标签蛋白手册中文版 (1)
SPRED1蛋白使用说明书
Instruction manual本产品仅供研究使用，不用于临床诊断。
本公司提供的电子版本说明书仅供参考，实验请以收到的纸质手册为准。
SPRED1, 1-444aa, Human, His tag, E.coli产品货号: TP04022第三版别名:Sprouty-related, EVH1 domain-containing protein 1, hSpred1, NFLS, spred-1描述:SPRED1 is a member of the Sprouty family of proteins and is phosphorylated by tyrosine kinase in response to several growth factors. This protein can act as a homodimer or as a heterodimer with SPRED2 to regulate activation of the MAP kinase cascade. Defects in this gene are a cause of neurofibromatosis type 1-like syndrome (NFLS). Recombinant human SPRED1 protein, fused to His-tag at N-terminus, was expressed in E.coli.配方:Liquid. In 20mM Tris-HCl (pH 8.0) containing 10% glycerol分子量:52.9 kDa (467aa)序列: MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMGSMSEETATSDNDNSYARVRAVVMTRDDSSGGWLPLGGSGLSSVTVFKVPHQEENG CADFFIRGERLRDKMVVLECMLKKDLIYNKVTPTFHHWKIDDKKFGLTFQSPADARAFDRGIRRAIEDISQGCPESKNEAE GADDLQANEEDSSSSLVKDHLFQQETVVTSEPYRSSNIRPSPFEDLNARRVYMQSQANQITFGQPGLDIQSRSMEYVQRQIS KECGSLKSQNRVPLKSIRHVSFQDEDEIVRINPRDILIRRYADYRHPDMWKNDLERDDADSSIQFSKPDSKKSDYLYSCGDE TKLSSPKDSVVFKTQPSSLKIKKSKRRKEDGERSRCVYCQERFNHEENVRGKCQDAPDPIKRCIYQVSCMLCAESMLYHC MSDSEGDFSDPCSCDTSDDKFCLRWLALVALSFIVPCMCCYVPLRMCHRCGEACGCCGGKHKAAG纯度:> 95% by HPLC浓度:0.5 mg/ml (determined by Bradford assay)内毒素:<1.0 EU per 1 ug of protein (determined by LAL method)存储: +4°C 保存 (1-2 周). 长期保存在-20°C或者-70°C. 避免反复冻融.1 / 1。
常见tag蛋白标签介绍讲课讲稿
常见t a g蛋白标签介绍蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。
随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。
目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。
美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag™、Halo Tag™、AviTag™、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。
•标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；•His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
•可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
•融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
GE组氨酸标签蛋白纯化手册
%0.120.0组氨酸标签蛋白的纯化GE 生命科学部填料应用部简介组氨酸标签被广泛的使用，因为它们小，几乎不干扰靶蛋白的功能、活性和结构。
固定的金属离子亲和层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白的最常用方法。
二价金属离子螯合到亲和填料上，还可以与组氨酸等氨基酸以配位键结合，从而快速的纯化出标签蛋白。
由于宿主蛋白也存在组氨酸和/或半胱氨酸氨基酸残基，其它的非特异蛋白与靶蛋白一起与金属离子亲和层析柱料发生结合，造成纯化样品纯度不高，在这种情况下，上样咪唑的浓度提高，换Co 2+离子亲和或者加多一步分子筛技术都是很好的解决方法。
一、his 标签蛋白的纯化工具Ni Sepharose FF 和Ni Sepharose HP具有高载量，达到40mg/ml 填料。
低Ni 离子脱落，在低浓度的还原剂存在下，脱落<5%。
无需每次重新螯合上Ni 2+。
选择在样品缓冲液和平衡液中加入20mM-40mM 的咪唑能大大提高样品的洗脱纯度。
1: Start material2: Eluate HisTrap FF crude 3: Eluate Superdex 75pg图1. 两步纯化，得到高纯度的his 标签蛋白TALON Superflow比Ni 亲和结合力弱，容易洗脱，带来更高的纯度。
结合缓冲液: 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl, pH7.4清洗缓冲液: 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 5 mMimidazole, pH 7.4洗脱缓冲液:50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 150mM imidazole, pH 7.4图2.用预螯合Co 2+的TALON 预装柱纯化标签蛋白HisTrap™FFcrude/HiTrap™TALON crude1ml/5ml---直接结合未澄清的样品分钟时间。
常见蛋白质标签
常见蛋白质标签总结2008-12-08 22:06Protein tags are peptide sequences genetically grafted onto a recombinant protein. Often these tags are removable by chemical agents or by enzymatic means, such as proteolysis or intein splicing. Tags are attached to proteins for various purposes.一、氨基酸标签（含小肽标签）A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of the labelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either end of the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding.