真菌分类学(标本的采集与制作)
菌物学基础
实验实习指导实验一菌物标本采集和制作一、目的：通过菌物标本采集，了解菌物的生态和多样，进一步认识菌物对寄主的危害性，以及它们与自然界和人类关系。
二、采集用具：扩大镜（10—20X）、标本夹、绳、采集袋（箱）、小刀、剪、镊子、指形管（带塞）、标本纸、塑料袋、标笺、记录本、铅笔、固定液（FAA）、照相机等。
三、采集方法：采集的主要对象是植物的根、茎、叶、花器和果实等发病的部位，其上有明显子实体、或植株残体上和林间地上腐生的大型真菌。
1、采集叶部菌物时，用扩大镜注意观察发病叶片正反两面病斑上有无子实体（霉层、霜霉层、小黑点、锈粉、白粉、泡斑等）；采集时叶片不能太少（一般应采集数片至数十片），预防在制作和鉴定时破损，有的还需要固定作切片用，多余的可作交流；对采集到寄主不熟悉时，最好要采到它的花和果实或种子，以便有助于寄主鉴定；采到锈菌类黑粉菌类、要分别用纸将标本包好，记上标记，以免孢子混杂；如果病斑上未见到子实体的标本，可带回室内进行保湿培养，可能产生分生孢子。
2、采集茎秆部的真菌的，用剪子剪下发病茎秆上具明有明显子实体部分。
如为树干，用小刀将有子实体的树皮削下；如植株是萎茑型的茎秆上有时无霉层，可将茎秆剖开观察内部维管束是否变褐色，将标本带回室内进行分离培养。
3、采集花器或穗部的真菌时，注意发病花器易于腐烂，应先将发病花器的症状照下来，然后用纸包好，记上标记，如病穗上为黑粉状物，也先用纸包好，以免孢子混杂污染。
4、采集果实上真菌时，注意发病果实易于腐烂，应先拍照病果的症状，再用纸包好，记上标记，放入采集袋内。
5、采集根部的真菌时，先观察植株地上部有无不正常现象，然后拔起植株或刨开茎基部土壤，观察根上或茎基部有无菌层或菌丝束或小菌核等物。
6、采集幼苗的真菌时，可将发病幼苗拔起除去根上泥土，用纸包好，记上标记带回室内进行保湿培养或分离培养。
7、采集大型真菌（伞菌、多孔菌、地星、马勃等）时，最好在大雨后2—3天，林木中最多，一般发生在树丛或树桩基部，或树干上，地上或枯枝落叶上，这类真菌大多是肉质或胶质，易于败坏，也应先拍照他们的形态特征，然后用纸包好，记上标记，带回室内用浸渍法或烤干保存。
微生物检验常用技术与方法—临床真菌检验技术与方法(微生物检验课件)
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
常见浅部真菌的标本采集及初步鉴定 -无视频
常见浅部真菌的鉴定
• 二、小孢子菌属-犬小孢子菌（Microsporum canis） • 镜下形态: • 可见很多纺锤形的大分生孢子，壁厚有刺，顶端可有“帽样”
肥大，分隔为6-12隔
常见浅部真菌的鉴定
• 二、小孢子菌属-犬小孢子菌（Microsporum canis） • 鉴定要点：
2、取材选取皮损边缘处，阳性率高； 3、指趾间皮损以第4、第5指趾间阳性率最高； 4、取部分皮屑置载玻片上，滴一滴5~10%KOH，盖 上盖玻片后直接镜检，另取部分皮屑接种于含氯霉素的 沙氏斜面培养基，置28℃培养两周，隔天观察。
标本采集
• 二、采集的注意事项 • 甲屑：
1、取材前局部用75%酒精消毒，先刮去病甲上层；
• 生长速度：25~28℃生长一周的菌落大小 • 生长非常快：直径≥9cm • 生长快： 直径3-9cm • 生长速度中等：直径1-3cm • 生长慢： 直径0.5-1cm • 生长非常慢：直径≤0.5cm • 质地：可见绒毛状、羊毛状、粉末状、颗粒状、蜡样等，表面可 •
高起或平坦，有或无皱折 颜色：红、白、黄、紫等，色素可渗透到培养基中
齐，背面呈葡萄酒色或红色
• III 粉末状：生长快，表面粉末中央凸起，菌落约占斜面的2/3，正面粉红色，
背面暗红色，边缘清楚
• IV 沟纹状：生长快，表面有少许菌丝及放射状沟纹，边缘清楚，背面暗红色
• V 颗粒状：又称胭脂型，似紫色毛癣菌，表面胭脂色，呈颗粒状，日久有少许
白色绒毛状菌落，背面暗红色，菌落质地松脆
• 1、发外镶嵌状孢子
• 2、菌落形态和颜色
• 3、大分生孢子形态特别是末端的帽样肥大
• 4、在米饭培养基上生长良好，可产生大量大分生孢子
大型真菌标本的采集
厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei
厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei
灰环粘盖牛肝菌 Suillus laricinus
松乳菇 Lactarius deliciosus
绒边乳菇 Lactarius pubescens
毛头乳菇 Lactarius torminosus
黑紫红菇 Russula atropurpurea
• 菌托：外菌幕的残留部分在菌柄基部形成的托状结构。
– 菌托的形状（图13）：1.苞状菌托；2.环带状菌托；3.杯状菌托；4.颗粒状 菌托。
• 菌环：在菌柄的一定部位由内菌幕的残留部分形成的环状结构。
– 菌环的形状（图14）：1.向下性的单层环；2.双层环；3.盖缘上的菌幕；4. 丝膜。
图13
（邵力平等，1997）
粪鬼伞 Coprinus sterquilinus
大孢花褶伞 Panaeolus popilionaceus
粪锈伞 Bolbitius vitellinus
毛柄库恩菇 Kuehneromyces mutabilis
金毛鳞伞 Pholiota aurivella
