ELISA检测乙肝抗体ppt课件
合集下载
ELISA检测技术培训ppt课件精品模板分享(带动画)
目的：通过室内质控，可以及时发现检 测过程中可能存在的问题，并采取相应 的措施加以纠正，从而提高检测结果的 准确性和可靠性
实施：实验室应建立完善的室内质控体系， 并定期对检测过程进行质控，以确保检测 结果的准确性和可靠性
室间质评计划：制定并执行统一的质评计划，确保各实验室之间的质评活动相互协调
室间质评样品：由权威机构制备和分发统一的质评样品，各实验室使用相同的质评样品进行 检测
试剂质量不稳定：选择高质量的试剂，确保试剂在有效期内使用 试剂盒灵敏度低：调整试剂盒的灵敏度，提高检测的准确性 试剂盒特异性差：选择特异性好的试剂盒，避免交叉反应
试剂盒保存不当：按照试剂盒说明书正确保存试剂盒，避免受潮、污染等影响
自动化技术：提高ELISA检测 效率和质量的关键
智能化技术：实现ELISA检测 的自动化和智能化
通过将抗原或抗体与酶结合形 成酶标抗原或抗体，使其具有 酶的催化作用
酶联 测方法
在固相载体表面进行抗原抗体 反应，加入底物后根据颜色变
化判断结果
酶联免疫吸附试验具有灵敏度 高、特异性强、操作简便、易
于定量等优点
临床诊断：用于检测各种疾病相关的抗原、抗体和细胞因子等 食品安全：检测食品中的微生物、毒素和过敏原等 生物安全：检测实验室中的生物因子和微生物等 环保监测：检测环境中的污染物和有害物质等
ELISA检测技术在临床诊断中的应用：用于疾病早期诊断、疗效评估和预后判断 在科研领域的应用：用于疾病的基础研究和临床试验，提高研究质量和效率 未来发展趋势：随着技术进步和应用拓展，ELISA检测技术将更加便捷、准确和高效 展望：随着医疗科技的发展，ELISA检测技术将在未来发挥更加重要的作用
汇报人：
样本类型：血清、血浆、细胞培养 上清等
《实验四ELISA》PPT课件
• HBcAg存在于Dane颗粒核心结构表面，为内壳 成分，其外被HBsAg覆盖，不易在血循环中检出， 但能刺激机体产生抗-HBc，抗-HBc IgM的存在 提示HBV处于复制状态；
• HBeAg游离于血中，其消长与病毒体消长及 DNA多聚酶消长基本一致，故HBeAg为HBV复 制及具有强感染性的一个指标；
断试剂盒。 预包被微孔条（用纯化的单抗-HBs或纯化
HBsAg包被） 酶结合物（多克隆抗-HBs-HRP或HBsAg-
HRP ） 阳性对照 阴性对照 洗涤液(浓缩液，用前以蒸馏水稀释25倍) 显色剂A、B（一般为四甲基联苯胺和H2O2 ） 终止液（2 mol/L H2SO4）。 2．微量加样器，吸水纸等。
精选PPT
19
实验步骤
• 每4人一组，每组有检测HBsAg和检测 HBsAb的反应条各一条, 每条含6个反应孔。
•每组有2种试剂盒(黄色测HBsAg,粉 红色测HBsAb),黄色试剂盒用黄色反 应条,粉红色试剂盒用红色反应条。
精选PPT
20
3、 检测方法
每孔加待检血清50ul, 每次实验各做1个阴性 对照和阳性对照;本实验空白对照孔不设， 前面讲台上有空白的反应条，可以作为空 白对照。
（7）孔内污染杂物；
（8）酶标仪滤光片不正确；
（9）血清标本未完全凝固即加入，反应孔 内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出 现假阳性反应等。
精选PPT
34
• 3．白板
（阳性对照不显色） （1）漏加酶结合物；
（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干 净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。
（3）漏加显色剂A或B；
4．洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离 酶未能洗净。
5．待测标本不可用NaN3防腐。所有样品都 应按传染源处理。
• HBeAg游离于血中，其消长与病毒体消长及 DNA多聚酶消长基本一致，故HBeAg为HBV复 制及具有强感染性的一个指标；
断试剂盒。 预包被微孔条（用纯化的单抗-HBs或纯化
HBsAg包被） 酶结合物（多克隆抗-HBs-HRP或HBsAg-
HRP ） 阳性对照 阴性对照 洗涤液(浓缩液，用前以蒸馏水稀释25倍) 显色剂A、B（一般为四甲基联苯胺和H2O2 ） 终止液（2 mol/L H2SO4）。 2．微量加样器，吸水纸等。
精选PPT
19
实验步骤
• 每4人一组，每组有检测HBsAg和检测 HBsAb的反应条各一条, 每条含6个反应孔。
•每组有2种试剂盒(黄色测HBsAg,粉 红色测HBsAb),黄色试剂盒用黄色反 应条,粉红色试剂盒用红色反应条。
精选PPT
20
3、 检测方法
每孔加待检血清50ul, 每次实验各做1个阴性 对照和阳性对照;本实验空白对照孔不设， 前面讲台上有空白的反应条，可以作为空 白对照。
（7）孔内污染杂物；
（8）酶标仪滤光片不正确；
（9）血清标本未完全凝固即加入，反应孔 内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出 现假阳性反应等。
精选PPT
34
• 3．白板
（阳性对照不显色） （1）漏加酶结合物；
（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干 净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。
（3）漏加显色剂A或B；
4．洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离 酶未能洗净。
5．待测标本不可用NaN3防腐。所有样品都 应按传染源处理。
ELISA检测技术培训ppt课件
试剂准备
按照试剂说明书要求，正确配制和保 存试剂，避免试剂污染和失效。
操作流程规范
01
02
03
操作前准备
熟悉实验流程，准备好所 需试剂和器材，确保实验 环境的清洁和安静。
操作过程规范
严格遵守实验操作规范， 避免操作失误和交叉污染 ，确保实验结果的准确性 和可靠性。
操作后处理
及时清洗实验器材，整理 实验数据，做好实验记录 和结果分析。
与其他技术联用
将ELISA技术与质谱、荧光定量PCR等其他检测技术相结合，实现多 组学数据的整合分析，为精准医学和个性化治疗提供有力支撑。
