循环肿瘤细胞基本生物学行为及检测技术_马富玲
循环肿瘤细胞的检测方法及其在肺癌临床中的应用(英文)
循环肿瘤细胞的检测方法及其在肺癌临床中的应用(英文) Minghui Zhang;Decai Chi;Shu Zhao;Yan Wang;Maopeng Yang;Yan Wan【期刊名称】《中德临床肿瘤学杂志：英文版》【年(卷),期】2014(0)10【摘要】Circulating tumor cells(CTCs) are tumor cells that enter the blood circulation after detaching from the primary tumor and can migrate to reach distant organs, where they can give rise to aggressive metastasis. Clinical studies have revealed that the presence of CTCs in peripheral blood is correlated with disease progression in lung cancer. However, as CTCs are rare cancer cells released from tumors into the bloodstream, both enrichment and sensitive detection methods are technically challenging. In order to best understand how CTCs are currently being deployed, this review mainly focuses on the different detection methods for CTCs. Furthermore, we will describe the clinical impact of circulating tumor cells in lung cancer and discuss their potential use as biomarker to guide the prognosis.【总页数】7页(P476-482)【关键词】肿瘤细胞;血液循环;临床意义;检测;肺癌;检验中心;生物标志物;潜在用途【作者】Minghui Zhang;Decai Chi;Shu Zhao;Yan Wang;Maopeng Yang;Yan Wan【作者单位】Department of Medical Oncology, The Tumor Hospital of Harbin Medical University;Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University;Department of Medical Oncology, Heilongjiang Provincial Hospital【正文语种】中文【中图分类】Q279;TS974.1【相关文献】1.循环肿瘤细胞的检测方法及其在肺癌临床中的应用 [J], 俞雄斌;欧阳学农;余宗阳2.循环肿瘤细胞的检测方法及在小细胞肺癌中的临床应用 [J], 张明辉;王燕;王艳3.肺癌患者外周血循环肿瘤细胞的检测方法及临床应用 [J], 陈阳阳;张洁;徐国宾4.循环肿瘤细胞的检测方法及其在肺癌临床中的应用 [J], 费秀斌5.循环肿瘤细胞分型检测及其在晚期肺癌中的临床应用研究 [J], 周政;孟凡萍;赵丹;牛晓昶;范慧;李思颖;康菊香;赵昕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2014循环肿瘤细胞筛查模型的初步探讨_马富玲
基金项目：天津市卫生局科技基金资助项目（０６ＫＺ３５） 作者单位：３００２１１天津市泌尿外科研究所通信作者：畅继武，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｏｒｔｈｓｔｒｅｅｔ１４７＠１６３．ｃｏｍ·实验研究·循环肿瘤细胞筛查模型的初步探讨马富玲 刘敏 蒋宁 汤洋 郭佳宁 张婷 孙二琳 刘淑芬 张淑敏 王锦 畅继武ｄｏｉ：１０．３８７０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－４６２４．２０１４．０２．０１４【摘要】 目的 建立模拟外周血中筛查肿瘤细胞的方法，作为肿瘤诊疗的辅助手段，协助判断治疗效果以及预后推断。
方法 抗凝外周血，分离有核细胞，吖啶橙染色，荧光显微镜观察肿瘤细胞。
结果 因吖啶橙高度异染性，使肿瘤细胞变为彩色，加之肿瘤细胞特有的形态学特点，使得肿瘤细胞易于与正常细胞分辨开来。
该方法在肿瘤细胞系、肿瘤组织印片、混有肿瘤细胞的外周血中应用都能使肿瘤细胞得到很好呈现，且特异性和敏感性都理想。
在部分肾癌患者中验证，可检测到循环肿瘤细胞。
结论 吖啶橙染色法可用于血液中肿瘤细胞的染色，特异性、敏感性均较好，可用于临床协助判断治疗效果以及预后判定，为患者制定更合理的治疗方案。
