乙肝表面抗原检测操作规程
乙肝病毒表面抗原诊断操作规程
乙肝病毒表面抗原诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升,设阴、阳性对照
各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)
充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,
静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,
封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双
波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性,否则为阴性。
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
14HBsAg临床检验标准操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量测定试剂盒(化学发光法)临床检验标准操作规程项目名称:乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量测定试剂盒(化学发光法)操作规程文件号:KM-SOP-CLIA-014第1版第 1 页共 4 页2008年1月1日起实施,2010年9月1日修订起草人:起草日期:2007-12-14复核人:复核日期:批准人:批准日期:分发部门或个人:1.实验原理:本试剂盒采用双抗体夹心法测定血清中HBsAg水平,用抗体包被微孔板制成固相抗体,用酶标记抗体制成酶标抗体。
在包被板微孔中先加入HBsAg校准品或待测血清,再加入酶标记物,温育后即形成固相抗体—抗原—酶标抗体复合物,充分洗涤后,加入化学发光底物液,然后测定其发光强度(RLU),根据校准曲线即可算出样品中HBsAg 的含量,样品的RLU值随HBsAg浓度的增加而升高。
2.临床应用:乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒的外膜蛋白,是血清中首先出现的HBV标志物。
在急性肝炎时它很快消失,若6个月以后仍不消失者,可成为慢性肝炎(CH)或HBsAg携带者,并可持续几年或几十年。
HBsAg的检测对于乙型肝炎的诊断和鉴别、流行病学的调查、献血员的筛选、预后判断及治疗效果的考察和药物的筛选具有重要的意义。
3.标本采集及处理:检测标本种类要求:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本。
溶血、脂血、黄疸血不宜使用,如需使用,应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。
受检者准备:受检者无需做特殊准备;标本采集及处理:采用正确医用技术收集全血标本,离心分离后提取血清用于检测。
使用抗凝剂(浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠,5mmol/L EDTA-Na,15IU/mL肝素,10mmol/L 草酸钠)不影响检测结果。
分离血清应彻底,不含纤维蛋白;标本保存:待测血清如在24小时之内使用,可于2-8℃保存,若需长期存放应保存在-20℃以下,并避免反复冻融。
乙肝两对半操作规程
免疫室乙肝两对半操作规程一、试验原理“乙肝两对半”指乙型肝炎病毒表面抗原(HBSAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBSAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)此五项指标,目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测血清标志物,判断是否感染乙肝与粗估病毒复制水平初步检查。
两对半中各项试验反应原理如下: 1、乙型肝炎病毒表面抗原检测:采用ELISA“双抗体夹心法”原理,用抗-HBs包被板条,用HRP 标记抗-HBs为酶标记物,以四甲基联苯氨(TMB)和过氧化物为底物。
当标本中存在HBSAg时,该表面抗原与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBSAg-抗-HBs-HRP复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。
在试验结束时,有颜色变化的,提示有HBSAg存在,无颜色或颜色变化微弱的,则提示不存在HBSAg。
2、乙型肝炎病毒表面抗体检测:采用ELISA“双抗原夹心法”检测人血清或血浆中的抗-HBS,采用HBSAg包被反应板,加入待测标本,同时加入HBSAg-HRP进行孵育。
当标本中存在抗-HBS时,该抗体与包被的HBSAg结合并与酶结合物形成HBSAg-抗-HBS-HBSAg-HRP复合物,洗去游离反应物,加入显色剂,将有明显颜色变化;当标本中没有抗-HBS时,加入底物后没有或只有很轻微的颜色变化。
3、乙型肝炎病毒e抗原检测:采用ELISA“双抗体夹心法”检测,用单抗-HBe包被板条,用HRP标记抗-HBe为酶标记物,以四甲基联苯氨(TMB)和过氧化物为底物。
当标本中存在HBeAg时,该HBeAg与包被抗-HBe结合并与抗-HBe-HRP结合形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe-HRP复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。
在试验结束时,有颜色变化的,提示有HBeAg存在,无颜色或颜色变化微弱的,则提示不存在HBeAg。
乙肝表面抗原检测流程
乙肝表面抗原检测流程
1. 采集样本,通常使用静脉血作为检测的样本。
医务人员会使用消毒的针头抽取一定量的血液。
2. 样本处理,采集到的血液样本会被送往实验室进行处理。
在实验室中,血清会被分离出来,以便进行后续的检测。
3. 酶免疫法检测,乙肝表面抗原通常使用酶免疫法(ELISA)进行检测。
