蛋白质及核酸的含量测定方法PPT
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紫外吸收法测定蛋白质含量 ppt课件
PPT课件
8
PPT课件
9
分光光度计的使用
PPT课件
10
分光光度计的分类
红外分光光度计: 测定波长范围为大于760
分
nm的红外光区
光
光
度 计
可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760
的
nm的可见光区
分
类
测定波长范围为200～400 紫外分光光度计:
nm的紫外光区
PPT课件
11
分光光度计的基本结构
（3）比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此，特别要 将比色皿清洗干净。先用自来水将用过的比色皿反复冲洗，然 后用蒸馏水淋洗，倒立于滤纸片上，待干后再收回比色皿盒中。 必要时，还要对比色皿进行更精细的处理，如用浓硝酸或铬酸 洗液浸泡、冲洗。
（4）比色皿与分光光度计应配套使用，否则会引起较大的实验
误差。
PPT定吸收能力，可能发生
干扰。混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两
处的OD值，然后根据两种波长的吸收度的比值，
通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋
白质的真实含量，再按公式推算蛋白质含量。
PPT课件
5
三、 实验材料、主要仪器和试剂
• 1．试验材料：待测的蛋白质溶液。 • 2． 主要仪器： （1）紫外分光光度计 （2）试管与试管架 （3）移液管 • 3．试剂：浓度为1mg/mL标准酪蛋白
PPT课件
15
• (4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3～3/4，过少会 影响实验结果，过多易在测量过程中外溢，污染 仪器。
• (5) 拿放比色皿时，应持其“毛面”，杜绝接触 光路通过的“光面”。如比色皿外表面有液体， 应用滤纸吸干，以保证光路通过时不受影响。
血清蛋白质含量的测定ppt课件
4.在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。
蛋白质规范液浓度
血清总蛋白含量=浓度X稀释倍数
得
血清总蛋白含量=〔A测/A标〕X蛋白质规范液浓度X稀释倍 数
临床意义
19
1.清总蛋白增高： ①血液浓缩：腹泻、呕吐等。 ②合成添加：如多发性骨髓瘤等。 2.清总蛋白降低： ①血液稀释：过多注射低渗溶液，各种缘由 引起的水钠潴留。 ②摄入量缺乏和耗费添加：营养不良、慢性 肠胃炎、严重结核病等。 ③合成妨碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丧失：严重烧伤时大量血浆渗出， 肾综合症等。
No.3 血清总蛋白含量的测1 定
by:煜.明.奇.婷.远
2
实验目的
1. 熟习血清总蛋白的测定方法〔双缩脲法〕
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义
血清总蛋白
3
血清蛋白
球蛋白 白蛋白
35~50g/L 20~40g/L
4
蛋白质含量测定的几种方法
5
6
凯氏定氮法〔图〕
凯氏定氮法
浓硫酸
样品中的有机氮
可求得蛋白质的量。
留意！
13
1.双缩脲反响并非是蛋白质特有的颜色 反响！
2.凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨 基〔-CONH2-〕 均可呈双缩脲反响。
如： 3HCCONH
NHCOCH3
14
实验试剂
1.生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水
2.双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏 水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全 溶解后，参与24%NaOH100ml，用蒸馏水 稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保管。
无机铵盐 +OH-
催化剂
7
NH3
蛋白质的测定课件参考.ppt
1.装水至 2/3 容积 处，加甲 基橙数滴 及硫酸数 毫升以保 持酸性
4.NaOH 溶液
4.5.6 5.水洗漏 步操 斗数次 作要 6.夹好漏斗 迅速 夹，水封。
