2实验二 凝集、沉淀反应
实验二、沉淀反应
实验二沉淀反应一、实验目的1、了解沉淀的生成、溶解和沉淀的转化条件，掌握沉淀平衡，同离子效应以及溶度积原理。
2、学习离子分离操作和同离子效应和电动离心机的使用。
二、实验的内容1、沉淀的生成和溶解①查表得：PbI2的ksp为7.1×10-9取1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2+9d水，取1d+9d水，配成1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液取1d 0.1mol/L的kI+9d水，取其中1d+9d水，再取1d+1d 水+首先配好的1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液2d→不出现黄色沉淀，溶液无变化。
计算：Q=【pb2+】·【I-】2=25/8×10-11﹤ksp计算值也不应该有沉淀。
反应方程：pb2++ 2I-≒pbI2实验结论：1、计算结果与实际相符，Q﹤ksp，不出现沉淀2、没看到pbI2黄色沉淀，不等于不存在pbI2，溶液中还是存在少量的pbI2②查表得：pbs的ksp=8×10-28 pbcro4ksp=2.8×10-13取1d 0.1mol/L的Na2S+1d0.1mol/L的k2cro4,稀释至2.5mL 取1d上述溶液+1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2→有棕黄色的混合沉淀出现。
计算：Q﹙pbs﹚=【S2-】【pb2+】=4×10-6﹥其kspQ﹙pbcro4﹚=【S2-】【cro42-】=4×10-6﹥其ksp反应方程：pb2++ S2-≒pbs pb2++ cro42-≒pbcro4实验结论：只要Q﹥ksp，就会出现沉淀，在同一溶液中也不会因沉淀的ksp的大小而出现沉淀的先后，而是同时沉淀。
如随着某离子的加入，Q先达到某个沉淀的ksp，后达到另一个沉淀的ksp，这是才会出现沉淀的先后之分。
2、沉淀的溶解和转化1d 0.1mol/L Pb（NO3）2+2d 0.1mol/L NaCL→Pbcl2↓（白色）+2d 0.1mol/L kI溶液→pbI2↓(黄色) {离心，去掉上清液→稀释至0.5mL}+饱和Na2so4晶体→ pbso4↓(白色) +0.1mol/L k2cro4→pbcro4↓（黄色）+2~3d 0.1mol/L k2S→pbs↓(黑色) {离心，取上清液，颜色为粉红色}★查表得：ksp（Pbcl2）=1.6×10-5 ksp（pbI2）=7.1×10-9 ksp（pbso4）=1.6×10-8ksp（pbcro4）=2.8×10-13 ksp（pbs）=8×10-28★计算：例Pbcl2转化为pbI2的过程：Pbcl2+ 2I-≒pbI2+2cl-K°=【cl-】2/【I-】2=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【I-】2= ksp （Pbcl2）/ ksp（pbI2）=1.6/7.1×104K°值越大，沉淀转化的越完全，对同一类型的沉淀来说，溶度积越大的沉淀越易转化成溶度积小的沉淀对ksp小→ksp大的方向进行的特例：ksp（pbI2）/ ksp（pbso4）=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【so42-】推出→【so42-】min=0.16/7.1 因此Na2so4晶体或饱和Na2so4溶液满足此条件。
工作报告之对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告【篇一：实验十一免疫电泳】免疫电泳技术抗原与抗体的结合在沉淀反应中，呈一定的分子比例。
不同抗原和抗体之间的分子比例是不同的，但只有在分子比例合适时，才出现可见的沉淀。
所以沉淀能否出现并不完全反映抗原和抗体是否存在和发生结合。
抗原结合多个抗体分子，称抗原为多价；抗体一般只能结合两个抗原分子（igm类抗体分子通常可以结合5个抗原分子）的抗原决定法簇，故为二价。
只有在彼此的结合价饱和时，才出现大量的抗原-抗体复合物沉淀。
当抗原与抗体的比例合适时，即二者结合价彼此饱和，就可形成网状结构的大分子抗原-抗体复合物沉淀，称为等价带。
若比例不合适时，抗体或抗原过量，则虽有抗原、抗体的结合，但不能大量形成网状结构的大分子复合物，沉淀量很少，甚至不出现沉淀。
在抗原、抗体数量关系曲线中，抗体过剩区域称为抗体过剩带，抗原过剩区域称为抗原过剩带。
如图1所示，在等价带的反应液中加入过量的抗原或抗体，沉淀复合物就会有部分溶解，甚至全部溶解的现象。
这是由于新加入的抗原或抗体竞争地结合相应的抗体或抗原，使网状大分子结构破坏，形成小分子复合物，致使沉淀出现溶解，沉淀量减少甚至完全消失。
在沉淀反应中，由于抗原过量而不出现沉淀的现象，称为前带现象。
此时不能误认为无沉淀就是无抗原存在，为了检测就必须稀释抗原。
抗体过量时，称为后带现象，同理需要稀释抗体进行检测。
图1的位置抗原与抗体的结合是依赖于两者分子结构的互补性，故其特异性高。
