沙门氏菌的检测
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性杆菌，可引起许多动物和人类的肠道感染。
为了检验沙门氏菌的存在，可以采用以下一些常见的方法：1.培养方法：沙门氏菌是一种需氧的微生物，在富含营养成分的寒凝琼脂或低酸性洗涤剂和生物素的培养基上培养。
常用的培养基如VRB （XLD）琼脂、SS琼脂、MS琼脂等。
培养基可以选择均匀地涂布在平板上，也可以用于液体培养。
2.表型特征：沙门氏菌的菌落通常呈现红色或无色，个别品系可能为粉红色。
如在VRB琼脂上，沙门氏菌会变为红色或橙色。
沙门氏菌也可以产生硫化氢，导致MS琼脂呈现黑色。
3.生化特性：沙门氏菌通常可以进行一些常规的生化测试，如产生气泡的气液反应，碳源利用测试和酸碱指示剂变色等。
这些测试可以帮助进一步确认沙门氏菌的存在。
4.血清学方法：采用沉淀试验或血清凝集试验检测血清中的抗生素，以确定是否感染了沙门氏菌。
这些试验通常利用鸡血清，鸡蛋白和羊血清制备的具有特异性的血清反应。
5. 分子生物学方法：沙门氏菌的检验还可以利用PCR技术进行，通过检测沙门氏菌特异性基因如invA基因的存在来确定沙门氏菌的存在。
6.抗生素敏感性试验：通过对沙门氏菌菌株进行抗生素敏感性测试，可以了解菌株对不同抗生素的抗性情况，为临床使用合适的抗生素提供参考。
除了以上提到的方法，还有其他一些检验方法如酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光PCR等也常被用于沙门氏菌的检验。
这些方法不仅可以准确快速地检测沙门氏菌的存在，还可以区分不同菌株和进行进一步的流行病学分析。
总之，通过上述的方法，可以对沙门氏菌进行有效的检验，从而帮助人们及时判断感染情况并及时采取措施进行治疗和预防。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
第五章沙门氏菌的检验ppt课件
血平板：中等大小、灰白色菌落。
生物学特性
生化反应：
不发酵乳糖和蔗糖，不产生吲 哚，不分解尿素，VP试验阴 性，大多产生硫化氢。发酵葡 萄糖、麦芽糖和甘露醇，除伤 寒杆菌产酸不产气外，其他沙 门氏菌均产酸产气。
ONPG －
沙门氏菌血清学试验 沙门氏菌血清学试验 沙门氏菌血清学试验
非沙门氏菌
报告
沙门氏菌在BS平板上
沙门氏菌在HE平板上
沙门氏菌的TSI试验
三糖铁（TSI）琼脂试验
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢 （变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸 ，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物， 故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
商品化生化鉴定系统
API 20E API 20E 生化鉴定 是根据快速酶促反应 及代谢产物的检测技 术发展的一种细菌编 码鉴定法，广泛应用 于临床、食品中革兰 氏阴性杆菌的快速鉴定。
API 20E
第1位数
O AL N DD P HC G
第2位数 第3位数 第4位数 第5位数
O CI H U T
1、未接种 2、尿素酶阳性 3、尿素酶阴性
KCN生长试验
右：抑制生长
沙门氏菌在TSI和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的结果
斜面 底层 产气 硫化氢 赖氨酸脱羧酶 初步判断
K A ＋(－ ) ＋(－ )
＋
K A ＋(－ ) ＋(－ )
沙门氏菌免疫学检测方法
沙门氏菌免疫学检测方法
沙门氏菌的免疫学检测方法为酶联免疫法，利用抗原-抗体之间的特异性结合反应为基础，用免疫力放大技术来鉴定病原菌。
灵敏度和特异性比较高，在增菌以后可以在短时间内检测出来。
酶联免疫法全称为酶联免疫法吸附测定法，英文缩写为ELISA，是一种酶标记测定方法，可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，是一种敏感性高、特异性强、重复性好的定量的实验诊断方法。
酶联免疫法原理是已经被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗体与
过量待检测的抗体或抗原反应，一部分结合形成固相抗原抗体复合物，另一部为多余的游离抗体或抗原，通过洗板，保留固相抗原抗体复合物，洗去多余游离抗体或抗原，再加入酶标记的抗体，形成固相抗原抗体酶标记抗体复合物，洗去多余酶标抗体，加入底物，此时酶催化底物显色，颜色的深浅与待测的抗体或抗原含量成正比或反比。
酶联免疫法现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病，寄生虫病及非传染病等各方面的免疫诊断，也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，如检测结核抗体、EB病毒抗体、HIV抗体、乙肝病毒抗原、破伤风抗毒素、流感病毒的抗原、梅毒抗体等。
酶联免疫法虽然应用广泛，但也存在一定的局限性，手工操作步骤繁琐，而且影响因素多，易出现假阳性结果等，因此有很多项目被兴起的化学发光法所取代。
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌，其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。
下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 培养分离沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。
