高效液相色谱柱常见故障
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
高效液相色谱柱的故障分析
高效液相色谱柱的故障分析色谱柱是有使用寿命的。
一根正常的商品柱一般可以正常使用2000~5000次进样；保护良好的柱子可达10000次以上，但是有时候即使是一次不当使用就可能使柱子发生严重的损害。
柱子受损害后，可表现为柱压升高、柱效下降、峰形异常等现象。
1. 柱压升高造成柱压升高的可能原因有很多。
一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体，造成流体阻力加大所引起的。
（1）流动相过滤不良这往往是由于流动相没有过滤，或者虽然已经过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏，使得固体杂质滞留于滤板上所造成的。
致使柱的进口滤片处堵塞，压力升高。
（2）霉菌生长霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长，堵塞滤板，导致压力升高。
这种现象在夏天，尤其是使用磷酸盐缓冲液为流动相时更易发生。
在夏季使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。
即使保存在冰箱中，一般也不要超过两天。
否则，即使不堵塞滤板，也会因细菌或霉菌孳生而产生的代谢物造成对样品的干扰。
（3）非特异性吸附当溶质在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
（4）更换流动相时置换不彻底致使流动相不互溶（5）盐晶体的析出更换流动相后，缓冲液在新的流动相体系溶解度低而析出（6）样品的沉淀配制样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中溶解度可能降低而析出（7）压力脉冲运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。
如，转动进样阀时动作过缓，造成液流堵塞再瞬间释放；开机瞬间压差较高等。
压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化。
填料微屑的长期累积可能会使柱床阻力增大。
2. 柱效下降柱子在使用过程中分离性能逐步降低是正常现象。
但是如果发生突然降低或改变，属于异常现象。
此时，应分析原因，有针对的采取措施，避免这种情况发生，或及时进行柱子再生，以求尽可能地恢复其性能。
造成柱效下降的原因有很多，但最基本的原因是使用不当，造成填料特性或柱床结构的改变所致。
高效液相色谱柱常见故障
3.塔板数下降
（1）超龄服役
（1）柱再生成换柱
（2）柱被污染
（2）清洗
二、根据色谱图的变化判断仪器故障
表2根据色谱图的变化判断仪器故障或方法失误
故障现象
可能的原因
排除方法
进样后不出峰
（1）检测器选择不当，样品无吸收
（1）正确选择检测器，如样品无紫外吸
收就不应选UV检测器，而应选其它
（1）延长平衡时间
替绰
（2）正相柱中流动相脱水不完全
（Байду номын сангаас）重新脱水
（3）柱温变化
（3）柱恒温
（4）缓冲液容量不够
（4）用较浓的缓冲液
（5）柱内条件变化
（5）稳定进样条件，调节流动相
（6）柱塌陷或形成短路通道
（6）更换色谱柱
出现无规则色谱峰
长期进样滞留在柱中的组分被洗脱
用强极性溶剂冲洗再用流动相平衡
平顶峰
（6）进样技术不佳
（6）提高进样技术
基线不能回零
（1）样品粘度大
（1）适当减小样品浓度，并采用低粘度
流动相溶剂
（2）进样量太大，柱超载
（2）减小进样量
（3）溶解样品的溶剂与流动相溶剂互溶
（3）尽量采用能互溶的溶剂来溶解试样
（4）柱效低，柱内空隙
（4）改用高效柱或重新装柱
（5）进样装置部分堵塞
（5）检修进样器并清洗之
，烘干
（3）色谱柱选择不当，试样与固定相
（3）更换色谱柱
间有作用
（4）进样技术差
（4）提高进样技术
（5）样品在流动中相中溶解度小
（5）选用对试样溶解能力强的溶剂作
为流动相
（6）进样量太大
高效液相色谱中常见故障排除
高效液相色谱中常见故障排除1. 流动相储罐①脱气：脱去流动相中的溶解气体是非常必要的，特别是在梯度洗脱用水和其它极性溶剂做流动相时，脱气更为重要。
A：为了防止在检测其中产生气泡；B：为了减少流动相和固定相可能发生的反应，除去流动相中的氧也是很必要的。
方法：以吹入惰性气体为最有效方法。
超声脱气，脱气后要密闭，防止比例改变和溶氧。
②过滤：防止滤头堵塞。
尤其是缓冲液容易出现沉淀和生菌，要及时过滤。