06
ELISA检测技术前沿动态及发展 趋势预测
前沿动态关注焦点
新型ELISA试剂盒的开发
01
针对新兴疾病标志物的高灵敏度、高特异性试剂盒的研制和应
用。
自动化ELISA检测系统的研究
ELISA技术发展历程
1971年，Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）用于IgG定量测定的文章，使得ELISA 技术开始得到广泛应用。
随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是基因工程技术的引入， 促进了抗原、抗体的制备，各种新型酶标抗体、抗原问世，ELISA在敏感
生物医学是现代医学的重要分支，研究生物大分子、细胞、组织及器官的结构 与功能，对于揭示生命现象本质及疾病发生机制具有重要意义。
ELISA在生物医学中的应用
ELISA作为一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，在生物医学研究中广泛 应用于蛋白质、抗体、激素等生物标志物的检测，为疾病诊断、治疗及预防提 供了有力支持。
性、特异性、应用范围等方面得到不断的发展和完善。
按照试剂说明书要求，正确配制和保 存试剂，避免试剂污染和失效。
操作流程规范
01
02
03
操作前准备
熟悉实验流程，准备好所 需试剂和器材，确保实验 环境的清洁和安静。
操作过程规范
严格遵守实验操作规范， 避免操作失误和交叉污染 ，确保实验结果的准确性 和可靠性。
操作后处理
及时清洗实验器材，整理 实验数据，做好实验记录 和结果分析。
与其他技术联用
将ELISA技术与质谱、荧光定量PCR等其他检测技术相结合，实现多 组学数据的整合分析，为精准医学和个性化治疗提供有力支撑。
06
ELISA检测技术前沿动态及发展 趋势预测
前沿动态关注焦点
新型ELISA试剂盒的开发
01
针对新兴疾病标志物的高灵敏度、高特异性试剂盒的研制和应
用。
自动化ELISA检测系统的研究
ELISA技术发展历程
1971年，Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）用于IgG定量测定的文章，使得ELISA 技术开始得到广泛应用。
随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是基因工程技术的引入， 促进了抗原、抗体的制备，各种新型酶标抗体、抗原问世，ELISA在敏感
生物医学是现代医学的重要分支，研究生物大分子、细胞、组织及器官的结构 与功能，对于揭示生命现象本质及疾病发生机制具有重要意义。
ELISA在生物医学中的应用
ELISA作为一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，在生物医学研究中广泛 应用于蛋白质、抗体、激素等生物标志物的检测，为疾病诊断、治疗及预防提 供了有力支持。
性、特异性、应用范围等方面得到不断的发展和完善。
《elisa检测技术》ppt课件(2024)
拓展ELISA检测技术在生物医学、环境监测 、食品安全等领域的应用，推动相关产业的 发展。
2024/1/28
22
06 ELISA实验操作技巧与注 意事项
2024/1/28
23
实验前准备工作建议
01
仔细阅读试剂盒说明书 ，了解实验原理、操作 步骤和注意事项。
2024/1/28
02
准备好所需的试剂、耗 材和仪器，确保它们的 质量和性能符合要求。
去除异常值、缺失值等， 保证数据质量。
2024/1/28
数据转换
对数据进行对数转换、归 一化等处理，以满足后续 分析需求。
统计分析
采用t检验、方差分析等统 计方法，对实验组和对照 组数据进行比较，评估差 异显著性。
13
结果解读与报告撰写
结果解读
根据统计分析结果，结合专业知 识对实验数据进行解读，如判断 样品中目标物质的含量是否超标
《elisa检测技术》ppt课件
2024/1/28
1
目 录
2024/1/28
• ELISA检测技术概述 • ELISA实验方法与步骤 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术在生物医学领域应用 • ELISA技术挑战与发展趋势 • ELISA实验操作技巧与注意事项
2
01 ELISA检测技术概述
发展多重ELISA检测技术，实现对多个目标物的同时检测，提高检 测效率。
20
新型ELISA技术发展趋势
数字化ELISA
利用微流控、微阵列等技术，实现ELISA检测的数字化、自 动化和智能化。
免疫荧光ELISA
结合免疫荧光技术，提高ELISA检测的灵敏度和特异性。
化学发光ELISA
ELISA2-乙肝两对半 PPT课件
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
乙肝两对半的检测
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法
竞争抑制法 竞争抑制法
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7.洗液如有结晶形成建议放置37℃充分溶解， 再稀释；
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。(450nm
处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
乙肝两对半的检测
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法
竞争抑制法 竞争抑制法
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时
7.洗液如有结晶形成建议放置37℃充分溶解， 再稀释；
乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证PPT课件
7.97
5
6.476 5.688 6.734
4.695 4.063 4.786
4.417 3.788 4.493
5.123 4.463 5.324
4.928 4.273 5.135
4.959± 0.83
16.737