常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。
将待检样品接种于选择性培养基上，并采用适当的温度和培养时间进行培养。
沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落，可以通过形态特征进行初步判断。
2. 生化检测生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。
常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。
气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。
亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。
尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。
3. 血清学检测血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。
常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。
在这些方法中，沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合，形成可见的凝集物或荧光产物，从而判断是否感染沙门氏菌。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）、核酸杂交和基因测序等。
PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏菌基因的特定片段，从而进行检测。
核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合，形成杂交信号来进行检测。
基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列，确定其身份。
总结：沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。
这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在，可以提供准确鉴定和检测结果。
在实际应用中，结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。
沙门氏菌的检测方法及其原理
沙门氏菌的检测方法及其原理
沙门氏菌的检测方法主要有传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
以下将分别介绍每种方法的原理。
1. 传统培养法：这是一种常用的检测沙门氏菌的方法。
原理是将样本（如食物、病人体液等）接种在含有适宜营养物质的培养基上，利用沙门氏菌的生长特性进行培养。
经过一定时间的孵育，形成典型的沙门氏菌菌落后，可以通过形态特征和生理生化试验进行鉴定。
2. 分子生物学方法：分子生物学方法主要是利用沙门氏菌特异性的基因或DNA序列来检测其存在。
最常用的方法是聚合酶链反应（PCR），其中利用特异性引物扩增含有沙门氏菌特定序列的DNA片段。
扩增后的产品可以通过凝胶电泳进行检测与鉴定。
此外，还有核酸杂交、测序和引物探针技术等方法也可以用于沙门氏菌的检测。
3. 免疫学方法：免疫学方法利用沙门氏菌的抗原与抗体之间特异性反应进行检测。
其中最常用的方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
ELISA基于固相试剂酶标板，将沙门氏菌的抗原固定在试剂酶标板上，然后加入特异性抗沙门氏菌的抗体。
经过洗涤步骤，再加入辅助抗体结合酶标记物。
最后加入底物，沙门氏菌存在时可通过颜色变化来判断阳性反应。
这些方法在实验室或食品安全监测中广泛应用，能够高效、准确地检测沙门氏菌的存在。
hbi沙门氏菌生化鉴定条
hbi沙门氏菌生化鉴定条一、鉴定条包含的生化反应项目。
1. 三糖铁（TSI）试验。
- 原理：三糖铁琼脂中含有乳糖、蔗糖和葡萄糖，以及硫酸亚铁铵等成分。
沙门氏菌通常发酵葡萄糖，产酸使底层变黄，由于不发酵乳糖和蔗糖（或发酵缓慢），斜面保持红色或变为粉红色。
同时，沙门氏菌可产生硫化氢，与硫酸亚铁铵反应生成黑色沉淀。
- 结果判定：典型的沙门氏菌在三糖铁琼脂上表现为底层变黄，斜面变红，有黑色沉淀。
但也有一些非典型菌株可能出现不同结果，需要结合其他试验综合判断。
2. 赖氨酸脱羧酶试验。
- 原理：某些细菌具有赖氨酸脱羧酶，可将赖氨酸脱羧产生尸胺。
该反应会使培养基的pH值升高。
- 结果判定：如果试验管颜色变为紫色（碱性反应），表明赖氨酸脱羧酶阳性，沙门氏菌赖氨酸脱羧酶通常为阳性。
如果颜色不变（黄色或保持原色）则为阴性。
3. 鸟氨酸脱羧酶试验。
- 原理：与赖氨酸脱羧酶试验类似，鸟氨酸脱羧酶作用于鸟氨酸产生腐胺，引起pH值变化。
- 结果判定：阳性结果为试验管变为紫色，沙门氏菌鸟氨酸脱羧酶多为阳性，但不同血清型可能存在差异。
4. 靛基质试验。
- 原理：某些细菌可分解色氨酸产生靛基质，靛基质与试剂（如对二甲基氨基苯甲醛）反应生成红色化合物。
- 结果判定：加入试剂后，若培养基变为红色则为阳性，沙门氏菌靛基质试验通常为阴性。
5. 尿素酶试验。
- 原理：尿素酶可分解尿素产生氨，使培养基的pH值升高。
- 结果判定：如果培养基变为粉红色或红色为阳性，沙门氏菌尿素酶试验为阴性。
6. 甘露醇发酵试验。
- 原理：甘露醇是一种糖类，可被某些细菌发酵产酸，使培养基pH值下降。
- 结果判定：如果培养基颜色变黄（酸性反应），表明甘露醇发酵阳性，沙门氏菌通常甘露醇发酵阳性。
7. 山梨醇发酵试验。
- 原理：山梨醇可被细菌发酵，产生酸性代谢产物改变培养基pH值。
