盐酸副玫瑰苯胺法测定食品中亚硫酸盐的方法改进
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向样品中各加入 25μg、50μg、125μg 二氧化 硫使 用 液，按 改 进 测 定 方 法，每 个 浓 度 一 组 平 行 样，分别测定加标回收率。
2 试验结果与分析
2． 1 试样的提取条件的选择 国内现有的对食品中二氧化硫提取方法主要
有蒸馏法和浸提法。其中，蒸馏法需要在密闭容 器中加酸蒸馏，以乙酸铅溶液或氢氧化钠溶液吸 收，此方法不适用于大批量的产品检测。浸提法 的吸收液可以采用剧毒的四氯汞钠溶液或者毒性 稍低的甲醛溶液。浸提方法又分为纯浸泡法提 取、超声提取以及振荡法提取。本试验中对此 3 种方法进行了比较，结果如下。
品名 粉丝 话梅
5min 48． 73 211． 5
10min 15min 20min 25min 30min 52． 12 57． 35 62． 32 64． 57 60． 56 259． 7 262． 3 267． 4 286． 2 207． 6
从表 1 ～ 3 中可见，随着提取时间的增加，二 氧化硫提取量逐渐增加，但超声提取 20min、振荡 提取 25min 后反而有所下降，这可能是因为随着 超声时间增加，温度升高，二氧化硫会损失而含量 降低的缘故。综合确定选择超声提取时间 20min 为最佳样品提取方法及时间。改进方法： 不溶性 的固体样品称取 5． 0 ～ 10． 0g 研磨均匀的试样，加 入 40mL 甲醛吸收液，超声波提取 20min，加入亚
1 试验材料与方法
1． 1 试剂与仪器 试剂： 甲醛、氨基磺酸铵、盐酸和盐酸副玫瑰
苯胺，均为分析纯试剂（ 上海中试化工生产） 。 仪器： SB － 5200DT 超声仪； UV － 2450 紫外
分光光度计（ 日本岛津公司制造） 。 1． 2 试验方法 1． 2． 1 试样的提取方法及提取时间的选择
液，立 即 盖 塞 混 匀，放 入 25℃ 恒 温 水 浴 显 色 10min，同时做试剂空白，分别扫描［11 － 12］。
（ 2） 不同温度和时间影响着显色溶液的稳定 性，显色的温度过高，显色时间过长，必然影响显 色溶液的稳定性，增加试验结果的误差。取二氧 化硫标准使用溶液（ 2μg / mL） 2． 0mL，在不同温度 下显色后，放置不同时间测定，选取最佳显色温度 及时间。 1． 2． 3 加标回收率的测定
酸盐［2］。由于亚硫酸盐可以抑制酚酶的活性［3］， 因此，亚硫酸盐被广泛应用于干制食品中，用于控 制果蔬褐变和保护营养素。在国内外目前流行的 一些食品包装技术中，也会通过充入二氧化硫的 方式下包装食品，从而延长食品保质期［4 － 5］。周 德庆等的研究得出： 亚硫酸盐可与氧化物结合，在 一定程度上减弱了抗坏血酸的氧化［6 － 7］。在酸性 介质中，亚硫酸盐还是十分有效的抗菌剂，可使超 氧化物歧化酶、过氧化物酶活性提升，提高抗氧化
收稿日期： 2012 － 05 － 16； 修稿日期： 2012 － 05 － 30 作者简介： 王常捷（ 1984 － ） ，女，本科，主要从事食品理化检验研究，通信地址： 210029 江苏南京市光华东街 5 号 江苏省产品质量监督
检验研究院，E-mail： cj_wong@ 163． com。
WANG Chang-jie，FENG Yun，MAO Yun （ Jiangsu Province Product Quality Supervision and Inspection Institute，Nanjing 210029，China）