皮革黄丝膜菌 Cortinarius malachius
大型真菌的主要类群
层 菌 纲 Hymenomycetes
伞 菌 目 Agaricales 非 褶 菌 目 Aphyllophorales 银 耳 目 Tremellales
担子菌门 Basidiomycota
异担子菌纲 Heterobasidiomycetes
花 耳 目 Dacrymycetales 木 耳 目 Auriculariales
蜜黄红菇Russula ochroleuca
野外大型真菌识别、标本采集和室内分离实验报告
野外大型真菌识别、标本采集和室内分离一、目的与要求1、掌握野外标本采集的方法和注意事项2、认识常见的大型真菌。
二、实验原理大型真菌以夏秋多雨时的七、八月份出现最多（春季发生的菌类比较少，仅盘菌目中的羊肚菌、马鞍菌和丛耳菌等多发生于春末），所以此时采集标本最为适宜。
担子菌门是一群多种多样的真菌，约1.6万种。
其特征：①菌丝具横隔，有单核菌丝和双核菌丝（又称初生菌丝和次生菌丝），担孢子萌发时形成单核菌丝，单核菌丝接合，核不结合而形成双核菌丝。
双核菌丝时期相当长。
②形成担子、担孢子，在此过程中有锁状连合。
担子菌分为四纲：①层菌Hymenomycetes，如银耳、木耳、灵芝、蘑菇等。
②腹菌纲Gasteromycetes，如马勃、鬼笔等。
③锈菌纲。
④黑粉菌纲。
泰山常见药用蕈菌有：茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.、灵芝Ganoderma lucidum (Leys. ex Fr.) Karst．、蜜环菌Armillaria mellea (Vahl. ex Fr.) Kummer．、脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.、猪苓Polyporus umbellatus (Pers.) Fr.、雷丸Polyporus mylittae Cook. et Mass.、猴头菌Hericium erinaceus (Bull. ex Fr.) Pers.、云芝Coriolus versicolor (Fr.) Fr.、银耳Tremella fuciformis Berk、木耳Auricularia auricular (L. ex Hook.) Underw．、紫芝Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd．、大马勃Calvatiagigantean (Batsch ex Pers) Lloyd.、紫色马勃C. lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd.等。
植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌是指在植物体内生活并与植物形成共生状态的真菌。
它们在植物生长和发育中扮演着重要角色，可促进植物的生长和抵抗病原微生物的能力。
对植物内生真菌进行分类鉴定是研究植物与真菌相互作用的重要基础。
本文将介绍植物内生真菌的分类鉴定方法。
一、分类鉴定的样本采集和处理1. 样本采集：根据需要采集植物的根系样本，选择表现出明显病状或异常的植株，或者在不同生长时期采集不同部位的样本。
2. 样本处理：将采集的样本用刀片或消毒的剪刀从植物体上切取。
为了避免外源杂菌的污染，可以在取样前用70%酒精或漂白粉消毒，然后用无菌蒸馏水或含有保鲜剂的缓冲液清洗数次，将清洗后的样本装入无菌离心管中。
二、分类鉴定的培养方法1. 消毒：将采集的样本在无菌工作台上消毒，可以用70%酒精或漂白粉进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水洗涤数次。
2. 培养基：选择适当的培养基进行分离培养。
一般常用的培养基有马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）、玉米粉蔗糖琼脂培养基（CMD）、毛状植物根培养基等。
3. 分离培养：将处理好的样本放置在培养基上，均匀涂抹或切割后排列，然后放置在适当的温度和湿度条件下培养。
4. 培养温度和时间：一般情况下，在适宜的温度（25-28°C）和光照条件（12小时光照/12小时暗）下培养一周左右，观察是否有菌落形成。
5. 菌落转接：当菌落形成后，可以用无菌环取样，将菌落转移到新的培养基上进行纯培养。
6. 保存：可以将纯培养的菌株进行保存，可以冷冻保存或进行液氮冻存。
三、分类鉴定的鉴定方法1. 形态学鉴定：通过观察菌落的形态、色素、菌丝等形态特征，以及产孢体、分生孢子的形态特征等来进行鉴定。
可以借助显微镜观察菌丝的形态、菌落的形态、菌丝状产孢体和产生的孢子形态。
2. 分子生物学鉴定：采用PCR方法对菌株进行鉴定。
通常可以从菌落或孢子中提取菌株的DNA，然后进行PCR扩增，再通过序列分析进行鉴定。
临床医学检验知识速记--(真菌)微生物学
临床医学检验知识速记--（真菌）微生物学真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的，单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。