组氨酸标签（His tag）一般为6个组氨酸，用Ni2+ （Cu2+）亲和层析纯化FLAG tag ：N-DYKDDDDK-C ，recovered with specific antibodyHA tag：an epitope derived from the Influenza protein haemagglutinin (HA，禽流感病毒血凝素)，e.g. N-YPYDVP-C，recovery with an HA antibodyMYC tag：an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC，e.g.N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C，recovery with an MYC antibodySBP tag：Streptavidin Binding Peptide，链霉亲合素结合肽，38 amino acid tag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)，更多参考在SigmaCBP tag：钙调蛋白结合肽（CBP; 26aa）钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖的，这种结合不受标签所处的位置影响（N端和C端均可），在中性pH条件下使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。
c-Myc标签Co-IP试剂盒中文说明
23620描述ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit 包含了足够25个与c-Myc –标签蛋白IP或Co-IP的成分，包括10个c-Myc –标签阳性对照的实验试剂盒成分：Immobilized Anti-c-Myc, 62.5 g固定的珠状琼脂加上125g 抗体，以含25%的溶液和0.1%叠氮钠的PBS 的形式提供(总体积为250ul)。
BupH™ Tris Buffered Saline Pack,一个包装，用500 ml超纯水稀释后，溶液成分为25 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.2Elution Buffer, 50 ml, pH 2.8Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer (5X), 5 ml, 包含0.3 M Tris•HCl, pH 6.8, 5% SDS, 50% 甘油, 电泳指示剂。
Handee™ Spin Columns Accessory Pack, 含提前放置好的玻璃原料，顶盖和底盖的27Collection Tubes and Caps Accessory Pack, 100 有刻度的2 ml 管子和塞盖c-Myc-tagged Positive Control, 500ul，1 mg/ml E. coli 提取的包含c-Myc-标签GST（古胱氨酸S-转移酶）储藏: 收到后，将c-Myc-标签阳性对照放在-80度冰箱，（在-20度可放6个月），将其他所用到的成分放在4度，c-Myc-标签阳性对照用干冰运输。
注意：ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit是ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Application Set (23622) 和c-Myc-tagged Positive Control (23633)的联合体。
介绍ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit与用蛋白A/G琼脂糖的IP方法相比，传统的提供了一个简单快速的方法来研究c-Myc-标签蛋白。
GE蛋白质纯化手册——中文——高段武学
蛋白质纯化
手册
imagination at work
Handbooks from Amersham Pharmacia Biotech
Antibody Purification Handbook 18-1037-46
The Recombinant Protein Handbook Protein Amplification and Simple Purification 18-1142-75
蛋白质纯化
手册
目录
前言................................................................................................6
第一章 纯化策略-- 一个简单的方法 ..............................................................................................................................................7 样品准备 ......................................................................................................................................................................................8 三步纯化策略 ..........................................................................................................................................................................8 蛋白质纯化的总体指导原则 .............................................................................................................................................10
His标签蛋白纯化亲和层析介质-纳微
His标签蛋白纯化亲和层析介质使用说明书Uni®IDA-80NiUni®NTA-80NiUni®IDA-80LUni®NTA-80L全国咨询热线：400-828-1622苏州纳微科技有限公司中文网站：English Website: /E-mail：info@公司总部地址：苏州工业园区百川街2号苏州中国通用缩略术语：280 nm：在指定波长的紫外吸收M：物质的量的浓度单位，mol/l的简写mM: 物质的量的浓度单位，mmol/l的简写BV：柱体积，bed volume的简写Mr：相对分子量MPa：兆帕斯卡Bar：压强单位，工程上“公斤力”的单位psi：压强单位，磅每平方英寸压强单位之间换算：1 MPa = 10 bar ≈ 145 psi索引目录1. 标签蛋白纯化亲和层析产品简介 (4)2. 层析纯化操作步骤 (4)2.1 层析柱装填 (4)2.2 柱效评价 (5)2.3 清洗 (5)2.4 平衡 (5)2.5 金属螯合 (5)2.6上样 (6)2.7洗脱 (6)2.8 再生 (6)2.9 在位清洗 (6)3. 储存 (7)4. 故障排除 (7)5. 订购信息 (8)1.标签蛋白纯化亲和层析产品简介重组蛋白的富集和纯化一般采用已知大小的标签，通过重组表达之后，利用标签和填料的特异性相互作用，达到分离纯化效果。
固定金属离子或金属螯合亲和层析（MAC）利用蛋白表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和固定在层析介质上的过渡金属离子（Ni2+，Cu2+，Zn2+，Co2+，Fe3+等）以配位键结合，从而实现对不同标签蛋白质的分离。
影响蛋白质与金属离子鳌合作用大小的因素，主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。
固定金属离子亲和层析介质具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于生物制药和生物制品的下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记(His-Tag)蛋白质的分离纯化。
