实验一 糕点中菌落总数的测定

• 4.2 维护规程及维护方法
4.2.1 根据环境的洁净程度，可定期（一般2～3个 月）将粗滤布（涤纶无纺布）拆下清洗或给予更换。 4.2.2 定期（一般为一周）对环境周围进行灭菌工作， 同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀 菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效 果。 4.2.3 当加大风机电压已不能使风速达到0.32m/s时 必须更换高效空气过滤器。 4.2.4 更换过滤器时，可打开顶盖，更换时应注意过 滤器上的箭头标志，箭头指向即为层流气流向。 4.2.5 更换高效过滤器后，应用Y09-4型尘埃粒子计 数器四周边框密封是否良好，调节风机电压，使操作 区平均风速保持在0.32-0.48m/s范围内，再用 Y09-4型尘埃粒子计数器检查洁净度。
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A.1 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基 A.1.1 成分
胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水 pH 7.0±0.2 5.0 2.5 1.0 15.0 1000 g g g g mL
A.1.2 制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃ 高压灭菌15 min。
三、实验方法
1、检验程序 菌落总数检验程序：
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度 各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适量营养 琼脂→菌落数→报告
2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml灭菌
生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠） 或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以 8000~100000r/min 的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取 1： 10稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml灭菌 生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下 同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作 10倍递增稀释液，如此每递 增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
实验报告
实验目的 实验原理 实验材料 实验方法、步骤 实验结果 分析讨论 注意事项
请同学们注意实验安全，保持实验室卫生。
值日生打扫完，经老师检查允许后方可离开！
注意： ①加入检样液时，吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀 释液，并将吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。 ②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖 与容器内紧贴 ③每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释 度，分别在作 10 倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移 1ml稀释液 于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （ 5 ）稀释液移入平皿后，应及时将凉至 460C 营养琼脂培养基 [ 可放置在 （（46±1）0C）水浴锅内保温 ]注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使混合均 匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内 作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱内培养（48±2）h取 出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。
②稀释度的选择
应选择平均菌落数在 30 ～ 300 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告 之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在 30 ～ 300 之间，则视两者 之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2 则报告其中较小的数字。 若所有稀释度平均菌落数均大于 300 ，则应按稀释度最高的平均 菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均 菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数报告 之。
(一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）*8 规格名称 数量 用途 1、500ml三角瓶 1个 稀释样品（配制生理盐水） 2、250ml三角瓶 1个 配制营养琼脂 3、18×180mm试管 5支 稀释样品（9ml） 4、1ml移液管 5支 5、直径为90mm平皿 8套 倒营养平板 6、250ml量筒 1支 7、玻璃珠：直径约5mm
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（二）应灭菌、消毒的器材 剪刀1把 不锈钢药匙1把 称量纸：适量 酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头5只 （三）应制备的培养基 培养基 总量 所用容器
• 蒸馏水 • 平板计数琼脂 • 稀释水： 1瓶 1瓶 每组5支 225ml/瓶 500ml三角瓶 150ml/瓶 250ml三角瓶 9ml/支 18×180mm试管
菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基 成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样 中所含菌落的总数。 本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂 上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用
这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进 行卫生学评价时提供依据。
思考题及实验作业
• • 食品检验为什么要测定细菌菌落总数？ 食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细 菌数？为什么？ 为什么营养琼脂培养基在使用前要保持地（46±1） ℃的温度？ 培养时为什么要把培养皿倒置培养？ 在菌落总数测定和霉菌、酵母菌的计数中，两者在 样品处理过程中有何不同？列表说明？计数时又有 何异同处？
4. 操作及维护规程
• 4.1操作规程
4.1.1使用工作台时，应提前50分钟开机，同时开启紫外杀 菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，30分钟后关闭杀 菌灯（此时日光灯即开启），启动风机。 4.1.2对新安装的或长期未使用的工作台，使用前必需对工 作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具 进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌 处理。 4.1.3 操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁 净气流流型不受干扰。 4.1.4 操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。 4.1.5 操作区的使用温度不可以超过60℃。
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双人单面垂直风超净工作台,洁净等级100级 闭合工作台面,不锈钢台面材质 工作区:1360*700*620mm
超净工作台的使用、维护保养与清洁标准操作规程
• 1. 目的 规范净化工作台操作与维护工作，确保 仪器正常运作。
• 2. 适用范围：本实验方法适用于微生物检验中净 化工作台操作与维护管理。 • 3. 检验人员职责：负责此仪器操作和维护管理
3、菌落计算方法
（1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防 遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总 数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀 释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片 状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀 释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分 布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有 链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一 个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
①培养基不能触及平皿口边沿，加入培养基后可正反两个方向旋转，但不可 用力过度，以免溅起触及上盖。 ②检样从开始稀释到倾注最后一个平皿，所用时间不宜超过20min ③琼脂凝固后，就立即将平板放入培养箱内进行培养，以免细菌蔓延生长。 ④如果把不能立即计数，要将平板放入0～4℃冰箱中，但不能超过24 h。
实验一 糕点中菌落总数的测定
一、实验目的
1、了解细菌总数检验的意义。 2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法 3、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 4、熟练无菌操作技术。
二、实验材料
• 1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天 平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、 试管、试管架、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或 剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、登 记薄 • 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水(蒸馏 水）、营养琼脂培养基。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大 于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数 报告之。
③菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位 有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为 了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。