细胞壁：不含肽聚糖，含几丁质及纤维素临床分类(按致病部位)：浅部真菌、深部真菌形态学分类：单细胞真菌、多细胞真菌真菌的形态与结构在鉴定上起重要作用（一）形态与结构1、单细胞真菌：圆形或卵圆形，包括酵母型和类酵母型真菌。
酵母型真菌以芽生方式繁殖，芽生孢子成熟后脱落成独立个体，不产生菌丝，其菌落与细菌菌落相似。
类酵母型真菌也以芽生方式繁殖，菌落与酵母型真菌相似，但它产生的芽体不从母细胞上脱落，而是延伸入培养基内形成假菌丝。
对人致病的主要有新生隐球菌和白假丝酵母菌。
2、多细胞真菌：由菌丝和孢子两种基本结构组成（1）菌丝：在环境适宜情况下由孢子萌发长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝。
按照功能分为：①营养菌丝：伸入培养基；②气生菌丝：露出培养基向空气中生长；③生殖菌丝按照结构分为：①有隔菌丝：多数致病性真菌；②无隔菌丝。
菌丝的形态大小不一(螺旋状/球拍状/鹿角状)、菌丝间有无分隔、形状特征(绒毛状/絮状/粉末状) → 鉴别真菌（2）孢子：由生殖菌丝产生的一种繁殖体，是真菌的繁殖结构。
有有性孢子和无性孢子两类①有性孢子：同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成。
包括：卵孢子、接合孢子、子囊孢子、担子孢子，多为非致病性真菌所产生。
②无性孢子：菌丝上的细胞分化或出芽生成，不经两性细胞的配合。
病原性真菌大多形成无性孢子。
可分为三种a. 分生孢子：又可分为大分生孢子（其大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据）、小分生孢子（真菌都能产生，诊断意义不大）b. 孢子囊孢子c. 叶状孢子：又可分为芽生孢子（一般芽生孢子生长到一定大小仍不与母体脱离，则形成假菌丝）、厚膜孢子（是真菌的一种休眠形态）、关节孢子真菌种类不同，孢子形状大小也不同→ 鉴别真菌3、二相性真菌：少数真菌在营养、温度、理化因素等不同环境条件下，可发生单细胞与多细胞两种形态的可逆转化，称为双向性真菌。
实验五真菌标本采集与制作
实验五、真菌标本采集与制作（腐生菌、寄生菌和共生菌的认识）一、实验目的1、了解和掌握腐生菌、寄生菌和共生菌的生活习性和采集、保存方式2、掌握真菌标本的采集和保存方式二、实验材料1、植物病原真菌干标本2、大型真菌干标本3、大型真菌浸渍标本三、实验内容1．真菌的分布根据真菌生境和生活方式不同可将其分为：（1）水生真菌：在水中腐生于动植物尸体上，有的寄生于动植物上，危害水中动物，如水蕾属（Saprol egnia）。
（2）地生真菌：这类真菌的种类较多，生活环境不同，庭院、公园、草原等地都可生长。
（3）木生真菌：有的寄生于活立木上，危害林中树木，形成森林病害；有的腐生于枯立木、倒木或伐木桩上，有利于清除林中垃圾，成为“林中清道夫”。
（4）病害真菌：这类真菌寄生于人、动物及各种农作物体上，使人、动物及农作物患病。
（5）共生真菌：真菌与藻类共生形成地衣；密环菌和天麻共生；接合菌、伞菌、担子菌与高等植物形成菌根。
2．真菌标本的采集制作（1）采集用具平底背筐，平底手提筐，纸盒若干个（或铝盒、小指管若干个，塑料袋若干个），木箱1～2个，液浸标本筒1～2个，掘根器，刨根器，手锯，短刀，刀片，白纸，纱布，号牌，线或细绳，钢卷尺，湿度计，温度计，pH试纸，测高计等。
（2）采集方法空气、土壤或动植物体上的真菌多属于霉菌，采集这类真菌常用分离或纯培养方法得到。
而伞菌、多孔菌、盘菌、锈菌、黑粉菌、银耳等各种真菌的采集方法如下：①地生真菌采集：采集时用手轻轻捏住菌柄基部，缓慢将菌体旋转一周，然后拔出，尽量带出地下部分，抖掉泥土。
采集时注意保持菌体的完整性，不要损伤各部，以免给鉴定带来困难。
有些菌类的菌柄在土中埋的很深，需用刀或掘根器挖出来。
有些伞菌柄的基部，盘菌和腹菌基部，有菌索伸入土中，注意一起采取。
真菌分类学(标本采集与制作)PPT课件
5. 存放与运输
05
明确采集的目的和要求，如分类学研究、生态调查等。
根据真菌的生活习性和生长环境，选择合适的时间和地点进 行采集。 详细观察真菌的生长环境、形态特征，并记录相关信息。
使用适当的工具将真菌子实体或相关组织切割下来。 将采集的标本放入采集袋中，并保持适当的温度和湿度条件 。
采集注意事项与技巧
建立档案
为每个真菌标本建立档案，记 录采集信息、制作过程、保存 状态等。
交流与共享
与其他真菌分类学者或爱好者 交流、分享标本和经验，促进
学术交流和共同进步。
04
真菌分类学应用与实践
真菌在生态环境中的作用
分解有机物
真菌通过分解有机物，将动植 物残体和排泄物转化为简单的 无机物，如二氧化碳和水，促 进物质循环。
01
02
03
04
保护资源
避免过度采集和破坏生态环境 。
记录详细信息
确保记录采集的所有相关信息 ，如地点、时间、环境条件等 。
使用专业术语
在记录和描述时使用专业术语 ，确保准确性。
及时处理和保存
采集后及时处理和保存标本， 以防腐烂变质。
03
真菌标本制作方法
制作前的准备工作
选择采集工具
根据真菌的种类和生长环境，选择合适的采集工 具，如铲子、刀、镊子等。
土壤改良
某些真菌能够分解岩石，释放 出植物生长所需的营养元素， 有助于改善土壤结构和肥力。
共生关系
真菌与植物形成共生关系，如 菌根菌，帮助植物吸收水分和 营养，促进植物生长。
真菌在农业上的应用
01
02
03
有害生物控制
一些真菌能够产生抗菌或 杀虫的代谢产物，用于防 治农作物病虫害，减少化 学农药的使用。