这种结合也是相当稳定的。
在一定条件下（过酸、过碱或浓盐存在下），二者可以分开，即结合是可逆的。
解离后的抗原、抗体的活性一般保持不变。
双向免疫扩散测定法原理双向扩散法(double diffusion)又称琼脂扩散法，是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。
琼脂或琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可以自由通过，这种分子的扩散作用可使分别处于两处的抗原和相应的抗体通过扩散相遇，形成抗原-抗体复合物，比例合适时出现沉淀。
实验-免疫沉淀反应简写版
Immunology
4. 小心打孔，勿使琼脂层脱离玻片，或底 层开裂；打孔要一次打到底，挑胶时要 细心，最好一次性挑出。
5. 加样加满即可，勿使液体溢出。 6. 为使沉淀线保持清晰度，可将已形成的
沉淀线琼脂板放在4℃冰箱。
Immunology
21
双向免疫扩散--人IgG检测
结果描述与分析
该法常用于分析血清蛋白种类。
Immunology
(immunoelectrophoresis)
3.
Immunology
免疫比浊(immunonephelometry)
一定量抗体中分别加入递增量的抗原， 经一定时间形成免疫复合物，液体混 浊。用浊度计测量反应体系的浊度， 可绘制标准曲线并依据浊度推算样品 中抗原含量。
几分钟至十几分钟 凝集块
沉淀反应 可溶性抗原 数小时至数天
沉淀物
Immunology
原理：
凝胶内沉淀试验
将可溶性抗原与相应分别放入凝胶（如琼脂、 琼脂糖等）内进行扩散，形成浓度梯度，在抗 原抗体浓度比例恰当的位置，形成肉眼可见的 免疫沉淀线、沉淀环。
分类：
①单向琼脂扩散试验(single gel diffusion test) ②双向琼脂扩散试验(double gel diffusion test）
将抗原和抗体分别加入琼脂板相对应的小孔 中，二者相互扩散、相遇，在比例合适处形成可 见的沉淀线。
Immunology
(double immunodiffusion)
Immunology
对流免疫电泳
当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ， 由于抗体的 PI 比较高，在适当的 pH 值下， 抗体带正电荷而抗原带负电荷，故在电场中 抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动，直 至相遇后形成沉淀线
凝集反应、沉淀反应
当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作 用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒 相互靠拢，聚集在一起。 当抗体的分子太少或分子量小，不能克服 相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚 集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。 为促使凝集现象的出现，可采取以下措施： 1、增加蛋白质和电解质，缩短颗粒间的距 离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和 神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗 粒间的排斥力。
第五章
凝集反应
颗粒性抗原与特异性抗原结合后，在适当 的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现 象，称为凝集反应。 可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合形成致 敏颗粒后，与相应的抗原或抗体结合，也 能发生凝集反应。
1
第一节 凝集反应的特点 凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗 体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的 凝集现象。 颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引 一层与之牢固结合的正离子，外面又排列 一层松散的负离子，构成一个双层电子云。 在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。 溶液中负离子强度越大，Z电位也越大，Z 电位使颗粒间互相排斥。
示意图
标准品抗原浓度测定
抗原浓度 1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找
不同病人抗原浓度测定
相应抗原浓度
35
单向扩散试验 （平板法）
沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法
Mancini曲线： 大分子抗原 时间扩散＞48h， 常数K＝C∕d2 普通坐标纸曲线