ELISA是一种常用的免疫学检测方法,通过检测血清中特定抗原或抗体的存在来进行诊断。
4. 结果分析,实验室技术人员会分析样本中乙肝表面抗原的检测结果。
阳性结果表明患者体内存在乙肝病毒,阴性结果则表明患者体内暂时没有乙肝病毒的感染。
5. 结果报告,最终的检测结果会被记录在报告中,并由医生进行解读和诊断。
如果检测结果呈阳性,医生可能会建议进行进一步的检测以确认诊断,并制定相应的治疗方案。
需要注意的是,以上流程仅为一般的乙肝表面抗原检测流程,
具体的操作步骤可能会因医疗机构和实验室的不同而略有差异。
在进行乙肝表面抗原检测前,建议咨询专业医生以获取详细的检测流程和注意事项。
1乙肝表面抗原检测操作规程
1.1乙肝表面抗原检测操作规程-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)1原理:在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体(HbsAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗原(HBsAg)。
2试剂:试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司包装规格:96Test/Kit试剂盒组成:HbsAb预包被微孔板(包被HbsAb),HbsAg酶标抗体(含HRP标记HbsAb), HbsAg阳性对照(含基因工程HbsAg),HbsAg阴性对照(正常人血清),HbsAg样品稀释液(含BSA缓冲液),浓缩洗涤液(PBS-T 缓冲液),底物A(含H2O2),底物B(含TMB),终止液(含H2SO4),封板膜,自封袋,说明书。
试剂储存条件及有效期:2~8℃避光保存,有效12个月。
3样本采集:取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及时测定可置于4℃冰箱保存,如长期保存需置于-15至-20℃冻存,并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性,建议不使用。
4所需仪器全自动酶免分析仪新鲜蒸馏水或去离子水酶标仪(单波长450nm或双波长450nm/630nm)微量移液器37℃恒温箱或水浴箱洗板机或洗瓶5检验方法平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温(18~25℃),微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。
配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1:19稀释后使用。
编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。
稀释:每孔加入20ul样品稀释液。
加样:分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
温育:置37℃温育60min。
加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
区人民医院乙肝病毒表面抗原操作规程
区人民医院乙肝病毒表面抗原(HBsAg)操作规程1方法胶体金法2原理本品采用胶体金免疫层析专业技术,在玻璃纤维素膜上预包被HBsAg,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠IgG.检测阳性血清或血浆样本时,样本中HBsAg与胶体金标记抗体结合形成复合物,由于层析作用复合物沿纸条向前移动,经过检测线时与预包被的抗体结合形成夹心物而凝聚显色,游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富集显色。
阴性标本则尽在对照线处显色。
3 试剂英科新创(厦门)科技有限公司4 试剂组成4.1试纸条25条4.2说明书1份5 仪器目测6 操作步骤6.1将试纸条取出,水平放置并做好标记。
6.2用加样器或毛细吸管吸取60ul新鲜全血(或血清、血浆)缓慢滴加与试剂条箭头下方的垫片上6.3为防止弱阳性标本的漏检,请于加样后10分钟观察并记录试验结果。
7 结果判断阴性:出现一条红线。
阳性:出现二条红线。
无效:不出现红线。
8 正常参考值阴性9 临床意义同ELISA法测定。
10 标本采集10.1 可采用全血、血清、血浆进行检测,血浆标本对抗凝剂无要求。
10.2 采集静脉血的血清血浆应在无菌条件下,避免样品溶血。
10.3 血清、血浆在7天内检测,样品须放在2-8℃保存,大于7天则冷冻保存。
11 注意事项11.1实验室环境应保持一定湿度、避风。
避免在过高温度下进行。
11.2试纸可在室温下保存,谨防受潮。
低温保存下的应平衡室温方可使用。
11.3试剂从包装中取出后,应尽快进行实验,避免放置于空气中时间过长,导致受潮。
11.4实验应在加样10分钟内判读结果,只需在检测线出现紫红线,即可判断阳性结果。
乙肝表面抗原ELISA检测程序
乙型肝炎病毒表面抗原ELISA法检测程序1检验目的及原理1.1检验目的:乙型肝炎病毒表面抗原是乙型肝炎病毒感染的最主要免疫指标,乙型肝炎肝病毒的感染带来了严重的公共卫生问题。
母婴传播、性传播和血液传播是最主要的传播途径。
尽早的发现感染可以有效减少疾病的传播。
1.2检验原理:两步双抗体夹抗原ELISA试验用于检测HBsAg的酶免疫检测法,是在1971年,首先由Engvall,Perimann1,VanWeemen 以及Schuurs进行描述的。
在1976和1977年,建立了固相“夹心”酶免疫检测法。
HBsAg 在包被有多克隆抗体(Anti-HBsAg)的固相上被捕获,随后由酶标Anti-HBs进行检测显示。
在二十世纪80年代早期,开发了基于单克隆Anti-HBs的HBsAg检测法。
本实验采用单克隆Anti-HBs的两步夹心ELISA试验,微孔板上所包被及酶结合物所用分别为针对表面抗原不同位点的抗体。
如果被检测血清中存在表面抗原,则可通过双抗体夹心的桥联将辣根过氧化物酶(HRP)连接到微孔板上,使TMB呈色。
2 方法性能参数2.1两步双抗体夹抗原ELISA试验(1)敏感性:样品中HBsAg浓度达到0.5ng/m1,即可得到阳性结果。
