盐酸头孢甲肟杂质测定的方法学验证

盐酸头孢甲肟杂质测定的方法学验证
对建立的盐酸头孢甲肟有关物质测定的方法，进行方法学验证。

色谱柱：球状蛋白色谱用亲水硅胶为填料的色谱柱，流动相：pH6.5磷酸盐缓冲液（55：45），检测波长：231nm，进样量：20μl。

经过实验证明系统适用性：头孢甲肟峰与其前杂质峰分离度为1.95；对照溶液线性和范围：头孢甲肟在浓度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml；检测限与定量限：检测限为0.21ng，定量限为0.55ng；溶液进样精密度：连续进样5次，峰面积值的相对标准偏差不大于2.0%，F值测定重现性：F值的日内、日间的相对标准偏差均在5%以内。

综上，建立的方法准确、可靠，能够满足实际生产要求。

标签：盐酸头孢甲肟；杂质；方法学验证
1 概述
盐酸头孢甲肟是第三代头孢菌素，对革兰氏阴性和阳性需氧菌和厌氧菌有抗菌作用。

MMT是由工艺引入的工艺杂质，参考JP XVI中关于MMT的控制方法及限度，采用外标法对MMT进行定量控制，并将限度制订为1.0%，列入质量标准。

在前期的实验中已经建立了相关的检测方法如下：
仪器：Agilent 1200；色谱柱：球状蛋白色谱用亲水硅胶填料；流动相：pH6.5磷酸盐缓冲液；检测波长：231nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；分析步骤：精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，以保留时间小于头孢甲肟峰的各杂质峰面积的和与对照溶液主峰面积做比较。

2 仪器与试剂
仪器：天平：Mettler XS205、高效液相色谱：Agilent1200。

试剂：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠（分析纯、天津市科密欧）。

3 实验方法
3.1 系统适用性
取本品5.0mg，置于10ml量瓶中，加0.5mol/L的氢氧化钠溶液1.0ml室温放置5分钟，再加0.5mol/L的盐酸溶液1ml，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录结果。

3.2 对照溶液进样精密度试验
精密量取对照溶液20μl，连续进样5次，记录结果。

3.3 F值重现性考察
F值为对照溶液中的盐酸头孢甲肟浓度（mg/ml）与测得的峰面积的比值，每天称取3份对照品（批号1296661），测定两天结果。

3.4 检测限与定量限
在本实验条件下，以信噪比S/N=10计算定量限；以信噪比S/N=3计算检测限。

3.5 有关物质MMT低浓度线性
取盐酸头孢甲肟对照品（1296661）25.50mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml至50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml 至10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别精密量取20μl注入液相色谱仪。

4 实验结果
4.1 系统适用性
头孢甲肟峰与其前相邻降解杂质峰的分离度为1.95，分离度达到要求。

4.2 对照溶液进样精密度试验
对照溶液重复进样峰面积的相对标准偏差不大于2.0%，进样精密度较好（结果见表1）。

表1 对照溶液进样精密度
4.3 F值重现性考察
F值的日内、日间的相对标准偏差均在5%以内，重现性较好（结果见表2）。

4.4 检测限与定量限
在本实验条件下，以信噪比S/N=10计算，定量限为0.55ng；以信噪比S/N=3计算，检测限为0.21ng。

4.5 有关物质MMT低浓度线性
试验结果表明，盐酸头孢甲肟在浓度1.66？滋g/ml～7.92？滋g/ml范围内与峰面积线性相关性良好（结果见表3，图1）。

表3 对照溶液浓度与峰面积线性试验
图1 有关物质MMT低浓度线性
5 实验结论
以上数据说明建立的相关物质检测方法，系统适用性、对照溶液线性和范围、检测限与定量限、溶液进样精密度、F值测定重现性符合相关指标和要求，得出如下结论：建立的方法准确、可靠，能够满足实际生产要求。

6 结束语
盐酸头孢甲肟等β-内酰胺类抗生素易降解产生杂质，本实验对制定了有关物质MMT的检测方法进行了系统验证。

经典检测聚合物的方法是采用葡聚糖凝胶G-10为色谱柱，检测时间长，聚合物与样品峰分离度差，柱效低，参考中国药典2010年版二部头孢地嗪钠有关物质MMT的检测方法，以球状蛋白色谱用亲水硅胶为填充剂，主峰前杂质与主峰的分离度较好，符合要求，且检测灵敏度高，准确度好，可用于有关物质的检测。

参考以上实验，对前期建立的相关物质检测方法，经过方法学的验证证实方法的可重复性高，线性范围较宽，能够满足日常生产的对产品含量测定的要求；回收率验证体现出了较高的回收效果，能够有效地提高该产品投产后的生产效率和经济效益。

参考文献
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