Fahey曲线： 小分子抗原 扩散时间24h 常数K＝logC∕d 半对数坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径
36
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以 上,可见T3为直线，T1为反抛物线
凝集反应与沉淀反应
凝集效价的判断：与相应菌液发生++凝集反应的血清最高稀释浓度为该被 检血清的凝集效价
双向琼脂扩散实验
1.材料
琼脂液，待测血清（未提供），肝癌患者AFP阳性血清（阳 性对照），生理盐水（阴性对照），AFP诊断血清（含AFP抗 体），载玻片，打孔器，毛细滴管
2.实验原理
AFP诊断血清中含有AFP的特异性抗体，肝癌患者阳性血清中含有AFP抗原作 为阳性对照，当待测血清中含有AFP抗原时，就会和AFP诊断血清中的AFP特异 性抗体发生抗原抗体反应，产生免疫沉淀线，反之则无免疫沉淀线，通过观察免 疫沉淀线的有无并和阳性对照对比，就可以判断待测血清中AFP的阳性或阴性。
Ag Ag + 生理 盐水 Ab Ag：肝癌病人AFP阳性血清 Ab：AFP诊断血清
实验结果 Ag与Ab间应出现乳白色免疫沉淀线 Ag与生理盐水间无乳白色免疫沉淀线出现
3. 实验方法
（1） 将配好的1%琼脂放到电炉子上融化，室温自然冷却 到 约60摄氏度。 （2）用玻璃吸管吸取琼脂液加入到载玻片上，使其铺满玻 片，等待其自然凝固。 （3）玻片下垫上打孔纸，用打孔器在凝固的琼脂板上打四 个相邻的孔。每两个相邻的孔不要太远，便于抗原抗体相遇。
对流免疫电泳
（4） 抗原孔内分别加入待测血清和AFP阳性血清，抗体孔 内加入AFP诊断血清和生理盐水阴性对照。 （5）将加好样的琼脂板置于电泳槽支架上，抗原孔置于负 极端，抗体孔置于正极端，琼脂板两端用纱布搭桥，使琼脂 板两端电流连通。设置电压60v，电泳40min开始电泳，电泳 结束观察结果。
Ab
Ab：AFP诊断血清
（4） 中心孔内加甲胎蛋白诊断血清，四周孔内分别加入待 测血清和肝癌患者阳性血清及生理盐水阴性对照。 （5）将琼脂版放入湿盒，置37摄氏度孵箱，24h后观察结果。
《兽医免疫学》实验课件：实验二 沉淀反应
B
B
A
A抗体中针对B抗原 的抗体可以 跨越透过C抗原来自BCA
二、双向琼脂扩散试验
实验材料：
1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原； 2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清； 3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清； 4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等；
二、双向琼脂扩散试验
5、琼脂凝胶板： 将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装
入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿 内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝 固后按如下图方式打孔。 注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底）
二、双向琼脂扩散试验
实验步骤：
中间孔加标准抗原， 外周孔加被检血清及阳性 血清（如要测被检血清的 效价，外周孔可倍比稀释 后依次加入）。加样后盖 上皿盖，37℃扩散24小时， 观察结果。
实验二 沉淀反应
一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验
一、环状沉淀反应
目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。
原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如 果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。
一、环状沉淀反应
实验材料：
1．被检抗原（沉淀原）的制备： （1）热浸法 取可疑材料约1克，研碎，加入510mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出 冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。 （2）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭 菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生 理盐水中，4℃浸渍18-24小时，同上法过滤。
原理：