CD0中文手册
激光器标签，后面板
序列号标签，后面板 CE 标签，后面板
警告：为120伏电压进行的设
置
如需使用其他线路电压进行操作时，请参阅操作手册中的详细说明。
PN 9230003
电压标签，后面板
小心：除非采取了相应的保护措施，否则不要处理溶液容器。
有关安装程序请参阅操作人员手册。
PN 9230334
溶液容器标签，后面板
注意：在本手册中这些标签多用图形形式表示。
如何使用本手册
概述
本操作手册对使用与维护CELL-DYN 3200系统进行了完整的说明。
本手册的目的是为了满足下列需要：从对操作过程进行逐一说明，到辅件编号的列表。
在您学习使用本系统时，本手册会为您提供很大的帮助，在以后的使用过程中也会为您提供实质性的参考。
1级激光器产品
PN 9230702。
常见蛋白质标签总结
常见蛋白质标签总结（Flag、HA、cMyc、CBP等）Protein tags are peptide sequences genetically grafted onto a recombinant protein. Often these tags are removable by chemical agents or by enzymatic means, such as proteolysis or intein splicing. Tags are attached to proteins for various purposes.一、氨基酸标签（含小肽标签）A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of the labelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either end of the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding.1.组氨酸标签（His tag）一般为6个组氨酸，用Ni2+（Cu2+）亲和层析纯化2.FLAG tag ：N-DYKDDDDK-C ，recovered with specific antibody3.HA tag： an epitope derived from the Influenza protein haemagglutinin(HA，禽流感病毒血凝素)，e.g. N-YPYDVPDYA-C，recovery with anHA antibody4.MYC tag： an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC，e.g.N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C，recovery with an MYCantibody5.SBP tag：Streptavidin Binding Peptide，链霉亲合素结合肽，38 amino acidtag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)，更多参考在Sigma6.CBP tag：钙调蛋白结合肽（CBP; 26aa）钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖的，这种结合不受标签所处的位置影响（N端和C端均可），在中性pH条件下使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。
蛋白标记标签与标签抗体介绍
何为蛋白标记标签？
为了对目的蛋白的功能/定位或三维结构等方面进行研究，需要使用生物体内各种蛋白质的抗体来研究目的蛋白的定位 和表达水平，或对目的蛋白进行纯化。但是，通常并不一定能够获得针对目的蛋白的特异性抗体。因此，我们可以利 用基因工程技术对目的蛋白进行标记（标签）使其在生物体内表达，以此来区分目的蛋白与其他类似蛋白质。
标签的分类
1、多肽标签
标签：DDDDK（FLAG®） 来源：人工序列 大小（肽序列）：8个氨基酸（1.0 kDa）（DYKDDDDK等ห้องสมุดไป่ตู้ 特征：即FLAG®（SIGMA），是一种非常有名的肽标签。
标签：6×His 来源：人工序列 大小（肽序列）：6个氨基酸（0.8 kDa）（HHHHHH） 特征：可以使用镍柱等金属螯合柱进行蛋白质纯化，要进行 低成本的大量纯化时，推荐使用此标签。使用镍柱时，还可 以纯化经过尿素或盐酸胍变性的蛋白质。
标签：V5
标签：S
来源：病毒
来源：人类胰脏 RNase A
大小（肽序列）：14个氨基酸（1.4 kDa）（GKPIPNPLLGLDST） 大小（肽序列）：15个氨基酸（1.7 kDa）（KETAAAKFERQHMDS）
特征：来源于猿猴病毒5（simian virus 5,SV5）的P蛋白和V蛋 特征：S-tag与S蛋白紧密结合，并作为核糖核酸酶S发挥功能。
标签：HSV 来源：病毒 大小（肽序列）：11个氨基酸（1.2 kDa）（QPELAPEDPED） 特征：来源于单纯疱疹病毒（herpes simplex virus）包膜中的多肽 序列。
标签：CBP（钙调蛋白结合肽） 来源：兔 大小（肽序列）：26个氨基酸（3.0 kDa） （KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL） 特征：由于钙调蛋白结合肽（CBP）在有钙的情况下与钙调蛋白紧 密结合，所以在使用钙调蛋白进行亲和纯化时可以实现强效洗脱， 并且可以抑制非特异性吸附。此外，在大肠杆菌中不存在与钙调蛋 白发生相互作用的蛋白质，因此可以纯化出高纯度的蛋白质。
Expi293操作手册-中文-2023版 (1)
Expi293操作手册-中文-2023版 (1)介绍本操作手册为Expi293细胞培养和瞬时转染系统的使用指南。
Expi293是一种高效的哺乳动物细胞表达系统，广泛应用于蛋白质表达和病毒产生领域。
本手册介绍了Expi293细胞的培养条件、瞬时转染步骤以及常见问题的解决方法，旨在帮助用户更好地使用该系统。
Expi293细胞的培养条件Expi293细胞是从HEK 293细胞中选育出的一种高效表达细胞系，其培养条件与传统的293细胞类似。
以下是Expi293细胞的培养条件：1.培养基：使用Expi293细胞培养基，添加适量的追加物（如GlutaMAX和Penicillin-Streptomycin）。
2.温度：在37℃的无二氧化碳孵育箱中培养。
3.CO2浓度：无需二氧化碳供应。
4.培养容器：使用无菌的培养皿或培养瓶，根据实验需求选择适当的大小。
5.细胞密度：最佳的细胞密度可在1-2×10^6细胞/ml之间。
注意事项：•细胞需要定期传代，以确保细胞的健康生长。
•培养过程中应避免细菌和真菌的污染。
•严格按照实验室的无菌操作规范进行培养。
Expi293瞬时转染步骤瞬时转染是Expi293系统中用于将目标DNA导入细胞的关键步骤。
下面是一般的Expi293瞬时转染步骤：1.除去旧的培养基：在转染前，用无菌的PBS缓冲液或培养基去除细胞的旧培养基。
2.制备转染复合物：将目标DNA与转染试剂（如聚乙烯醇）混合，形成转染复合物。
3.添加转染复合物：将转染复合物缓慢地滴加到细胞上，确保转染复合物均匀分布。
4.孵育细胞：将转染后的细胞放回培养箱中，继续在37℃下孵育。
5.收获表达产物：根据实验的要求，在适当的时间点收获细胞，检测目标蛋白的表达水平。
注意事项：•转染复合物的制备应按照厂家提供的说明书进行。
•孵育时间和表达产物的收获时间应根据实验设计来确定。
常见问题解决方法1.细胞生长缓慢：可能是由于细胞密度过高或培养条件不适当所致。
Ni-NTA superflow cartridge手册 中文版