③使用高纯试剂：A：水，水中的杂质的影响在进行痕量的梯度洗脱时尤为明显，一些水中的杂质积累于色谱柱的头部，当洗脱剂强度增大时它们流出色谱柱，形成鬼峰。
一般要用蒸馏并进行离子交换的纯水，还要贮存在加盖的玻璃瓶中。
B：溶剂,溶剂中如含有紫外吸收的微量杂质就能使噪音增大，溶剂的紫外吸收节止波长增大50-100nm。
一般来讲，等度分析对流动相纯度的要求要低一些。
2. 泵①精密度：液相精密度变差是由于泵的某些故障所引起的，泵的单向阀无规则地泄露所引起的输出液体流量不稳。
泵噪音：是由活塞的正常运动和单向阀的工作所引起的。
漂移：(长周期的测量精度)指在较长时间里，泵流量的连续变化的情况，往往是由于室温的变化而引起的输出量的变化。
②超压：泵最大输出是40-50MPa，一般设定在25MPa以下为了保护色谱柱。
超压时采用逐级拆除法检查堵塞部位，如果是色谱柱堵塞问题，无解决方法时可以考虑增加输出上限。
③泵室内有气泡：分析型液相泵室不超过400ul，气泡可以从排气阀顺利排出。
如果排不净A：检查储液瓶流动相脱气；B：流动相滤头。
④柱塞杆折断：为实验中严重事故，表现为不泵液。
多为缓冲盐流动相直接与高纯度有机溶剂混合出现结晶所致。
缓冲盐对液相系统腐蚀性大，如果停止流动也易在色谱柱结晶，造成柱结构发生改变，因此要避免在不做分析的时候液相系统中有缓冲液，及时用水冲洗系统20ml以上。
3. 检测器①噪声：没有溶质通过输出信号的变化。
A：泵的脉动等仪器因素，当噪声和流速成比例是一定来源于分离系统。
高效液相色谱常见故障及解决方案
清洗柱或更换柱 清洗六通阀 清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂 或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变 化
现象
保留时 间不重 复
判断
系统不问或未达 到平衡
室温波动大
柱被污染 溶剂配比不合适 进样体积太大或 样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间 使系统平衡 使用柱温箱、将系统置于 恒温、空气对流小的环境 冲洗柱或更换柱 调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂 冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器，在检测器后面 安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线 噪音
现象
规则基 线噪音
判断
故障排除
流动相、检测 器或泵内有气 泡
流动相脱气，冲洗系统除去检 测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、 将系统置于恒温、空气对流小 的环境
鬼
洗脱物
峰
注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程， 换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流 速、如问题仍存在，两次进样间用 强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图 出现鬼 峰
柱被污染 六通阀污染 检测器污染
峰变 宽
环境温度变化 漏夜
使用柱温箱 检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分 离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案液相色谱柱在使用过程中常见的问题有柱压上升、峰拖尾变宽、分别效果下降等。
一般情况下这些都是色谱柱使用时间过长引起的正常现象，只需对色谱柱进行清洗与再生便可解决。
但是假如柱压蓦地上升，则需要检查色谱柱是否显现问题。
可能的原因有以下几点：1.柱头的过滤筛板被污染解决方法：卸下柱头螺丝，将过滤筛板取下，放置在30%左右的稀硝酸中，然后用超声波清洗10分钟。
再将过滤筛板放入超纯水，超声清洗约10分钟，之后将过滤筛板重新装回色谱柱。
2.填料被污染解决方法：①卸下柱头螺丝，将前端被污染的填料用专用小匙挖出，然后重新填入相同的填料。
②选择合适的流动相，按色谱柱使用的方向冲洗，冲洗量须大于色谱柱体积的20倍，将污染物溶解并冲杰出谱柱，然后，依照色谱柱标明的箭头方向使用。
3.缓冲盐溶液碰到纯有机相析出盐结晶，堵塞色谱柱解决方法：先用冲洗色谱柱，将盐晶体溶解并冲杰出谱柱，然后换高浓度甲醇水溶液或其他有机溶剂作为流动相。
4.流动相的PH值偏差过大，造成固定相溶解或结构被破坏解决方法：此时很难将色谱柱修复通常需要直接更换色谱柱。