可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼 脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相 遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处 形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于 组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它 的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种 AgAb系统的沉淀物。
实验二沉淀反应
沉淀反应
一、实验内容
1.双向琼脂扩散试验(小组做)
2.单向琼脂扩散试验(示教) 3.免疫电泳(示教) 4.火箭电泳(示教) 5.尿液HCG检测(胶体金免疫法 ) (小组操作) 6.录像：免疫反击战
免疫标记技术
沉淀反应
二、目的与要求
1.掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果
分析及应用。
2.熟悉免疫电泳基本原理及应用。
用途：抗原或抗体的检测，定性或可粗略定量。
缺点：需时长，灵敏度不高。
3.单向琼脂扩散试验（示教）
Ag稀释度
1 :80 1 :40
1 :20
1 :10
用途：已知抗体测抗原，定量实验； 缺点：耗时长。
4.免疫电泳（示教）
1
2
先Ag电泳，后扩散。
注意：1、2孔为Ag样本孔。
免疫电泳的用途：
A.用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断；
B.用于抗原纯度的定性分析。
5.火箭电泳（示教）
火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场 用途：已知抗体测抗原，定量实验；
优点：耗时短，反应敏感性好。
四、操作内容
1.甲胎蛋白(AFP)的检测（小组操作）
（1）材料：
A.待测Ag： AFP可疑血清； B.阳性对照：AFP阳性血清； C.阴性对照：生理盐水（NS）
早早孕HCG胶体金试纸,采用了双抗体夹心 法的检测模式。
HCG金标试纸
带条中含有均匀分布的胶 体金标记的鼠抗人HCG单抗 1.鼠抗人HCG单抗 (固定的检测线) 2.羊抗鼠IgG(固定的质控线)
标志线
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG结合形成免疫复合物； 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色
在检测线未结合的金标记鼠抗人 HCG 单抗 (IgG) 随着尿液上行 , 到达质控线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
实验二细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察报告（1）
实验二细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察报告（1）实验二细胞凝集反应和细胞膜通透性的观察一、实验目的1、了解细胞糖被的特点和功能，了解植物凝集素的作用2、了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度二、实验原理1、细胞膜表面的有分支状糖外被，细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应、肿瘤的发生等都和细胞表面的分支状糖分子有关。
凝集素（lectin）是一类含糖并能与糖分子专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞表面间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
2、细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。
可选择性地让某些物质进出细胞，各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，动物细胞会失水而收缩；在低渗环境中，动物细胞会吸水膨胀直至破裂。
本实验将红细胞分别放于各种等渗溶液中，由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同，使得不同溶质透入细胞的速度相差很大，有些溶质甚至不能透入细胞。
当溶质分子进入细胞后可引起渗透压升高，水分子随即进入细胞，使细胞膨胀，当膨胀到一定程度时，红细胞膜会发生破裂，血红素溢出，此时，原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为红细胞溶血。
由于各种溶质进入细胞的速度不同，所以不同的溶质诱导红细胞溶血的时间不同，相反可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。