- 结果判定：培养基变黄为阳性，沙门氏菌山梨醇发酵情况因血清型而异，部分沙门氏菌山梨醇发酵阳性，部分阴性。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等，能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查：感染沙门氏菌时，多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况，大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象，该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查：感染沙门氏菌以后，部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况，通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查：检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况，有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外，沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等，如果自身的病情比较严重，建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗，以免延误病情。
食品中沙门氏菌检验
食品中沙门氏菌检验
食品微生物检验技术
1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时分离出猪霍乱沙门菌，故定名为沙门菌属。 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。虽然沙门菌血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50 个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。分类： •伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 • 非伤寒沙门菌-食品安全标准的检测的主要对象。
一、沙门氏菌概况
培养与生化特性
前增菌
选择性增菌
生物化学筛选
非如上述的各种反应
检样
BS
XLD(或HE ，显色培养基)
挑取可疑菌落
选择性平板筛选
非沙门氏菌
H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+
H2S+靛基质+尿素-KCN-赖氨酸+
H2S-靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+/-
甘露醇+ 、山梨醇+
ONPG -
蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色
菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑心中心
按照显色培养基的说明进行判定
葡萄糖+H2S
乳糖+ H2S
乳糖+ H2S
葡萄糖+H2S
SC
TTB
结果报告：综合以上生化试验结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。前增菌：缓冲蛋白胨水（BPW） 肉汤是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。增菌：① 四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）含有胆盐，抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。②亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）可对伤寒及其他沙门菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
欧盟沙门氏菌检验标准
沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的食源性病原菌，可以导致食物中毒。
为了确保食品安全，许多国家和地区都有相关的食品和饲料中沙门氏菌的检验标准。
欧盟是全球食品安全监管最为严格的地区之一，其对于沙门氏菌的检验标准非常严格。
以下是欧盟对于食品和饲料中沙门氏菌的一般检验标准：
1. 检测方法:欧盟推荐使用ISO 6579:2002、ISO 6579:2007或ISO 6579:2017等国际标准进行沙门氏菌的检测。
2. 样品数量:每个食品或饲料样品的检测数量至少为25克。
3. 检测频率:对于某些高风险食品，如生肉、家禽、蛋类和蛋制品，欧盟推荐在生产、加工、储存和销售过程中进行定期检测。
4. 阳性判定:如果在一个样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被视为阳性。
5. 报告:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么必须立即报告给相关的监管机构。
6. 处理:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被销毁，并且相关的生产或加工设备必须进行清洁和消毒。
需要注意的是，具体的欧盟沙门氏菌检验标准可能会根据食品的种类、来源、加工方法等因素有所不同。
沙门氏菌的检验方法与注意事项
沙门氏菌的检验方法与注意事项在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！一、沙门氏菌检测的原因和意义根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。