6 检测限（LOD）计算： 取空白孔的OD值的均数加2倍标准差。
注意事项
标准品和质控品配制要准确。 实验各个环节都很重要，每步操作都要认
3.27
5
6.467 4.695
4.419
5.123
4.928
5.126 ±0.79
15.41Biblioteka 间精密度VEGFR2 -Fc
（ng/ml）
测定值
21.764 7.789 20.301 22.612
20
19.262 14.760 16.955 19.643
21.519 15.630 17.862 22.160
108.825 88.945 101.505 113.06 103.46 112.79 111.48 117.39 118.28 120.52 129.34 93.9 88.38 102.46 98.56
平均回收率 RR(%) 103.159
116.092
102.528
SD(%) 9.15 3.82 15.88
5 按示例表列表并计算精密度 。
板内精密度
VEGFR2-Fc
（ng/ml）
1
测定值
2
3
4
X S RSD(%)
5
20
21.765 17.789 20.301
22.613 20.692
20.632 ±1.83
ELISA知识简介PPT课件
27 Nhomakorabea06
总结与展望：ELISA技术发展趋 势预测
2024/1/26
28
新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测 。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景 干扰。
2024/1/26
29
2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患 者治疗过程中肿瘤标志物 的变化，评估治疗效果和 预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿 瘤患者康复期肿瘤标志物 的水平，及时发现肿瘤复 发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡 因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
30
自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
2024/1/26
03
其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标 志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早 期发现和筛查。
总结与展望：ELISA技术发展趋 势预测
2024/1/26
28
新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测 。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景 干扰。
2024/1/26
29
2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患 者治疗过程中肿瘤标志物 的变化，评估治疗效果和 预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿 瘤患者康复期肿瘤标志物 的水平，及时发现肿瘤复 发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡 因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
30
自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
2024/1/26
03
其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标 志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早 期发现和筛查。
乙肝定量检测试剂临床意义PPT课件
不同试剂间的差异问题
由于不同品牌和类型的乙肝定量检测 试剂所采用的检测方法、抗原和抗体 等成分不同，可能导致检测结果存在 差异。
这种差异可能导致医生对患者的病情 和治疗方案产生误判，因此在使用不 同试剂进行检测时需要注意结果的对 比和评估。
CHAPTER 05
乙肝定量检测试剂的发展趋势
高灵敏度检测技术的研究
假阴性
由于试剂的特异性不足，可能出现漏报阳性结果的情况，导致患者被误诊为未感染乙肝 病毒。
试剂稳定性问题
01
试剂的稳定性对检测结果的准确 性至关重要，如果试剂不稳定， 可能导致检测结果波动，影响临 床诊断和治疗。
02
温度、湿度等环境因素对试剂稳 定性有较大影响，需要在存储和 运输过程中严格控制这些因素。
流行病学调查
健康体检
乙肝定量检测试剂可以用于流行病学调查 ，了解HBV感染的分布和流行趋势。
在健康体检中，乙肝定量检测试剂可以用 于筛查HBV感染，及早发现和治疗。
CHAPTER 02
乙肝定量检测试剂的临床意义
辅助诊断乙肝
辅助判断病毒携带状态
乙肝定量检测试剂可以检测血液中乙 肝病毒的含量，有助于判断患者是处 于携带状态、发病状态还是恢复状态 。
利用荧光信号的变化量来测定DNA或RNA的浓度，具有高灵敏度 、高特异性和可定量等优点。
乙肝定量检测试剂的应用范围
诊断乙型肝炎
监测抗病毒治疗
通过乙肝定量检测试剂可以确定HBV感染 状态，评估病情进展和治疗效果。
在接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中 ，乙肝定量检测试剂可以监测病毒复制水 平，评估治疗效果和调整治疗方案。
乙肝定量检测试剂临床 意义ppt课件
CONTENTS 目录
elisa检测技术 ppt课件
生物素是一种生长因子，广泛分布于动、植物体内，又称辅 酶R或维生素H。亲和素由四个亚单位组成，对生物素具有高度 亲和力，即一个亲和素可以结合4个生物素分子。因此，本方法 具有信号放大功能（特点）。
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