三、实验材料、器具和试剂1、器材与仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、直管、5ml量筒、滴管、天平、离心管2、材料与试剂：土豆块茎，鸡（采血）、5mmol/LNaCl、65 mmol/LNaCl、0.15 mol/LNaCl、0.8 mol/L甲醇、0.8 mol/L丙三醇、2% Triton X-100、氯仿、PBS缓冲液、生理盐水四、实验步骤（一）细胞凝集反应1、2%鸡血红细胞悬液制备：以无菌方法抽取鸡静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000rpm离心5 min，最后按沉淀压积的红细胞体积，用生理盐水配成2％红细胞悬液待用。
实验二凝集、沉淀反应
凝集反应的分类
按照颗粒表面电荷的性质，凝集反应可以分为正凝集反应和 负凝集反应。正凝集反应是指颗粒表面带有正电荷，相互吸 引形成凝集物；负凝集反应则是指颗粒表面带有负电荷，相 互排斥形成凝集物。
按照颗粒间的相互作用方式，凝集反应可以分为均相凝集和 多相凝集。均相凝集是指同一种物质的不同晶型或同分异构 体之间的凝集；多相凝集则是指不同物质颗粒之间的凝集。
反应条件的影响
实验中，温度、pH值、反应时间等因素也会对凝集、沉淀反应产生影响。例如，在某些条件下，某些物质可能 更容易发生凝集或沉淀。
结果讨论
实验误差分析
对实验结果进行误差分析，探讨可能存在的误差来源，如测量误差、操作误差等，并提出相应的改进 措施。
实验结论总结
根据实验结果和分析，总结实验结论，阐述凝集、沉淀反应的原理和影响因素，并指出实验中需要注 意的事项。
实验二凝集、沉淀反应
目录
• 实验简介 • 凝集反应 • 沉淀反应 • 实验结果分析 • 实验总结与展望
01 实验简介
实验目的
掌握凝集、沉淀反应 的原理。
了解凝集、沉淀反应 在医学和生物学中的 应用。
学习如何观察和记录 凝集、沉淀反应的现 象。
实验原理
凝集反应
凝集反应是指颗粒物在悬浮状态下由于特定因素的作用聚集 在一起的现象。在实验中，通过向含有颗粒物的溶液中加入 特定物质，使颗粒物聚集在一起，形成可见的凝集物。
凝集反应的应用
在生物医学领域，凝集反应常被用于检测和分离细菌、病毒、细胞等生物颗粒。 例如，利用抗原抗体反应的特异性，可以检测和分离特定的生物颗粒，用于诊断 疾病和科学研究。
在化学和工业领域，凝集反应可以用于分离和纯化不同物质颗粒，如矿物、催化 剂等。通过控制凝集反应的条件，可以获得高纯度的产品，提高生产效率和产品 质量。
血清学反应-沉淀反应
二 凝胶内沉淀实验
（一）免疫琼脂实验(Immunodiffusion test）
原理：抗原抗体在电解质存在的条件下，再合适的比例 处形成白色沉淀线，并且一种抗原抗体系统形成一种沉淀 线，另一种形成另一种沉淀线，互相不影响。 优点：能将复合的抗原成分加以区分，根据沉淀线的数 目，位置，以及相邻两条沉淀线之间的融交分支等情况即 可了解该复合抗原的组成。并且可以将沉淀线用特殊染色 法（蛋白质、多糖、之类的鉴定染色），生物活性(酶活 性)和同位素标记法鉴定抗原的成分。 实验类型：
（3） 对流免疫电泳 对流免疫电泳是双向扩散与 电泳技术相结合的一种方法。在PH8~8.6的缓冲溶 8-21火箭免疫电泳 液中，蛋白质抗原带负电，向阳极移动。抗体虽然 也是蛋白质，但等电点比抗原高，所带阴离子少且 分子质量大，移动缓慢，同电渗反而向阴极移动。 实验时，将免疫血清置琼脂板正极孔内。通电后， 在电场作用下，抗原向正极移动，抗体向负极移动， 在最适比例处相遇时即形成白色沉淀。由于电场作 用，既限制了抗原抗体向多方向扩散，有加速了泳 动速度，缩短了时间。 优点：时间短，灵敏度高。 缺点：特异性不如双扩散高。如图8-20 8-20对流免疫电泳
抗原
抗体
单向单扩散
2.单向双扩散 用内径8mm的试管，现将含有阳 性血清的琼脂加于管底，高约6mm， 中间加一层同样浓度的琼脂，先凝固 后加待测0.25ml抗原，37°或室温扩 散数日。抗原抗体在中间琼脂层相向 扩散，在平衡点上形成沉淀线。
单向双扩散
3. 双向双扩散
试验在玻璃板或平皿上进行,用1.6％~2.0％琼脂加一定 浓度的等量抗体浇成凝胶板厚度为2~3mm在其上打孔直 径为2mm，孔内滴加抗原液。抗原在孔内向四周辐射扩 散，在与凝胶中的抗体接触形成白环。此环随扩散时间 而增大。因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，即可 用以测定抗原的量。 此法在兽医临床已用于传染病的诊断：如马立克氏病的 诊断。将马立克氏病高免血清制成血琼脂平板，拔取病 鸡新换的有髓质的羽毛数根，将毛根剪下，插于血琼脂 平板，阳性者毛囊中病毒向四周扩散，形成白色沉淀环。
沉淀反应和凝集反应的异同点
沉淀反应和凝集反应的异同点一、引言沉淀反应和凝集反应是化学中常见的反应类型，它们在实验室和工业生产中都有广泛应用。
这两种反应都是由于物质之间的相互作用而发生的，但是它们在本质上有很大的区别。
本文将从不同角度比较沉淀反应和凝集反应的异同点。
二、定义沉淀反应是指在两种溶液中加入适量反应物后，产生难溶性固体沉淀的化学反应。