高效液相色谱仪常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。
其中常见的有柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
一、液相色谱仪压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：找寻各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。
当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。
处理方法：打开Purge阀，用3～5ml/min的流速冲洗，假如不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
二、液相色谱仪柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
液相色谱柱的十大常见故障及操作规程
液相色谱柱的十大常见故障及操作规程液相色谱柱是液相色谱的核心部件，它紧要起到了分别作用。
色谱柱同样也是一个消耗品，在流动相冲刷的过程和样品在分析的过程，填料损失和污染使得色谱柱的性能渐渐下降。
所以，对于液相色谱尤其是常用的C18柱，需要在确定时间内对其性能做一个评估，同样，新的色谱柱也要对色谱柱做一个有效的体检。
液相色谱柱的十大常见故障：1、若操作过程发觉压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当显现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排出后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。
柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings 中心的管子未和接口处贴紧。
不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头；3、操作过程若发觉压力特别高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排出法检查，确定何处堵塞后解决。
若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可接受小流量反冲的方法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完；5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可接受调低进样针进样高度的方法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶；6、自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对按时，需重新定位。
7、泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换；8、基线产生不规定噪声，可能起因于系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在使用使需要充分的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到充分的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定；9、短期有规定的噪声，可能起因于泵压不稳或泵脉冲，调整溶剂不适当（如两种溶剂的互溶性问题），泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定；10、长期有规定噪声，可能起因于室温不稳（未使用柱温箱）或使用柱温箱不当；液相色谱柱的使用和维护在液相色谱操作过程中，我们需要下面的问题，便利维护液相色谱柱。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱常见问题原因及处理方法
高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。
②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。
（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。