Ni-NTA Superflow Cartridge 手册用于手动或FPLC纯化His-tag蛋白目录：包装内容物（4）储存和稳定性（4）安全措施（4）介绍（7）Ni-NTA Superflow Cartridge说明书（7）QIA表达系统（7）Ni-NTA Cartirdge 接头（14）天然或变性条件下纯化蛋白（15）说明书⏹天然条件下清澈的E.coli菌液的制备（16）⏹变性条件下清澈的E.coli菌液的制备（18）⏹从E.coli细胞制备6XHis-tag的胞质蛋白（19）⏹天然条件下从昆虫细胞中制备细胞菌液（20）⏹使用注射器手动纯化6XHis-tag蛋白（21）⏹使用自动层析系统纯化6XHis-tag蛋白（22）问题的解决（23）附录A：Buffer成分（25）附录B; Ni-NTA Superflow Cartridge的清洁与再生（27）包装包含物Cat no. Ni-NTA Superflow Cartridge（1）Ni-NTA Superflow Cartridge（5）说明书30721 5 1 30725 100 1 30760 1 1 30761 5 1 30765 100 1技术支持在QIAGEN，我们为我们的技术支持的质量和有效性而感到骄傲我们的技术部门是由有广泛实验经验的技术人员和专家组成的，他们都从事分子生物学而且熟练使用QIAGEN的产品。
如果您有任何问题或实验中遇到困难关于Ni-NTA SuperflowCartridge或QIAGEN的产品，请尽快联系我们。
QIAGEN用户是我们改进和专业化产品的主要信息来源。
这些信息对于我们的科研人员与其他的科学家一样重要。
因此您如果有什么关于产品的建议或新的需要和技术等等请尽快联系我们。
对于技术支持和更多的信息请联系QIAGEN的技术服务部或者当地经销商储存和稳定性Ni-NTA Superflow Cartridge应该储存在2-8度。
标签蛋白的名词解释
标签蛋白的名词解释标签蛋白（Tag protein）是一类具有特定功能和特点的蛋白质。
它们被广泛应用于生物学领域的研究中，作为对其他蛋白质的识别和标记工具。
通过标签蛋白，科学家们可以更加方便地追踪、纯化和分析目标蛋白质，从而深入研究其功能和调控机制。
标签蛋白的应用领域非常广泛。
在基础研究中，科学家们常常需要纯化特定的蛋白质，以进一步探究其在细胞内的功能和通路。
传统的蛋白质纯化方法繁琐且耗时，而引入标签蛋白则可以极大地简化这个过程。
在目标蛋白质的基因序列中，科学家们可以插入编码标签蛋白的DNA序列，从而将两者融为一体。
在蛋白质的表达和纯化过程中，利用标签蛋白的特点，可以通过亲和层析或其他特定的结合方法，高效地从其他蛋白质混合物中纯化出目标蛋白质。
这种方法不仅迅速，而且可以高效地获取目标蛋白质，为后续的研究提供了可靠的样品。
标签蛋白具有多种不同的类型和结构。
其中，最常用的是序列标签蛋白。
这类标签蛋白通过在目标蛋白的N-或C-端附加一段特定的肽链序列，实现与其他蛋白质的结合。
例如，多肽序列His6被广泛应用于蛋白质纯化中。
由于镍离子与His6序列有极强的亲和力，因此可以将目标蛋白结合到含有镍离子的树脂上，然后通过洗脱等步骤将目标蛋白纯化出来。
此外，Streptavidin标签和Glutathione S转移酶标签等也是常用的序列标签蛋白，它们通过特异性的结合与分离方法进一步扩展了标签蛋白的适用范围。
除了序列标签蛋白，还有定性标签蛋白和荧光标签蛋白等。
定性标签蛋白是指通过改变目标蛋白的肽链序列，使其能够与其他分子特异性结合，进而将目标蛋白本身在细胞中定位或与其他蛋白质相互作用的结构域纯化出来。
荧光标签蛋白则是在目标蛋白的肽链序列中引入荧光染料（如绿色荧光蛋白-GFP），使得目标蛋白可以在活细胞或标本中通过荧光显微镜直接观察到。
这种方法不需要特殊染色或抗体检测，直观地展示了目标蛋白在细胞中的位置和动态变化。
(2021年整理)LAMMPS手册-中文版讲解
（完整）LAMMPS手册-中文版讲解编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（（完整）LAMMPS手册-中文版讲解）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为（完整）LAMMPS手册-中文版讲解的全部内容。
LAMMPS手册—中文解析一、简介本部分大至介绍了LAMMPS的一些功能和缺陷。
1．什么是LAMMPS？LAMMPS是一个经典的分子动力学代码，他可以模拟液体中的粒子,固体和汽体的系综。
他可以采用不同的力场和边界条件来模拟全原子，聚合物，生物,金属，粒状和粗料化体系。
LAMMPS可以计算的体系小至几个粒子，大到上百万甚至是上亿个粒子.LAMMPS可以在单个处理器的台式机和笔记本本上运行且有较高的计算效率,但是它是专门为并行计算机设计的。
他可以在任何一个按装了C++编译器和MPI的平台上运算，这其中当然包括分布式和共享式并行机和Beowulf型的集群机。
LAMMPS是一可以修改和扩展的计算程序，比如,可以加上一些新的力场，原子模型，边界条件和诊断功能等。
通常意义上来讲，LAMMPS是根据不同的边界条件和初始条件对通过短程和长程力相互作用的分子，原子和宏观粒子集合对它们的牛顿运动方程进行积分。
高效率计算的LAMMPS通过采用相邻清单来跟踪他们邻近的粒子。
这些清单是根据粒子间的短程互拆力的大小进行优化过的,目的是防止局部粒子密度过高.在并行机上,LAMMPS采用的是空间分解技术来分配模拟的区域，把整个模拟空间分成较小的三维小空间,其中每一个小空间可以分配在一个处理器上.各个处理器之间相互通信并且存储每一个小空间边界上的"ghost”原子的信息.LAMMPS(并行情况）在模拟3维矩行盒子并且具有近均一密度的体系时效率最高。
His-tag 蛋白纯化磁珠-说明书
Service@
400-600-3979
BeaverBeads TM 金属离子螯合磁珠纯化组氨酸标签蛋白操作流程
细胞(菌体) 粗蛋白样品 重悬，裂解 + 加入Buffer A 3.目标蛋白结合 重悬后 翻转混合 30min 磁性分离
1.样品处理
2.磁珠预处理
4.磁珠洗涤
收集上清
目标蛋白量 2mg 样品体积 ~10 mL 5％磁珠悬液用量 1～2mL
产品特性
1. 基本信息
产品名称 货号 磁珠粒径范围 螯合金属离子 金属离子密度 蛋白结合量 注1 工作温度 储液浓度 保存液 保存温度 BeaverBeads Nickel 镍离子螯合磁珠 71205，71225，71275 Ni 2+ ~40 mg/mL（100％磁珠）
User Manual
BeaverBeads™ His-tag Protein Purification
海狸金属离子螯合磁珠是专为高效、快速纯化组氨酸标签蛋白而设计的一种新型功能化材料，可通过 磁性分离方式直接从生物粗样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效 率，适合科研和工业领域便捷地进行组氨酸标签蛋白的纯化工作。 与传统的柱层析纯化方式相比，采用海狸磁珠纯化组氨酸标签蛋白，无需对粗蛋白样品进行多次长时 间的高速离心，也不需要过滤操作；样品与磁珠的特异性结合、洗涤和目标蛋白洗脱也变得非常简 单、快速、易操作，无需控制流速，更不需要昂贵的层析设备。对于熟练的操作者来说，在一小时内 就能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现多样品平行处理，实现高通量蛋白纯化。 本产品系列包括镍离子（Nickel）、钴离子（Cobalt）和铜离子（Copper）共三种金属离子的螯合磁 珠，它们在目标蛋白载量和非特异性吸附等性能上有所区别，用户可根据目标蛋白与不同种类金属离 子的结合性能，以及对目标蛋白的产量和纯度的要求，选择不同种类的金属离子螯合磁珠。具体产品 信息和规格参考本说明书的《相关产品信息表》。
BiotinLabelingKit-NH2（1mg）技术手册
Biotin Labeling Kit - NH2(1 mg) 技术手册产品描述Biotin Labeling Kit - NH2主要用于制备生物素标记的蛋白质，用于酶免疫分析(EIA)。
NH2 -Reactive Biotin是试剂盒成分之一，它含有琥珀酰亚胺基(NHS)，能轻易地与蛋白质或其他分子的氨基反应。
该试剂盒中的过滤管可用于除去干扰标记反应的小分子。
整个标记过程十分简便。
只需将NH2 - Reactive Biotin加入到IgG溶液中，37 ℃培养10分钟即可。
