排石颗粒中总黄酮的含量测定

实训二十二排石颗粒中总黄酮的含量测定

一、实训目的：

1.掌握紫外-可见分光光度法（标准曲线法）含量测定的一般操作步骤和技能。

2.理解标准曲线法含量测定的原理。

3.了解本测定法的设计思路。

二、检验依据

1.排石颗粒药品标准 [《中国药典》2005年版（一部）正文部分594页]

【处方】连钱草车前子（盐炒）关木通徐长卿石韦瞿麦忍冬藤滑石苘麻子甘草

【含量测定】

对照品溶液的制备精密称取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品20mg,置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度,摇匀,即得（每

1ml含无水芦丁0.2mg）。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加50％甲醇至5ml，加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液

4ml，再加50％甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-分光光度法（附录ＶA），在510nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法取本品装量差异项下的内容物，研细，取5g或1g(无糖型)，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇100ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml量瓶中,加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50％甲醇至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算，即得。

本品每袋含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于0.12g。

2.紫外-可见分光光度法[《中国药典》2005年版（一部）附录Ⅴ A]

三、检验原理

本实验以无水芦丁为对照品，通过配制成不同浓度的系列溶液，加5％亚硝酸钠溶液和10％硝酸铝溶液，再加氢氧化钠试液显色，以相应的溶液为空白，照紫外-分光光度法（《中国药典》附录ＶA）测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。将供试品依法处理，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中以芦丁计总黄酮的浓度，并计算出排石颗粒中总黄酮的含量。

四、仪器与试剂

紫外分光光度计、石英吸收池、量瓶（10ml、100ml、500 ml）、吸量管（1ml、5ml）、干燥箱、分析天平（感量0.0001g）、具塞锥形瓶、滤纸等。

甲醇、芦丁对照品、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、排石颗粒等

五、实训内容与步骤：

1.对照品溶液制备在100ml量瓶中，用分析天平（感量0.0001g）精密称取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品20mg，称量范围0.0195～0.0205g，加50％甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.195～0.205mg）。

2.标准曲线的制备用用移液管精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、

3.0ml、

4.0ml、

5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加50％甲醇至5ml，用用移液管加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟；加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟；加氢氧化钠试液4ml，再加50％甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-分光光度法（《中国药典》附录ＶA），在510nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程A=a+bC 和相关系数r。

3.供试品溶液制备取本品装量差异项下的内容物，研钵研细，取5g或1g(无糖型)，用分析天平（感量0.0001g）精密称定，称量范围

4.5000～

5.4000g，或0.6000～1.4000g(无糖型)，置锥形瓶中，用移液管精密加入甲醇100ml，用分析天平（感量0.0001g）称定重量（保留四位有效数字），超声处理20分钟，溶解，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，得样品溶液。用移液管精密量取样品溶液25ml，置50ml量瓶中,加水至刻度，摇匀，用移液管精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，

摇匀，作为空白对照液。

另用移液管精密量取上述样品溶液2ml ，置10ml 量瓶中，加50％甲醇至5ml ，用移液管加5％亚硝酸钠溶液0.3ml ，摇匀，放置6分钟；加10％硝酸铝溶液0.3ml ，摇匀，放置6分钟；加氢氧化钠试液4ml ，再加50％甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

4.上机测定 立即将空白对照液和供试品溶液置紫外分光光度计中，在510nm 波长处测定吸光度（A 供）,记录测量数据。

5.含量计算

（1）将回归方程转变成下列浓度计算公式，再将A 供代入即可计算出供试品溶液中以芦丁计总黄酮的浓度C 供（ mg/ml ）。

C 供（mg/ml ）=（A 供－a ）/b

（2）按下式计算药品中总黄酮的含量（g/袋）

【操作要点】

①《中国药典》凡例精确度项下规定：恒重，除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg 以下的重量；干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30分钟后进行。

②实验中加亚硝酸钠溶液和硝酸铝溶液后要摇匀，并按规定时间充分放置，否则反应不完全会影响测量结果。

③由于供试品溶液显色后稳定性较差，故需立即上机测定。 ④其他操作要点参照本章紫外-可见分光光度法中的“注意事项”。 六、结果判断

将测定结果与药品标准规定比较，若在限度范围之内则判定符合规定。 七、实训思考

（1）实验中加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液和氢氧化钠溶液的目的是什么？ （2）为什么在510nm 的波长处测定吸光度？

八、实训测试

含量（g/袋）= C 供（g/ml ）×10-3×稀释倍数×V 样（ml ）×平均装量（g/袋）

W 样（g ）