【关键词】 循环肿瘤细胞； 吖啶橙Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ＭＡ Ｆｕ－ｌｉｎｇ，ＬＩＵ Ｍｉｎ，ＪＩＡＮＧＮｉｎｇ，ＴＡＮＧ Ｙａｎｇ，ＧＵＯ Ｊｉａ－ｎｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｔｉｎｇ，ＳＵＮ Ｅｒ－ｌｉｎ，ＬＩＵ Ｓｈｕ－ｆｅｎ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ－ｍｉｎ，ＷＡＮＧ Ｊｉｎ，ＣＨＡＮＧ Ｊｉ－ｗｕ．Ｔｉａｎｊｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００２１１，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＣＨＡＮＧ Ｊｉ－ｗｕ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｏｒｔｈｓｔｒｅｅｔ１４７＠１６３．ｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｓｏｌａｔｅ ｎｕｃｌｅａｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ，ｓｔａｉｎ ｗｉｔｈ ａｃｒｉｄｉｎｅ ｏｒａｎｇｅ，ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ． Ｒｅ－ｓｕｌｔｓ Ａｃｒｉｄｉｎｅ ｃａｎ ｄｙｅ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｕｎ－ｄｅｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ａｃｒｉｄｉｎｅ ｏｒａｎｇｅ ｓｔａｉｎ ｃａｎ ｍａｋｅ ｉｔ ｅａｓｙ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ａｃｒｉｄｉｎｅ ｏｒａｎｇｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ａｎ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｍ－ｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ； Ａｃｒｉｄｉｎｅ ｏｒａｎｇｅ 肿瘤的复发、转移是造成患者死亡的主要原因。
循环肿瘤细胞检测技术的研究进展
循环肿瘤细胞检测技术的研究进展肿瘤是一种十分复杂的疾病，它的病理变化可以在多个组织层次上发生。
近年来，随着分子生物学的不断发展，循环肿瘤细胞检测技术作为一种新型肿瘤诊断手段正在逐渐受到人们的重视。
本文将从基本概念、检测方法以及研究进展三个方面探讨循环肿瘤细胞检测技术。
基本概念循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）是指癌症患者体内的肿瘤细胞，在肿瘤组织外的血液中存在的，具有肿瘤来源、生物学活性和增殖转移能力的单个活细胞或细胞团。
与传统的检测方法不同，循环肿瘤细胞检测技术可以通过简单的血液检测来检测肿瘤的存在，不仅能够实现早期诊断，还可以监测肿瘤活动、评估治疗效果以及预测肿瘤的临床结果。
检测方法循环肿瘤细胞检测技术的方法多样，包括直接可视化、免疫磁珠捕获、流式细胞分选、单细胞扩增和下一代测序等。
其中，直接可视化技术主要是通过应用显微镜等设备对血液中的肿瘤细胞进行检测；免疫磁珠捕获技术是通过将血液中的肿瘤细胞与磁珠结合，然后将其分离出来，形成肿瘤细胞的纯化；流式细胞分选技术是通过免疫分选技术对血液中的肿瘤细胞进行筛选和鉴定；单细胞扩增技术是通过对肿瘤细胞的筛选和扩增，使其在试管中形成足够数量的肿瘤细胞，并为下一代测序提供样品；下一代测序技术是通过高通量测序技术对肿瘤细胞进行检测，并获得其基因物质的序列信息。
这些技术的出现极大地拓展了循环肿瘤细胞检测技术的应用范围，并在临床诊断、治疗和研究中发挥着重要作用。
研究进展随着循环肿瘤细胞检测技术的发展，越来越多的研究表明，CTCs已成为多种癌症类型的生物标记物。
细胞表面分子的表达、细胞学形态特征以及肿瘤相关基因的表达均被证明与CTC相关。
通过对CTCs的捕获和分析，可以更好地了解肿瘤的临床进展，并为更好地治疗和干预肿瘤提供基础数据。
此外，循环肿瘤细胞检测技术也有助于肿瘤早期诊断，提供治疗方案的选择，监测治疗效果以及预测肿瘤的预后。
循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA的检测技术研究
循环肿瘤DNA的
02
检测技术
检测方法
基于PCR的 方法
基于细胞培 养的方法
基于测序的 方法
基于免疫的 方法
检测流程
样本收集：收集患者的血液样本
建库：将核酸进行建库处理
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
核酸提取：从血液样本中提取核酸
上机测序：对建好的库进行上机测 序
检测应用
循环肿瘤DNA的检测技术在结直肠癌、肺癌等癌症的早期筛查和诊断中具有广泛应用。
CTC和ctDNA 的检测可用于 判断肿瘤的恶 性程度和预后。
CTC和ctDNA 的检测可用于 监测肿瘤的复
发和转移。
CTC和ctDNA 的检测可用于 指导肿瘤的治
疗。
对肿瘤疾病的治疗价值
监测肿瘤疾病的发展
评估肿瘤疾病的预后
指导肿瘤疾病的治疗
监测肿瘤疾病的复发
对肿瘤疾病的预后评估价值
检测技术可以准确预测肿瘤患者的预后情况。
检测流程
细胞分离：从样本中分离出 肿瘤细胞
样品收集：收集患者血液或 其他体液样本
细胞标记：对肿瘤细胞进行 标记，以便后续检测
检测分析：对标记的肿瘤细 胞进行检测分析，如基因测
序等
结果解读：解读检测结果， 为临床诊断和治疗提供参考