）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。
1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。
目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。
高性能液相色谱仪的常见故障及解决方案
高性能液相色谱仪的常见故障及解决方案高性能液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
然而，使用HPLC时经常会遇到各种故障，这需要我们及时解决，以确保测试的准确性和可靠性。
本文将介绍一些常见的HPLC故障，并提供相应的解决方案。
一、进样器堵塞进样器是HPLC系统中的核心组件之一，常常会发生堵塞现象。
原因可能是样品中含有较高浓度的杂质或沉淀物，造成进样针堵塞。
解决方案是首先将进样器中的旧样品完全清除，然后用合适的溶剂冲洗进样器，或者更换新的进样针。
二、废液泵故障废液泵是HPLC系统中的关键组成部分，负责排出进样器中的废液。
常见的故障是废液泵无法正常排液或产生异常噪声。
这可能是由于废液管道堵塞或泵头损坏造成的。
解决方案是检查废液管道是否畅通，清洗或更换损坏的泵头。
三、柱失效柱是HPLC分离过程中起关键作用的组件，经常会发生失效。
常见的柱失效表现为峰形变宽、峰高降低或漂移。
这可能是柱堵塞、废液中含有杂质、流速过高等原因导致的。
解决方案是首先检查柱是否堵塞，如有必要可进行柱后过滤；同时检查废液和洗涤液中是否含有杂质，如有需要可更换或过滤溶剂。
如果流速过高，可以调整流速以改善峰形。
四、泵压异常HPLC系统中的泵负责提供流动相，如果泵压异常，可能会导致测试结果不准确或分离不良。
常见的泵压异常表现为压力过高或过低。
这可能是由于流量设置错误、柱堵塞、泵头损坏等原因引起的。
解决方案是首先检查流量设置是否正确，如有必要可调整流量；同时检查柱是否堵塞，如有需要可以进行柱后过滤；如果泵头损坏，需更换新的泵头。
五、检测器故障检测器是HPLC系统中的关键组件，负责检测和记录分离柱出口的样品峰。
常见的检测器故障包括峰形异常、噪声干扰等。
这可能是由于检测器光路不正、流量设置不合理或杂质干扰等原因引起的。
WATERSHPLC常见故障分析
WATERSHPLC常见故障分析WATERSHPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析方法，用于分离和检测化合物。
然而，HPLC仪器在使用过程中一些常见故障可能会影响分析结果和实验的进行。
在以下的文章中，我们将探讨一些WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法。
1.峰形不对称峰形不对称可能是由于流动相、柱等问题引起的。
首先，检查流动相是否正确配置，确保使用的溶剂无气泡和杂质。
其次，检查柱的状态，尽量避免在柱上运行样品时破坏柱的封底。
最后，还可以尝试调整梯度和流速等参数以改善峰对称性。
2.噪声干扰噪声干扰可能是由于仪器的光电检测器或环境因素引起的。
首先，检查光电检测器是否干净，清洁检测器表面以去除灰尘和杂质。
其次，尽量将仪器放置在安静的环境中，避免外部噪声的干扰。
最后，检查样品制备的过程，确保样品中没有杂质或颗粒。
3.漏液漏液可能是由于柱连接不紧密或密封圈老化引起的。
首先，检查柱连接是否紧固，确保连接件没有松动。
其次，检查密封圈的状态，及时更换老化的密封圈。
最后，还可以尝试调整流速和压力以减轻压力对密封的影响。
4.柱堵塞柱堵塞可能是由于样品中的杂质、柱背压增加或柱老化引起的。
首先，可以尝试使用过滤器或微孔过滤膜将样品预处理，去除样品中的颗粒和杂质。
其次，检查流动相的组分，避免出现析出物或结晶。
最后，定期检查柱背压，及时更换老化的柱。
5.柱效降低柱效降低可能是由于柱老化、样品残留或流动相组分改变引起的。
首先，定期检查柱的状态，及时更换老化的柱。
其次，对于含有高糖、脂肪或盐的样品，可以考虑进行前处理或柱后处理以减轻柱效降低的影响。
最后，检查流动相的组分，确保流动相没有杂质和过多的溶剂。
总结而言，WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法需要综合考虑多个因素，包括流动相、柱、样品和仪器等。
通过仔细检查和调整这些因素，可以解决大多数故障，并确保HPLC仪器的正常运行和准确的分析结果。
高效液相常见问题
在高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）中在使用过程中可能会遇到一些常见问题，常见的问题包括：
