04氨中毒实验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
氨在肝性脑病 发病机制中的作用
实验目的
1.复制氨中毒的动物模型； 2.观察氨中毒时动物的神经精神症状，检测 不同状态下的血氨水平； 3.了解肝脏对氨的清除作用。
实验原理
通过结扎动物门脉血管，阻断绝大 部分肝叶血流，再从十二指肠注入复方 氯化铵溶液，复制氨中毒动物模型，以 验证血氨升高在肝性脑病发病机制中的 作用。
（二）血浆氨的测定
原理：血浆中氨在亚硝基铁氰化钠及碱性条件 下与苯酚、次氯酸钠作用，生成蓝色解离型靛酚， 可通过分光光度计检测氨水平的变化。 步骤：依次在试管中加入离心后的血浆0.25 ml， 蒸馏水2.75 ml，酚试剂1 ml，次氯酸钠1 ml，充分 混匀，置试管于37℃水浴箱15~30分钟，取出后冷 却，用635nm波长比色，读取各管光密度值。
1.甲组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯化铵 溶液（实验组）； 2.乙组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入生理盐水 （对照组）；
3.丙组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯化 铵溶液（对照组）；
4.丁组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠不注入任何溶 液（对照组）。
实验步骤
实验注意事项
动物体重相差不能太大。
剪断镰状韧带时注意不要损伤膈肌和肝脏。
棉线要绕在肝脏根部，结扎要紧。
思考题
1．血氨升高引起肝性脑病的机制。
wk.baidu.com
2．乙组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入生理盐水 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：用生理盐水代替复 方氯化铵溶液注入十二指肠。
3．丙组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯 化铵溶液 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：不结扎门脉血管。 4．丁组：手术操作，不结扎门脉血管 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：肝门脉血管绕棉线 后不结扎门脉血管，不向十二指肠注入任何溶液。
（一）动物实验操作： （二）血浆氨的测定
（一）动物实验操作：
1．甲组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠 注入复方氯化铵溶液
（1）常规称重、固定、股三角区剪毛、局麻。切开股三角区，逐层钝性分离股 动脉，动脉下穿两根线备用。 （2）腹部正中剪毛，自剑突往下6cm区域局麻，行上腹部正中切口，沿腹白线 正中打开腹腔。 （3）耳缘静脉注射1％肝素（1ml/kg），结扎股动脉远端，近端夹动脉夹，股 动脉插管、固定。待兔子状态较平稳后，观察兔一般情况，从股动脉插管放血 2ml，离心取血浆做血氨测定。 （4）轻轻按压肝脏膈面，剪断肝脏与横膈之间的镰状韧带；再将肝叶上翻，剥 离肝胃韧带，使肝叶完全游离，以右手食、中指夹持粗棉线沿肝左外叶、右中叶、 方叶之根部环绕一周（右外叶及尾状叶门脉血管为独立分支，不会同时被结扎而 得以保留），结扎肝门脉血管。向十二指肠内注入复方氯化铵溶液6~8 ml，20分 钟后从股动脉插管放血2ml，并观察记录兔子呼吸、角膜反射、肌张力等指标 （若兔子未及20分钟便开始抽搐，应立即从股动脉插管放血）；必要时，追加注 入复方氯化铵溶液并观察记录，直至兔子死亡。
实验对象
健康家兔
实验药品和器材
1％普鲁卡因，1％肝素，复方氯化铵溶液， 酚试剂，次氯酸钠试剂，蒸馏水，生理盐水， 婴儿磅秤，手术器械，分光光度计，离心机， 水浴箱，注射器2支，注射针头（5、7号各 一），试管4支，5ml吸管3支，0.5 ml吸管2支， 巴氏吸管，粗棉线1根。
实验步骤
实验分组：分为实验组和对照组
实验目的
1.复制氨中毒的动物模型； 2.观察氨中毒时动物的神经精神症状，检测 不同状态下的血氨水平； 3.了解肝脏对氨的清除作用。
实验原理
通过结扎动物门脉血管，阻断绝大 部分肝叶血流，再从十二指肠注入复方 氯化铵溶液，复制氨中毒动物模型，以 验证血氨升高在肝性脑病发病机制中的 作用。
（二）血浆氨的测定
原理：血浆中氨在亚硝基铁氰化钠及碱性条件 下与苯酚、次氯酸钠作用，生成蓝色解离型靛酚， 可通过分光光度计检测氨水平的变化。 步骤：依次在试管中加入离心后的血浆0.25 ml， 蒸馏水2.75 ml，酚试剂1 ml，次氯酸钠1 ml，充分 混匀，置试管于37℃水浴箱15~30分钟，取出后冷 却，用635nm波长比色，读取各管光密度值。
1.甲组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯化铵 溶液（实验组）； 2.乙组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入生理盐水 （对照组）；
3.丙组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯化 铵溶液（对照组）；
4.丁组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠不注入任何溶 液（对照组）。
实验步骤
实验注意事项
动物体重相差不能太大。
剪断镰状韧带时注意不要损伤膈肌和肝脏。
棉线要绕在肝脏根部，结扎要紧。
思考题
1．血氨升高引起肝性脑病的机制。
wk.baidu.com
2．乙组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠注入生理盐水 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：用生理盐水代替复 方氯化铵溶液注入十二指肠。
3．丙组：手术操作，不结扎门脉血管，十二指肠注入复方氯 化铵溶液 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：不结扎门脉血管。 4．丁组：手术操作，不结扎门脉血管 手术操作及取血同甲组。不同之处在于：肝门脉血管绕棉线 后不结扎门脉血管，不向十二指肠注入任何溶液。
（一）动物实验操作： （二）血浆氨的测定
（一）动物实验操作：
1．甲组：手术操作，结扎门脉血管，十二指肠 注入复方氯化铵溶液
（1）常规称重、固定、股三角区剪毛、局麻。切开股三角区，逐层钝性分离股 动脉，动脉下穿两根线备用。 （2）腹部正中剪毛，自剑突往下6cm区域局麻，行上腹部正中切口，沿腹白线 正中打开腹腔。 （3）耳缘静脉注射1％肝素（1ml/kg），结扎股动脉远端，近端夹动脉夹，股 动脉插管、固定。待兔子状态较平稳后，观察兔一般情况，从股动脉插管放血 2ml，离心取血浆做血氨测定。 （4）轻轻按压肝脏膈面，剪断肝脏与横膈之间的镰状韧带；再将肝叶上翻，剥 离肝胃韧带，使肝叶完全游离，以右手食、中指夹持粗棉线沿肝左外叶、右中叶、 方叶之根部环绕一周（右外叶及尾状叶门脉血管为独立分支，不会同时被结扎而 得以保留），结扎肝门脉血管。向十二指肠内注入复方氯化铵溶液6~8 ml，20分 钟后从股动脉插管放血2ml，并观察记录兔子呼吸、角膜反射、肌张力等指标 （若兔子未及20分钟便开始抽搐，应立即从股动脉插管放血）；必要时，追加注 入复方氯化铵溶液并观察记录，直至兔子死亡。
实验对象
健康家兔
实验药品和器材
1％普鲁卡因，1％肝素，复方氯化铵溶液， 酚试剂，次氯酸钠试剂，蒸馏水，生理盐水， 婴儿磅秤，手术器械，分光光度计，离心机， 水浴箱，注射器2支，注射针头（5、7号各 一），试管4支，5ml吸管3支，0.5 ml吸管2支， 巴氏吸管，粗棉线1根。
实验步骤
实验分组：分为实验组和对照组