检测应用
预后评估：预测患者生存率、复发风险等 病情监测：监测肿瘤进展、转移情况等 指导治疗：为制定治疗方案提供参考依据 复发监测：监测肿瘤复发情况，及时采取干预措施
数据分析：对 实验数据进行 统计分析，得 出检测结果并
撰写报告
联合检测应用
预测肿瘤的复发风险 监测肿瘤的治疗效果 指导肿瘤的个性化治疗 发现新的肿瘤治疗方法
2015吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用_刘敏_马富玲_韩荣_李美_刘淑芬_张
1.1 一般资料 选择 2013 年 7 月—2014 年 5 月我院收治 的转移性肾细胞癌患者 27 例（研究组），其中男 19 例，女 8 例；年龄 28~79 岁，平均（61.63±12.04）岁。患者均有明确病 理组织学诊断证实为肾细胞癌，且具有充分临床或影像学证 据确诊为转移性肾细胞癌，均未接受任何治疗。另择 10 例 健康体检者作对照组，其中男 6 例，女 4 例；年龄 26~79 岁， 平均（50.1±16.88）岁。本研究经我院医学伦理委员会批准， 且获研究对象知情同意。 1.2 主要试剂和仪器 769-P 细胞系购自中国科学院上海 生命科学研究院细胞资源中心，RPMI-1640 培养基、热灭活 胎牛血清、淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物科技有限公 司，胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ、红细胞裂解液购自北京索莱宝科技 有限公司，荧光显微镜（Olympus BX51），离心机(BAIYANG B160A)，超净台(Labeier)，CO2 培养箱(Forma Scientific)。 1.3 方法 1.3.1 肿瘤细胞培养 新鲜肾癌组织经胶原酶Ⅱ消化，加淋 巴细胞分离液，离心获得原代肾癌细胞。加含 20%胎牛血清 的 RPMI-1640 培养基，置于 37 ℃、5%CO2 条件下传代培养。 同时将 769-P 细胞系加入含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 培 养基中培养。待细胞覆盖瓶底 80%时，胰蛋白酶消化后按 1∶3 传代。每 5 d 传代 1 次。取对数生长期 769-P 细胞 备用。 1.3.2 AO-F 染色评估 AO-F 染料对肿瘤细胞的敏感性 分 别制备原代和 769-P 细胞涂片，涂片经 AO-F 染色：AO-F 染 液中浸泡 3 min，PBS 冲洗；HCl 溶液冲洗 5 s，PBS 冲洗；CaCl2 溶液浸泡 3 min，PBS 冲洗。加盖片于荧光显微镜下观察细 胞形态及着色情况。随机读取 5 个视野计算 AO-F 阳性（+） 细胞占 769-P 细胞的比例，评估 AO-F 染料对肿瘤细胞的敏 感性。 1.3.3 富集对照组外周血单个核细胞 对照组清晨空腹抽 取肘正中静脉血 5 mL，低张红细胞裂解液破红，乙二胺四乙 酸（EDTA）漂洗后固定 2 次，2 000 r/min 离心 10 min，获得单
循环肿瘤细胞检测技术及其在癌症治疗中的应用
循环肿瘤细胞检测技术及其在癌症治疗中的应用随着科技的不断发展，循环肿瘤细胞检测技术越来越受到科研工作者和临床医生的关注。
循环肿瘤细胞(CTC)是指肿瘤细胞从原发病灶脱落，进入循环系统，定植到其他部位的肿瘤细胞。
CTC具有急性转移、远处转移、耐药性等特点，是癌症转移的重要载体和预后评估指标，因此检测、隔离和研究CTC的技术被广泛应用于癌症治疗研究领域。
CTC检测技术主要包括流式细胞术(FACS)、聚合酶链反应(PCR)、基于表面增强拉曼散射(SERS)、基于磁珠分选等技术。
其中，流式细胞术(FACS)是一种常用的CTC检测方法，其通过将CTC与血液中其他细胞分离，从而检测出肿瘤细胞。
PCR技术是一种高灵敏度和高特异性的CTC检测技术，可以检测出单个CTC。
基于表面增强拉曼散射(SERS)技术则可以通过分析CTC的分子特征，实现高效、准确、无创的肿瘤筛查和癌症治疗。
基于磁珠分选技术则可以利用特定标记物对CTC进行捕捉和分离，并进一步进行各种分析和研究。
CTC检测技术在癌症治疗中的应用主要表现在三个方面：癌症筛查、治疗监测和个体化治疗。
首先，CTC检测技术可以用于癌症筛查。
通过检测血液中的CTC，不仅可以有效地诊断出早期肿瘤，也可以进行癌症的风险评估，从而制定更加科学的健康管理方案。
而且，与传统的癌症筛查技术相比，CTC检测技术具有高灵敏度、高特异性、无创和操作简便的优点。
其次，CTC检测技术可以用于治疗监测。
通过跟踪血液中CTC 数量的变化，可以有效地评估治疗效果，并及时调整治疗方案。
同时，对于一些难以判断疗效的癌症类型，如淋巴瘤、脑胶质瘤等，CTC检测技术也可以提供参考依据。
最后，CTC检测技术可以用于个体化治疗。
由于不同患者的肿瘤细胞有着不同的分子特征和遗传变异，基于CTC的个性化治疗策略可以更精准地、更有效地治疗患者的肿瘤。
例如，一些针对CTC的靶向治疗和免疫治疗，可以通过精准制定个性化治疗方案，来实现更好的治疗效果。
循环肿瘤细胞的生物学特性及其检测方法和应用进展
