固相萃取高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量_图文(精)

usHIzHEN MEDIcINE AND MATERIA MEDIcA REsEARcH 2007vo L.18No.1时珍国医国药2007年第18卷第l期

固相萃取一高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

杨克迪,李宏,龙云飞,郑智慧,万顺刚

(广西大学化学化工学院,广西南宁 530004

摘要:目的采用固相萃取.高效液相色谱方法分析黄芪中黄芪甲苷的含量。方法采用c。。固相萃取小柱纯化黄芪提取物中的黄芪甲苷,反相高效液相色谱一紫外检测方法测定黄芪中黄芪甲苷含量。色谱柱为zorbax sB-C。。柱

(彬.6mm×150mm,5汕m,以乙腈.水(32:68为流动相,流速1.O mL/min,柱温30℃,检测波长200nm。结果黄芪甲苷进样量在 1.408—7.04灿g范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999。平均回收率为101.5%。结论该方法操作简便,重现性好,可作为黄芪药材或其它含黄芪制剂中黄芪甲苷含量的分析方法。

关键词:固相萃取; 高效液相色谱;黄芪甲苷

中图分类号:R284.2文献标识码:A 文章编号:1008旬805(200701抑04lml

Detemi勰tion of AstragalosideⅣin Radix As加酗髓by SPE・HPLC

YANG Ke—di,LI Hong,LONG Yun.fbi,ZHENG Zhi—hui,WAN Shun—gang

(Jsc^ooZ矿吼em趣哪。凡d醌em渤Z西柳聘Peri噌,G“口,移i踟泐邝妙,№肌i昭530004,劬i凡口 Abstract:Ob.iective To establish SPE.HPLC method for the dete彻ination of as￡嘴aloside IV in Radix As￡m鼬执Methods The astragaloside IV in sample was purified with Cl R solid phase column and its content was determined wi出HPLC.UV metho(1.The

astragaloside IV was sep啪ted 0n a zorba【SB-C18column(‘p4.6mm x 150mm,5斗mwith acetonitrile—water(32:68,v/v as mobile phase,and the detective wavelen#尊h

was￥et at 200nm.1tesults The linear range was 1.408一-7.04¨g(r=O.9999. 11he avemge recovery of astmgaloside IV was 101,5%.Conclusi彻The method is simple。accurate and can be used forthe quaJ. ity contr01of Radix As￡nZgn屁and its pI℃paration.

1【ey wOrds:SoIid.phase extraction:HPLC:Astragaloside IV

黄芪为常用中草药,具有较高的药用价值,其主要成分黄芪甲苷具有镇痛、镇静和降血压等药理活性¨o J。2005年版《中国药典》规定采用HPLc—ELSE方法测定黄芪甲苷含量p‘,鉴于紫外检测器的普及性,目前相当部分实验室仍采用HPLc—UV法分析黄芪及相关制剂中黄芪甲苷含量M“1。由于黄芪甲苷的特征吸收波长在200nm左右,样品中杂质对黄芪甲苷定量分析干扰较大。目前一般采用D101大孔吸附树脂处理样品,样品中仍含有较多的杂质,黄芪甲苷与其它杂质难以达到基线分离,影响分析准确度,另一方面也不利于色谱柱的保护。本文采用固相萃取方法纯化样品中黄苠甲苷,可明显去除样品中杂质,并以此测定了黄芪药材中黄芪甲苷含量。

1仪器与材料

1.1仪器A西1enll 100高效液相色谱仪,二极管阵列检测器(美国Agilent公司;c。8固相萃取柱(美国Bestown公司;Labomta 4000旋转蒸发器(德国Heidolph公司;BSl24S电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司;KQ.500DB超声波清洗机 (昆山超声仪器厂。

1.2药材与试剂黄芪购于南宁市一心药业公司,经鉴定均为药典正品;黄芪甲苷对照品购于中国药品与生物制品检定所(批号0781.200311;乙腈为色谱纯,其它试剂为分析纯,双蒸水自制。

2方法

2.1对照品溶液的配制精密称取17.6mg黄芪甲苷对照品置于25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。

2.2黄芪甲苷供试品溶液的制备取黄芪药材,粉碎。精密称取4g粉末,用20ml

甲醇于索氏提取器中浸泡过夜,加甲醇至60 ml,于水浴中80℃下回流提取4h。提取液挥干甲醇,残渣用正丁醇饱和的水10ml超声溶解,溶液用水饱和的正丁醇萃取4

收稿日期:2006蜘-25;修订日期:2006—1l-20

基金项目:广西教育厅资助项目[项目批准号:桂教科研(200420]. 作者简介:杨克迪(1966一,男(汉族,广西兴安人,现任广西大学化学化工学院副教授,博士学位,主要从事天然产物有效成分分离与应用研究. 次,40mL/次。合并正丁醇液,用l%Na0H溶液洗涤3次,40mL/次,然后用正丁醇饱和水洗至中性,回收正丁醇,残渣用5ml水溶解,备用。

c。。固相萃取柱依次用5rnl甲醇和5ml水预处理,取黄芪甲苷水溶液过固相

萃取柱,先用3ml双蒸水洗涤,然后用20%甲醇溶液5ml洗涤,弃去洗涤液。用60%甲醇20ml洗脱,收集洗脱液。洗脱液挥干溶剂,用甲醇定容至5ml作为供试品溶液。 2.3色谱条件zorbax sB—c18色谱柱(4.6mm×150mm,5斗m, 流动相为乙腈一水(32:68,∥口,流速1.0mL/min,柱温为30℃, 检测波长200nm。样品谱图见图l,对照品谱图见图2。

2.4样品含量测定

2.4.1线性范圉考察用微量进样器分别取2,4,6,8,10一黄芪甲苷对照品溶液进样。以黄芪甲苛对照品峰面积为纵坐标y,黄芪甲苷对照品进样量为横坐标戈,进行线性回归,得回归方程:

y=72.2885戈~4.9025(n=5,r=0.9999,线性范围为1.408— 7.04pg。

2.4.2黄芪甲苷含量测定分别测定了批号为20050316, 2005l 125两批黄苠药材中黄芪甲苷的含量。结果见表l。

∥mi n

图l 黄芪甲苷供试晶液褶色谱图