2.管下端 插入液面 下(瓶内先 装硼酸液 及混合指 示剂2滴)
7.水蒸气蒸馏至指示剂变绿色 开始计时，蒸馏10min，将管
8.吸收液用0.01000mol/L HCl标准溶液滴定至
总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值
精选课件
2
5、蛋白质的测定方法
利用蛋白质共性的方法
凯氏定氮法 杜马斯法
福林酚法
利用特定氨基酸残基法
染色法
精选课件
3
第二节 蛋白质的定性测定
一、蛋白质的一般显色反应
电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并 变色。书中列举了 5 种染料。
二、复合蛋白质的显色反应
第一节 概述
1.蛋白质的元素组成（The elements of protein）
▪ C：50-55% N：15-18% O：20-23%
▪ H：6-8% S：0-4%
▪ 微量元素：P、Fe、Zn、Cu
2、基本结构单位：氨基酸
3、蛋白质的变性作用。
精选课件
1
4、蛋白质分析的重要性
▪ 生物活性测定 ▪ 功能性质调查 ▪ 营养标签
精选课件
17
操作方法
▪ 1、制作标准曲线 取10支干试管分成两组，按下表平行操作：
0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1
2
3
4
标准蛋白液/ml
0.2 0.4 0.6 0.8
蛋白浓度 /(mg/ml)
2.0 4.0 6.0 8.0
蒸馏水/ml
4.NaOH 溶液
4.5.6 5.水洗漏 步操 斗数次 作要 6.夹好漏斗 迅速 夹，水封。
2.管下端 插入液面 下(瓶内先 装硼酸液 及混合指 示剂2滴)
7.水蒸气蒸馏至指示剂变绿色 开始计时，蒸馏10min，将管
8.吸收液用0.01000mol/L HCl标准溶液滴定至
总蛋白质含量 氨基酸组成 蛋白质的营养价值
精选课件
2
5、蛋白质的测定方法
利用蛋白质共性的方法
凯氏定氮法 杜马斯法
福林酚法
利用特定氨基酸残基法
染色法
精选课件
3
第二节 蛋白质的定性测定
一、蛋白质的一般显色反应
电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并 变色。书中列举了 5 种染料。
二、复合蛋白质的显色反应
第一节 概述
1.蛋白质的元素组成（The elements of protein）
▪ C：50-55% N：15-18% O：20-23%
▪ H：6-8% S：0-4%
▪ 微量元素：P、Fe、Zn、Cu
2、基本结构单位：氨基酸
3、蛋白质的变性作用。
精选课件
1
4、蛋白质分析的重要性
▪ 生物活性测定 ▪ 功能性质调查 ▪ 营养标签
精选课件
17
操作方法
▪ 1、制作标准曲线 取10支干试管分成两组，按下表平行操作：
0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1
2
3
4
标准蛋白液/ml
0.2 0.4 0.6 0.8
蛋白浓度 /(mg/ml)
2.0 4.0 6.0 8.0
蒸馏水/ml
蛋白质和核酸化学ppt课件
的
三
级
结
构
最新课件
29
蛋白质的三级结构
最新课件
30
此类蛋白质只有完整四级结构才有生物学活性
最新课件
31
三、蛋白质结构与功能的关系
天然状态， 有催化活性
(一)一级结构与功能的关系
72
（分子病）
58 65
1.核糖核酸酶一级结构与
功能的关系 二硫键破坏
去除尿素、 β-巯基乙醇
SH
后，生物学活性
65
丧失。
最新课件
44
三.蛋白质的沉淀、变性、凝固及其应用
蛋白质从溶液中析出的现象，称为沉淀。 1.盐析：在蛋白溶液中加入大量中性盐，蛋
白质表面的水化膜即被破坏，其所带电荷 也被中和，蛋白质胶粒失去这两种稳定因 素而沉淀，这种沉淀过程称为盐析(salting out)。
最新课件
45
三.蛋白质的沉淀、变性、凝固及其应用
除脯氨酸外，其余氨基
酸均属α-氨基酸，其化 学结构式具有共同的特 点，即连接羧基的α-碳 原子上有一个氨基，称 为α-氨基酸。
α-氨基酸的结构通式，R 为侧链基团。
最新课件
6
各种氨基酸的结构区别在于侧链（R基团）的不 同，故具有不同的理化性质。
COO-
CHRH3
C +NH3
H
L-氨基酸的甘丙通氨氨式酸酸
重金属离子、生物碱试剂及辐射等因素。
– ①利用变性：
酒精消毒
高压灭菌
血虑液制备
– ②防止变性：低温保存生物制品，避免接触变性因素。
– ③取代变性：乳品解毒最(用新课于件 急救重金属中毒)
49
不可逆变性和可逆变性
蛋白质的定量测定方法PPT课件