过量的生物素分子能够使用过滤管将其除去。
该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括储存缓冲液。
试剂盒内含NH2 - Reactive Biotin ··········1管WS Buffer···············13 ml x 1Reaction Buffer············ 1.2 ml x 1Filtration Tube ·············1管15 ml Tube（用于平衡）········1管适用范围一个样品标记样品需求：分子量>50,000，具有反应性的氨基储存条件储存于0-5 ℃，未开封试剂在0-5 ℃能稳定保存6个月＊一旦密封铝箔袋打开，请确保使NH2 - Reactive Biotin保存在铝箔袋中，并在-20 ℃下紧闭袋口。
标签蛋白介绍
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。
特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：His6：His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。
组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak 序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
One-Step Western His-Tag 产品说明书
One-Step Western TM His-Tag KitTechnical Manual No. 0207 Version 03282008I Description (1)II Kit Contents (2)III Applications (2)IV Key Features (2)V Storage (2)VI One-Step Western TM Protocol (2)VII Examples (3)VIII Troub leshooting (4)IX Ordering Information (4)X References (4)I. DESCRIPTIONThe One-Step Western TM His-Tag Kityields a journal-quality western blot inabout one hour. Using GenScript'sbreakthrough immunodetection technology(patent pending), the kit replaces theclassical three-step western process, whichcan take nearly five hours. Transfer theproteins from gel to membrane andincubate it in the pretreat solution for fiveminutes. Then incubate in WB solution for40 minutes, and lastly, wash three times forfive minutes each. The membrane is thenready for development. The One-StepWestern™ procedure is contrasted with aclassical western at right.This kit can detect (His)4 or (His)5 or (His)6tags fused to any part of the relevantprotein, the N-terminus, C-terminus, oranywhere in between. Occasionally,protein folding may prevent access to anddetection of the His-tag. Treatment of themembrane with 3 M thiocyanate1mayexpose the His-tag.The One-Step Western TM His-Tag Kitcontains all the necessary reagents,buffers, nitrocellulose membrane and HRPsubstrate for performing Western or Dotblot. Neither primary nor a secondaryantibody is needed. A sensitivechemiluminescent substrate is alsoincluded for HRP signal development.Figure 1. Overview of Western Procedure.II. KIT CONTENTSEach kit contains enough reagents for 10 mini gel (7.5 x 8 cm) Western blot (or Dot blot) detections.III. APPLICATIONSOne-Step Western TM His-Tag Kit enables the fast Western-blot or Dot-blot for the applications such as: ∙ Detection of His-tagged proteins∙ Confirmation of His-tagged protein expression∙ Screening of His-tagged protein expression for optimizationIV. KEY FEATURES◆Easy to perform: Fewer steps mean fewer chances for human error.◆High sensitivity and low background: The kit is optimized to give strong signal and low background.◆Reproducible results: The kit produces highly reproducible results.◆Excellent linearity.◆Needs no optimization.◆Neither a primary antibody nor a secondary antibody is needed.V. STORAGEStore WestClear TM Nitrocellulose Membrane at room temperature. Store the rest of the kit at 4︒C. It will remain stable for three months. Do not freeze the kit or any of its components.VI. ONE-STEP WESTERN TM HIS-TAG KIT PROTOCOLThis procedure is optimized for a sheet of 7.5 x 8 cm membrane. The volumes of the reagents can be scaled up or down according to the size of the membrane. Use this kit after transferring proteins from gel to membrane.Before use, prepare the following:1. Gently invert each solution bottle several times to mix well.2. Dilute 12.5 ml of 10X wash solution with 112.5 ml