人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。
而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验（一）前增菌(无选择性)BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。
促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。
（二）选择性增菌TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。
SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。
（三）分离培养基(选择性)①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对光可看到金属光泽。
BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。
伤寒沙门氏菌鉴定流程
伤寒沙门氏菌鉴定流程1. 标本采集。
- 可采集血液、粪便、尿液、骨髓等标本。
血液在病程第1 - 2周采集，粪便在病程第2周后采集，尿液在病程第3 - 4周采集，骨髓穿刺液可在病程各期采集。
2. 初步检查。
- 涂片染色。
- 取粪便或离心后的尿沉渣、骨髓穿刺液等标本直接涂片，革兰染色后镜检。
伤寒沙门氏菌为革兰阴性杆菌，无芽孢，有周身鞭毛能运动。
- 分离培养。
- 将标本接种于增菌培养基（如胆汁肉汤），血液标本需先接种于血培养瓶中增菌。
- 增菌后转种至选择性培养基，如SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板等。
在SS琼脂平板上，伤寒沙门氏菌形成无色透明、中等大小、边缘整齐的菌落，因不发酵乳糖而与乳糖发酵菌相区别。
3. 生化鉴定。
- 挑取可疑菌落进行生化试验。
- 糖发酵试验：伤寒沙门氏菌发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖、蔗糖等。
- 吲哚试验：阴性，不产生吲哚。
- 甲基红试验：阳性。
- V - P试验：阴性。
- 枸橼酸盐利用试验：阳性。
- 硫化氢试验：阳性，可产生黑色硫化亚铁沉淀。
4. 血清学鉴定。
- 玻片凝集试验。
- 用已知的伤寒沙门氏菌O、H、Vi抗原的诊断血清与待检菌进行玻片凝集试验。
如果与O抗原血清凝集，再用H抗原血清进行凝集试验，确定血清型别。
Vi抗原的检测有助于发现带菌者。
5. 分子生物学鉴定。
- 对于一些难以鉴定的菌株，可采用聚合酶链反应（PCR）等分子生物学方法。
- 设计针对伤寒沙门氏菌特异性基因（如鞭毛蛋白基因等）的引物，进行PCR扩增。
若扩增出特异性条带，则可判定为伤寒沙门氏菌。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于食品、环境中,尤其是在沙门氏菌感染的食品中。
沙门氏菌检验是食品安全检测中的重要一环,其准确性和可靠性对保障公众健康至关重要。
下面将介绍沙门氏菌检验国标的检验步骤及接种方式。
一、检验步骤
1.原料准备:准备待检样品,包括食品、环境样品等。
2.样品采集:采集样品时应使用一次性餐具或清洁用具,确保样品的完整性和真实性。
3.样品处理:对采集的样品进行初步处理,包括去除杂质、研磨成粉末等。
4.检验样品:将处理后的样品放入含有适当浓度的试剂管中,进行沙门氏菌检验。
5.结果判断:根据检验结果判断样品是否存在沙门氏菌感染。
二、接种方式
1.沙门氏菌疫苗接种:在食品安全检测中,一般使用沙门氏菌疫苗进行接种。
疫苗接种后,人体免疫系统会产生针对沙门氏菌的抗体和免疫记忆,从而有效地预防沙门氏菌感染。
2.样品接种:对于食品样品,可以使用沙门氏菌疫苗进行接种。
在样品处理过程中,可以通过加入疫苗,使样品受到沙门氏菌的感染,进而进行检测以判断样品是否存在感染。
三、注意事项
1.接种疫苗前,应进行体检,确保没有患有其他疾病或感染。
2.接种疫苗后,应严格按照操作规程进行样品处理和检测,以确保检验结果的准确性和可靠性。
3.疫苗接种后可能会出现短暂的发热、乏力等症状,正常现象,不应影响检测结果。
沙门氏菌检验国标的检验步骤及接种方式非常重要,可以确保食品安全检测的准确性和可靠性。
在食品安全检测中,应严格遵守操作规程,确保疫苗接种的安全和有效性,以保证公众健康安全。
沙门氏菌血清学鉴定方法
沙门氏菌血清学鉴定方法
1. 血清凝集试验，这是一种常见的血清学鉴定方法，通过将患者的血清与沙门氏菌的抗原混合，观察是否发生凝集反应来确定是否感染了沙门氏菌。
凝集反应的出现表明患者体内存在与沙门氏菌抗原相对应的抗体，从而可以进行诊断。
2. 血清中的抗体浓度测定，通过测定患者血清中特定抗体的浓度来判断是否感染了沙门氏菌。
通常，感染后，患者体内会产生特定的抗体以应对沙门氏菌的感染，因此可以通过测定血清中特定抗体的浓度来进行诊断。
3. 补体结合试验，这是一种常用的血清学鉴定方法，通过观察患者血清中的抗体是否能与沙门氏菌的抗原结合，从而激活补体系统，引起溶解反应，来确定是否感染了沙门氏菌。
总的来说，沙门氏菌的血清学鉴定方法是通过检测患者血清中的特定抗体来确定是否感染了该细菌。
这些方法需要在专业实验室条件下进行，并且需要严格的操作和解读，以确保诊断的准确性。
同时，血清学鉴定方法通常需要与其他临床症状和实验室检测结果相结合，才能最终确定患者是否感染了沙门氏菌。
沙门氏菌检测操作步骤
沙门氏菌检测操作步骤沙门氏菌是一种常见的细菌，其存在于许多环境中，包括食物、水源和动物体内。
由于沙门氏菌可能引起严重的食物中毒症状，因此对其进行检测和控制非常重要。