以光密度为纵座标，标准蛋白溶液浓度为横座标，绘 制出标准曲线。
2.测定未知样品
取样品溶液4毫升,加蒸馏水4mL混匀，在280nm下 测定其光密度值。
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中 查出样品溶液的蛋白质含量。
第8页/共24页
【实验目的】
三、微量凯氏定氮法
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
蛋白质染料复合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白质测定 的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质结合迅速，大约为2 分钟，结合物的颜色在1小时内稳定。所以本法操作简便，快速，灵敏 度 高 ， 稳 定 性 好 ， 是 一 种 测 定 蛋第白20质页/含共量24页的 常 用 方 法 。
【实验材料】
2. 测定未知样品：取2支试管，分别准确吸取1毫升样品溶液，各加
5毫升Fo1in酚试剂甲，摇匀，室温放置10分钟后，再各加1毫升 Fo1in酚试剂乙，立即摇匀，放置30分钟，在500nm处测定光密度值 。
【实验结果】
根据未知样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品
溶液中的蛋白质含量。
第5页/共24页
Folin酚试剂法操作简便，灵敏度高，样品中蛋白
质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最
பைடு நூலகம்
广泛的方法之一。
第2页/共24页
【实验材料】
1.实验器材
100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。
2.实验试剂
(1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于／L氢氧化钠溶液中，再把 硫酸铜(CuSO4∙5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后 将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。
2.测定未知样品
取样品溶液4毫升,加蒸馏水4mL混匀，在280nm下 测定其光密度值。
【实验结果】
根据样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中 查出样品溶液的蛋白质含量。
第8页/共24页
【实验目的】
三、微量凯氏定氮法
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
蛋白质染料复合物具有很高的吸光值，因此大大提高了蛋白质测定 的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质结合迅速，大约为2 分钟，结合物的颜色在1小时内稳定。所以本法操作简便，快速，灵敏 度 高 ， 稳 定 性 好 ， 是 一 种 测 定 蛋第白20质页/含共量24页的 常 用 方 法 。
【实验材料】
2. 测定未知样品：取2支试管，分别准确吸取1毫升样品溶液，各加
5毫升Fo1in酚试剂甲，摇匀，室温放置10分钟后，再各加1毫升 Fo1in酚试剂乙，立即摇匀，放置30分钟，在500nm处测定光密度值 。
【实验结果】
根据未知样品溶液的光密度值，在绘制好的标准曲线图中查出样品
溶液中的蛋白质含量。
第5页/共24页
Folin酚试剂法操作简便，灵敏度高，样品中蛋白
质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最
பைடு நூலகம்
广泛的方法之一。
第2页/共24页
【实验材料】
1.实验器材
100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。
2.实验试剂
(1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于／L氢氧化钠溶液中，再把 硫酸铜(CuSO4∙5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后 将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。
蛋白质和核酸化学PPT课件.ppt
试问100g大豆中含蛋白质多少克？
▪ 2. 用凯氏微量定氮法测得0.2ml血清中含