(2)特异性:使用血浆、被检测者因各种病理因素而使血液中含有过高纤维蛋白原或者异嗜性抗体时,可能引起检测结果的假阳性。
3 标本3.1乙型肝炎病毒表面抗原的适宜检材为新鲜血液样本分离出的血清,不适合于混合血清、血浆或其他体液样本,特殊检材的要求及结果判断见其具体要求,不适用本程序。
3.2血液标本用不含添加剂的干燥洁净试管采集,采集后在37℃孵育1.5~2小时,2000 RPM 以上离心5分钟,分离血清。
3.3采用含有分离胶和促凝剂的试管采集的血液样本,采集后在37℃孵育0.5~1小时,2000 RPM以上离心5分钟,分离血清。
3.4严重脂血、严重溶血原则上不会影响检测结果,但洗涤一定要彻底、干净。
乙肝表面抗原标准操作规程
乙肝表面抗原标准操作规程一。
1.1 乙肝表面抗原是啥。
咱先来说说这乙肝表面抗原到底是个啥。
简单讲,它就是能反映一个人是不是可能感染了乙肝病毒的一个重要指标。
就好比是一个“小信号”,告诉咱们身体里可能有“敌人”入侵啦。
1.2 为啥要检测它。
这可太重要啦!检测乙肝表面抗原能让咱早早知道是不是被乙肝病毒给盯上了。
早发现就能早治疗,免得病情加重,那可就麻烦大了。
而且,知道了结果,也能让咱心里有个底,该注意啥,该咋预防,都能做到心里有数。
二。
2.1 检测前的准备。
要做这个检测,也有一些要准备的。
比如说,检测前得好好休息,别熬夜,要不然可能会影响结果。
还有啊,别吃那些太油腻、太刺激的东西,让身体保持一个比较“清爽”的状态。
2.2 检测的过程。
检测的时候呢,别紧张。
一般就是抽点血,送到实验室让专业的医生和仪器去分析。
这过程就像一场“侦察行动”,医生们通过各种手段找出那些可能存在的“敌人”线索。
2.3 检测结果咋看。
等结果出来了,要是显示阳性,那可就得小心了,可能是感染了乙肝。
要是阴性,也别大意,还得继续保持好的生活习惯,预防着点。
三。
3.1 阳性结果咋办。
要是真不幸是阳性,也别慌。
赶紧找医生,听听专业的意见。
可能需要进一步检查,看看病情到底咋样。
然后按照医生说的,该吃药吃药,该治疗治疗,要有信心打败这个“小病魔”。
3.2 阴性结果也不能放松。
阴性结果虽然是个好消息,但也不能掉以轻心。
还是要注意个人卫生,别和别人共用牙刷、剃须刀这些可能会传播病毒的东西。
打乙肝疫苗也是个好办法,给自己加一层“保护罩”。
这乙肝表面抗原检测是个很重要的事儿,大家都得重视起来,保护好自己的身体,健健康康的才好!。
乙肝抗原筛查操作方法
乙肝抗原筛查操作方法乙肝抗原筛查是一种常见的临床检测方法,用于检测个体是否感染了乙型肝炎病毒(HBV)。
乙肝抗原筛查主要是通过检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的存在与否来确定个体是否感染了乙型肝炎病毒。
下面将详细介绍乙肝抗原筛查的操作步骤以及相关注意事项。
1. 样本采集:首先,需要采集被检测者的血液样本。
常用的样本采集方法是静脉采血,在采集样本前应先做相关消毒处理,以避免交叉感染。
2. 样本处理:采集到的血液样本需要进行相关处理才能进行乙肝抗原筛查。
一般常用的方法是将血液样本离心分离,得到澄清的血清样本。
3. 抗原检测:离心分离得到的澄清血清样本即可进行乙肝抗原的检测。
常用的检测方法包括酶免疫分析法(ELISA)和荧光定量PCR法(qPCR)等。
ELISA 法是一种广泛应用的方法,可以通过特异性抗体与乙肝抗原结合来进行定性、定量的检测。
4. 结果解读:对于乙肝抗原的检测结果,一般分为阳性和阴性两种。
阳性表示被检测者感染了乙型肝炎病毒,阴性表示未感染。
需要注意的是,乙肝抗原筛查只能初步判断被检测者是否感染了乙肝病毒,不能确定感染的时间或潜伏期长短。
除了乙肝抗原筛查,还有其他相关的检测方法可供选择。
例如,可进行乙肝表面抗体(HBsAb)的检测,用于判断个体是否处于乙肝病毒感染后的康复期或曾经接种过乙肝疫苗;还可以进行乙肝e抗原(HBeAg)的检测,用于判断被检测者是否为乙肝病毒的携带者,或乙肝病毒感染的活动性程度。
在进行乙肝抗原筛查时,还需注意以下事项:1. 严格按照操作规范进行操作,避免污染和误差。
2. 使用符合质量标准的试剂和设备,确保检测结果的准确性和可靠性。
3. 对于阴性结果,应谨慎判断,可进行多次检测以确认结果。
4. 对于阳性结果,应及时进行进一步的检测和诊断,确认感染的类型、程度以及有无并发症。
综上所述,乙肝抗原筛查是一种简便、快速、准确的乙型肝炎病毒感染检测方法。
在临床上广泛应用,对乙型肝炎疫情的控制和患者的个体化治疗具有重要意义。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、检验申请单独检验项目申请:乙型肝炎病毒表面抗原(缩写HBsAg)测定;组合项目申请:肝炎标志物检查组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中,或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆,用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后,在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足:少于0.3ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本,包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆,避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min,离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间:室温(15-25℃)下可稳定48h,普通冰箱中(2-8℃)稳定7d,在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号,置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛,避免剧烈活动。