1. 色谱峰形状异常：可能出现尖峰、宽峰、不对称峰等情况。
这可能是由于流速不稳定、柱温度不恰当、样品溶液中存在杂质或沉淀等原因引起的。
2. 噪音和基线波动：色谱图上出现明显的噪音或基线波动，可能是由于进样器、柱、检测器或其他仪器部件故障、大气压力变化、流动相污染等原因导致的。
3. 分离不良：某些目标化合物无法得到有效的分离，可能是由于柱选择不当、流动相组成不适合、进样量过大或样品混杂等原因引起的。
4. 柱寿命问题：柱子的寿命会受到样品残留、样品破坏柱子、流动相pH值不适宜等因素的影响。
如果柱子寿命较短，可能需要重新考虑进样前的样品预处理以减少对柱的损害。
5. 检测器响应异常：检测器对目标化合物的响应异常，可能是由于检测器灵敏度调整不当、光源衰减、检测器污染等原
因导致的。
解决这些问题的方法包括：检查仪器设备是否正常运行、保证流动相的纯净性、选择适当的柱和方法条件、优化样品预处理步骤等。
如果问题持续存在，建议咨询专业的技术支持人员以获得更具体的指导和解决方案。
高效液相色谱法常见故障排除
高效液相色谱法常见故障排除所长办公室文毅日前，本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班，现将培训内容总结如下，希望对大家的实际工作有所帮助！一、检测器常见故障排除1、基线噪声·检测池窗口污染：用强溶剂冲洗检测池；卸下检测池，拆开清洗或更换池窗石英片。
·样品池中有气泡：突然加大流量赶出气泡；在检测池出口端加一反压（0.2-0.3MPa）连一个0.3mm×1～2m的不锈钢管，以增大池内压（增加压力不要过大，防止检测池石英片碎裂）。
·检测器或数据采集系统接地不良：拆去原来的接地线，重新连接。
·检测器光源故障：检查氘灯或钨灯设定状态；检查灯使用时间、灯能量、开启次数；更换氘灯或钨灯。
·液体泄露：拧紧或更换连接件。
·很小的气泡通过检测池：流动相要仔细脱气；加大检测池的背压；系统检漏；有微粒通过检测池，清洗检测池；检查色谱柱出口筛板。
2、基线漂移·检测池窗口污染：同基线噪声描述。
·色谱柱污染或固定相流失：更换色谱柱或使用保护柱。
·检测器温度变化：系统恒温。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·原先的流动相没有完全除去。
·溶剂储液瓶污染：清洗溶剂瓶，用新流动相平衡系统。
·强吸附组分从色谱柱中洗脱：在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱；使用溶剂梯度。
3、工作站上出现大的尖峰·检测池内有气泡通过：溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液。
·记录仪或检测器接地不良：消除噪声来源；确保良好接地。
·样品溶解不彻底。
4、负峰·检测器输出信号的极性相反。
·样品的吸收小于流动相，流动相不纯。
·样品溶剂干扰。
·示差折光检测器中样品的折射率较低。
·进样中带入气泡。
5、鬼峰或假峰·进样阀或注射器污染·样品溶剂与流动相不同·样品中有空气·流动相中杂质引起·在线过滤器或过滤沉子污染·溶剂储液瓶污染6、工作站不回零⑴记录仪或工作站信号阶梯式上升·检测器的输出范围设定不当：重新设定检测器的输出范围。
高效液相色谱常见故障
高效液相色谱仪常见故障的断定及解决(一)高效液相色谱仪保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用〉25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)高效液相色谱仪保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)高效液相色谱仪保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四)高效液相色谱仪出现肩峰或分叉1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)高效液相色谱仪鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)高效液相色谱仪基线噪声1.气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声)清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声)采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)高效液相色谱仪峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)高效液相色谱仪峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品既使日常精心维护的液相色谱仪，随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。