凝集反应则是指在介质中存在着一定浓度的胶体颗粒，在加入适量凝集剂后，颗粒聚集形成较大的团块或者沉淀。
三、化学基础1. 反应类型沉淀反应属于双离子交换反应，即两种带电离子交换配位基团而形成新物质。
凝集反应则属于胶体物理学范畴。
2. 反应机制沉淀反应通常是由于配位基团之间形成了较弱的键而发生的。
而凝集剂通常会与胶体颗粒表面上带电离子相互作用，使得颗粒聚集形成较大的团块或者沉淀。
四、实验操作1. 反应条件沉淀反应通常需要控制反应物浓度、温度和pH等因素。
而凝集反应则需要控制凝集剂浓度、介质pH和温度等因素。
2. 实验方法沉淀反应通常采用滴定法或者比色法进行分析，如Mohr滴定法、Fajans滴定法和Gravimetric分析法等。
凝集反应则通常采用光散射或者电泳等技术进行分析。
五、应用领域1. 工业生产沉淀反应常用于废水处理、金属提取和药物合成等工业生产中。
而凝集反应则广泛应用于纸浆造纸、矿物选矿和废水处理等领域。
2. 生命科学在生命科学领域，沉淀反应被广泛用于蛋白质纯化和酶活性检测等方面。
而凝集反应则被广泛用于细胞分离和药物输送系统的设计等方面。
六、总结通过以上比较可以看出，沉淀反应和凝集反应在反应类型、反应机制、实验操作和应用领域等方面都有很大的不同。
虽然它们都是由于物质之间的相互作用而发生的，但是它们所涉及的化学基础和实验方法都有很大的差别。
因此，在实际应用中需要根据需求选择合适的反应类型和方法。
实验二 沉淀试验
鸡传染性法式囊病毒琼脂免疫扩散试验；
三、实验步骤
吸取3-5ml加热融化（含有8％氯化钠） 琼脂平板的配制 1％的琼脂，浇注在干净载玻片上，待 凝固后使用。 用直径为4mm左右的打孔器在琼脂上打出个 打孔 梅花孔，中间孔与周围孔距离为3mm左右， 挑取孔中琼板背面放到火焰上轻轻灼烧，用手背 感觉微烫即可！ 在中央孔加入抗原，周围孔分别加入标准阴 阳性血清，以及被检血清。 加毕后，将琼脂板平放入铺有数层湿纱布的 带盖搪瓷盘内，置37℃条件下孵育，作用24 －48小时，观察结果。
实验七 沉淀试验
一 实验原理： 可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料 浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多 糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后， 在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色 絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称 为沉淀反应。 沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮 状沉淀反应和琼脂扩散反应。
二实验内容：
结果判定： 抗原孔与标准阳性血清之间出现白色沉淀 线，与阴性血清无沉淀线。 抗原与检测血清间出现沉淀线为阳性， 否则为阴性
实验分析讨论：
1、记录实验结果，分析产生结果的原因。 2、请思考在琼脂扩散试验中哪些因素会对结 果产生影响。
实验二、沉淀反应
实验二沉淀反应一、实验目的1、了解沉淀的生成、溶解和沉淀的转化条件，掌握沉淀平衡，同离子效应以及溶度积原理。
2、学习离子分离操作和同离子效应和电动离心机的使用。
二、实验的内容1、沉淀的生成和溶解①查表得：PbI2的ksp为7.1×10-9取1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2+9d水，取1d+9d水，配成1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液取1d 0.1mol/L的kI+9d水，取其中1d+9d水，再取1d+1d 水+首先配好的1×10-3mol/L的Pb（NO3）2溶液2d→不出现黄色沉淀，溶液无变化。
计算：Q=【pb2+】·【I-】2=25/8×10-11﹤ksp计算值也不应该有沉淀。
反应方程：pb2++ 2I-≒pbI2实验结论：1、计算结果与实际相符，Q﹤ksp，不出现沉淀2、没看到pbI2黄色沉淀，不等于不存在pbI2，溶液中还是存在少量的pbI2②查表得：pbs的ksp=8×10-28 pbcro4ksp=2.8×10-13取1d 0.1mol/L的Na2S+1d0.1mol/L的k2cro4,稀释至2.5mL 取1d上述溶液+1d 0.1mol/L的Pb（NO3）2→有棕黄色的混合沉淀出现。
计算：Q﹙pbs﹚=【S2-】【pb2+】=4×10-6﹥其kspQ﹙pbcro4﹚=【S2-】【cro42-】=4×10-6﹥其ksp反应方程：pb2++ S2-≒pbs pb2++ cro42-≒pbcro4实验结论：只要Q﹥ksp，就会出现沉淀，在同一溶液中也不会因沉淀的ksp的大小而出现沉淀的先后，而是同时沉淀。
如随着某离子的加入，Q先达到某个沉淀的ksp，后达到另一个沉淀的ksp，这是才会出现沉淀的先后之分。