3.方法原理采用单克隆抗-HBs包被反应板,加入待测标本,同时加入抗-HBs-HRP,当标本中存在HBsAg时,该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。
4.试剂及其他用品4.1试剂:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒,由上海科华生物技术有限公司出品,试剂盒药品批准文号:国药准字S1*******(48人份);国药准字S1*******(96人份)。
1.2乙肝表面抗体检测操作规程1
乙型肝炎病毒表面抗体检测(ELISA)1原理在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原(HbsAg),配以酶标记抗体(HbsAg-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗体(HBsAb)。
2试剂:2.1试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)2.2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司2.3包装规格:96Test/Kit2.4试剂盒组成:HbsAg预包被微孔板(包被HbsAg),HbsAb酶标抗体(含HRP标记HbsAg), HbsAb阳性对照(含HbsAbde 阳性血清),HbsAb阴性对照血清(正常人血清),浓缩洗涤液(PBS-T缓冲液),底物A(含H2O2),底物B(含TMB),终止液(含2M H2SO4),封板膜,自封袋,说明书。
2.5试剂储存条件及有效期:2~8℃避光保存,有效12个月。
3样本采集:取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及时测定可置于4℃冰箱保存,如长期保存需置于-15至-20℃冻存,并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性,建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪(单波长450nm或双波长450nm/630nm)4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温(18~25℃),微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。
5.2配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1:19稀释后使用。
5.3编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。
5.4加样:分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.5加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ul;轻拍混匀。
5.6温育:置37℃温育25min。
5.7洗涤:用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干(每次应保持30~60s的浸泡时间)。
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请:乙型肝炎病毒表面抗原测定(HBsAg II quant);组合项目申请:乙肝病毒项目组合。
临床医生根据乙肝患者抗病毒疗效监测需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml,置含分离胶的真空采血管(黄盖管)。
2.1.2采用电子检验申请单,血标本试管粘贴附患者信息的条形码。
2.1.3标本采集后,通过LIS及标本条形码管理系统记录标本采集时间。
2.1.4标本采集后及时运送至实验诊断中心。
由标本处理中心负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。
2.1.5不合格标本2.1.5.1标本量不足:少于0.3ml的全血标本,或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.3其他如标识涂改、标本试管破裂等。
注:严重溶血或脂浊的标本,应在检验报告中标注标本状况,并建议复查;并在工作日志中记录。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间:室温(20℃~25℃)下可稳定一周,普通冰箱中(2℃~8℃)7天,-20℃3个月。
样本可以冻存5次。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩,对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号,置2℃~8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本,如果必须使用血浆,推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的针对乙肝病毒表面抗原。
采用双抗体夹心法原理,①第一次孵育:将含有样本,两种生物素化的anti-HBsAg单克隆抗体与钌复合体标记的一种anti-HBsAg单克隆抗体和anti-HBsAg多克隆抗体形成一种夹心复合体;②第二次孵育:加入链霉亲合素包被的微粒后抗原,该复合体通过生物素与链霉亲合素的相互作用与结合;③将反应液吸入测量池中,通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面,未与磁珠结合的物质通过Procell被去除。
区人民医院乙型肝炎表面抗原操作规程
区人民医院乙型肝炎表面抗原(HBsAg)操作规程1、原理:采用抗-HBs包被反应板,加入待测样本,经孵育后,加入抗-HBs-HRP,当样本中存在HBsAg时,该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗- HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。
