ELISA检测乙肝抗体ppt课件

标记物
细胞1
DH２+H２O２
D+2H2O
酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前 后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用
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酶免疫技术
+ 酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性 抗原或抗体
+ 酶免疫组化法
用于检测组织或细胞 表面的抗原
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ELISA是一种免疫测定（immunoassay， IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被 酶催化成为有色产物；产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，由此进行定性或 定量分析。
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+ 实验原理
抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶 连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时， 在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物 质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析。
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（1）免疫吸附剂 （2）结合物 （3）酶反应的底物
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间接法（测抗体） 双抗体夹心发（测大分子抗原） 竞争发（测小分子抗原）
1
2
实验目的 1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
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+ 免疫标记技术
免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗 原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
细胞1
细胞2
ห้องสมุดไป่ตู้
分类
荧光素
放射性核素
酶
放射免疫技术
免疫荧光技术
免疫酶技术
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用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测 定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng—pg/ml。
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1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1
待2
待2
阳性
阴性
空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀， 空白孔不加，置37度温箱30分钟。
4.取出反应板，弃液，拍干。
5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干， 重复洗条5次，拍干。
6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。
7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
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用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以 测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤 后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另 一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底 物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对 小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点 就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标 记抗原。