of distilled or filtered water to make a 1X wash solution,use 20 ml for each rinse or wash. If any precipitate forms in 10X wash solution during storage, incubate the bottle in warm or hot water bath (up to 50°C) with occasional mixing until all the precipitate disappear.Dilute the buffer with ddH2O to 1X and store it at 4°C.3. Mix 10 ml of pretreat A solution with 10 ml of pretreat B solution just before use in a plastic container suchas Western Wash Box (GenScript, M00100) to make the pretreat solution mixture.Western or Dot blot procedure:Do not wash the membrane after transferring the proteins from the gel. Proceed directly to the steps below.1. Incubate the membrane in the pretreat solution mixture (fresh mixture of pretreat A and pretreat B) on ashaker for five minutes at room temperature. Do not incubate the membrane for more than 15 minutes.After incubation, rinse the membrane with 20 ml of 1X wash solution two times.2. Incubate the membrane from step 1 with the WB solution on a shaker for 40 minutes at roomtemperature.3. Rinse the membrane once with 20 ml of 1X wash solution. Then wash the membrane on a shaker threetimes for five minutes each with 20 ml of 1X wash solution. Use a clean container for each rinse andwash step to avoid carryover contamination and to reduce background.4.Mix 3 ml of LumiSensor TM reagent A with 3 ml of LumiSensor TM reagent B to make the working solution(0.1 ml/cm2). Drain off the excess wash solution from the membrane by holding it vertically with forcepsand touching the edge against a tissue. Place the membrane on clean, flat surface, and cover themembrane with the working solution.5.Incubate for three minutes at room temperature. Place the membrane on a clean tissue. Use a softclean tissue to remove excess working solution. Wrap the membrane in a clean piece of plastic film.6.Expose to a sheet of film for 30 seconds and develop the film. Repeat this step with different exposuretimes to get the best results.VII. EXAMPLESWestern blot detection of His-tagged protein markersFigure 2. Western blot detection of 6xHis Protein Ladder (Qiagen, Cat. No. 34705) using the One-Step Western TM His-Tag Detection Kit L00212. 10 μl, 5.0 μl, 2.5 μl, 1.3 μl, and 0.6 μl of the 6xHis Protein Ladder (reconstituted in 250 μl 1X SDS-PAGE sample buffer as suggested by Qiagen) were loaded in Lane 1, Lane 2, Lane 3, Lane 4, and Lane 5, respectively. The blot was developed with LumiSensor TM system included in the kit. Picture A above was given an exposure time of 30 seconds and picture B 60 seconds.In Lane 5, where 0.6 μl of the 6xHis Protein Ladder was loaded, 12.5 ng of 50 kDa His-tagged protein was cleanly detected.VIII. TROUBLESHOOTINGIX. ORDERING INFORMATIONOne-Step Western TM His-Tag Kit: Cat. No. L00212X. REFERENCES1. Jin, L., Wei, X., et al. (1995). Use of alpha-N,N-bis[carboxymethyl]lysine-modified peroxidase in immunoassays. Anal. Biochem. 229:54-60.Patent Pending. For Research Use Only.Limited Use Label license: This product may be the subject of one or more patents filed by GenScript Corporation. The purchase of this product conveys to the buyer the non-transferable right to use the purchased amount of the product and components of the product in research conducted by the buyer (whether the buyer is an academic or for-profit entity). The buyer cannot sell or otherwise transfer (a) this product (b) its components or (c) materials made using this product or its components to a third party or otherwise use this product or its components or materials made using this product or its components for any Commercial Purposes. For commercialuse,******************************************.GenScript Corporation120 Centennial Ave., Piscataway, NJ 08854Tel: 732-885-9188, 732-885-9688Fax: 732-210-0262, 732-885-5878Email: ******************Web: 。