2、标本采集与处理׃2.1 受检者准备:对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯,采血前应禁食4-6小时。
2.2静脉采血:除非是卧床病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,因此影响测定水平。
故在采血前至少应静坐5分钟。
一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3采血管:一般采用血清做检验,可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。
2.4标本处理:血清:采血后,室温下自然放置1-2小时,待血液凝固、血块收缩后,在于3000转每分钟离心15分钟,吸出血清待用。
血浆:采血后,样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后,充分离心,将血浆与血细胞分离后,吸出血浆待用。
2.5标本接收:接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期,对不合格标本应退回重采,并填写记录。
2.6标本储存:一般该标本应随到随做,血清和血浆标本在2-8o c保存。
如需长期保存,可在-20℃保存,并避免反复冻融。
3、试剂与仪器:3.1测定试剂:3.1.1生产厂商:英科新创(厦门)科技有限公司3.1.2批准文号:国药准字S1*******3.1.3包装:48T×1、96T×13.1.3试剂配置:25倍浓缩稀释液40ml×1瓶HBsAg微孔反应板96孔HBsAg酶结合物 6.2 ml ×1瓶HBsAg阳性对照 1.0 ml ×1瓶HBsAg阴性对照 1.0 ml ×1瓶显色液A、B液各8.0 ml ×1瓶终止液7 ml×1瓶封板纸5片说明书1份3.2测定仪器:3.2.1酶标仪:上海安泰MODEL MT-8583.2.2洗扳机:ANALYTECH8284、操作步骤:4.1配液:配制工作浓度洗涤液(以纯化水做25倍稀释)4.2编号:将样品对应微孔按序编号(共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔)4.3加样:加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。
1.1乙肝表面抗原检测操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)1原理:在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体(HbsAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗原(HBsAg)。
2试剂:2.1试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)2.2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司2.3包装规格:96Test/Kit2.4试剂盒组成:HbsAb预包被微孔板(包被HbsAb),HbsAg 酶标抗体(含HRP标记HbsAb), HbsAg阳性对照(含基因工程HbsAg),HbsAg阴性对照(正常人血清),HbsAg样品稀释液(含BSA缓冲液),浓缩洗涤液(PBS-T缓冲液),底物A(含H2O2),底物B(含TMB),终止液(含H2SO4),封板膜,自封袋,说明书。
2.5试剂储存条件及有效期:2~8℃避光保存,有效12个月。
3样本采集:取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及时测定可置于4℃冰箱保存,如长期保存需置于-15至-20℃冻存,并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性,建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪(单波长450nm或双波长450nm/630nm)4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温(18~25℃),微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。
5.2配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1:19稀释后使用。
5.3编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。
5.4稀释:每孔加入20ul样品稀释液。
5.5加样:分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育:置37℃温育60min。
5.7加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
HbsAg检测标准操作
HbsAg检测标准操作HbsAg检测标准操作一、原理:本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标纪抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其它试剂,采用双抗体夹心原理检测人血清或血浆中的乙肝表面抗原(HBsAg).二、实验前病人准备:无特殊要求。
三、标本采集及要求:①核对患者姓名和和准备的器材。
②静脉采血,除非是卧床的病人,一般采血取坐位,从肘静脉取血。
③采集标本为血清,不应溶血。
④对不符合要求的标本血重新采集。
⑤采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器,一人一管,用后毁形,用500mg/L有效氯浸泡消毒30分钟,回收、焚烧、做好登记。