Abstract： To study the method for determination of sulfite in foods． Based on the existing detection methods to detection of sulfite in food． The sample was extracted by the absorption to a stable complex compound， with formaldehyde and pararosaniline hydrochloride to generate purple complexes，with the standard series of comparative quantitative． The crushed samples with formaldehyde solution by ultrasonic extraction 20min，can be fully absorbed． Using sodium sulfite as the standard sample，colorimetric method for the determination of sulfite in food． the method of stability，reproducibility and recovery rate are consistent with requirements．
由图 1 表明，显色剂用量差别不大时，最佳吸 收波长差异性较小，显色剂用量变化较大时，最佳 吸收波长波动较大。因此测定结果确定显色剂用 量为 1 mL 时其最佳吸收波长为 550nm。此项试 验结果与国标方法基本一致。
件下，标 准 曲 线 回 归 方 程 的 线 性 相 关 系 数 r = 0． 9998，检出限（ RSN = 3） 为 1mg / kg。说明所得线 性回归方程线性关系良好，且本方法的显色条件 符合分光光度法分析检测的试验要求。 2． 3 加标回收率和测定结果精密度
传统方法： 水不溶性的固体样品粉碎研磨后， 加入 20mL 四氯汞钠吸收液，浸泡 4 个小时以上， 沉淀、过滤后备用。整个检测过程耗时较长、效率 低下。研究方法： 分别称取粉碎处理后的粉丝、话 梅 5． 0g，加入 40． 0mL 甲醛吸收液。分别浸泡提 取 1h、2h、3h、4h、5h、6h 和 超 声 提 取、振 荡 提 取 5min、10min、15min、20min、25min、30min 后，测定 吸光度。 1． 2． 2 显色条件的选择
品名 粉丝 话梅
5min 51． 98 298． 9
10min 15min 20min 25min 30min 54． 08 58． 18 66． 89 59． 32 52． 82 309． 8 315． 8 337． 5 298． 2 279． 6
表 3 振荡法提取结果（ n = 3） （ mg / kg）
通过改进样品处理、提取方法、科学优化显色 条件，食品中亚硫酸盐的检测基本满足试验要求。 通过加入不同量的亚硫酸盐（ 以二氧化硫计） 标 准品，所得检出量及加标回收率见表 4。加标回 收率在 99． 1% ～ 104． 8% 之间，标准偏差分别为 0． 28、0． 85、0． 42，满足分光光度法分析方法的试 验要求。
Key words： sulfite； pararosaniline hydrochloride； colorimetry
0 引言
二氧化硫及能够产生二氧化硫的无机亚硫酸 盐类是一类广泛使用的食品添加剂，被用作防腐 剂、漂白剂、保色剂、疏松剂和还原剂等，广泛应用 于蜜饯、干果、粉丝、葡萄酒等食品中［1］。研究表 明，二氧化硫的漂白机理是一种可逆的加成反应， 复合物分解后，食品中通常会残留一定量的亚硫
3 结束语
通过浸泡、振荡和超声等方法提取样品，经试 验研究得出采用超声波提取样品方法是最佳的样 品前处理方法，确定了食品中快速检测二氧化硫 残留量的样品提取、测定条件，大大缩短了分析时 间，提高了分析的效率。确定显色剂盐酸副玫瑰 苯胺用量为 1mL 时其最佳吸收波长为 550nm，显 色温度为 20℃ ，显色 20min，大大提高了试验的准 确性。
包装与食品机械 2012 年第 30 卷第 5 期
盐酸副玫瑰苯胺法测定食品中亚硫酸盐的 方法改进
王常捷，冯 云，毛 筠
（ 江苏省产品质量监督检验研究院，南京 210029）
