总黄酮含量测定
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附录A（标准的附录）
总黄酮含量的测定（分光光度比色法）
1 试剂
所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。
1.1无水乙醇；
1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3•9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.4 芦丁标准溶液：
1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。
1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。
2 仪器
全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。
3 分析步骤
3.1 标准曲线
3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1.
4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。
3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。
3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。
3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。
3.2 空白对照
精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。
3.3样品测定
3.3.1精密吸取待测样液
4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。
3.3.2以空白对照液（3.2）作参比，用1cm比色杯，在波长415nm处测定样品溶液的显色吸光度。
3.3.4 通过3.1.4标准曲线回归方程计算样品溶液中的总黄酮含量（mg).
4 样品测定结果计算
m
X= ×100
W
式中：
X ——样品中总黄酮的含量(mg/100mL) ；
m ——由直线回归方程求出的样品比色液中芦丁的质量（mg）；
W ——样品的体积（mL）。