四、试剂:①试剂盒组成(万春生物)A、HBsAg酶标板4×12孔B、HbsAg阳性对照0.5ml×1管C、HBsAg阴性对照0.5ml×1管D、HBsAg酶标试剂3ml×1瓶E、浓缩洗涤剂20ml×1瓶F、显色剂A液3ml×1瓶G、显色剂B液3ml×1瓶 H、终止液3ml×1瓶J自封液 1个 K、封板膜1张②质控血清:应在测量未知样本的同时检测质控物并保确质控在可接受的范围,并且结果在三个标准差范围内。
③试剂应选择特异性强,亲和力高的抗原及纯度高、效价高、特异性强,亲和力高的抗体。
④试剂贮存及稳定性:试剂在2-8℃保存可稳定至瓶签所示失效日期.⑤质控物批号: 0512. -20℃保存试剂在2-8℃保存可稳定至瓶签所示有效日期。
五、仪器:北京普朗DNX-9620电脑洗板机,北京普朗DNX-9620酶六、操作程序:①分析参数:方法:酶联免疫法,波长450nm,温度37℃②操作步骤:A、配液:将20ml浓缩洗涤液(20×1)用蒸馏水稀释至400ml 备用。
B、编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴阳性对照各1孔和空白对照1孔及质控1孔。
A1空白,A2,A3阴、阳孔,再依此加样品孔,最后为质控孔。
胶体金法乙肝表面抗原规范检测流程
胶体金法乙肝表面抗原规范检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改,请根据实际需要进行相应的调整和使用,谢谢!并且,本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料,如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等,如想了解不同资料格式和写法,敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!胶体金法乙肝表面抗原规范检测流程详解乙肝表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎病毒感染的早期标志,通过胶体金法进行检测是一种常见的筛查方式。
胶体金法乙肝表面抗原检测流程
胶体金法乙肝表面抗原检测流程一、检测前的准备。
咱先得把要用的东西都准备好。
这就好比做饭得先把食材和厨具都找齐了一样。
检测要用的胶体金法乙肝表面抗原检测试剂卡,那可得好好保管着,不能压坏了,也不能受潮了,这可是检测的关键家伙事儿。
然后呢,还得有个干净的小桌子或者小台面,把检测要用的东西都整整齐齐地摆好。
哦对了,别忘了还有采血的工具,如果是自己在家检测,那采血针得是那种正规的、一次性的,干净又卫生,可不能随随便便拿个不干净的东西扎自己呀,那多危险呀。
二、采血啦。
接下来就是采血环节。
这时候心里可能会有点小紧张,就像小时候打针一样。
不过别怕,采血其实没那么恐怖的。
如果是用那种小小的采血针的话,就轻轻扎一下手指头就行啦。
扎之前呢,可以先给自己鼓鼓劲,“就一下下,不痛不痛”。
扎完之后,看到血冒出来了,就赶紧用干净的小吸管或者小滴管把血收集起来。
这里要注意哦,血的量不能太多也不能太少,就按照检测试剂卡上要求的量来就行。
要是血太多了,可能会影响检测结果;血太少呢,又可能测不出来。
这就像是做菜放盐,多了少了都不行。
三、把血加到检测试剂卡上。
采好血之后呢,就把收集好的血小心地加到检测试剂卡上指定的位置。
这一步要慢慢来,就像给小花浇水一样,一滴一滴地加。
加的时候眼睛要盯着点儿,可别加错地方了。
要是不小心加到别的地方去了,那这个检测可能就得重新做了,多麻烦呀。
四、等待结果的时间。
加好血之后呢,就开始等待结果啦。
这个等待的过程就像是在等快递一样,心里有点小期待又有点小忐忑。
一般来说,这个等待的时间不会太长,就按照检测试剂卡上写的时间来就行。
在等待的时候呢,可以做点别的事情分散一下注意力,比如听听音乐、看看书之类的。
但是也不能把检测的事儿给忘得一干二净了,毕竟这是很重要的检测结果嘛。
五、看结果啦。
终于到了看结果的时候了。
这个时候可一定要仔细看哦。
如果检测试剂卡上出现了特定的条带,那就代表着不同的结果。
要是出现了两条清晰的条带呢,那可能就表示乙肝表面抗原是阳性的。
乙肝表面抗原抗体检测作业指导书
用 Elecsys 抗- HBs质控品1和2 (PreciControl)。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
7.计算方法
对每一个标本,仪器会自动计算抗- HBs含量,单位是IU/l。
17种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体和抗钌抗体的干扰。
Elecsys 抗- HBs 测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
11.结果解释
标本的抗-HBs含量<10IU/l判断为抗HBs无反应性。标本的抗-HBs含量>=10IU/l判断为抗- HBs有反应性。
· Elecsys 添加剂液(SysWash)货号11930346
· Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号500
4.仪器和校准
使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准:
每批抗-HBs试剂盒必须用新鲜试剂和抗-HBs Cal 1,Cal 2定标一次。另外,
1.分析原理
采用双抗原夹心法原理,整个过程18分钟完成。
· 第1步:40μl标本中的抗-HBs、生物素化的HBsAg(ad/ay)和钌(Ru)标记的HBsAg(ad/ay)混匀,形成夹心复合物。
· 第2步:加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步:反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)实验操作规程(吉比爱)
1.目的和适用范围:1.1.为保证血液检测的结果正确性,规范实验操作,特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室,全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语:无。