循环肿瘤细胞的生物学特性及其检测方法和应用进展王莹;梁砚菲;陶敏【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)002【总页数】4页(P329-332)【关键词】循环肿瘤细胞;异质性;分子检测;临床应用【作者】王莹;梁砚菲;陶敏【作者单位】苏州大学附属第一医院肿瘤科苏州 215006;广西医科大学第三附属医院妇产科南宁 530031;苏州大学附属第一医院肿瘤科苏州 215006【正文语种】中文【中图分类】R73外周血循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells, CTCs)是自发或者因诊疗操作由原发病灶或转移病灶播散进入外周血循环的肿瘤细胞，目前已有大量CTCs检测相关的临床试验见诸报道，这些临床研究已证实CTCs是肿瘤侵袭转移的重要环节，因而对这些细胞的检测具重要临床意义。
外周血CTCs的检测取材方便，重复性强，可实时监测癌细胞转移的情况，是诊断肿瘤的理想检测标本来源。
由于原发灶和转移灶的肿瘤细胞具有异质性，CTCs可表现出与原发灶肿瘤细胞相迥的特性，这种异质性的机制尚未完全阐明，这对CTCs的检测造成一定的影响。
目前已有较多实验结果提示CTCs能预示肿瘤进展及转移，因此CTCs的临床意义及其实用性仍值得更多研究来加以证实。
随着过去数年中CTCs检测技术的不断提高， CTCs生物学特性与临床意义研究也取得较大的进展。
本文对近年来CTCs的生物学特性及其检测方法和应用进展作一综述。
1 CTCs的生物学特性1.1 CTCs的休眠和增殖：当肿瘤细胞随循环播散并于远处组织或器官存活下来，即形成了转移瘤(例如骨髓、肺脏或者脑)。
但CTCs在循环过程中多处于休眠期，期间也可能会发生凋亡，因此只有少部分CTCs最终形成转移灶。
从脉管中侵出的肿瘤细胞必须在新的微环境中找到或建立适合其生长的“穴巢”才能保证它在转移灶中能够存活。
播散的肿瘤细胞可能会变得具有更强的侵袭能力。
有些时候，它们可能会离开侵袭组织重新进入循环，甚至归巢至原发灶。
研究循环肿瘤细胞检测在卵巢上皮性肿瘤中的应用进展
综述与进展研究循环肿瘤细胞检测在卵巢上皮性肿瘤中的应用进展余盛权，黄浩#（广东医科大学，广东湛江 524000）摘要：目的：卵巢上皮性癌（EOC）发病隐匿，早期诊断困难，易发生侵袭及转移，发展迅速，确诊时往往处于疾病晚期。
因此，研究卵巢癌细胞恶性生物学行为的分子机制尤为重要。
近年来，循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs）检测技术取得了快速发展，对恶性肿瘤辅助诊断、疗效评价、预后监测等具有重要的指导作用。
本研究分析CTCs在EOC的研究进展。
关键词：卵巢上皮性；循环肿瘤细胞检测；恶性肿瘤妇科恶性肿瘤中，卵巢癌死亡率最高，且发病率呈逐年上升，全球每年卵巢癌新发病例达20万，死亡率高达14万[1]。
卵巢癌死亡率高的原因之一是大多数患者在确诊时已经出现转移[2]。
卵巢癌发病隐匿，早期诊断困难，易发生侵袭及转移，确诊时患者通常处于疾病晚期。
晚期卵巢癌五年生存率仅为20%，早期患者可达85％~90％[3]。
液体活检（Liquid BioPsy, LB）微创技术快速发展，利用高通量测序技术检测脱落进入血液的肿瘤细胞或其DNA、RNA。
相较于传统的组织活检，具有操作简便、可重复性好、无创、非侵入性等优势[4]。
该项技术是通过检测血液或尿液等体液中某些生物活性分子，从而做出诊断。
目前，临床上产前筛查所使用的无创基因检测即为液体活检的标志性应用之一。
液体活检常见的检测项目包括循环肿瘤DNA（Circulating Tumor DNA，CT DNA）、循环肿瘤细胞（Circulating Tumor cell, CTCs）[5]及肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor Cell-Drived Exosomes, TEXs）[6]。
1 CTCs概述CTCs指存在于外周血中各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，大部分CTC在进入外周血后发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者死亡风险。
循环肿瘤细胞富集检测技术和临床应用进展
循环肿瘤细胞富集检测技术和临床应用进展
罗磊;潘明新
【期刊名称】《肝癌电子杂志》
【年(卷),期】2017(000)002
【摘要】肿瘤复发转移是导致癌症死亡的主要原因,循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)是复发转移的一个重要中间过程,携带了大量的肿瘤进展和转移相关信息,使其在肿瘤复发转移、疗效监测和预后判断等方面具有潜在的应用价值。
CTC检测作为简单、无创、实时的液体活检方式,主要分为分离富集和检测两大步骤,分离富集主要有以基于抗原抗体特异结合反应的免疫富集方法和基于CTCs的物理特性进行分离的两大类方法,然后进行分子特征分析。
本文就循环肿瘤细胞的分离富集和检测方法及临床应用的研究进展进行综述。
【总页数】8页(P24-31)
【作者】罗磊;潘明新
【作者单位】南方医科大学珠江医院肝胆二科;南方医科大学珠江医院肝胆二科【正文语种】中文
【中图分类】R730.43
【相关文献】
1.液体活检循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA在肝癌中的临床应用进展 [J], 张劲国;许国雄
2.循环肿瘤细胞富集检测技术和临床应用进展 [J], 罗磊;潘明新;
3.循环肿瘤细胞富集检测技术和临床应用进展 [J], 罗磊;潘明新
4.肝细胞癌中循环肿瘤细胞的检测技术及临床应用进展 [J], 彭邦剑;黄文斌;赵娟娟;潘明新