摘要： 研究食品中亚硫酸盐的检测方法。通过对现有检测方法的改进来检测食品中亚硫酸盐的含 量。样品经吸收液吸收提取，形成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物， 与标准系列比较定量。经粉碎后的食品样品用甲醛溶液超声提取 20min 后，能够被充分吸收。以亚硫 酸氢钠为标样，比色法测定食品中亚硫酸盐的含量。该方法稳定性、重现性以及加标回收率均符合要 求。
20
盐酸副玫瑰苯胺法测定食品中亚硫酸盐的方法改进———王常捷，冯云，毛筠
能力［8］。二 氧 化 硫 对 人 体 很 多 种 器 官 （ 脑、心、 肝、胃、肠、脾、胸腺、肾、睾丸及骨髓细胞） 均有毒 理作用，是一种全身性毒物，而且是一种具有多种 毒性作用的有毒化合物。它通过血液吸收，对全 身产生毒副作用。通过破坏酶的活力，从而明显 地影响碳水化合物及蛋白质的代谢，对胃肠道及 肝、肾等器官组织有一定的损害［9］。尤其对心脏 的损害作 用 日 益 引 起 广 大 学 者 的 关 注［10］。 由 于 亚硫酸盐在食品领域应用得十分广泛，研究与应 用亚硫酸盐的高效检测技术是实现监督管理的有 效措施之一。目前对于食品中亚硫酸盐的检测存 在几个问题，一是检测耗时长，单个样的检测至少 需要连续耗时 6h 以上； 二是检测稳定性差，由于 按照现有比色法检测，样品检出的重复性非常不 尽如人意。为此，我们对现有盐酸副玫瑰苯胺法 的不足之处加以改进，通过改进样品提取方法及 显色条件来优化食品中亚硫酸盐的检测方法。
（ 1） 显色剂盐酸副玫瑰苯胺溶液测定时的用 量对结果影响非常大。不同用量的显色剂，其最 佳吸收波长是不一样的，最终也会影响试验的结 果。取 25mL 比色管，分别加入 2． 0mL 二氧化硫 标准使用液（ 2μg / mL） ，加甲醛吸收液至 10mL，加 入 1． 0mL0． 3% 氨基磺酸钠溶液、1． 0mL1mol / L 氢 氧化钠溶液，充分混匀后，分别加入 1． 0mL、1． 5 mL、2． 0 mL、2． 5 mL 0． 025% 盐酸副玫瑰苯胺溶
关键词： 亚硫酸盐； 盐酸副玫瑰苯胺； 比色 中图分类号： TS207． 3 文献标识码： A 文章编号： 1005 － 1295（ 2012） 05 － 0020 － 03 doi： 10． 3969 / j． issn． 1005 － 1295． 2012． 05． 006
Method Improvement of the Determination of Sulfite in Food by Pararosaniline Hydrochloride
表 1 浸泡法提取Baidu Nhomakorabea果（ n = 3） （ mg / kg）
品名 粉丝 话梅
1h 26． 72 198． 7
2h 39． 76 240． 7
3h 47． 32 275． 3
4h 61． 45 284． 8
5h 58． 73 265． 4
6h 54． 53 253． 9
表 2 超声法提取结果（ n = 3） （ mg / kg）
21
包装与食品机械 2012 年第 30 卷第 5 期
铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液沉淀，定容，过滤后取 滤液备用。 2． 2 显色条件的优化
在亚硫酸盐的测定中，显色的时间、温度以及 显色液的使用对最终结果都有较大的影响。要调 节显色剂用量和最佳吸收波长的一致性，控制显 色时间和温度的最佳契合度。 2． 2． 1 显色剂用量及最佳吸收波长的确定
加标测定回收率的方法进行测定，结果见表 4。
表 4 二氧化硫添加回收率
样品 1 2 3 4 5 6
加入量 / μg 25 25 50 50 125 125
检出量 / μg 26． 2 25． 8 50． 8 49． 6 123． 9 123． 3
加标回收率 /% 104． 8 103． 2 101． 6 99． 2 99． 1 98． 6
图 1 显色剂用量对最佳吸收波长的影响
2． 2． 2 显色时间及温度对检测结果的影响 显色溶液在不同温度时，达到最大吸光值所
需时间不同，温度越高，所需显色时间越短； 显色 溶液在不同温度时稳定性不同，温度越高，显色溶 液稳定时间越短。由图 2 可以看出，15℃ 条件下 不能够完全显色，20℃ 条件下显色效率和稳定性 最佳。因此，本试验确定显色温度和时间为 20℃ 显色 20min。