在本文中，我将介绍沙门氏菌检测的操作步骤，以帮助您了解如何进行有效的沙门氏菌检测。
1. 选择适当的检测方法在进行沙门氏菌检测之前，首先需要选择适当的检测方法。
常见的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
传统培养法需要将样品在富含营养物的培养基上培养并观察有无沙门氏菌生长。
分子生物学方法利用PCR技术检测沙门氏菌的DNA，而免疫学方法则使用抗体来检测沙门氏菌的存在。
根据您的需求和实验条件，选择合适的检测方法非常重要。
2. 样品采集在进行沙门氏菌检测之前，需要采集样品。
这些样品可以是食物、水源、表面物体或动物组织。
确保在采集样品之前，正确消毒采样工具以避免任何污染。
确保将样品收集到干净、密封的容器中，以避免污染和交叉感染。
3. 样品准备收集样品后，需要进行适当的样品准备以便于后续的沙门氏菌检测。
对于食物样品，可以使用均匀悬浮液方法将样品与适当的缓冲液混合均匀。
对于水样或表面物体样品，可以使用封闭的容器直接收集样品。
对于动物组织样品，需要先将样品进行处理，如挤压、切割或研磨，以获得足够的样品量进行检测。
4. 样品分析根据选择的检测方法，进行相应的样品分析。
如果使用传统培养法，可以将样品转移到含有适当培养基的培养皿中，并进行孵育。
培养过程中，需要注意培养皿的环境条件，如温度、pH值和氧气含量。
如果使用分子生物学方法，可以提取样品中的DNA，并使用PCR技术进行检测。
如果使用免疫学方法，可以使用特定的抗体与样品中的沙门氏菌结合，然后观察是否发生免疫反应。
5. 结果解读根据样品分析的结果，进行结果解读。
对于传统培养法，可以观察培养皿中是否有沙门氏菌的典型形态或颜色变化。
对于分子生物学方法，可以通过PCR扩增的产物的大小和带状图样来判断是否存在沙门氏菌的DNA。
2024版沙门氏菌检验实验解析PPT
增加“无菌量筒：容量50mL、无菌均质杯、无菌均质袋、无菌广口瓶：容量500mL、无菌试管15mm×150mm、18mm×180mm、无菌接种环：10μL（直径约3mm）、1μL以及接种针”
对检验用器具规格明确，方便实验室选用
增加“生物安全柜”
对于实验室开展活菌操作、样本检测实验室生物安全等级需“BSL-2”，因此，增加此设备是生物安全必须。
明确接种菌液浓度为“0.5麦氏浊度”，接种量“2滴~3滴”，避免接种量过大导致假阳性；还有增加"接种混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封"由于氰化钾不稳定容易分解失效，因此，加石蜡密封避免造成假阳性反应。
“符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应”后面补充“进行血清学鉴定后报告结果”
明确的指出符合沙门氏菌典型的生化反应需要进行血清学鉴定后报告结果
调整可疑菌落初筛流程
流程图更清晰易懂
TTB选择性增菌改为：低背景菌36 ℃±1 ℃，高背景菌42 ℃±1 ℃原因：验证试验发现，对于生鲜样品，TTB 42℃比 TTB 36℃的选择性好，所以继续沿用；对于深加工样品，TTB 36℃比 TTB 42℃生长好，所以低背景菌采用36℃±1℃培养。如有需要，可将预增菌的培养物在2 ℃~8 ℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。
2016版“必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴定”修改为2024版中“必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴定”
“生化群”用“种和亚种”替代，更易懂;
在表5沙门氏菌种和亚种的生化鉴定中增加“肠炎沙门氏菌、邦戈尔沙门菌种名”以及肠炎沙门氏菌种内对应的6个亚种和生化群分型”;生化反应项增加“明胶酶、L(+)-酒石酸盐、半乳糖醛等8项”
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• 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。
SC增菌液各成分的作用
蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求， 乳糖是可发酵的糖类； 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性菌的生长， 磷酸盐是缓冲剂， L-胱氨酸为还原剂。
• 2 赖氨酸脱羧酶试验： 接种三糖铁琼脂的接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，
• 于36±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h。
三糖铁（TSI）琼脂试验 • 培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红 • 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 • 原理：只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而
溶液1mL～2mL。
•
制法
• 将前面七种成分溶解于400mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL 蒸馏水内。然后分别搅拌 均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内，调节pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至 50 ℃～55 ℃倾注平皿。