医院真菌标本采集标准操作规程
XXXX医院真菌标本采集标准操作规程1 目的规范真菌标本采集、接种培养及鉴定标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2 适用范围各类真菌检测的标本。
3 标本采集及处理3.1 标本类型痰、尿、粪、脓液、脑脊液、血、拭子、皮屑、甲屑、气管穿刺抽取的痰液等。
3.2 标本采集与处理3.2.1 痰液、气管穿刺抽取的痰液。
3.2.2 尿液：早晨中段尿10ml，离心收沉淀液1 ml，作真菌涂片及培养。
3.2.3 口腔、咽喉、外耳道、阴道、和直肠黏膜的标本：应迅速放入内装1 ~ 2 ml无菌蒸馏水的试管送检。
常规KOH涂片及SDA培养。
3.2.4 粪便：无菌盒送检，挑取黏液、脓血接种于含氯霉素培养基上。
3.2.5 脓液：脓液标本应置无菌广口有盖玻璃瓶或小的无菌平皿中，立即送检。
3.2.6 脑脊液：采集于无菌试管3 ~ 5 ml立刻送检，离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物1 ml，作黑汁涂片镜检和培养（SDA）25℃及37℃1周。
3.2.7 血液：分别于左右两侧尢菌抽血3 ~ 5 mI，立即置于脑心浸出液肉汤。
3.2.8 体液：支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水等10ml，离心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接镜检（注意颗粒）及培养。
3.2.9 组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌研钵或组织匀浆器加2 ml蒸馏水，研磨成浆或切成1 ~ 2 mm3的小块作真菌直接镜检（KOH涂片）及培养。
3.2.10 皮屑：皮损的边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或活动边缘皮屑。
取材前用75％酒精棉球消毒取材处，标本作真菌直接镜检（KOH涂片）和培养。
3.2.11 甲屑：用细锉或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的SDA平皿，25℃ ~ 28℃培养3周，并同时作KOH 涂片。
3.2.12 毛发：取病发15根、75%酒精消毒，3 ~ 5根作直接镜检，5 ~ 10根种于SDA斜面（加氯霉素），稍划破斜面掩埋。
大型经济真菌的标本采集
大型经济真菌的标本采集1 整理和鉴定的基本方法(一)标本的采集方法和野外记录1．采集用具平底背筐或平底扁形手提筐，不同大小的厚纸盒若干个(或长方形铝、塑料饭合)若干个，小指管若干个，塑料袋若干个，木箱1—2个，液浸标本筒1—2个。
还应携带掘根器、手锯、短刀、小快刀、刀片、刨根斧、白报纸、纱布、竹制或塑料板制的号牌、棉线和细绳、钢卷尺、温度计、湿度计、测高计、酸碱度试纸、白色厚塑料布2～3块(每块5尺长)等等。
2．采集方法伞菌目、银耳目、肉座菌目、蜡钉菌目、盘菌目、腹菌类各目和一年生，多孔菌类，夏季和秋季最多，故夏、秋季是采集的适期。
但盘菌目的一些种如羊肚菌、马鞍菌和丛耳等多在春季末发生，过时即消失，因此也需及时采集。
多年生的多孔菌类一年四季均可采到，如专程采集多孔菌以春季和晚秋为宜。
采集地生菌类时，可用手轻捏基部，缓慢地将菌体转一周，然后拔出，尽量带出地下部的下部分，散去其泥土，保持其完整，不要污损各部，不要损坏其菌环和菌托；最好采集时带洁净的丝制手套以免触伤菌体。
如遇到丝膜属菌类，切勿伤其丝膜，尽量将其菌蕾、未开伞的幼体和已开伞的成熟体一齐采到。
菌盖上的附着物如落叶、小虫等也不要弹掉，菌盖上的鳞片、绒毛等要保持完整，盖缘的菌幕残片要注意保护。
有些种伞菌的菌柄在土壤中埋的很深，要用短刀或掘根器轻轻挖出，切勿损害地下部分和菌托。
有些菌柄的基部有根状菌索或绒毛，均应采全。
菌柄上的绒毛、鳞片等均要保持其完整。
腹菌类基部有菌索深入土中，要注意采取。
肉质、胶质和蜡质的标本，可轻放于漏斗状纸袋中(用光滑洁白的纸按标本大小现用现做)，菌柄向下，保持各部完整。
如正在散放孢子时可顺便取得孢子印，切勿在标本上贴手手印，放入号牌，包好，放于纸盒中。
如遇脆弱易于破损的标本或具丝膜或有菌幕残片的标本，可直接放于饭盒中，在其周围用洁净、稍干的藓类予以填充以防磨伤标本。
在稀褶黑菇和黑红菇的菌盖上可能见到小型丛生或群生的寄生菇[Asterophoralytoperdoiders S. F.Gray(Nyetalis asterophora Fr.)，要将寄生菇和寄主一同采取。
真菌检测步骤(1)
真菌检查步骤1.采集标本浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本时应注意无菌操作。
2.检查方法真菌检查的方法主要有：（1）直接涂片：为最简单而重要的诊断方法。
取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。
可用于检查有无菌丝或孢子，但不能确定菌种。
（2）墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。