2、沉淀的溶解和转化1d 0.1mol/L Pb（NO3）2+2d 0.1mol/L NaCL→Pbcl2↓（白色）+2d 0.1mol/L kI溶液→pbI2↓(黄色) {离心，去掉上清液→稀释至0.5mL}+饱和Na2so4晶体→ pbso4↓(白色) +0.1mol/L k2cro4→pbcro4↓（黄色）+2~3d 0.1mol/L k2S→pbs↓(黑色) {离心，取上清液，颜色为粉红色}★查表得：ksp（Pbcl2）=1.6×10-5 ksp（pbI2）=7.1×10-9 ksp（pbso4）=1.6×10-8ksp（pbcro4）=2.8×10-13 ksp（pbs）=8×10-28★计算：例Pbcl2转化为pbI2的过程：Pbcl2+ 2I-≒pbI2+2cl-K°=【cl-】2/【I-】2=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【I-】2= ksp （Pbcl2）/ ksp（pbI2）=1.6/7.1×104K°值越大，沉淀转化的越完全，对同一类型的沉淀来说，溶度积越大的沉淀越易转化成溶度积小的沉淀对ksp小→ksp大的方向进行的特例：ksp（pbI2）/ ksp（pbso4）=【pb2+】【cl-】2/【pb2+】【so42-】推出→【so42-】min=0.16/7.1 因此Na2so4晶体或饱和Na2so4溶液满足此条件。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
常见抗原抗体反应种类
常见抗原抗体反应种类引言：抗原抗体反应是生物学研究中的重要领域，它涉及到免疫系统的功能与调节机制。
在这篇文章中，我们将介绍一些常见的抗原抗体反应种类，包括沉淀反应、凝集反应、中和反应、荧光反应和免疫组化。
一、沉淀反应沉淀反应是指当抗原与抗体结合后，形成可见的沉淀物。
这种反应通常发生在溶液中，例如在免疫沉淀试验中。
通过加入沉淀剂，如聚乙二醇，可以促使抗原和抗体结合形成沉淀物。
沉淀反应的结果可以通过肉眼观察或显微镜观察来确定。
二、凝集反应凝集反应是指抗原与抗体结合后，形成可见的凝集物。
这种反应通常发生在液体中，如血清凝集试验中。
当抗原与抗体结合后，它们会形成凝集物，这些凝集物可以通过肉眼观察或显微镜观察来确定。
凝集反应在临床诊断中具有重要的应用价值，可以用于检测特定疾病的诊断和监测。
三、中和反应中和反应是指抗体与抗原结合后，阻止抗原的活性或入侵机体。
这种反应通常发生在体内，例如针对病毒或细菌的中和抗体。
当中和抗体与病原体结合后，它们可以阻止病原体进入或感染宿主细胞。
中和反应是免疫系统中重要的防御机制，对于预防病毒感染和细菌感染具有重要意义。
四、荧光反应荧光反应是指通过使用荧光标记的抗体来检测特定抗原。
在荧光免疫分析中，荧光染料被标记在抗体上，当这些荧光标记的抗体与目标抗原结合时，可以通过荧光显微镜观察到荧光信号。
荧光反应在生物医学研究中具有广泛的应用，可以用于检测抗原的存在和定位。
五、免疫组化免疫组化是指通过使用特异性抗体来检测组织中的特定分子。
在免疫组化实验中，组织样本被固定和切片，然后与特异性抗体结合。
通过使用染色剂或荧光标记的二抗来检测抗原-抗体结合，可以观察到抗原在组织中的位置和表达水平。
免疫组化广泛应用于疾病诊断和医学研究领域。
结论：抗原抗体反应是免疫系统中重要的功能机制，涉及到多种反应类型。
沉淀反应、凝集反应、中和反应、荧光反应和免疫组化是常见的抗原抗体反应种类。
这些反应不仅在基础科学研究中有重要应用，也在临床诊断和医学研究中具有广泛的应用前景。
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直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
操作步骤
实验材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、
载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂板、 打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳 性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）等。
实验内容
1.直接凝集反应：玻片法（操作） 2.沉淀反应：
（1）单向琼脂扩散试验（示教）
（2）双向琼脂扩散试验（操作）
分类：
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散
—— 定性实验
（一）单向琼脂扩散试验 （示教）
原理:
适宜浓度的抗体预先在琼脂中混匀后制成琼脂板，以 适当距离打孔，将可溶性抗原至孔中，抗原向周围扩散，与 琼脂中抗体相遇，抗原与抗体比例适宜时，出现沉淀。沉淀 环的直径与孔中抗原浓度呈正相关，可根据沉淀环直径大小 从预先绘制成的标准曲线查出待测标本中抗原含量。 本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度 约为10～20μg／ml.