5.循环肿瘤细胞分离富集与分析检测技术的研究进展 [J], 蒲思思; 周朝辉; 贾能勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
循环肿瘤细胞的检测
循环肿瘤细胞的检测李帅;刘晓强【摘要】循环肿瘤细胞的检测有助于研究肿瘤转移机制、指导肿瘤治疗、判断治疗效果、为推断预后提供可靠参考、监测肿瘤的转移或复发.随着研究的进展,循环肿瘤细胞逐渐被人们所重视.外周血中循环肿瘤细胞的数目较少,精确分离很困难.目前用于循环肿瘤细胞检测的方法很多,通常包括富集技术和分析技术两个部分,实际操作中常需要选择两个部分的不同方法加以有效结合;近年来随着实验技术的进步,建立了兼有富集和分析功能的细胞搜索系统.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)006【总页数】4页(P928-931)【关键词】循环肿瘤细胞;检测方法;富集;分析;细胞搜索系统【作者】李帅;刘晓强【作者单位】天津医科大学第二医院泌尿外科,天津,300211;天津医科大学第二医院泌尿外科,天津,300211【正文语种】中文【中图分类】R446.1血循环中检测到循环肿瘤细胞并不意味着有远处转移,但转移的概率会大大增加。
如果在转移灶出现前就能预测患者将要发生转移,就可以采取更加积极主动的治疗。
早在 1869年,Ashworth[1]就报道在 1例癌症死亡的患者外周血中发现了类似肿瘤的细胞,并首次提出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的概念。
但由于外周血中 CTCs的数目较少,精确分离很困难,限制了 CTCs的应用。
随着人们对肿瘤转移机制研究的深入,尤其是伴随现代检测技术的广泛应用,CTCs逐渐被人们所重视。
目前用于 CTCs检测的方法很多,通常包括富集技术和分析技术。
富集技术主要通过一些物理化学原理将这些细胞特异性地富集起来,提高 CTCs检测的敏感性。
分析技术主要依靠肿瘤细胞上存在的一些肿瘤特异性或器官特异性标记以及肿瘤细胞本身的形态学特征来发现 CTCs。
实际操作中常需要选择两个部分的不同方法并加以有效结合,最终寻找出敏感性和特异性均较高的方法。
近年来,随着CTCs研究的进展和实验技术的进步,建立了兼有 CTCs富集和分析功能的细胞搜索系统。
循环肿瘤细胞的检测方法及其在肺癌临床中的应用
还 受 到很 多 方 面 因素 的 影 响 ，例 如 ：操 作 步 骤 、判读 流 程 以及 受
试 剂 成 分等 ，一 样 的样 品接 受重 复 检测 之 后 出现 的结果 存 在很 大 可 能会 出现 偏 差 。Ｃ ｅ ｌ ｌ Ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ 检 测 系统 是 现 金 自动 化 程 度 最 高 的 检测 方 法 。该 检测 方 法 是人 为 因 素影 响最 小 的 ，上 述 系统 有 效 的
细胞 的存在 自十九世 纪末 “ 种子 ， 土壤” 学说 开始。就 目前 而言 ，对 循环肿瘤 细胞 的分析 已经建 立了可靠的、重复性好的检 测方法以及分 析 方 法 。就 目前 而 言 ，在 临床 上被 广 泛 使 用的 是 Ｃｅ ｌ ｌ Ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ检 测 方 法 。 循环 肿瘤 细胞 的计数 可 以有 效的指 导转 移性肿 瘤 患者的预 后评 估分 析 。与 此 同 时 可 以 有 效 的 反 应 出 肿 瘤 药 物 的 使 用 效 果 ，同 时 对 肿 瘤 的 复发发挥着非常显著的检测效果。
Ｉ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｔ ｈ ｅ ｍａ ｉ ｎ ｅ ｎ ｔ ｒ ｙ ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ ｌ ｕ ｎ ｇ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ
ｍｅ ｔ ａ ｓ ｔ ａ ｓ ｉ ｓ ｉ Ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏｃ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕｌ ａ ｔ ｉ ｎｇ ｔ ｕ ｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕｄ ｙ ｏｆ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｈａ ｓ ｂ ｅ ｅ ｎ ｒ ｅ ｃ ｅ ｉ ｖ ｅ ｄ ｅ ｘ ｔ ｅ ｎｓ ｉ ｖｅ ａ ｔ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ｏ ｍ ａ ｌ ｌ ｓ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ｏ ｆ ｓ ｏ ｃ ｉ ｅ ｔ ｙ ．Ｔ ｏ ｐ ｒ ｅ ｄ ｉ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｕｍｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｓ ｉ ｎ ｃ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｎ ｄ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｎ ｉ ｎ ｅ ｔ ｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｃ ｅ ｎ ｔ ｕ ｒ ｙ” ｓ ｅ ｅ ｄ， ｓ ｏ ｉ ｌ ”ｔ ｈ ｅ ｏ ｙ ｒ ｂ ｅ ｇ ａ ｎ ｔ ｏ． Ａｔ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ
循环肿瘤细胞的检测方法及在小细胞肺癌中的临床应用
循环肿瘤细胞的检测方法及在小细胞肺癌中的临床应用
循环肿瘤细胞(CTC)是指从原发肿瘤中脱落的癌细胞进入血液
循环，并在其他器官形成转移瘤的细胞。
CTC的检测可以反
映肿瘤的生长和转移情况，为肿瘤的筛查、诊断、治疗和预后评估提供了有力的手段。
下面介绍一种常用的CTC检测方法
及其在小细胞肺癌中的临床应用。
1. CTC检测方法
目前常用的CTC检测方法主要包括免疫磁珠分选法、流式细
胞术、聚合酶链反应等。
其中，免疫磁珠分选法广泛应用于临床检测中。
该方法利用肿瘤细胞表面的特定抗原与磁珠偶联，经过样品预处理后，磁珠上的肿瘤细胞被磁场分选出来，再通过细胞形态学分析、免疫荧光染色和分子分析等方式进行检测和鉴定。
2. 在小细胞肺癌中的临床应用
小细胞肺癌(SCLC)是一种高度侵袭性的肺癌，易发生转移和
复发，预后较差。
CTC检测作为SCLC治疗中的监测手段，
可以帮助医生及时评估治疗效果和预测患者的预后。
研究显示，采用CTC检测可以提高SCLC的诊断准确率和敏感性，尤其
对于无法取得组织样本的患者有较高的诊断价值。
同时，CTC 检测还可以预测SCLC患者的疗效和生存期，指导医生制定个体化的治疗方案和监测计划。
总的来说，CTC检测是目前肿瘤诊断和治疗的重要手段之一，
对于SCLC的诊断和治疗具有很强的临床应用价值。
随着技术的不断改进和完善，CTC的检测方法和临床应用将进一步完善和推广。
循环肿瘤细胞及其在乳腺癌诊疗中的应用研究进展
循环肿瘤细胞及其在乳腺癌诊疗中的应用研究进展肖乾坤【摘要】循环肿瘤细胞(CTCs)的发现使人们对肿瘤发展及转移有了更深入的了解.现已证实,在乳腺癌发生早期,就可能已经有肿瘤细胞进入外周血循环随血液转移到其他器宫或组织,在一定条件下可以发展为转移灶.如果能够准确检测出外周血中CTCs并分析研究检出的CTCs特征,将可能为临床治疗方案的制定或优化提供参考.本文综述了乳腺癌中CTCs的分子生物学特征、筛选和检测技术及临床研究进展.【期刊名称】《肿瘤基础与临床》【年(卷),期】2018(031)005【总页数】3页(P454-456)【关键词】循环肿瘤细胞;乳腺癌;检测技术;诊断;治疗【作者】肖乾坤【作者单位】郑州大学附属肿瘤医院病理科,河南郑州450008【正文语种】中文【中图分类】R737.9近年来，中国女性乳腺癌发病率和死亡人数逐年增高，北京等城市乳腺癌的增长率达到了5%，已然发展成为威胁我国女性健康的最常见肿瘤之一[1]。
导致乳腺癌难以治愈的主要因素是肿瘤的转移，提高对肿瘤转移的监控甚至寻找一种能够抑制肿瘤转移的方法成为近年来研究的热点。
现已证实，肿瘤细胞能够从原发肿瘤上脱离出来或由于其他一些医疗操作的原因进入血液循环系统，虽然在肿瘤细胞的转移过程中，大部分肿瘤细胞被机体的免疫系统所拦截并消灭，但是还是会有一部分肿瘤细胞能够生存下来[2]，并且形成转移灶，此类肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)[3]。
CTCs与乳腺癌患者的预后、临床分期、总生存期以及肿瘤的转移均密切相关[4]。
本文将从CTCs的生物学特征、筛选和检测技术以及临床研究现状方面综述乳腺癌CTCs的相关研究。
1 CTCs生物学特征1.1 CTCs基因研究研究[5-6]表明，对单个CTCs进行全基因组测序并对特定的基因突变进行分析，有利于进行针对性治疗，改善治疗方案，减少对患者不必要的化疗。
循环肿瘤细胞的研究与应用
循环肿瘤细胞的研究与应用随着生物技术和医学研究的不断发展，循环肿瘤细胞成为了近年来备受关注的研究对象。
循环肿瘤细胞，简称CTCs，是指在肿瘤细胞侵袭时，从原发病灶进入血液循环系统并进行远处转移的肿瘤细胞。
它们携带着原发病灶的基因和表型，并具有高度恶性和耐药性，因此对肿瘤的治疗和预后具有重要意义。
本文将就循环肿瘤细胞的研究和应用展开讨论。
一、循环肿瘤细胞的检测方法当前，循环肿瘤细胞的检测方法主要分为两类：常规检测法和新型检测法。
常规检测法包括细胞计数、荧光原位杂交、PCR检测以及CBA等技术，这些技术检测CTCs的成功率很高，检测结果稳定，但检测时间和成本较高。
而新型检测法包括微流控芯片、纳米技术、磁性分选和激光捕获等，这些技术具有快速、准确、高通量、低成本的特点，已经成为研究CTCs的热点方向之一。
二、循环肿瘤细胞的应用CTCs在肿瘤预后评估、肿瘤筛查及监测、肿瘤治疗和个体化治疗等方面应用广泛。
其中，肿瘤预后评估是CTCs应用的最主要领域之一。
CTCs的高度恶性和耐药性使得它们成为肿瘤复发和转移的主要来源，并且预后较差的肿瘤患者体液中CTCs的含量显著高于预后良好的患者。
肿瘤筛查及监测也是CTCs应用的重要领域之一。
CTCs可以帮助早期发现肿瘤并进行监测，及时进行治疗，降低死亡率。
此外，CTCs还可作为肿瘤治疗和个体化治疗方案的重要参考依据。
三、CTCs在肿瘤治疗中的作用近年来，随着药物治疗的不断进步，肿瘤治疗已经从传统的化疗、放疗等单一治疗方式发展到了多学科综合治疗。
在肿瘤细胞的治疗过程中，CTCs具有重要的作用。