高效液相色谱仪HPCL使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪HPCL 使用中常见故障及解决方法1高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar ）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1). 首先断开真空泵的入口处，此时 PEEK管里充满液体，使 PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2). 打开 Purge 阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3). 把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱仪常见故障处理
高效液相色谱仪常见故障处理故障1:流动相内有气泡, 关闭泵, 打开泄压阀, 打开p urge键, 清洗脱气, 气泡不断从过滤器冒出, 进入流动相, 无论打开p urge 键几次,都无法清除不断产生的气泡。
原因:过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内, 过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
处理过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中12～36 小时, 轻轻震荡几次, 再将过滤器用纯水清洗几次, 打开泄压阀, 打开p urge 键,清洗脱气, 如仍有气泡不断从过滤器冒出, 继续将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏, 流动相可以流畅地通过过滤器。
打开泄压阀,打开泵,流速调至1. 0～3. 0ml/ min ,纯水冲洗过滤器1 小时左右。
即可将过滤器清洗干净。
关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
故障2:柱压高原因(1) 缓冲液盐分如(乙酸铵等) 沉积于柱内; (2) 样品污染沉积。
处理对于第一种情况先用40～50 ℃的纯水,低速正向冲洗柱子, 待柱压逐渐下降后, 相应提高流速冲洗, 柱压大幅度下降后, 用常温纯水冲洗, 之后用纯甲醇冲洗柱子30 分钟; 对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子, 然后换成甲醇冲洗, 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) , 再用换成甲醇冲洗, 然后用纯水冲洗, 最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30 分钟以上。
故障3:既无压力指示,又无液体流过[1 >。
原因:(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡进入泵体。
处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时, 用一个50ml 的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修液相色谱仪器是一种广泛应用于化学、生物和医药等领域的分离和分析仪器。
然而，由于长期使用或操作不当等原因，液相色谱仪器可能会出现故障。
本文将介绍一些常见的液相色谱仪器故障，并提供诊断和维修方法。
1. 压力异常当液相色谱仪器出现压力异常时，可能是由于柱堵塞或柱压力不足等原因引起的。
首先，可以检查柱是否堵塞，可以通过更换柱或者清洗柱来解决。
另外，也需要检查柱前的过滤器是否堵塞，如果是，则需要更换过滤器。
2. 泵故障液相色谱仪器的泵可能会出现泵头堵塞或密封件损坏等故障。
当出现这种情况时，需要检查泵头是否堵塞，并清洗或更换泵头。
另外，也需要检查泵的密封件是否完好，如果密封件损坏，则需要更换密封件。
3. 检测器信号异常检测器信号异常可能是由于检测器灯管老化或污染、检测器电路故障等原因引起的。