常见抗原抗体反应的种类
抗原抗体反应又称血清学反应，主要有：
1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与反应 4、中和反应 5、免疫标记技术
一、凝集反应
(一)概念
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在 一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。
颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
结果及判断
盐水侧无凝集颗粒； 血清侧出现肉眼可见的凝集块为阳性，仍为均匀一致乳浊 液者为阴性。
注意事项
1、接种环在伤寒菌液取菌前后均需严格灭菌，以免出现假阳
性。 2、注意涂菌时，先涂生理盐水侧，以免污染血清产生错误结 果。 3、摇动玻片时不要把两凹内液体混在一起。
二、沉淀反应:
经典抗原抗体反应的一种。
凝集块
沉淀物
思考题
1、凝集反应的原理及直接凝集反应玻片法的 用途是什么？ 2、沉淀反应的原理是什么？
作业
1 写出实验报告 2 分析凝集反应的结果和意义 3 绘出双向琼脂扩散试验结果图
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag 1:80 Ag 1:40 Ag 1:20 Ag 1:10 Ag 未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
原理:
将可溶性抗原与相应抗体两种溶液置于琼脂糖凝胶的不 同位置，使两者在凝胶中各自向四周扩散,抗原与抗体相遇并 在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。
双向扩散法测血清中AFP注意事项
1、琼脂板一定平整、光滑 (无气泡)，琼脂不可过厚； 2、打孔不要划破边缘； 3、加样要加满而不溢出为止； 4、合理分配吸管，Ag、Ab吸管不能混淆。
凝集反应与沉淀反应的比较
凝集反应 抗原性质 沉淀反应
颗粒性或可溶性抗原致 可溶性 敏颗粒 几分钟 数小时至数天
反应时间 反应产物
取洁净玻片1张，用蜡笔划分2等份，如下图所示 ； 无菌操作，用接种环分别于一、二格内各加2～3环伤 寒杆菌诊断血清、生理盐水； 用接种环取待测菌液，分别涂布于生理盐水和伤寒血 清中，混匀； 轻轻摇动玻片，1~2分钟后观察结果。
生理盐水 ＋ 待测菌液 阴性 伤寒血清 ＋ 待测菌液 ？
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
可溶性抗原
+
相应抗体 沉淀线或沉淀环
பைடு நூலகம் 分类:
琼脂扩散 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 免疫电泳
琼脂扩散试验：
琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高温时溶于 水，冷却后凝固，形成凝胶，呈多孔结构，充满水 分，允许各种抗原抗体分子自由扩散。二者于比例 适当处相遇，发生沉淀，形成可见的沉淀带。
应用:
检测 AFP 、HBsAg, 协助疾病诊断.
双向琼脂扩散法测血清中AFP
甲胎蛋白（AFP）：
是一种在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成的α球蛋白， 存在于胎儿血清中，出生后血清中AFP几乎消失。正常 成人血清中仅含极微量的AFP，经典的免疫学方法检测 不出。 当肝细胞发生癌变时，AFP含量增高，测血清中AFP， 可协助诊断原发性肝癌。
材料：
待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）、 生理盐水、琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、酒精灯。
双向扩散法测血清中AFP操作步骤
1、制备琼脂板： 1%盐水琼脂加热溶化，取5ml均匀铺与载玻片上。 2、打孔： 琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。 3、封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。 4、加样： 中间孔加抗AFP抗体，1、4孔加AFP阳性对照，2、3孔加待检血清，5、6孔加 生理盐水。 5、反应： 于湿盒，37C 24h。
实验二
凝集、沉淀反应
实验目的
1.熟悉凝集反应、沉淀反应的概念。 2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法及应用。 3.掌握直接凝集反应玻片法的原理、方法及其 用途。 4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法、结果 判断。
实验原理
1.直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈 现的肉眼可见的凝集现象。 。 2.沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结 合而出现的沉淀现象。
1
6 5 4 2 3 6
Ag
1
2 Ag?
Ab
5
Ag
3 Ag? 4
抗AFP抗体
双向扩散法测血清中AFP实验结果
1
6 5 2 3 6 5
1
2 3
4
4
1、4两孔（阳性对照孔）与中心孔之间应出现清晰的乳白色沉淀线， 5、6（阴性对照孔）两孔与中心孔之间无沉淀线。 2、3两孔（待测血清）如与中心孔之间也出现了沉淀线，且一端与 相邻的阳性对照血清形成的沉淀线相吻合，则该待测血清为阳性。 如待测血清与中心孔出现了沉淀线，但与阳性对照血清的沉淀线相 交叉，不判为阳性。 如待测血清24h内与中心孔间无沉淀线则为阴性。