标注蛋白说明
从 2 个桑椹蛋白质的2－DE凝胶中，切取差异表达的45个蛋白斑点，经胶内酶切、质谱分析及数据库检索，结果成功鉴定了其中的38个蛋白斑点。
在对照与感病桑椹中，38个差异表达蛋白斑点上调表达17个，下调表达21个。
下调蛋白为，光合作用：景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶，Protease Do-like 1，核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶，碳酸酐酶1，表达翻译：核糖体蛋白30S，二硫键异构酶，蛋白酶调控亚基26S，伴侣蛋白20 kDa，代谢过程：核酮糖-磷酸-3-差向异构酶，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，半胱氨酸合成酶，琥珀酰基辅酶A，可溶性无机焦磷酸酶，抗氧化：SOD酶，蛋氨酸硫氧化物还原酶，谷胱甘肽过氧化酶，转录调控：精氨酸-丝氨酸富集剪接因子33，核糖核酸调节酶-3，水解酶：醛缩酶，逆境相关：S-腺苷甲硫氨酸合成酶（参与乙烯形成），结构蛋白：肌动蛋白亚基，能量提供减少。
光合作用减弱，表达翻译减弱，抗氧化能力降低，结构蛋白减少，果实成熟相关基因表达降低。
上调表达蛋白主要为，孔蛋白：结构蛋白1（细胞膜通透性），SEC13，质膜ATP酶，核苷酸水解酶，脱氧尿苷5--三磷酸，糖代谢：苹果酸脱氢酶，木糖异构酶，细胞分裂：纺锤体驱动蛋白。
代谢过程：线粒体内膜蛋白酶ATP23，二/三羧酸转运蛋白酶，ATP合成酶亚基，核苷二磷酸激酶A，翻译：翻译起始因子，转录调控：成熟酶K，DEAD-box RNA解旋酶，RNA聚合酶，抗性：脂转移蛋白非特异性，生物合成：腺苷酸琥珀酸合成酶细胞膜通透性增加，糖被降解利用，核苷酸水解，转录调控增加，细胞分裂加速，部分代谢过程增强，说明在病原菌侵染过程中，桑葚光合作用，细胞骨架，部分的代谢过程，及抗氧化能力降低。
而细胞的通透性大大提高，转录活性增强，细胞分裂加快，部分代谢途径加快（糖代谢），抗逆信号增强。
同时还有部分蛋白没有确定其性能。
从 2 个桑椹蛋白质的2－DE 凝胶中，切取在感菌桑椹中特异表达的39个蛋白斑点和正常桑椹中特异表达蛋白点5个，经胶内酶切、质谱分析及相关数据库检索，结果分别成功鉴定了其中的37个和3蛋白斑点。
融合蛋白标签【可编辑范本】
在蛋白质功能及结构研究过程中，研究的首要任务就是利用多种方法获得纯化的具有完整结构及生物学功能并能够正确折叠的高度纯化蛋白质。
除了蛋白质的研究，具有特定生物活性的高价值蛋白质的生产也需要对蛋白质产品进行纯化。
因此，科研人员和工业生产往往大量采用多种多样的表达系统来获得高表达的蛋白质,对其纯化后进行研究或加工,这些表达系统包括原核表达系统、酵母菌表达系统、昆虫动物细胞表达系统、真核细胞表达系统等。
如何将系统中表达的目标蛋白质与其他蛋白分离，一直是表达纯化中的一个重点。
为了克服从复杂样品中纯化单一蛋白质这种困难，科学家利用生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别某种特定物质并与该物质分子特异性结合的能力，利用生物分子间的这种特异性结合能力而形成的亲和纯化技术．亲和标签纯化技术已广泛应用于蛋白质,特别是重组蛋白的分离纯化中。
在重组蛋白的亲和纯化中,利用基因工程技术，将经过改造优化的亲和标签与目标蛋白融合表达,通过一步简单快速的亲和层析，直接获得纯度较高的重组融合蛋白,已成为重组蛋白纯化的一个通用方法,具有结合特异性高、纯化步骤简便、纯化条件温和、适用性广泛等优点,为蛋白质的有效纯化提供了一条解决的途径，广泛应用于蛋白质结构与功能的研究及重组蛋白纯化工艺的开发中。
自从20世纪7０年代中期融合标签技术出现以来，亲和标签已成为一种重组蛋白纯化十分有效的工具,具有结合特异性高、纯化条件温和、纯化步骤简便、适用性广泛等显著优势。
通常,亲和标签定义为对特定的生物或化学配基具有高度亲和力的一段氨基酸序列。
到目前为止,已经出现了种类众多、功能各异、用途多样的亲和标签,极大地促进了对重组蛋白的有效纯化。
根据自身分子量大小的不同，亲和标签可以分为两大类:一类是结合固定化配基的短肽标签,如Ｈiｓ-tag、FＬAG－ｔag、Stｒeｐ—ｔaｇⅡ等；另一类是识别小分子配基的蛋白标签，如GＳT、ＭＢP等。
短肽标签:His—tag：Hｉs标签是目前高通量蛋白纯化最普遍使用的亲和标签，广泛用于多种重组蛋白在各种表达系统的表达与纯化中。
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GSTrap 4B 1 !" GST! 5
EACF
HiLoadTM 16/60 SuperdexTM 200 pg 120 !"#$%&' E. coli !140 mM 20 mM !Mr 43 000 pH 7.4
EGFF
SDS-PAGE
(Mr × 103)
!" EACFW 10 mM EGFFW 10 mM 0.3 ml/min ÄKTAxpress
GE Healthcare
标签蛋白的 简易纯化
目录
从靶基因到纯化蛋白之旅 GST 标签蛋白 GST 融合系统概述 pGEX 载体 应用 Tag 剪切酶 应用 GST 标签蛋白的检测 订货信息 组氨酸标签蛋白 组氨酸标签蛋白概述 应用 订货信息 Strep- 标签 II 蛋白 Strep- 标签 II 蛋白概述 应用 订货信息 MBP 标签蛋白 MBP 标签蛋白概述 应用 订货信息 双标签蛋白 双标签蛋白概述 应用
! pGEX-2T GSTrap FF GSTPrep FF 16/10 Multiphor II !" ! -SDS Marker ÄKTAexplorer ExcelGel SDS 8-18
!"#$%&'()*+, !"#$%&'$()*+,-./01234567 !"#$%& 26 ! !"#$%&'()*+,-./ E !"#$%&'()F 1 5 GSTrap FF TM !"#$%&' GSTPrep FF 16/10 E20 !F !"# !"#$%&'()*+,-$. ! 280 !"#$%& ! SDS-PAGE
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GSTrap HP ! Sepharose
! Sepharose 4B
E !"#$F
RediPack GST
GST
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96
GST 50 mg
!"#$ 50 mg
GST SpinTrap
!*
GST MultiTrap 4B GST MultiTrap FF ! Sepharose 4B ! Sepharose 4 GSTrap FF GSTrap 4B
!
8-18 Multiphor II
!"#$%&'()*+,!"#$%&' GST !"#$% E. coli !"#
GST MultiTrap 4B 96 !"#$%&'(
! "#$%&'() )*+,-. GST-
96
!"#$% E
! GST MultiTrap FF GST MultiTrap 4B 300 ! GST !"#$%&' E. coli BL21 Mr 45 000 ! !"#$ !" 10 mM !140 mM !pH 8.0 !" 50 mM Tris-HCl 10 mM !"#$%pH 8.0 !