• 注:①本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。
BS ＋
XLD HE 科玛嘉显色培养基平板
（4）生化试验
• 选择性琼脂平板上符合沙门氏菌特征的菌落，只能称其疑为沙门氏菌，也可能是其他杂菌。 • 五项生化试验：
– 三糖铁(TSI)试验 – 赖氨酸脱羧酶试验 – 靛基质试验 – 尿素琼脂培养 – 氰化钾培养基
• 1.三糖铁(TSI)试验 自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再底层穿刺， 用一空白培养基作对照试验。
沙门氏菌的检测
1
二、实验器材
• 1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌 • 2.检样：鲜鸡蛋 • 3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）
增菌液；亚硫酸铋（BS）琼脂；HE 琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI） • 4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、无菌锥形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、
氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸 类不被氧化，所以仍保持黄色。
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三糖铁(TSI)试验 • 测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的分解和产硫化氢情况:不分解乳糖、蔗糖，分解葡萄糖
√
√
不产酸，碱性粉红色（-） ；产酸黄色（+） ；产生H2S黑色（+）；不产生H2S （-） 。
无菌试管、无菌毛细管
1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液
• 基础液 900 mL • 硫代硫酸钠溶液 100 mL • 碘溶液 20.0 mL • 煌绿水溶液 2.0 mL • 牛胆盐溶液 50.0 mL • 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另 • 一种成分。
思考题
1.志贺菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多数不发酵乳糖，不产生硫化氢，应该是几号？ 2.大肠杆菌，能分解葡萄糖，产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生硫化氢，应该是几号管？ 3.沙门氏菌能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生硫化氢，多说产气，应该是几号管？
赖氨酸脱羧酶试验
(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。胺使培养基变为碱性，可用指示 剂指示出来。
• ②甲液的配制 • 硫代硫酸钠34.0g 柠檬酸铁铵4.0g 蒸馏水100mL • ③乙液的配制 • 去氧胆酸钠 10.0g蒸馏水 100mL • ④ Andrade 指示剂 酸性复红0.5g 1mol/L氢氧化钠溶液 16.0mL 蒸馏水100 mL，将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠
• • 牛肉粉 • 月示胨 • 乳糖 • 三号胆盐 • 枸橼酸钠 • 硫代硫酸钠 • 枸橼酸铁 • 中性红 • 煌绿 • 琼脂 • pH值7.0 ±0.1
•Байду номын сангаас
6.SS琼脂配方
5.0 5.00 10.0 8.5 8.5 8.5 1.0 0.025 0.00033 17.0
SS琼脂的原理
• 月示胨、牛肉粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质； • 乳糖、葡萄糖为可发酵的糖类； • 三号胆盐、枸橼酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长； • 硫代硫酸钠和枸橼酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色； • 中性红为pH指示剂，可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落 • 发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色； • 琼脂是培养基的凝固剂。
制法
• 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水（制作基础液）， • 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL
蒸馏水中， • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，
倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中， 混合均匀，冷至50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。
BS培养基的原理
• 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源； • 2.葡萄糖提供能源 • 3.亚硫酸铋抑制剂，抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群，但不影响沙门氏菌的生长； • 4.磷酸氢二钠 缓冲剂 • 5.硫酸亚铁用于产生硫化氢，并与铁反应生成黑色沉淀，使阳性培养物在平板上具有金属光泽的棕