2 试验结果与分析
2． 1 试样的提取条件的选择 国内现有的对食品中二氧化硫提取方法主要
有蒸馏法和浸提法。其中，蒸馏法需要在密闭容 器中加酸蒸馏，以乙酸铅溶液或氢氧化钠溶液吸 收，此方法不适用于大批量的产品检测。浸提法 的吸收液可以采用剧毒的四氯汞钠溶液或者毒性 稍低的甲醛溶液。浸提方法又分为纯浸泡法提 取、超声提取以及振荡法提取。本试验中对此 3 种方法进行了比较，结果如下。
品名 粉丝 话梅
5min 48． 73 211． 5
10min 15min 20min 25min 30min 52． 12 57． 35 62． 32 64． 57 60． 56 259． 7 262． 3 267． 4 286． 2 207． 6
从表 1 ～ 3 中可见，随着提取时间的增加，二 氧化硫提取量逐渐增加，但超声提取 20min、振荡 提取 25min 后反而有所下降，这可能是因为随着 超声时间增加，温度升高，二氧化硫会损失而含量 降低的缘故。综合确定选择超声提取时间 20min 为最佳样品提取方法及时间。改进方法： 不溶性 的固体样品称取 5． 0 ～ 10． 0g 研磨均匀的试样，加 入 40mL 甲醛吸收液，超声波提取 20min，加入亚
1 试验材料与方法
1． 1 试剂与仪器 试剂： 甲醛、氨基磺酸铵、盐酸和盐酸副玫瑰
苯胺，均为分析纯试剂（ 上海中试化工生产） 。 仪器： SB － 5200DT 超声仪； UV － 2450 紫外
分光光度计（ 日本岛津公司制造） 。 1． 2 试验方法 1． 2． 1 试样的提取方法及提取时间的选择
液，立 即 盖 塞 混 匀，放 入 25℃ 恒 温 水 浴 显 色 10min，同时做试剂空白，分别扫描［11 － 12］。
（ 2） 不同温度和时间影响着显色溶液的稳定 性，显色的温度过高，显色时间过长，必然影响显 色溶液的稳定性，增加试验结果的误差。取二氧 化硫标准使用溶液（ 2μg / mL） 2． 0mL，在不同温度 下显色后，放置不同时间测定，选取最佳显色温度 及时间。 1． 2． 3 加标回收率的测定
酸盐［2］。由于亚硫酸盐可以抑制酚酶的活性［3］， 因此，亚硫酸盐被广泛应用于干制食品中，用于控 制果蔬褐变和保护营养素。在国内外目前流行的 一些食品包装技术中，也会通过充入二氧化硫的 方式下包装食品，从而延长食品保质期［4 － 5］。周 德庆等的研究得出： 亚硫酸盐可与氧化物结合，在 一定程度上减弱了抗坏血酸的氧化［6 － 7］。在酸性 介质中，亚硫酸盐还是十分有效的抗菌剂，可使超 氧化物歧化酶、过氧化物酶活性提升，提高抗氧化
收稿日期： 2012 － 05 － 16； 修稿日期： 2012 － 05 － 30 作者简介： 王常捷（ 1984 － ） ，女，本科，主要从事食品理化检验研究，通信地址： 210029 江苏南京市光华东街 5 号 江苏省产品质量监督
检验研究院，E-mail： cj_wong@ 163． com。
WANG Chang-jie，FENG Yun，MAO Yun （ Jiangsu Province Product Quality Supervision and Inspection Institute，Nanjing 210029，China）
Abstract： To study the method for determination of sulfite in foods． Based on the existing detection methods to detection of sulfite in food． The sample was extracted by the absorption to a stable complex compound， with formaldehyde and pararosaniline hydrochloride to generate purple complexes，with the standard series of