9
高效率一步纯化
特色产品：GSTrap FF 、ÄKTAexplorer 、ExcelGel SDS 梯度 8-18、Multiphor II 电泳系统、低分子量 SDS Marker 试剂盒
使用方便的预装柱结合注射器、 泵或者色谱系统， GST 标签蛋白的纯化常常可以一步获得。 在这个例子中， GSTrapTM FF 1 毫升柱子用来纯化 GST 标记的可溶受体亚单位，一步达到很高的纯化程度。 ÄKTAexplorer 上使用的预编程 UNICORNTM 方法模板，提供了标准的纯化操作规程，可以完全遵从，或者适合您独特需要进行修改。洗脱组分使用凝胶电泳分离 和银离子染色进行分析。
!20 mM DTT
!" EACFW 50 mM Tris-HCl
!"20 mM DTT pH 8.0 !20 mM DTT pH 7.4 1.5 ml/min EGFF 97 66 45 30
!140 mM
! 1 ml/min EACF
← GST-hippocalcin
A280 mAU 250 200 150 100 50 0 110 120 GST-
3 4 5 6 13 14 17 19 20 21 31 32 33 36 38 39 43 44 45
从靶基因到纯化蛋白之旅
由于重组蛋白扩增和纯化技术和产品的日益丰富， 重组蛋白近年来使用大大的 增加。 使用重组标签蛋白有利于纯化和检测的优势现在已经被广泛的知晓。 一 般来说， 在蛋白表达流程的第一步， 是将靶基因克隆进入合适的表达载体。 接 下来，将表达载体转化进入合适的宿主系统，进行接下来的表达分析。 现在可以使用的宿主系统种类多样，包括可以进行培养的细菌、酵母、植物、 细丝真菌、 昆虫和哺乳动物细胞， 以及转基因动物和植物。 每种宿主系统都有 各自的优点和缺点，在最终决定选择哪一种宿主时，考虑这些优缺点非常重 要。 在您的特定蛋白最初筛选和最佳表达条件确定之后， 您可以扩大规模纯化 生产，获得大量的靶蛋白，进行下游的应用，如功能分析和结构研究。 由于在表达蛋白的标签和亲和柱料的配基之间存在高特异性吸附， 标签蛋白的 纯化相对简单省时。 您可以仅使用一步就获得较高的纯度——亲和纯化一般可 以达到 95% 以上的纯度。如果您需要更高的纯度，可能需要进一步的纯化。
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GST MultiTrap FF 350
GST MultiTrap 4B
GST-
!"#$!"%&'()* 3
5
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!"
7
GST 标签膜蛋白的可溶性 筛选策略
特色产品：GST SpinTrap 纯化模块，GST 检测模块
溶解性是膜蛋白提取的最关键步骤之一。 有效的溶解确保了具有生物活性膜蛋白的高产量， 为成功的纯化铺平了道路。 为了使目标膜蛋白有效的溶解， 经常必须筛选一系列去污剂， 然后选择适合特定靶蛋白和其纯化策略的最好的去污剂。 GST SpinTrapTM 柱子用来对 GST 标记膜蛋白 (GST-ecoKch) 进行六种不同去污剂的快速、同时筛选。
0.8
可溶材料 穿透液 洗脱液
0.6
0.4
0.2
0
SDS-PAGE
DDM OG CHAPS Tween 20 Triton X-100 Sarcosyl
(Mr × 103)
94 67 43 ← GST-ecoKch
致谢：D. Birse，生物化学和生物物理系，斯德哥尔摩大学，瑞典
小结： 溶解 (数据未展示) 和纯化阶段 GST 标记的 ecoKch 的产量，使用 DDM 和 Sarcosyl 最高。注意 Sarcosyl 在 CDNB 实验中极大的 降低了 GST 的活性，因此该结果没有反映存在的 GST 标记蛋白的真实数量。使用 DDM 纯化之后的酶活性实验最高。这就显示 了对于膜蛋白溶解性最佳条件选择的简易和快速的方法。
克隆
细胞培养
筛选
规模放大纯化
结构和 功能研究
引导设计
3
GST 标签蛋白
谷胱甘肽 -S 转移酶 (GST) 基因融合系统是表达、纯化和检测 E. coli 生产的 GST 标签蛋白的多功能系统。 GST 标签蛋白的代表性特征是， TM 与谷胱甘肽Sepharose 色谱柱料的谷胱甘肽配基高特异性结合， 因 而一步洗脱靶分子的纯度可以超过 90%。GST 标签可能也增加了靶 蛋白的溶解性和稳定性。GST 相对来说比较大，相对分子量 (Mr) 为 26 000。GST 标签蛋白含有特殊的剪切序列，纯化后使用不同的蛋 白酶可以比较简单的去掉 GST 标签。 GST 标签蛋白的纯化在非常温和的条件下进行，有效地保护了靶蛋 白的功能和抗原性。GST 标签经常用来补充组氨酸标签，或在表达 过程中组氨酸标签不能得到可溶蛋白时，作为代替标签。
生产高产量的标签蛋白 的 pGEX 载体
GST 基因融合系统整合 pGEX 质粒，可以进行日本血吸虫 GST 融合的基因或基因片段的可诱导、 高等级细胞内表达。 在 E. coli 内表达， 在胞浆内产生具有标签的蛋白， GST 部分 在氨基端，而感兴趣的蛋白在羧基端。 现在有十三种 pGEX 载体。其中九种载体具有可扩展的多 克隆位点 (MCS)，此位点含有六个限制性内切酶位点。可 扩展的多克隆位点方便之处在于，直接克隆。 通用电气医疗集团提供具有位点特异剪切编码识别序列的 pGEX 载体，可以被 PreScissionTM 蛋白酶、凝血酶蛋白酶和 因子 Xa 蛋白酶识别 (参见本页 pGEX 载体的序列图)。
8-18
!"#$%&'()*+ EDDTF GST
!"#$%&'()*+,!"#$%&'()%&*+,-./012 !"#$%&'() !"#$%&'() !"#$% ÄKTAxpressTM !"#$%&'()*+ !"#$!%&'() ÄKTAxpress !"#$!%&'() GST!"#$%&'()*+%,-. !"#$%& EACF !"#$ EGFF !" GST!"#$%&'() 280 !"#$%&'( !"# !"#$