1.基本步骤（程序）：
• 1.前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的沙门菌恢复活力; • 2.选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，大多数其它细菌受到抑制; • 3.选择性平板分离培养：分离出所需的细菌; • 4.生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检项目的细菌; • 5.血清学鉴定：进一步鉴定。
基础液
• 蛋白胨 10.0 g
蒸馏水 1 000 mL
• pH 7.0±0.2
牛肉膏 5.0 g
• 氯化钠 3.0 g
• 碳酸钙 45.0 g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选产酸菌的作用）
• 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20
4.亚硫酸铋（BS）琼脂
• 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g • 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g • 煌 绿 0.025g 或5.0g／L 水溶液5.0mL • 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g • 琼 脂 18.0g～20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2
• 观察各平板上生长的菌落，各平板上的菌落的特征见附表。
SS琼脂平板 •
•
BS琼脂
DHL上的菌落
BS上的菌落
SS上的菌落
• 一种培养基不可能适合所有沙门氏菌的分离，BS选择性强，更适合分离伤寒沙门氏菌。 • 分离沙门氏菌要同时用两种以上的培养基，互补，可提高检出率，以防漏检。其中必须有BS。
• 未加工样品：。。。。。
增菌时，必须同时使用SC和TTB，提高检出率，以防漏检。 （2） 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物， – 移取1mL，转种于10mL四硫磺酸钠煌绿（ TTB ）增菌液内，42 ℃ ±1℃ 培养18～24h。 – 同时，另取1mL，转种于10mL亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液内，36±1℃培养18～24h。
MM增菌液各成分的作用
• 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求； • 氯化钠可维持均衡的渗透压； • 磷酸二氢钾是缓冲剂； • 氯化镁可以增加培养基的渗透压； • 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长， • 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性。
3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液
• 成分 • 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g • 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL • pH 7.0±0.2 • 制法 • 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入
（1） 前增菌
加工过的样品： – 称取25g（mL）样品放入盛有225mL缓冲蛋白胨水（BPW）的无菌均质杯，以8000 ～10000r/min均 质1~2 min ，或置于盛有225mL BPW的无菌均质袋，拍击式均质拍打1~2 min 。液体样品不需均质， 振摇混匀。 – 无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中（如使用均质袋，可直接培养）， 36±1℃培养8～18h 。 – 冷冻产品，应在45 ℃以下不超过15min，或2 ℃~5 ℃不超过18h解冻。
min
硫代硫酸钠溶液
• 硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g • 蒸馏水 加至100 mL • 高压灭菌121 ℃，20 min。（硫代硫酸钠作为中和剂，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含
有次氯酸钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培养基中硫代硫酸钠和磺所生成的 四硫磺酸，能抑制大部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌 具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。）
(2)方法：将待检菌分别接种于1支赖氨酸脱羧酶试验管和1支对照管，各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油， 35℃孵育1~4d，观察结果。
(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨 基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。对照管应为 黄色。