医学教育|网搜集整理方法是取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，盖上盖玻片后直接镜检。
（3）涂片或组织切片染色：涂片染色可更好地显示真菌形态和结构。
革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等；瑞氏染色适用于组织胞浆菌；组织切片通常用PAS染色，多数真菌可被染成红色。
（4）培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。
标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上，置室温或37℃培养1～3周，必要时可行玻片小培养协助鉴定。
菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断，对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。
四、真菌学检验的基本技术（一）直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断方法，常用的方法有：①氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。
检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。
浮载液：A.10%~20%的KOH。
配方：氢氧化钾10～20g，蒸馏水加至100ml，待氢氧化钾完全溶解后揺匀存放在塑料瓶内，适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、粪便、组织、耵聍等的检查。
分离植物内生真菌操作流程
分离植物内生真菌操作流程1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。
（1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物拍照留用于鉴定，并做好相关记录。
（2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。
2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。
3.取样：（1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取样本，样本不要剪的太大或太小。
（2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数，尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。
（3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。
（4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。
4.表面灭菌：在无菌操作台中进行（1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。
（2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管中样本倒出，倒出的样本不要再放入其中，也不要用手碰到样本，样本不可以接触到除了离心管以外的东西。
真菌的直接检查
第 1页
1.标本的采集 浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂皮；深部真菌的标本可根据 情况取痰、尿液、粪便、脓液、多种分泌物、血液、活检组织等；头 癣可用拔毛镊子拔取脆而无光泽或带有白色菌鞘的病损部毛发；手足 癣及体股癣宜用外科圆头钝刀轻轻刮取损害部边缘或指（趾）间皮屑， 花斑癣刮取褐色的皱纹皮屑；甲癣可用小刀刮取病损指（趾）甲深层 碎屑。皮肤及指甲病损部位，若先经1∶10 000苯扎溴铵（新洁尔灭） 洗涤后再刮取标本更好。注意取到足够量的标本，同时为防止标本污 染，尽量无菌操作。
第 3页
3.显微镜检查 一般先用低倍镜检查，检查有无真菌菌丝或孢子，然后用高倍 镜观察菌丝和孢子的特征。皮屑及甲屑阳性标本常可查见分支 菌丝。毛发标本若为小孢子菌属感染，可见毛发外围有许多圆 形小孢子，以镶嵌状排列；毛癣菌属紫色癣菌或断发癣菌感染， 常可见发内有多量呈链状排列的孢子；黄癣感染，则发内常有 不规则菌丝及空泡，花斑癣菌可见香蕉形短粗菌丝及成群孢子。
第 5页
谢谢大家！
第 6页
第 4页
4.注意事项 （1）检查真菌及孢子时，应注意与各种假菌丝，如纤维、表皮 细胞间隙及气泡、油点等的鉴别。 （2）镜检找到菌丝或孢子，常可确立癣症的诊断，但1次检查 阴性结果，不能完全排除，有时须做多次检查。 （3）取材前皮损最好不要涂药。 （4）除少数菌种外，大部分真菌仅根据镜下形态不能确定菌种， 必要时可做进一步培养。 （5）采集标本应注意无菌操作。
第 2页
2.标本片制备 取标本少许于载玻片上，加1滴10%氢氧化钾溶液，覆盖一盖玻片， 置火焰上微微加热（加速角质溶化，使标本透明），待标本溶解，轻 轻加压使成薄片，驱去气泡，用滤纸吸去周围溢液。毛发标本勿加热 及加压过甚，以保持其原形，利于鉴别。亦可使用真菌染色法：取洁 净的载玻片，加染液（结晶酚20g，乳酸20ml，甘油40ml，蒸馏水 20ml，加温溶解后，加入棉蓝0.05g混匀即成）1滴，然后取培养物 或标本少许于其中，用接种针将其推匀，加盖玻片，微微加温并稍压 盖玻片除去气泡后镜检；结果真菌呈蓝色。