ELISA检测技术培训课件
THANK YOU
感谢各位观看
。
废弃物处理
按照实验室规定正确处理实验 废弃物。
03
ELISA检测技术实验结果分析
实验结果解读
总结词
正确解读实验结果是ELISA检测技术的关键，需要掌握实验原 理、熟悉实验步骤，并对实验结果进行科学分析。
详细描述
实验结果解读需要基于对ELISA检测技术的深入理解，熟悉实 验原理、操作步骤和试剂性能。在解读结果时，应关注数据 的趋势、变化规律和异常值，结合专业知识进行综合分析， 避免误判或遗漏。
elisa检测技术培训课件
汇报人：可编辑 2023-12-27
目录
• ELISA检测技术简介 • ELISA检测技术实验操作流程 • ELISA检测技术实验结果分析 • ELISA检测技术实验注意事项与安全须知 • ELISA检测技术实验案例分享
01
ELISA检测技术简介
ELISA检测技术的定义
试剂处理
遵循试剂处理规定，避免直接接触试 剂，以防皮肤和眼睛刺激。
废物处理
正确处理实验废物，防止对环境造成 污染。
紧急处理
熟悉实验室紧急处理程序，如发生意 外，应立即采取适当的急救措施并寻 求医疗援助。
05
ELISA检测技术实验案例分享
案例一：抗原抗体检测
灵敏度高、特异性好
利用酶标记的抗体或抗原与相应的抗原或抗体结合，通过显色反应对微量抗原或抗体进行定量检测，具有较高的灵敏度和特 异性，适用于传染病、自身免疫病、肿瘤等多种疾病的诊断和监测。
在食品安全检测中，ELISA可 以用于检测农药残留、兽药残
留和食品添加剂等。
此外，ELISA还可以用于环境 监测、生物制品纯度检测等方
ELISA实验课件
2.审核结果不一致样本
☺特殊样本采用多种不同方法多次复查 ☺必要时重新抽血复查，注明已复查
◎记录 所有实验的原始资料均应存档； 所有的记录均应规范登记在册；
☺注重沟通，避免纠纷
乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价
• • • • • • • • •
(1) ＋ ＋ ＋ － (2) － － － ＋ (3) (4) (5) ＋ － ＋ － － ＋ － ＋ ＋ － － ＋ － － ＋ 急性或慢性乙型肝炎， 急性或慢性乙型肝炎，高传染性 急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者 急性、慢性乙型肝炎或慢性 携带者 急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝， 急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性 急性HBV感染康复期或有既往感染史，有 感染康复期或有既往感染史， 急性 感染康复期或有既往感染史 免疫力 ＋ 乙肝恢复期，弱传染性 乙肝恢复期，
样本处理
• 做好三查三对，保证样本正确 • 离心 3500r/min离心10min 不可轻视，不厌其烦 非抗凝血，保证血清清亮、无混浊
◎对于HBcAb-IgG检测的稀释 （1∶30） 准确——直接影响结果准确性 • 移液器需校准 • 准确加入稀释液（用移液器加300µl稀释液，快速， 方便；吸量管加稀释液，工作量大，易疲劳） • 使用一次性吸头吸血样10µl • 吸头仅接触血清表层，不要插入过深，避免吸头 外壁沾染过多血清，影响准确性 • 混匀 人工操作，习惯多样 ,充分混匀
分析前质控
●人员培训 实验是人操作的，因此检验人员需经过 培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识： ◎检验项目的基本原理 （ELISA原理）； ◎临床意义； ◎熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点； ◎熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片 段及其组成）； ◎ 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的 能力和质量控制知识。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
7
+ 实验原理
抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶 连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时， 在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物 质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析。
8
（1）免疫吸附剂 （2）结合物 （3）酶反应的底物
9
间接法（测抗体） 双抗体夹心发（测大分子抗原） 竞争发（测小分子抗原）
标记物
细胞1
DH２+H２O２
D+2H2O
酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前 后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用
5
酶免疫技术
+ 酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性 抗原或抗体
+ 酶免疫组化法
用于检测组织或细胞 表面的抗原
6
ELISA是一种免疫测定（immunoassay， IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被 酶催化成为有色产物；产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或 定量分析。
10
11
12