首先，CTCs可以通过对肿瘤细胞的检测，制定个体化治疗方案，加强肿瘤治疗的有效性。
其次，CTCs可能会通过参与肿瘤微环境的调节以及肿瘤干细胞的转化等机制，对肿瘤治疗中的复发和转移产生作用。
这些结果表明，针对CTCs的治疗将为肿瘤治疗提供潜在治疗潜力。
四、循环肿瘤细胞的研究进展目前，循环肿瘤细胞的研究主要集中在三个方面：CTCs的分子生物学特征，CTCs与肿瘤干细胞的关系和肿瘤微环境中CTCs的作用。
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1869年，澳大利亚医生Ashworth ［1］初次提出循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs ）的概念。
CTCs 作为一种“液体活检”标本在肿瘤的临床意义已被明确证实［2，3］。
随着研究不断深入，CTCs 的许多特征如上皮间质转化、异质性及循环肿瘤干细胞等被发现。
本文就CTCs 的基本生物学行为、检测技术进行阐述。
1循环肿瘤细胞基本生物学行为细胞自原发灶脱落进入外周血循环系统并在远处组织、器官增殖形成转移灶，这部分进入循环系统的细胞即称之为循环肿瘤细胞CTCs ［4］。
由于检测技术的限制，过去尚不能检测到或只能通过有创性检查手段才可检出，因此CTCs 一直未引起重视［5］。
随着检测技术的不断发展，对其转移机制的研究也不断深入。
临床上许多患者发现肿瘤时已属晚期，严重影响了患者的预后；另有一部分患者虽属早期，但在原发灶切除后不久却出现了转移和复发，这些都与CTCs 密切相关。
浸润、转移和复发是恶性肿瘤发展的标志，其机制非常复杂。
整合蛋白和钙粘连蛋白在生理条件下将上皮细胞与上皮细胞及细胞外基质紧密相连，因此上皮细胞之间连接十分稳定。
然而，间叶组织间由于缺乏上述紧密连接而不稳定。
在肿瘤细胞进入脉管系统之前，肿瘤细胞之间失去正常条件下细胞间的紧密连接，而表现出更多间叶组织细胞的特征即上皮-间叶转化（epithelial mesenchymaltransition，EMT ）［6］。
CTCs 同时表达上皮和间叶两种组织标记物：在细胞解离过程中，CTCs 下调上皮组织特定标志物如细胞角蛋白和上皮细胞粘附分子，同时上调间叶组织标记物如波形蛋白的表达，这有利于细胞逃离原发灶进入血液循环［7］。
EMT 这一特性对现存的一些CTCs 的检测方法有着重要的影响。
例如针对上皮细胞表面标记物的检测方法就无法检测到发生［收稿日期］2016-05-05；［修回日期］2016-07-15［作者简介］马富玲，博士，主要研究循环肿瘤细胞筛查、临床意义。
循环肿瘤细胞基本生物学行为及检测技术马富玲（天津医科大学第二医院，天津300211）摘要：循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)是脉管中的肿瘤细胞，被认为是肿瘤血液转移的关键步骤之一。
循环肿瘤细胞的检测对于肿瘤的诊断、治疗和预后判定都具有非常重要的意义，因其稀缺性及异质性其检测方法一直是肿瘤研究的热点。
本文从CTCs 生物学行为、检测方法方面综述了CTCs 临床应用的最新研究进展。
关键词：循环肿瘤细胞；生物学行为；检测；临床意义【文章编号】2095-3720（2016）09-0764-05【中图分类号】R73【文献标志码】BBasic biological behaviors and detection technology of circulating tumor cellsMA Fu-ling (Tianjin Medical University Second Hospital,Tianjin 300211,China)Abstract:Circulating tumor cells (CTCs)are the tumor cells in vessel,and considered as the key step in tumor blood metastasis.Detection of CTCs in cancer patients plays very important roles in diagnosis,treatment and prognosis.The heterogeneity and scarcity of CTCs make it very difficult in detection.In this paper,we reviewed the latest research progress in basic and clinical applications of CTCs.Key words:Biological behaviour；Detection；Clinical significance;Circulating tumor cell丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐丐综述DOI:10.16548/j.2095-3720.2016.09.0232016年9月Journal of Logistics University of PAP（Medical Sciences）Sep.2016EMT转化的CTCs，未检出率可达38%～40%，然而该部分“隐蔽细胞”且更易形成转移灶，并且与疾病预后息息相关［8］。
Aktas采用逆转录PCR发现在转移性乳腺癌患者CTCs表面EMT相关标志分子如Twist1、蛋白激酶B、磷脂酰肌醇-3激酶α均有不同程度表达［9］。