细菌和真菌标本的采集指南
八细菌和真菌标本的采集指南标本类型采集时间和温度重复采样限制说明原则装置和最小量转运储存脓肿用无菌盐水或70％乙醇拭去表面渗出物组织或体液优于拭子标本，如必须用拭子，采集2个，1个培养，1个做革兰氏染色。
开放性尽可能抽取或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样拭子送捡系统≤2h，常温≤24h，常温1/d/来源从脓肿底部或脓肿壁的取样，结果最好封闭性用针及注射器抽吸脓肿壁，将所有物质无菌转入厌氧转运装置厌氧送捡系统≥1ml≤2h，常温≤24h，常温1/d/感染来源取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌咬伤见脓肿不要培养≤12h的动物咬伤伤口（通常不能分离到感染性病原体，除非位于脸上或手上，或有感染的指征存在）血培养培养瓶的消毒：加70％异丙基乙醇到橡胶塞1min细菌：血培养瓶≤2h，常温≤24h，常温或按说明3套/24h急性脓毒病：10min内从不同部位采2－3套成人，5-10ml/套急性心内膜：1－2h内从3个不同部位采3套首先触摸静脉婴儿，3－5ml/套亚急性心内膜炎：从3个分离部位采3套，间隔≥15min，如24h内为阴性，要再采3套型采样限制说明原则装置和最小量转运储存血培养静脉穿刺消毒：1.用70％乙醇清洗采集体位2.使用蘸碘拭子，次女嘎中心开始呈同心圆式涂抹3.让碘制剂晾干4.不要触摸该点5.采血6.穿刺后，用乙醇将皮肤上的碘除去原因不明发热：从不同部位采2－3套，间隔≥1h，如24h内为阴性，要再采3套骨髓对穿刺一侧准备同外科切口接种血培养瓶≤24h，常温，≤24h，常温1/d少量骨髓可直接接种培养基烧伤标本采集前，先清洗和清创烧伤伤口将组织放入有旋帽的容器内用拭子取渗出物≤2h，常温≤24h，常温1/d/感染只需进行需氧培养，烧伤表面的培养可能会有误导导管1.用乙醇清洗导管周围的皮肤2.将导管末端距夹子5cm无菌移入无菌管3.直接转运微生物实验室，以防干燥无菌或有旋帽的管或杯≤15min，常温≤24h，4℃无对半定量培养，导管是可以接受的，如静脉导管（Maki法）：中心的、CVP、Hickman、Broviac、外周的、动脉的、Foley 由于培养物代表尿道末端的菌群，不要培养要求培养是不能接受的型采样限制说明原则装置和最小量转运储存蜂窝组织炎1.用无菌生理盐水或70%乙醇擦拭2.用细针头和注射器抽吸发炎的区域（一般是中心而不是边缘）3.往注射器吸入少量无菌生理盐水，将标本抽入无菌旋帽管无菌管（不要用注射器转运）≤15min，常温≤24h，常温无只有25－30%可产生潜在的致病菌CSF 1.用2%碘酒消毒采集体位2.用带L3－L4，L4－L5或L5－S1通管丝的针头插入3.进入蛛网膜下腔后，移去通管丝，采集1－2ml液体，分别放入3个防漏管无菌旋帽管所需的最小量：细菌，≥1ml真菌，≥2ml细菌：不要冷冻；≤15min，常温≤24h，常温无也可采血进行培养。
临床真菌标本的采集和处理
组织
决定性意义 组织中分离出的任何真菌都有病理意义 标本分两份，一份真菌检查，一份病理
检查 标本应放入生理盐水中，不要放入福尔
马林中。
做血清学试验标本
将体液收集在不加抗凝剂的玻璃或塑料 管中，5~10毫升即可。
测定抗真菌药物水平的标本
5~10毫升 不含抗凝剂的玻璃或塑料管中 采样时间：服药前或预定的血浓度达峰
尿液，离心，沉淀培养。
其他体液
胸水、腹水、关节腔积液应收集到含少 量灭菌肝素（1：1000）抗凝的无菌容器 中，量10毫升。
持续腹透病人，引流液用不含肝素的无 菌容器收集。
下呼吸道标本
清晨新鲜痰，无菌容器收集，2小时内送 检。4°C贮存，不超过24小时。
建议取3次标本送检。 免疫受损病人，采取支气管肺泡灌洗液
甲：尽可能从甲近端取材，包括全甲厚 度。对增厚的甲板，从下方取材。
黏膜
口腔：拭子取材，取材前应用生理盐水 或无菌水浸湿。
阴道：拭子从分泌物及阴道侧壁取材。
耳
刮屑取材较好，拭子亦可。
眼 结膜：拭子取材 角膜：菌铂制刮匙刮取溃疡部位，自溃疡的全部基底和边缘取材。同时镜检、 培养。不用拭子。 内眼：收集玻璃体液，稀释了的要离心。
阴性 肯定的致病菌 条件致病菌（部位、数量） 污染菌
指甲/头发 耳
鼻/鼻窦 阴道
推荐方法 KOH KOH KOH GRAM GRAM
尿 前列腺液
血 活检标本
粪 口腔拭子
GRAM或染色剂 KOH
溶解离心 KOH GRAM GRAM
痰
KOH
支气管肺泡液
染色、PCR
CSF
印度墨汁、GRAM
如何采集真菌标本
真菌标本采集制作1．真菌的基本特征及其分布真菌是典型的异养植物，细胞内无质体。
真菌营养体有单细胞和管形细胞两种，其中管形细胞称为菌丝。
菌丝有无隔菌丝和有隔菌丝之分，组成一个菌体的全部菌丝称为菌丝体。
大多数真菌的细胞壁由几丁质组成，部分低等真菌的细胞壁由纤维素组成。
菌丝细胞内含有原生质、细胞核、液泡等。
真菌能够营养繁殖、无性生殖和有性生殖。
真菌约有10万余种，分属于藻菌纲、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌纲。