当出现这种情况时，可以先清洗检测器灯管或更换灯管；同时，也需要检查检测器电路是否正常，如果电路故障，则需要修复或更换电路。
总的来说，液相色谱仪器的故障诊断和维修需要具备一定的专业知识和技能。
在进行维修前，建议先查阅液相色谱仪器的使用说明书，了解其工作原理和结构，以便更好地诊断和解决故障。
同时，定期对液相色谱仪器进行维护和保养，可以有效地减少故障的发生，延长仪器的使用寿命。
液相色谱仪器（HPLC）是一种高效、精确的分析仪器，在化学、生物、药学等领域都有着广泛的应用。
然而，由于长期使用、操作不当或者设备老化等原因，液相色谱仪器也会出现各种故障。
在这种情况下，对仪器进行准确的故障诊断，并采取适当的维修措施，是保障仪器正常运行的关键之一。
4. 色谱柱问题液相色谱仪器中的色谱柱是重要的部件，若出现问题则会导致分离效果下降。
柱子可能会发生堵塞、损坏或老化，而影响分离效果。
如果怀疑柱子的问题导致了色谱仪器的故障，第一步就是检查柱子的状态。
可以通过更换柱子或者清洗柱子来解决这一问题。
此外，也要检查柱前的过滤器是否正常运行，如果过滤器故障，也会影响色谱仪器的运行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（10）更换光源
（11）紧固件或连接件泄漏
（11）拧紧或更换紧固件
（12）进样装置部分堵塞
（12）检修进样器并清洗
（13）由泵的冲程引起的规则脉冲
（13）连接脉冲阻尼装置：使用无脉冲泵
（14）隔膜泄漏
（14）更换隔膜：最好使用进样阀
基线漂移
（1）溶剂贮槽污染
（1）清洗贮槽装入新流动相冲洗柱子
（3）处理样品
（4）柱未平衡（尤其是离子对色谱）
（4）重新平衡柱：用流动相作样品溶剂
（5）进样阀残余峰
（5）每次使用后用强溶剂清洗阀
（6）与流动相组成不同的样品溶剂洗脱
（6）用流动相溶解样品：大大减少进样
量
（7）用不同批号的溶剂溶解样品
（7）应尽量采用同一溶剂和相同处理条
件的溶剂溶样，若非用不同溶剂时，
（6）进样技术不佳
（6）提高进样技术
基线不能回零
（1）样品粘度大
（1）适当减小样品浓度，并采用低粘度
流动相溶剂
（2）进样量太大，柱超载
（2）减小进样量
（3）溶解样品的溶剂与流动相溶剂互溶
（3）尽量采用能互溶的溶剂来溶解试样
（4）柱效低，柱内空隙
（4）改用高效柱或重新装柱
（5）进样装置部分堵塞
（5）检修进样器并清洗之
（2）柱端床层塌陷
（2）修补柱端
（3）柱子寿命已到
（3）更换新柱
（4）进样量过大
（4）减少进样量
（5）样品浓度过大
（5）减少配样浓度
（6）试样溶解不完全
（6）换溶剂使其完全溶解
（7）试样粘度大
（7）减少进样量，降低进样浓度
（8）色谱柱污染柱效下降
（8）更换柱子或以级性溶剂冲洗
保留时间不重复
（1）更换流动相对旧流动相未完全被顶
或衬聚四氟乙烯薄膜
3.塔板数下降
（1）超龄服役
（1）柱再生成换柱
（2）柱被污染
（2）清洗
二、根据色谱图的变化判断仪器故障
表2根据色谱图的变化判断仪器故障或方法失误
故障现象
可能的原因
排除方法
进样后不出峰
（1）检测器选择不当，样品无吸收
（1）正确选择检测器，如样品无紫外吸
收就不应选UV检测器，而应选其它
忽大忽小
器进样重复性误差小于5%
（3）管路有泄漏处
（3）检查并修复
（4）仪器没有充分稳定
（4）对仪器再次预热稳定冲洗平衡
（5）实验条件发生变化
（5）使实验条件（检测器灵敏度、流速
、温度等）尽可能一致
（6）注射器有泄漏或堵塞现象
（6）修复或更换注射器
（7）进样速度不一致
（7）掌握一样的进样速度
（8）进样阀开关不灵，阀门没有充
色谱峰未分开
（1）色谱柱分离度低，柱效不高
（1）选择高效柱或重装柱
（2）色谱柱或色谱条件（溶剂、检测器、
（2）再行试验选择最佳色谱柱分离条件
温度、流速、柱子等）选择不当
（3）柱子过载
（3）减少进样量或采用“再循坏分离”
技术
（4）流动相流速过大
（4）适当降低流速
（5）柱中填料流失过多，增加了柱外效应
（5）更换色谱主
（6）检查后正确连接
（7）用UV检测器时，溶解样品所用的溶
（7）应尽量采用能与流动相溶剂互溶的
剂与流动相溶剂不能互溶或两溶剂
溶剂来溶解样品，最好用流动相作
pH值不同。当溶剂流过检测池时，
为样品溶剂
光在两种互不溶溶剂的界面上产生
折射，从而使光电池接受到不同强
度的光，光强度减弱，以至于低于，
参比也可出负峰。
固件是否有空气漏入系统
（2）实验室内其他电器（如：烘箱，
（2）消除噪音来源：确保装置接地良好：
其他色谱仪等）的影响
用绝缘变压器使仪器绝缘
峰重现性差
（1）注射器针头太长，样品液部分漏
（1）选用合适的针头对U6K进样装置以
掉
（3.8-5.0）cm为宜
（2）进样技术欠佳，表现为峰面积