comparative quantitative． The crushed samples with formaldehyde solution by ultrasonic extraction 20min，can be fully absorbed． Using sodium sulfite as the standard sample，colorimetric method for the determination of sulfite in food． the method of stability，reproducibility and recovery rate are consistent with requirements．
由图 1 表明，显色剂用量差别不大时，最佳吸 收波长差异性较小，显色剂用量变化较大时，最佳 吸收波长波动较大。因此测定结果确定显色剂用 量为 1 mL 时其最佳吸收波长为 550nm。此项试 验结果与国标方法基本一致。
件下，标 准 曲 线 回 归 方 程 的 线 性 相 关 系 数 r = 0． 9998，检出限（ RSN = 3） 为 1mg / kg。说明所得线 性回归方程线性关系良好，且本方法的显色条件 符合分光光度法分析检测的试验要求。 2． 3 加标回收率和测定结果精密度
传统方法： 水不溶性的固体样品粉碎研磨后， 加入 20mL 四氯汞钠吸收液，浸泡 4 个小时以上， 沉淀、过滤后备用。整个检测过程耗时较长、效率 低下。研究方法： 分别称取粉碎处理后的粉丝、话 梅 5． 0g，加入 40． 0mL 甲醛吸收液。分别浸泡提 取 1h、2h、3h、4h、5h、6h 和 超 声 提 取、振 荡 提 取 5min、10min、15min、20min、25min、30min 后，测定 吸光度。 1． 2． 2 显色条件的选择
品名 粉丝 话梅
5min 51． 98 298． 9
10min 15min 20min 25min 30min 54． 08 58． 18 66． 89 59． 32 52． 82 309． 8 315． 8 337． 5 298． 2 279． 6
表 3 振荡法提取结果（ n = 3） （ mg / kg）
通过改进样品处理、提取方法、科学优化显色 条件，食品中亚硫酸盐的检测基本满足试验要求。 通过加入不同量的亚硫酸盐（ 以二氧化硫计） 标 准品，所得检出量及加标回收率见表 4。加标回 收率在 99． 1% ～ 104． 8% 之间，标准偏差分别为 0． 28、0． 85、0． 42，满足分光光度法分析方法的试 验要求。
Key words： sulfite； pararosaniline hydrochloride； colorimetry
0 引言
二氧化硫及能够产生二氧化硫的无机亚硫酸 盐类是一类广泛使用的食品添加剂，被用作防腐 剂、漂白剂、保色剂、疏松剂和还原剂等，广泛应用 于蜜饯、干果、粉丝、葡萄酒等食品中［1］。研究表 明，二氧化硫的漂白机理是一种可逆的加成反应， 复合物分解后，食品中通常会残留一定量的亚硫
3 结束语
通过浸泡、振荡和超声等方法提取样品，经试 验研究得出采用超声波提取样品方法是最佳的样 品前处理方法，确定了食品中快速检测二氧化硫 残留量的样品提取、测定条件，大大缩短了分析时 间，提高了分析的效率。确定显色剂盐酸副玫瑰 苯胺用量为 1mL 时其最佳吸收波长为 550nm，显 色温度为 20℃ ，显色 20min，大大提高了试验的准 确性。
包装与食品机械 2012 年第 30 卷第 5 期
盐酸副玫瑰苯胺法测定食品中亚硫酸盐的 方法改进
王常捷，冯 云，毛 筠
（ 江苏省产品质量监督检验研究院，南京 210029）
摘要： 研究食品中亚硫酸盐的检测方法。通过对现有检测方法的改进来检测食品中亚硫酸盐的含 量。样品经吸收液吸收提取，形成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物， 与标准系列比较定量。经粉碎后的食品样品用甲醛溶液超声提取 20min 后，能够被充分吸收。以亚硫 酸氢钠为标样，比色法测定食品中亚硫酸盐的含量。该方法稳定性、重现性以及加标回收率均符合要 求。