山林、草原、田野、沙漠、庭院、江河、湖泊等地都可见到真菌踪迹。
根据真菌生境和生活方式不同可将其分为：（1）水生真菌：在水中腐生于动植物尸体上，有的寄生于动植物上，危害水中动物，如水蕾属（Saprolegnia）。
（2）地生真菌：这类真菌的种类较多，生活环境不同，庭院、公园、草原等地都可生长。
（3）木生真菌：有的寄生于活立木上，危害林中树木，形成森林病害；有的腐生于枯立木、倒木或伐木桩上，有利于清除林中垃圾，成为“林中清道夫”。
（4）病害真菌：这类真菌寄生于人、动物及各种农作物体上，使人、动物及农作物患病。
（5）共生真菌：真菌与藻类共生形成地衣；密环菌和天麻共生；接合菌、伞菌、担子菌与高等植物形成菌根。
2．真菌标本的采集制作（1）采集用具平底背筐，平底手提筐，纸盒若干个（或铝盒、小指管若干个，塑料袋若干个），木箱1～2个，液浸标本筒1～2个，掘根器，刨根器，手锯，短刀，刀片，白纸，纱布，号牌，线或细绳，钢卷尺，湿度计，温度计，pH 试纸，测高计等。
（2）采集方法空气、土壤或动植物体上的真菌多属于霉菌，采集这类真菌常用分离或纯培养方法得到。
而伞菌、多孔菌、盘菌、锈菌、黑粉菌、银耳等各种真菌的采集方法如下：①地生真菌采集：采集时用手轻轻捏住菌柄基部，缓慢将菌体旋转一周，然后拔出，尽量带出地下部分，抖掉泥土。
采集时注意保持菌体的完整性，不要损伤各部，以免给鉴定带来困难。
有些菌类的菌柄在土中埋的很深，需用刀或掘根器挖出来。
真菌分类学(标本的采集与制作)
Pholiota squarrosoides
Hericium romosum
要体现出菌物的生态象及其保持完整性
4、 采集标本
采集地生菌类时，可用手轻捏基部，缓慢地 将菌体转一周，然后拔出。 注意事项：
尽量带出地下部分，散去其泥土，保持其完整。 ② 菌盖上的附着物如落叶、小虫等也不要弹掉。 ③ 注意保护菌物的自身特点，以便日后观察。
标本采集应根据其种类特点,确 定采集地点及时期。在普查基础上先 选择真菌发生多的地方进行采集,然 后再进行补点采集。
？？？
贺兰山
扎兰屯
克一河
采集地的普查
齐齐哈尔
2、准备采集用品和用具
便携式烘干机 采集用具
1、采集层次顺序 2、记录 3、拍照 4、采集标本 5、标本的包装和标号
装入标本袋
三、标本烘干及临时的整理
1、标本烘干
便携式烘干机
2、临时的整理：
首先把标本分为四类： ① 肉质、含水多、速腐性、脆弱、易变色、 盖面黏和小型标本； ② 是肉厚、致密、坚实、含水少、缓腐性标 本； ③ 一年生多孔菌科革质、半革质、纤维质不 易腐的标本； ④ 是木质、木栓质的多孔菌类标本。
标本包装后分类装袋并做好标记
装箱
归类装箱，以便搬运过程中避免损坏标本。
四、标本鉴定
标本与采 集表一同 放入标本 盒中 标本解 剖结构 观察使 用工具
标本鉴 定使用 书籍
标本进 行鉴定
五、标本登记入库
已鉴定的标本
标本打签、登记、入库
1、采集层次顺序
采集过程按一定层次顺序进行,如树木、 枯枝、落叶层、草丛。
2、记录
蘑菇采集记录表
菇 名 中文名 俗名
真菌检验【送检】SOP--标本采集及处理课件
2h 内常温送检
4°C保存
24
眼(角膜刮片、玻璃体液等)标本采集及处理
. 角膜刮片或针吸玻璃体液。 . 15 分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。角膜刮片直接接种
至不含抑制剂的培养皿中，采用 X 或 C 型涂菌方式，玻璃体液离心后取
沉淀物接种。
15min 内常温送检
不含抑制剂的培养皿 接种培养
不能送检时，常温保存
19
无菌体液 (脑脊液、心包液、腹水和关节液) 标本处理二
. 标本大于 2ml，则 2000g 离心10 分钟，取沉渣接种。 . 若标本量少于 2ml，则将标本直接接种于培养基。
. 推荐使用细胞离心机对无菌体液进行涂片镜检。脑脊液可直接接种于血培养瓶。
离心10min
接种培养
涂片镜检
3
2. 最小抑菌浓度 MIC
按照标准操作规程进行体外真菌稀释法或连续浓度梯度稀释法药物敏感性 试验时，在特定培养时间及温度的条件下，能导致特定程度肉眼可见真菌 生长抑制的最低药物浓度。
4
3. 剂量依赖敏感 S-DD
. 给予高于常规给药剂量，且达到最大血药浓度时，临床有效。
4. 最低有效浓度 MEC
9
血液标本采集
. 推荐在抗真菌药物使用前，发热初期或寒颤期、采静脉血或骨髓液。 . 立即注入血培养瓶内并轻轻摇匀。至少采集 2 套。 . 标本与培养基比例为 1/10-1/5 (成人每瓶 8-10ml)、必须包括需氧瓶或
真菌瓶。
10
血液标本处理
. 2h 内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。
2h 内常温送检
6
6. 消化液 lysis solution
. 粘液溶解作用，用于呼吸道标本等的前处理，常用N-乙酰-L-半胱氨酸、 5%草酸或二巯基苏糖醇等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
粘
不粘
形状：钟形、斗笠形、半球形、漏斗形、平展 边缘有条纹、无条纹
块鳞、角鳞、丛毛鳞片、纤毛、疣、丝光、龟裂
菌肉 色
香
味
变色反应
菌柄 长×粗：
cm
颜色：
形状：
菌托 颜色：
形状：
附属物：
消失 不易消失
孢子印 白色 粉红色 锈色 褐色 青褐色 紫褐色 黑色
附记
.