3.职责:3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理:应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。
用特异性抗-HBs抗体包被酶标板,待检血清或血浆中的 HBsAg可与包被抗体反应,再与酶标抗—HBs抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。
加底物(TMB)显色,在酶标仪上测定后根据吸光值(A值)判定有无HBsAg的存在。
4.1.2.实验所需设备和材料:酶标分析仪、洗板机、50ul加样器、100ul加样器、37℃恒温孵育箱,一次性加样吸头、试剂槽、过程记录单等。
4.1.3.实验室环境条件:实验检测的室温应保持在18℃-25℃之间。
4.1.4.实验流程:标本接收核对→编制加样顺序的布局图→设置条孔→加样→加酶标记物→温育→洗板→加显色剂→温育→加终止液→酶标仪读数→结果判断→结果报告4.2.实验操作步骤:4.2.1.准备:自2-8℃试剂冰箱中取出试剂盒,在室温中平衡30分钟;包被板平衡至室温后才可打开外包装,以防止板条吸收空气中的水蒸气;将20倍浓缩洗涤液用纯化水20倍稀释后备用。
剩下的试剂及时封存于2℃-8℃冰箱中,以备后用。
4.2.2.设定:将待测样品按需排列设定加样顺序。
每板实验设空白对照1孔(若用双波长检测,可不设空白对照孔),阴性对照3孔,阳性对照2孔。
4.2.3.加样:将所需数量的板条固定于板架。
除空白对照孔外,在相应孔中加入阴性阳性对照和待检样品各100ul.4.2.4.温育第一次:贴上封口胶,置37℃温育60分钟。
4.2.5.加酶:小心撕去封口胶,除空白孔外,每孔加入酶工作液100ul.4.2.6.温育第二次:贴上封口胶,置37℃温育30分钟洗涤:小心撕去封口胶。
乙肝病毒表面抗原测定操作规程010
乙型肝炎病毒表面抗原测定操作规程文件号:WH-MY-010版本:第1版共:3页2009年3月1日起实施本规程每2年复审一次复审日期:2010年2月27日复审人:雷凤珠规程编写者:王莉红审批者:王金成批准日期:2010年2月28日检验科主任:雷凤珠1、检验目的:乙肝表面抗原测定2、检测原理:本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其他试剂,采用双抗体夹心法法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝表面抗原(HBsAg).3、试剂和仪器:3.1试剂:上海科华生物有限公司3.23.3试剂稳定性:原装试剂在2-8℃避光保存,有效期6个月。
3.4仪器:3.4.1 TE-B型定时微量振荡器3.4.2 37℃水浴箱(上海山连)4、标本:4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管),将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后,分离血清。
4.2样品后收到后不要急于分离血清,以免血块收缩不良造成结果假阳性。
4.3溶血标本不能用于检测,因溶血可造成假阳性结果出现。
4.4用完的标本,应在样品管上注明日期,放置在2-8℃冰箱中保存一周。
4.5样品放置一周后,逐管加入1:50的84消毒液,并放置4小时后,装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。
5、操作5.1操作步骤:5.1.配液:将20ml浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。
5..2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步相同),5. 3加样:分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。
5.4加酶:每孔加入酶标试剂1滴(50ul),轻轻振荡混匀。
5.5温育:用封板模封板后置37℃温育30分钟。
5.6洗涤:将孔内液体用吸引器吸干,用洗涤液洗涤5遍,用吸引器吸干。
5.7显色:每孔加入显色剂A、B液各1滴(50ul),,轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10分钟。
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乙型肝炎病毒表面抗原检测( ELISA)
1原理:
在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体( HbsAb-HRP)及 TMB 等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗原(HBsAg)。
2试剂:
2.1试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)
2.2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司
2.3包装规格: 96Test/Kit
2.4试剂盒组成:HbsAb预包被微孔板(包被 HbsAb),HbsAg 酶标抗体(含 HRP标记 HbsAb), HbsAg 阳性对照(含基因工程 HbsAg),HbsAg 阴性对照(正常人血清),HbsAg样品稀释液(含 BSA缓冲液),浓缩洗涤液( PBS-T 缓冲液),底物 A(含 H2O2),底物 B(含 TMB),终止液(含
H2SO4),封板膜,自封袋,说明书。
2.5试剂储存条件及有效期: 2~8 ℃避光保存,有效 12 个月。
3样本采集:
取静脉血 3-4ml 于干净容器中分离出血清或血浆标本,如不及时测定可置于 4℃冰箱保存,如长期保存需置于 -15 至-20 ℃冻存,并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性,建议不使用。
4所需仪器
4.1全自动酶免分析仪
4.2新鲜蒸馏水或去离子水
4.3酶标仪(单波长 450nm或双波长 450nm/630nm)