氮2.1mg，问100ml血清中含蛋白质多少克？
二、蛋白质的基本单位—氨基酸
▪ 氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 ▪ 20标准氨基酸 ▪ 氨基（-NH2）和羧基（-COOH）
COOH H2N—Cα—H
R
不带电形式
COO+H3N—Cα—H
2.空间结构与功能的关系
▪ 蛋白质的空间
结构一旦改变 就会影响蛋白 质的生物活性。
▪ （如右图）牛
核糖核酸酶的 空间结构与功 能。
•牛脑海绵状病，简称BSE。1985年4月，医学家 们在英国发现了一种新病，专家们对这一世界 始发病例进行组织病理学检查，并于1986年11 月将该病定名为BSE，首次在英国报刊上报道。 •食用被疯牛病污染了的牛肉、牛脊髓的人，有 可能染上致命的克罗伊茨费尔德—雅各布氏症 （简称克－雅氏症），其典型临床症状为出现 痴呆或神经错乱，视觉模糊，平衡障碍，肌肉 收缩等。病人最终因精神错乱而死亡。 医学 界对克－雅氏症的发病机理还没有定论，也未 找到有效的治疗方法。
(1)
(2)
（二）
一级结构是空间结构的基础。结构与功能密切相关，蛋白质的一级 结构一旦确立，其空间结构以及生理功能也基本确立。
四、蛋白质的空间结构
▪ 多肽链需通过各种方式卷曲成特定的空间
结构。蛋白质肽链通过折叠、盘曲，使分 子内部原子形成一定的空间排布及相互关 系，称为蛋白质的构象，即空间结构。
（2）分子病
——蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与 正常有所不同的遗传病。
镰状细胞贫血（sick-cell anemia） 从患者红细胞中鉴定出特异的镰刀型或月牙型细胞。
▪ 2. 用凯氏微量定氮法测得0.2ml血清中含
氮2.1mg，问100ml血清中含蛋白质多少克？
二、蛋白质的基本单位—氨基酸
▪ 氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 ▪ 20标准氨基酸 ▪ 氨基（-NH2）和羧基（-COOH）
COOH H2N—Cα—H
R
不带电形式
COO+H3N—Cα—H
2.空间结构与功能的关系
▪ 蛋白质的空间
结构一旦改变 就会影响蛋白 质的生物活性。
▪ （如右图）牛
核糖核酸酶的 空间结构与功 能。
•牛脑海绵状病，简称BSE。1985年4月，医学家 们在英国发现了一种新病，专家们对这一世界 始发病例进行组织病理学检查，并于1986年11 月将该病定名为BSE，首次在英国报刊上报道。 •食用被疯牛病污染了的牛肉、牛脊髓的人，有 可能染上致命的克罗伊茨费尔德—雅各布氏症 （简称克－雅氏症），其典型临床症状为出现 痴呆或神经错乱，视觉模糊，平衡障碍，肌肉 收缩等。病人最终因精神错乱而死亡。 医学 界对克－雅氏症的发病机理还没有定论，也未 找到有效的治疗方法。
(1)
(2)
（二）
一级结构是空间结构的基础。结构与功能密切相关，蛋白质的一级 结构一旦确立，其空间结构以及生理功能也基本确立。
四、蛋白质的空间结构
▪ 多肽链需通过各种方式卷曲成特定的空间
结构。蛋白质肽链通过折叠、盘曲，使分 子内部原子形成一定的空间排布及相互关 系，称为蛋白质的构象，即空间结构。
（2）分子病
——蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与 正常有所不同的遗传病。
镰状细胞贫血（sick-cell anemia） 从患者红细胞中鉴定出特异的镰刀型或月牙型细胞。
蛋白质含量的测定(共4张PPT)
第三页，共4页。
样品的测定
吸取提取液和稀释250倍的血清液各1.0mL于试管中（三次重复），分别 加5.0mL试剂甲，放置10分钟后，加试剂乙0.5mL，立即混匀，恒温37度 反应20分钟，测A750的值。
管号
1 2 3
小白 菜
T或A
管号
1 2 3
血清 T或A
☆小白菜用mg／g，血清用mg／mL。
／mL）
μg
1 样品（小白菜）液的提取
其中双缩脲法和Folin-酚法
0
1.0 0
2 以1号为参比，测A750的值。
0.2 0.8 50
进—一Fo步lin掌-酚握试分剂光法光（度L法ow—ry—法求3）标和准考曲马线斯、0亮.准蓝4确法测（定Br未od知0fo.样rd6品法、）正100
4 其中双缩脲法和Folin-酚法
蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚基
的酪氨酸，故有此颜色反应。因此，用Folin-酚法测定蛋白质 含量灵敏度较高。
第二页，共4页。
实验步骤 1.标准曲线的制作：按下表操作
管
BSA
H2O Pr.
蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混号合物）。（300μg
含量
样品（小白菜）液的提取 是一般实验室中经常使用的方法。
蛋白质含量的测定
—Folin-酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝法
（Brodford法）
一 Folin-酚试剂法（Lowry法） 目的和要求
学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。
进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测定未知样品、正 确使用仪器
第一页，共4页。
原理
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如折射率、比重、紫 外吸收等测定而得知：或用化学方法，如定氮、双缩脲反应、 Folin-酚试剂反应等方法来求算。其中双缩脲法和Folin-酚法
分光光度法检测蛋白质含量课件
蛋白质含量的计算方法
通过测量蛋白质溶液在特定波长下的 吸光度，利用标准曲线法或直接比较 法计算蛋白质含量。
标准曲线法需要制备不同浓度的蛋白 质标准溶液，绘制吸光度-浓度标准曲 线，根据待测样品的吸光度值在标准 曲线上找到对应的浓度。
蛋白质含量检测的影响因素
待测蛋白质的纯度和分子结构会影响其紫外吸收性质，从而影响检测结果的准确性 。
该方法具有高灵敏度、高准确度和高重现性 等优点。
分光光度法的原理
当一束特定波长的光通过含有待 测物质的溶液时，部分光会被吸
收。
吸收程度与物质浓度成正比，因 此可以通过测量透射光的强度来
计算物质浓度。
常用的分光光度计可以调整波长 范围，以便对不同物质进行测定
。
分光光度法的应用
在生物学和医学领域，分光光 度法常用于测定生物分子，如 蛋白质、核酸和酶的浓度。
03
准确称量样品
在称量样品时，应使用精 确天平，确保称量结果的 准确性。
正确设置仪器参数
在使用分光光度计时，应 根据实验要求正确设置仪 器参数，以确保测量结果 的准确性。
规范操作实验步骤
在实验过程中，应按照实 验步骤规范操作，避免因 操作不当导致实验结果误 差。
实验结果可靠性验证方法
重复实验
为了验证实验结果的可靠性，可 以重复进行实验，并对结果进行
在化学和环境科学领域，该方 法用于测定金属离子、有机化 合物和其他物质的浓度。
分光光度法还可以用于水质监 测、药物分析以及食品安全等 领域。
02
蛋白质含量检测原理
蛋白质的紫外吸收性质
01
蛋白质分子中的肽键和芳香氨基 酸在紫外光区有强烈的吸收峰， 其吸光度与蛋白质浓度成正比。
BCA法测定蛋白质含量ppt课件
C测=A测/ A标×C标
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
2.利用标准曲线法进行换算测定物浓度（标准曲线法）
❖ 配制一系列的
A
标准管，然后
绘出标准曲线。
A待测
❖ 再测出测定管 的吸光度，在 标准曲线上查 找到对应浓度。
二.实验原理
A562∝M蛋白质
紫蓝色
562nm
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
二.实验原理
采用标准曲线法计算待测液含量
作图人：
仪器型号：722型分光光度计
时间：
A待测
波长：562nm
45°
二.实验原理
在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， Cu+与两分子 BCA（二辛可酸）反应形成紫蓝色的络合物，测定其在 562nm处的吸光度值，并与标准曲线对比，即可计算待测
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
5 测定管
m(ug)
0 15 30 45 60 75
吸光度 (A)
仪器名称、型号编号： 波长： 测定日期： 测定人：
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
四.注意事项
1、实验分组，两人一组 2、试剂盘的摆放：专管专用，防止污染 3、准确量取试剂，正确使用吸量管 4、正确操作722型分光光度计，此次由于 溶液体积较少，比色皿不需要待测溶液润洗 5、正确绘制标准曲线，标明名称、仪器、 作图人、时间等 6、实验原始数据书写规范，三线表 7、待测液(小牛血清)已经稀释了500倍，
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
2.利用标准曲线法进行换算测定物浓度（标准曲线法）
❖ 配制一系列的
A
标准管，然后
绘出标准曲线。
A待测
❖ 再测出测定管 的吸光度，在 标准曲线上查 找到对应浓度。
二.实验原理
A562∝M蛋白质
紫蓝色
562nm
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
二.实验原理
采用标准曲线法计算待测液含量
作图人：
仪器型号：722型分光光度计
时间：
A待测
波长：562nm
45°
二.实验原理
在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+， Cu+与两分子 BCA（二辛可酸）反应形成紫蓝色的络合物，测定其在 562nm处的吸光度值，并与标准曲线对比，即可计算待测
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
5 测定管
m(ug)
0 15 30 45 60 75
吸光度 (A)
仪器名称、型号编号： 波长： 测定日期： 测定人：
在 日 常 生 活 中，随 处都可 以看到 浪费粮 食的现 象。也 许你并 未意识 到自己 在浪费 ，也许 你认为 浪费这 一点点 算不了 什么
四.注意事项
