳性， CD34、HLA-DR通常阳 性，缺乏髓系成熟分化 抗原：CD11B，CD15等， 有时会表达CD7或CD4； MPO阳性率一般小于 3%。
AML-M1
• CD13、CD33、CD34、HLA-DR、CD15与CD11B可以阳性， 血型糖白A阳性，MPO阳性/阴性。
• 本例中可见两群幼稚细胞，M6的定义是红系祖细胞占骨髓幼 稚细胞群体的50%强，而其他系别的幼稚细胞可占30%以上。
• 固诊断M6时要依据形态学红系细胞的数量来确定，如仅根据 免疫分型很难得出正确诊断，必须结合形态计数幼稚细胞数 量来确定。以上是典型的M6免疫分型图，出现两群幼稚细胞。
• 根据骨髓细胞CD45/SSC 图中 分布情况设门圈定各类细胞
• R1 门为成熟淋巴细胞 • R2 为正常单核细胞位置 • R3 门正常粒细胞位置 • R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 • R5 门为有核红细胞或细胞碎片
位置 • R6 门为幼稚髓细胞出现位置 • 白血病细胞通常会在R4 R6 两
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分别属于T/B/髓系
全
套
T系：CD2、CD5、CD7
B系：CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR 泛白细胞标志：CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
B-ALL
在CD45/SS点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟淋 巴细胞比较CD45弱表达
流式细胞术在白血病MICM分型诊断中的作用
50 000/秒(分选) 3：5个激光 4：24色荧光 5：无菌环境
FACSAria II 1：高速分选 2：分选精度1/32滴 3：3个激光 4：13色荧光 5：仪器随开随用
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FCM原理（动画）
FACSCalibur光路图
但是，流式免疫分型结果的解释应与临床、形态学、细胞遗传学等其他方 法结合使用，综合考虑，做出疾病的诊断与分类。
正常血细胞发育过程的抗原表达规律
按《WHO造血和淋巴组织肿瘤分类》（2008年版）
Wood B,etc（2007）
急性白血病的免疫表型
急性髓细胞白血病的免疫表型
细胞碎片
单核细胞
淋巴细胞
阈值
检测信号及意义：
荧光信号 根据荧光素交联的单克隆抗体不同而表达不同的意义
（一）设门 （gating）
（二）荧光强度 （三）单参数分析 （四）多参数分析
二、数据解释及报告
1.定性的描述（阳性或阴性）
2.评估抗原表达强度
3. 区分弱阳性和阴性群体
运用流式分析造血细胞的抗原表达情况，远远多于对形态学结果的简单证 实，能够提供大量的信息，可能帮助形态学确认某些诊断，也可能提出之前 没有考虑的诊断；在一些典型表现下，流式免疫分型可以在其他方法的辅助 之下诊断疾病。
Hale Waihona Puke 免疫分型的抗体组合原则免疫分型的抗体组合原则
一、常用抗体
白细胞分化抗原（leukocyte differentiation antigen）是指血细胞在分化成熟 为不同谱系、不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。
1982年，国际统一使用分化群（cluster of differentiation，CD）作为白细胞 分化抗原和相应单克隆抗体的命名，CD分子在流式细胞术的血液学应用中发挥着 重要作用。
迈瑞BriCyte E6 流式细胞仪介绍
BriCyte E6 产品特点
低生物风险低携带污染率的 拭子式进样针自动清洗模块
可使鞘液充分消耗的高精 度检测装置。
报警时鞘液液位 < 1/2
BriCyte E6 产品特点
部件
BriCyte E6
仪器
尺寸*(mm，宽×高×深) 重量*(Kg)
500×500×550 ≤60
液流车
小型试剂组件
气源
无
• 无需仪器设置，信号采集、分 析与报告一键式解决方案—— 全自动HLA-B27检测双色试剂 配套分析软件;
迈瑞流式细胞仪Bricyte E6介绍
BriCyte E6 产品特点
BriCyte E6 产品特点
条码扫描仪
条码扫描仪通过扫描含lis编码的条码，可直 接从lis库中调取样本信息，如“姓名”、 “年龄”等，并录入软件相应界面。
不能直接连接LIS；
BD临床中高端主力机型； 全中文界面（国际英文版
英文界面；
本）；
不能直接连接LIS；
双向LIS直连；
自动电压、补偿设置；
自动算法软件；
精密度：CV<3%
灵敏度： < 750 MESF
精密度：CV<2%
灵敏度： FITC < 600 MESF； PE < 300 MESF； APC < 600 MESF
SSC FL2 FL5
FL6
v v
v
t
FL3
FL5
FL1
v t
v t
FL1 (FITC)
t
FL2 (PE)
FL3 (PerCP)
(PE-cy7)
585/40
670LP
785/60
白血病免疫型课件
(三).正常粒细胞标志
cMPO CD13 CD34 CD117 HLA-DR CD33 CD11b CD15 CD64 CD10
幼稚粒 + + + 成熟粒 + + -
+ + ++ - - - - - + + ++ +
全粒细胞标志：CD13，CD33， cMPO 幼稚粒细胞：CD34，CD117，HLA-DR， 成熟粒细胞：CD15，CD11b，CD10，CD64
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8
I期 ： + II期： + III期： + Ⅳ期： +
++ + ++ - + ++ - + ++ - -
+/+/+/+ + + +/+ +/- +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
Side scatter
CD45
Side Scatter
Forward Scatter
CD34
CD34
CD5
CD117
CD11b
CD7
CD7
CD10
CD19
CD64
CD64
HlA-DR
CD33
CD33