20
盐酸副玫瑰苯胺法测定食品中亚硫酸盐的方法改进———王常捷，冯云，毛筠
能力［8］。二 氧 化 硫 对 人 体 很 多 种 器 官 （ 脑、心、 肝、胃、肠、脾、胸腺、肾、睾丸及骨髓细胞） 均有毒 理作用，是一种全身性毒物，而且是一种具有多种 毒性作用的有毒化合物。它通过血液吸收，对全 身产生毒副作用。通过破坏酶的活力，从而明显 地影响碳水化合物及蛋白质的代谢，对胃肠道及 肝、肾等器官组织有一定的损害［9］。尤其对心脏 的损害作 用 日 益 引 起 广 大 学 者 的 关 注［10］。 由 于 亚硫酸盐在食品领域应用得十分广泛，研究与应 用亚硫酸盐的高效检测技术是实现监督管理的有 效措施之一。目前对于食品中亚硫酸盐的检测存 在几个问题，一是检测耗时长，单个样的检测至少 需要连续耗时 6h 以上； 二是检测稳定性差，由于 按照现有比色法检测，样品检出的重复性非常不 尽如人意。为此，我们对现有盐酸副玫瑰苯胺法 的不足之处加以改进，通过改进样品提取方法及 显色条件来优化食品中亚硫酸盐的检测方法。
（ 1） 显色剂盐酸副玫瑰苯胺溶液测定时的用 量对结果影响非常大。不同用量的显色剂，其最 佳吸收波长是不一样的，最终也会影响试验的结 果。取 25mL 比色管，分别加入 2． 0mL 二氧化硫 标准使用液（ 2μg / mL） ，加甲醛吸收液至 10mL，加 入 1． 0mL0． 3% 氨基磺酸钠溶液、1． 0mL1mol / L 氢 氧化钠溶液，充分混匀后，分别加入 1． 0mL、1． 5 mL、2． 0 mL、2． 5 mL 0． 025% 盐酸副玫瑰苯胺溶
关键词： 亚硫酸盐； 盐酸副玫瑰苯胺； 比色 中图分类号： TS207． 3 文献标识码： A 文章编号： 1005 － 1295（ 2012） 05 － 0020 － 03 doi： 10． 3969 / j． issn． 1005 － 1295． 2012． 05． 006
Method Improvement of the Determination of Sulfite in Food by Pararosaniline Hydrochloride
表 1 浸泡法提取Baidu Nhomakorabea果（ n = 3） （ mg / kg）
品名 粉丝 话梅
1h 26． 72 198． 7
2h 39． 76 240． 7
3h 47． 32 275． 3
4h 61． 45 284． 8
5h 58． 73 265． 4
6h 54． 53 253． 9
表 2 超声法提取结果（ n = 3） （ mg / kg）
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包装与食品机械 2012 年第 30 卷第 5 期
铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液沉淀，定容，过滤后取 滤液备用。 2． 2 显色条件的优化
在亚硫酸盐的测定中，显色的时间、温度以及 显色液的使用对最终结果都有较大的影响。要调 节显色剂用量和最佳吸收波长的一致性，控制显 色时间和温度的最佳契合度。 2． 2． 1 显色剂用量及最佳吸收波长的确定
加标测定回收率的方法进行测定，结果见表 4。
表 4 二氧化硫添加回收率
样品 1 2 3 4 5 6
加入量 / μg 25 25 50 50 125 125
检出量 / μg 26． 2 25． 8 50． 8 49． 6 123． 9 123． 3
加标回收率 /% 104． 8 103． 2 101． 6 99． 2 99． 1 98． 6
图 1 显色剂用量对最佳吸收波长的影响
2． 2． 2 显色时间及温度对检测结果的影响 显色溶液在不同温度时，达到最大吸光值所
需时间不同，温度越高，所需显色时间越短； 显色 溶液在不同温度时稳定性不同，温度越高，显色溶 液稳定时间越短。由图 2 可以看出，15℃ 条件下 不能够完全显色，20℃ 条件下显色效率和稳定性 最佳。因此，本试验确定显色温度和时间为 20℃ 显色 20min。