1、实验分组，两人一组 2、试剂盘的摆放：专管专用，防止污染 3、准确量取试剂，正确使用吸量管 4、正确操作722型分光光度计，此次由于 溶液体积较少，比色皿不需要待测溶液润洗 5、正确绘制标准曲线，标明名称、仪器、 作图人、时间等 6、实验原始数据书写规范，三线表 7、待测液(小牛血清)已经稀释了500倍，
最新实验一蛋白质含量测定ppt课件
生物化学与分子生物学基础实验
TU1800 紫外可见分光光度计
波长范围：200－1100nm 钨灯：340－1100nm
测光系统：单光束
氘灯：200－340nm
功能指标：光度测量 光谱扫描 定量测量
生物化学与分子生物学基础实验
注意事项
1 测紫外吸收要用石英比色皿 ！ 2 定量实验取液要准确。 3 从低浓度到高浓度依次测量，比色皿不要润 洗。 因此3ml溶液足够测定。 4 测量完毕，请把光度计的盖打开 ！ 5 每次实验时提交上一次的实验报告。
生物化学与分子生物学基础实验
生物化学与分子生物学基础实验
Folin-酚试剂法（Lowry法）
实验步骤
0 1234567
标准蛋白（1mg/ml）ul 0 20 40 80 120 160 200 0
待测样品 ul
-
- - - - - - 200
蒸馏水 ul
1000 980 960 920 880 840 800 800
Folin-酚试剂甲 ml
3、所有的样品（包括标准样品），都必须在规定时间 内测试。时间过长，得到的吸光值会有变化，导致测出 的样品浓度与实际的浓度不符。
生物化学与分子生物学基础实验
722型光栅分光光度计
光 源
单 色
样
光
读
品
电
数
器
池
源
单
件元
测量完毕，请把光度计的盖打开 ！
讲解完毕后，每个组出一个同学去 127听老师讲解仪器使用。
生物化学与分子生物学基础实验
Folin-酚试剂法（Lowry法）
• 酸、铜离子螯合剂（如EDTA、柠檬酸等）、还原剂（如巯基乙 醇、DTT、苯酚等）干扰本反应。
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蛋白质及核酸的含量测定方法
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• 蛋白质（protein）是生命的物质基础，没
有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及 与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物 质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部 分都有蛋白质参与。 • 核酸是许多核苷酸聚合成的生物大分子化 合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛 存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生 物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
定溶液。 • 7、混合指示试剂：0.1%甲
基红乙溶液液1份，与0.1% 溴甲酚绿乙醇溶液5份临用 时混合。
5
反应机理
• （二）仪器
• 微量定氮蒸馏装置：如图所 示。
• 1、电炉； 2、水蒸气发生 器（2L平底烧瓶）；3、螺 旋夹a；
•
4、小漏斗及棒状玻璃
塞（样品入口处）；5、反
应室；6、反应室外层；
•
7、橡皮管及螺旋夹b；
8、冷凝管；9、蒸馏液接
收瓶。
6
核酸——ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 核酸测定常用方法有定磷法、定糖 法、紫外吸收法。
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【实验原理】
• 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭 双键系统，能吸收紫外光，RNA和 DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。 一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024， 每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约 为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA 溶液在260nm的光吸收值即可计算出 其中核酸的含量。
• 因为食品中除蛋白质外，还含有其 它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋 白。
4
三、仪器与试剂
• （一）试剂 • 1、硫酸铜（CuSO4·5H20） • 2、硫酸钾 • 3、硫酸（密度为1.8419g/L） • 4、硼酸溶液（20g/L） • 5、氢氧化钠溶液（400g/L） • 6、0.01mol/L盐酸标准滴
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仪器及试剂
1.实验器材 离心机, 离心管,紫外分光光度计； 2.实验试剂 (1)钼酸氨—高氯酸试剂(沉淀剂)：如配
制200ml，可在193ml蒸馏水中加入 7ml高氯酸和0.5g钼酸氨。 (2)5%~6%氨水
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2
蛋白质——
目前常用的方法有凯氏定氮法、双 缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯 亮蓝法(Bradford)。
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凯氏定氮法_原理