（2）认真掌握注射器进样技术，使注射
（2）样品不稳定有部分分解
（2）采取措施，防止试样组分的部分分
解
（3）进样量大，柱超载
（3）减小进样量
（4）柱子中有孔隙
（4）更换柱子
有空峰（假峰）
（1）不同批号不同处理条件的溶剂分别
（1）最好使用同一批，又是在同一条件
用来溶样或作为流动相时，易出空
下处理过的溶剂，用它分别作为流
峰
动相或溶样，则有可能避免出假峰
（2）流动相溶剂中有杂质或气泡，用该
（2）对流动相溶剂，应坚持先以0.45um
流动相配样会出空峰
过滤膜过滤和脱气后再使用
（3）样品中未知物
（8）检查维修进样阀开关
分打开
（9）样品溶解毒小，近样后有少量
（9）选用的溶解试样的溶剂应对试样有
在流动相中析出
好的溶解能力且流动相互溶的溶剂
（10）流动相流速发生了改变
（10）用内标物定期检查流动相流速
峰分裂（一个组分有两个峰）
（1）样品中可能有异构体
（1）按异构体特征选择分离条件，使两
峰达完全分离
应注意空峰对实验带来的影响
基线有噪音
（1）记录仪与检测器信号输出接触不良
（1）检查并接好信号线
（2）电压不稳
（2）采取稳压措施
（3）接地线不好
（3）应改用良好的接地线
（4）泵中有气泡，泵压不稳
（4）用前述的方法赶除聚集于泵头内的
气泡
（5）溶剂纯度不高，背景吸收强，透光
（5）提纯溶剂或选纯度比较高（至少应
（2）前次分离样品中的强吸附组分从
（2）在分离之前用强流动相从柱子中洗
柱上洗脱
脱所有的组分：使溶剂梯度清洗柱子
（3）由微粒造成柱入口、进样阀、柱入
（3）清洗进样系统和柱入口过滤片
口的部分堵塞
（4）溶剂分层
（4）采用合适溶剂
（5）泵输出的缓慢改变
（5）检测流量：如果泵的输出随温度变
化，应控制温度
（6）检测器污染
（5）环境温度变化大（指使用RI检测器）
（5）应采取恒温措施
（6）管路漏
（6）检查管路，并消除泄漏处
（7）色谱柱没有完全平衡
（7）延长冲洗时间，使柱子达到平衡
（8）溶剂直接吸收了空气中的水分，
（8）阻止溶剂与潮湿空气接触或用干燥
使RI检测器不稳定
剂干燥溶剂
基线上出现大的尖峰
（1）检测池内有气泡通过
（1）溶剂脱气并彻底冲洗系统：检查紧
，烘干
（3）色谱柱选择不当，试样与固定相
（3）更换色谱柱
间有作用
（4）进样技术差
（4）提高进样技术
（5）样品在流动中相中溶解度小
（5）选用对试样溶解能力强的溶剂作
为流动相
（6）进样量太大
（6）减少进样量
（7）色谱柱与阀的连接管连接处出现死区
（7）重新装柱或更换
分离度变差
（1）柱端固定相反结
（1）挖掉修补、重填固定相
不解决问题应更换柱子
（4）示差折光检测器池裂开
（4）检查更换
基线不规则地转移
（1）色谱柱污染变脏
（1）冲洗柱子、重新装柱或更换新柱子
（2）溶剂纯度差
（2）更换纯溶剂
（3）泵密封不好
（3）检查维修泵密封或更换密封圈
（4）用RI检测时，两溶剂互溶性不好
（4）使两溶剂能很好地互溶混合，必要
时可采取搅拌方式
（1）色谱柱超载
（1）减少进样量
（2）记录仪灵敏度过高
（2）适当降低记录仪的灵敏度
（3）记录仪机械部分有故障
（3）参照有关说明进行修理
（4）记录仪接收的信号超过了测量范围
（4）改变记录仪量程
（5）检测池及其透镜、池窗等光学附件
（5）清洗检测池以及透镜、池窗等记录仪或检测器极性接反
（5）设法打通，或者换新的
出现无名峰
（1）转子针头密封垫及进样针导管污染
（1）清洗阀的样品通路
（2）阀样品通路清洗不干净
（2）方法同（1）
峰形拖尾
（1）定体积量管与阀连接处出现死区
（1）更换新管消除死区
（2）进样器内有污染或不干净
（2）可选用2：1：4的硫酸-硝酸-水的
混合溶液清洗，接着用蒸馏水清
洗，然后用丙酮或乙醚等溶剂清洗
（1）延长平衡时间
替绰
（2）正相柱中流动相脱水不完全
（2）重新脱水
（3）柱温变化
（3）柱恒温
（4）缓冲液容量不够
（4）用较浓的缓冲液
（5）柱内条件变化
（5）稳定进样条件，调节流动相
（6）柱塌陷或形成短路通道
（6）更换色谱柱
出现无规则色谱峰
长期进样滞留在柱中的组分被洗脱
用强极性溶剂冲洗再用流动相平衡
平顶峰
（6）清洗检测器
（7）柱污染或“流失”
（7）再生或更换（如再生不成功）柱子：
使用预柱
（8）检测器温度变化
（8）使系统恒温
（9）光源故障
（9）更换光源灯
基线噪声大，且漂移
（1）环境温度变化大
（1）采取恒温措施
（2）色谱系统未达平衡
（2）延长色谱系统流动相平衡时间
（3）柱子污染
（3）用大流量极性溶剂冲洗柱子，如还
的检测器
（2）试样溶液浓度太低，而检测灵敏
（2）应适当提高样品浓度和进样量，并
度不高
提高检测灵敏度
（3）检测器到记录仪之间的输入信号
（3）修理接好信号并将灵敏度调到适宜