9
3、拍照
❖ 照相必须有远距离和近距离两种镜头，应照 生态相。可在原地把蘑菇正、侧、倒和菌柄基部 以及蘑菇的纵断面排好，要保持菌幕、菌环、菌 托的完整，尽可能保持其生境，须附有编号以免 错乱。彩卷摄影更好。如现场来不及照生态相时， 可在回住地整理标本时再补照。
装入标本盒
装入标本袋
.
16
三、标本烘干及临时的整理
1、标本烘干
便携式烘干机
.
17
2、临时的整理：
首先把标本分为四类： ① 肉质、含水多、速腐性、脆弱、易变色、
盖面黏和小型标本； ② 是肉厚、致密、坚实、含水少、缓腐性标
本； ③ 一年生多孔菌科革质、半革质、纤维质不
易腐的标本； ④ 是木质、木栓质的多孔菌类标本。
.
12
5、标本的包装和标号
标本包装方法一：
蘑菇放在报纸上
两边对折
两边对折
包装成形标号
两端对折
.
两端对折
13
标本包装方法二：
蘑菇放在报纸上
两边对折
两边对折
包装成形标号
两端对折
.
两端对齐插入
14
标本包装方法三：柄长的蘑菇包装法
蘑菇放在报纸上
一角折叠、底部折叠
卷包扎
标号
丁部折叠封口
丁部折叠
.
15
标本包装方法四：
.
18
标本包装后分类装袋并做好标记
装箱
归类装箱，以便搬运过程中避免损坏标本。
.
19
标本与采 集表一同 放入标本 盒中
四、标本鉴定
标本鉴 定使用 书籍
.
标本解 剖结构 观察使 用工具
标本进 行鉴定
Байду номын сангаас20
五、标本登记入库
已鉴定的标本
.
21
标本打签、登记、入库
.
22
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
.
10
Pholiota squarrosoides
Hericium romosum
要体现出菌物的生态象及其保持完整性
.
11
4、 采集标本
采集地生菌类时，可用手轻捏基部，缓慢地 将菌体转一周，然后拔出。
注意事项： 尽量带出地下部分，散去其泥土，保持其完整。
② 菌盖上的附着物如落叶、小虫等也不要弹掉。 ③ 注意保护菌物的自身特点，以便日后观察。
大型真菌标本采集与制作
.
1
大型真菌标本制作流程
Pleurotus citrinipileatus
标本采集 准备工作
标本采集
标本烘干及 临时整理
标本登记 入库
标本鉴定
.
2
一、采集标本的准备工作
❖ 1、采集时间及采集地的选择 ❖ 2、准备采集用品和用具
Kuehneromyces mutabilis
.
.
7
1、采集层次顺序
采集过程按一定层次顺序进行,如树木、 枯枝、落叶层、草丛。
.
8
2、记录
蘑菇采集记录表
菇 名 中文名
俗名
学名
产 地 省（区） 县
海拔
m
生 境 冻原、针叶林、阔叶林、混交林、灌丛、 基物：地上、腐木、立木、粪上、
草地、草原
虫体
生态
单生 散生 群生 丛生 簇生 迭生
菌盖
大小：
cm
颜色：
3
1、采集时间及采集地的选择
标本采集应根据其种类特点,确
定采集地点及时期。在普查基础上先
选择真菌发生多的地方进行采集,然
后再进行补点采集。
？？？
.
4
贺兰山
采集地的普查
克一河
.
扎兰屯
齐齐哈尔
5
2、准备采集用品和用具
采集用具
便携式烘干机
采集框
采集标本盒
培养基
.
6
二、标本的采集
❖ 1、采集层次顺序 ❖ 2、记录 ❖ 3、拍照 ❖ 4、采集标本 ❖ 5、标本的包装和标号