• 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓 硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白 质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫 酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏 使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸 标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘 以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
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• 蛋白质（protein）是生命的物质基础，没
有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及 与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物 质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部 分都有蛋白质参与。 • 核酸是许多核苷酸聚合成的生物大分子化 合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛 存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生 物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
定溶液。 • 7、混合指示试剂：0.1%甲
基红乙溶液液1份，与0.1% 溴甲酚绿乙醇溶液5份临用 时混合。
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反应机理
• （二）仪器
• 微量定氮蒸馏装置：如图所 示。
• 1、电炉； 2、水蒸气发生 器（2L平底烧瓶）；3、螺 旋夹a；
•
4、小漏斗及棒状玻璃
塞（样品入口处）；5、反
应室；6、反应室外层；
•
7、橡皮管及螺旋夹b；
8、冷凝管；9、蒸馏液接
收瓶。
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核酸——ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 核酸测定常用方法有定磷法、定糖 法、紫外吸收法。
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【实验原理】
• 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭 双键系统，能吸收紫外光，RNA和 DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。 一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024， 每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约 为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA 溶液在260nm的光吸收值即可计算出 其中核酸的含量。
• 因为食品中除蛋白质外，还含有其 它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋 白。
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三、仪器与试剂
• （一）试剂 • 1、硫酸铜（CuSO4·5H20） • 2、硫酸钾 • 3、硫酸（密度为1.8419g/L） • 4、硼酸溶液（20g/L） • 5、氢氧化钠溶液（400g/L） • 6、0.01mol/L盐酸标准滴
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仪器及试剂
1.实验器材 离心机, 离心管,紫外分光光度计； 2.实验试剂 (1)钼酸氨—高氯酸试剂(沉淀剂)：如配
制200ml，可在193ml蒸馏水中加入 7ml高氯酸和0.5g钼酸氨。 (2)5%~6%氨水
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蛋白质——
目前常用的方法有凯氏定氮法、双 缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯 亮蓝法(Bradford)。
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凯氏定氮法_原理
• 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓 硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白 质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫 酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏 使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸 标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘 以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。