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以 测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤 后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另 一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底 物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对 小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点 就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标 记抗原。
13
1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1
பைடு நூலகம்
待2
待2
阳性
阴性
空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀， 空白孔不加，置37度温箱30分钟。
4.取出反应板，弃液，拍干。
5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干， 重复洗条5次，拍干。
1
2
实验目的 1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
3
+ 免疫标记技术
免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗 原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放射性核素
酶
放射免疫技术
免疫荧光技术
免疫酶技术
4
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测 定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng—pg/ml。
6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。
7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
14
15
16
17
18
19
+ 实验原理
抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶 连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时， 在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物 质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析。
8
（1）免疫吸附剂 （2）结合物 （3）酶反应的底物
9
间接法（测抗体） 双抗体夹心发（测大分子抗原） 竞争发（测小分子抗原）
标记物
细胞1
DH２+H２O２
D+2H2O
酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前 后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用
5
酶免疫技术
+ 酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性 抗原或抗体
+ 酶免疫组化法
用于检测组织或细胞 表面的抗原
6
ELISA是一种免疫测定（immunoassay， IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被 酶催化成为有色产物；产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或 定量分析。
10
11
12
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以 测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤 后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另 一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底 物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对 小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点 就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标 记抗原。
13
1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1
பைடு நூலகம்
待2
待2
阳性
阴性
空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀， 空白孔不加，置37度温箱30分钟。
4.取出反应板，弃液，拍干。
5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干， 重复洗条5次，拍干。
1
2
实验目的 1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
3
+ 免疫标记技术
免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗 原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放射性核素
酶
放射免疫技术
免疫荧光技术
免疫酶技术
4
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测 定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng—pg/ml。
6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。
7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
14
15
16
17
18
19