Rossi E通过动物实验首次证明Ep-CAM（epithelial cell adhesion molecule）高表达的CTCs更具侵袭性［3］。
对于经血行转移形成的转移瘤，CTCs在诱导转移瘤形成的过程中扮演了重要角色。
CTCs形成转移灶需经历3个步骤：粘附、穿壁和定植。
肿瘤细胞进入循环系统后由于肿瘤细胞自身因素（缺乏变形能力不能顺利通过血管，或缺乏形成癌栓能力、宿主的免疫识别及机械损伤），绝大多数在极短时间内死亡，只有极少数细胞可存活下来，它们逃脱免疫机制不断增殖，并最终发展为转移灶［11］。
目前不仅在晚期肿瘤患者的外周血中能发现CTCs，某些肿瘤比如早期乳腺癌，早期肺癌、隐匿期肿瘤患者的外周血中也能发现CTCs，这种现象说明在现有检查方法发现肿瘤之前就有CTCs进入血液，因此对于这部分患者应高度重视。
与原发肿瘤及转移灶内肿瘤细胞一样，CTCs具有明显异型性，包括细胞体积增大、核浆比例失调且染色质呈细颗粒状或斑点状、增殖活力强、癌基因及特异标志物高表达等。
Meng等研究发现，CTCs 的核浆比例明显高于正常血白细胞（0.8±0.1vs 0.55±0.05，P<0.001），CTCs的直径（29.8±6.5）μm 较原发肿瘤（32.0±5.8）μm或转移灶（33.9±8.3）μm中的肿瘤细胞小，但远较白细胞大很多，提示肿瘤负荷和治疗状况影响CTCs［12］。
为了探究存活下来CTCs的增殖活性，El-Naggar AK等使用流式细胞术对肾癌患者研究分析，证明进入外周血CTCs大多处于凋亡状态，仅有少数处于高增殖状态并形成转移灶，存活下来的肿瘤细胞具有高度增殖潜能［13］。
Kallergi等对转移性乳腺癌患者血标本检测后发现，CTCs可表达血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1α和粘着斑激酶等多种关键成分，参与肿瘤血管生成［14］。
在转移灶形成过程中，新生血管不仅能为细胞提供营养，而且内皮细胞还可分泌多种生长因子促进肿瘤生长。
一般来说，原发灶对人体危害程度并不高，但转移瘤却可影响人体主要器官功能导致患者死亡，因此，在原位癌治疗后，对转移癌也不能忽视。
研究发现原发和转移性前列腺癌患者5年平均生存率分布为100%和28%［14，15］。
既往研究认为外周血中呈现CD45-/Ep CAM+/CK+的细胞即CTCs，与肿瘤患者预后密切相关。
但事实上，少数具备肿瘤干细胞潜能形亚群的细胞（circulating tumor stem cell，CTSC）在微环境适宜时可能才是最终形成转移灶的根本所在，因此CTSC的检测更具有临床意义。
Reube等发现约60%的CTCs表达与干细胞相关基因NOTCH1［16］。
Theodoropoulos等发现在乳腺癌患者外周血CTCs中也存在另一部分CD44+/CD24-低表达的CTSC，提示CTSC也存在异质性［17］。
张秀珍等认为CTSC标记物CD44、CD133连合CD45、Ep-CAM可作为CTSC的检测指标，对患者的预后判断疗效监测具有重要意义［18］。
2循环肿瘤细胞的分离和鉴定近年来伴随现代生物学技术的不断进步，免疫磁珠、多色荧光标记和生物细胞分选芯片等细胞分选技术己经能够准确、快速的分离外周血中的肿瘤细胞。
CTCs检测一般包括细胞富集和细胞鉴定，二者均较复杂且技术要求相对较高。
2.1循环肿瘤细胞富集技术密度梯度离心法根据各种细胞的密度不同，用1.077g/ml的密度梯度把单核细胞和肿瘤细胞从其它血细胞中分离出来。
OncoQuick系统使分离出的肿瘤细胞更加纯化，提高了CTCs的检出率。
该方法优点是基于细胞物理学特性的富集技术为下一步的形态学、细胞学及分子生物学研究提供了条件，对人员操作水平要求不高且经济实用，局限性在于多次离心可造成CTCs的破坏和丢失［19］。
Pachmann K比较了密度梯度离心法和红细胞裂解液这两种方法富集肿瘤细胞的效率，其敏感度相对不足且依赖于细胞的特性、离心时间、温度等多种因素［20］。
膜滤过技术（Isolation by Size of Epithelial Tu-mor cells，ISET）依据肿瘤细胞与白细胞大小的不同，用直径8μm孔径的聚碳酸酯膜将二者分离，直径大于8μm的肿瘤细胞留于膜的表面。
此方法可达到从每毫升全血中检测到1个CTCs的敏感性，且能够检测到CTCs微栓子。
该方法具有敏感性高、破坏性低等优势。
分离到的CTCs具有活性，能较好保持CTCs遗传学、免疫化学等特性；其局限性在于由于细胞异质性，CTCs大小并不完全一致，不能检出体积小的肿瘤细胞，不能富集所有CTCs。
免疫磁珠分选法（magnetic activated cell sorting，MACS）将肿瘤细胞与其他细胞分离是利用包被了抗体的磁珠结合分离细胞上的蛋白质抗原，形成抗原--抗体-磁珠免疫复合物，在磁力作用下发生移动而实现的。
MACS分为正选法和负选法：正选法即分离得到的就是目的细胞；负选法即富集不需要细胞，剩下的就是目的细胞。
二者富集效率不同：正选法可对CTCs进行103~1.5×l05倍的富集［21］；负选法只进行3~4倍的富集，二者结合可提高检测的敏感度。
该法具有特异性高、富集效率高并可计数等优点，不足之处在于可能导致部分尤其是高侵袭性CTCs如经历EMT转化细胞的丢失［22］；价格比较昂贵、技术要求较高且缺乏特异性标志物。
2.2循环肿瘤细胞检测技术免疫细胞化学法（Immunocytochemistry，ICC）的基本原理是通过不同的显色剂对抗体进行标记，在细胞原位利用抗原与抗体的特异性使二者相结合，再进行定位、定性及定量检测。