4.4微量移液器
4.537 ℃恒温箱或水浴箱
4.6洗板机或洗瓶
5检验方法
5.1平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温
( 18~25℃),微孔板板开封后,余者即时以自封袋封存。
5.2配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按 1:19 稀释后使用。
5.3编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号。
5.4稀释:每孔加入 20ul 样品稀释液。
5.5加样:分别在相应孔中加入 100ul 阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育:置 37℃温育 60min 。
5.7加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体 50ul 。
5.8温育:置 37℃温育 30min 。
5.9洗涤:用洗涤液充分洗涤 5 次、洗涤后扣干(每次应
保持 30~60s 的浸泡时间)。
5.10显色:每孔加入底物 A、B 各 50ul ,轻拍混匀, 37℃
暗置 30min 。
5.11终止:每孔加入终止液 50ul ,混匀。
5.12测定:用酶标仪单波长 450nm 或双波长 450nm/630nm 测
定各孔 OD值(用单波长测定时,需用空白对照调零),并记录结果。
6结果判定与分析
临界值( C.O. )的计算:临界值 =阴性对照孔 OD平均值
*2.1 ;阴性对照 OD均值小于 0.05 时以 0.05 计算。
结果判定:样本 OD值 S/C.O.>=1 者为 HbsAg阳性样本 OD 值 S/C.O.<1 者为 HbsAg阴性阴性对照均值 >0.1 或阳性对照均值 <0.4 时,实验无效,应重新试验。
7质量控制
每次试验用 HBsAg的质控血清同步检测, S/CO值应在控制范围内;如失控,检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至从新试验使其在控。
8参考范围阴性
9临床意义
在血清或血浆中 HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
10操作性能灵敏度为 ng/ml ,特异性高
11方法的局限性
11.1此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测,不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。
11.2该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。
11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标,阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时,验证试剂盒中的组分
是否有效。
11.4由于方法学的局限性,本实验结果仅作为判断疾病的一
项依据,如需对患者进行确诊,建议施于其它检验手段予以确认。
12注意事项
12.1 试验前请详细阅读试剂说明书,任何违反试剂说明书的使用或操作行为,都可能得到不准确的结果。
12.2所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理,严格防止交叉感染,严格健全和执行消毒隔离制度。
对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质,应有合适的生物安全保证制度,下列为有关注意事项,但不仅限于此:
1)戴手套处理样本和试剂;
2)不要用嘴吸样;
3)不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜等;
4)用消毒剂对溅出的样本和试剂进行消毒;
5)按科室有关条列来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。
12.3加试剂前应先将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。
建议使用加液器进行加液,并经常对加液器进行校准。
加液时注意勿使加液枪头接触孔内液体,避免液体间相互污染。
仔细操作,避免加样时在孔中产生气泡。
12.4每板设阴、阳性对照各两孔,设空白对照 1 孔,空白对
照不加样本和酶标抗体、其余各步相同。
12.5避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次氯酸等
强氧化性物质。
12.6孵育温度要保持在 37℃+-1 ℃,温度过高或者过低可能会影响检测结果的准确性。
12.7封模板为一次性使用,重复使用可能导致污染。
12.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净,以防止管路堵塞和腐蚀。
洗涤时各孔军需加满但不溢出,防止孔内有残留物未能洗净。
12.9每次洗涤结束请尽早进行后续加液操作,避免长时间暴露而引起错误结果。
12.10使用全自动生化仪器时,封板和洗版后扣干步骤可以省略。
但需要注意保证洗涤液的加液量,保证洗涤后将微孔板孔中的洗液充分吸干,以免对实验造成错误的结果。
12.11确保反应孔板的底清洁干燥,在读板前要确保孔中液体没有气泡。
12.12终止后尽早用酶标仪进行读数测量(建议在 10min 内完成读值),避免放置过长时间而引起的错误结果。
12.13检测结果用酶标仪进行读数测量。
样本的检测读数与样本中抗原的浓度不一定呈正相关。
12.14检测结果呈阴性的样本,不能绝对保证样本中没有低浓度抗原的存在,不能完全排除HBV感染的可能。
12.15该免疫测试不能绝对排除非特异性反应的存在,如对检测结果有疑问,用相应的确认试剂或方法对检测样本进行结果确
认。
12.16试剂盒各组分在正确处理和保存的情况下至效期都保持
稳定,不能使用过期的试剂,以免造成错误结果。
12.17不同厂商,不同品名、不同批号的试剂不能混用,以免产生错误结果。