最新26 第二十六章 基因表达及功能分析基本策略汇总
生物信息学中基因表达分析的技巧
生物信息学中基因表达分析的技巧基因表达分析是生物信息学中的重要研究领域，它涉及到对基因在不同组织和时间点的表达模式进行解析和解释。
基因表达分析的技巧包括数据获取、数据预处理、差异表达分析以及功能富集分析等步骤，下面将逐一介绍这些技巧。
首先，在进行基因表达分析之前，首要任务是获取与目标研究相关的高质量基因表达数据。
常见的数据来源包括公共数据库（如GEO和TCGA）以及实验室内部的测序实验。
公共数据库提供了大量的已发表数据，而实验室内部的测序实验则能够提供更具针对性的数据。
关于数据选择的原则，需根据研究目的和样本特点进行考虑。
获取到基因表达数据后，下一步是数据的预处理。
预处理的目的是对原始数据进行质量检测、去除噪音、归一化等操作，以减少后续分析中的偏差和误差。
常见的预处理包括测序质控、去除低质量样本和低表达基因、去除批次效应等。
测序质控可以通过FastQC等工具来进行，低质量样本和低表达基因的去除可以根据实验设定的阈值进行，而批次效应的去除则可以使用ComBat、limma等方法。
预处理完成后，接下来的关键步骤是差异表达分析。
差异表达分析是基因表达分析中最重要的环节之一，它旨在寻找不同条件下基因表达水平的显著变化。
在执行差异表达分析之前，需要先进行基本统计分析来获得样本间的差异。
常见的差异表达分析方法包括t检验、方差分析（ANOVA）和广义线性模型（GLM）。
需要注意的是，在进行差异表达分析时，必须要根据研究设计和实验数据的特点，选择合适的统计方法和模型。
差异表达分析获得的结果包括差异表达基因和其相关的统计指标，例如p值、调整p值和折叠变化倍数等。
对于大规模的基因表达数据，选择合适的差异表达基因筛选标准至关重要。
常见的选择标准包括显著性水平、调整p值、差异倍数和基因表达水平的绝对值等。
不同标准的选择将对结果产生显著的影响，因此，需要根据具体研究问题的特点来进行选择。
差异表达基因筛选完成后，接下来可以进行功能富集分析，以帮助研究者更好地理解基因表达变化的生物学意义。
基因表达分析和基因功能注释的方法
基因表达分析和基因功能注释的方法在生物学的研究中，我们经常会面临一个问题：如何对大量的基因进行分析和注释，以便更好地了解它们的功能和意义。
为了解决这个问题，研究者们发明了许多基因表达分析和基因功能注释的方法，这些方法应用广泛，对于生物学的研究和应用都有着重要的意义。
1. 基因表达分析的重要性基因表达分析是指对一个生物体的基因组进行微阵列分析、RT-PCR等技术的研究，以了解不同组织或条件下的基因表达情况。
它可以帮助我们揭示不同组织或条件下的基因转录水平差异，进一步探究相关的生物学过程。
例如，研究者可以通过比较不同疾病患者和正常人的基因表达谱，进一步了解某些疾病的发病机制和治疗方案。
基因表达分析的结果可以提供大量的生物信息学数据，为后续的基因功能注释和分析奠定基础。
2. 基因表达分析的方法基因表达分析的方法主要包括微阵列分析、RNA测序、RT-PCR等技术。
其中微阵列分析是最常用的技术之一。
微阵列是用来检测被测物（如基因或蛋白质）表达情况的高通量工具，可以同时检测上千个基因。
通过微阵列分析，我们可以获得大量的基因表达谱数据，进一步挖掘分析基因与生物过程之间的关系。
除了微阵列分析外，还有RNA测序（RNA-Seq）技术。
RNA 测序是通过测定RNA样品的序列，来获得全基因组水平的转录信息的一种技术。
它有更高的精度和更宽的动态范围，可以检测出不同转录本的存在情况，对于基因表达分析有很好的优势。
3. 基因功能注释的重要性基因功能注释是基于基因组学数据，对基因进行生物学功能预测和注释的过程。
注释包括果蝇、小鼠、人类等模式生物数据库的关联分析、同源性比对、GO注释等多方面的数据整合处理。
准确的基因功能注释是基础和前提，在科学研究中的价值非常高。
它可以为基于基因组学表达数据的功能研究提供线索和指导，加深我们对生物学系统性质的认识。
4. 基因功能注释的方法基因功能注释的方法主要包括BLAST、基因集富集分析等。
药理学第26章整理
第二十六章治疗心力衰竭的药物心力衰竭（HF）是由各种心脏疾病导致心功能不全的一种临床综合征。
心力衰竭时通常伴有体循环和（或）肺循环的被动性充血，故又称充血性心力衰竭。
心力衰竭按发生过程可分为急性和慢性心力衰竭两种。
第一节心力衰竭的病理生理学及治疗心力衰竭药物的分类一、心力衰竭的病理生理学（一）心力衰竭时心肌功能及结构变化1.心肌功能变化心力衰竭是各种心脏疾病导致的心肌受损，表现为左心、右心或全心功能障碍。
大多数患者以收缩性心力衰竭为主，心肌收缩力减弱，心输出量减少，射血分数明显下降，组织器官灌流不足，其对正性肌力药物反应良好。
少数患者以舒张功能障碍为主，主要是心室的充盈异常，心室舒张受限和不协调，心室顺应性降低，心输出量减少，心室舒张末期压增高，体循环和（或）肺循环淤血，其射血分数下降不明显甚至可维持正常，对正性肌力药物反应差。
极少数由贫血、甲状腺功能亢进、动静脉瘘等所致的心力衰竭，心输出量并不减少甚或增高，表现为高输出量心力衰竭，该类患者用本章讨论的治疗心力衰竭的药物难以奏效。
2.心脏结构变化心力衰竭发病过程中，心肌处在长期的超负荷状态，心肌缺血、缺氧、心肌细胞能量生成障碍，心肌过度牵张，心肌细胞内Ca2+超载等病理生理改变引发心肌细胞肥大、心肌细胞凋亡，心肌细胞外基质堆积，胶原量增加，胶原网受到破坏，心肌组织纤维化等，心肌组织发生重构，表现为心肌肥厚、心腔扩大、心脏的收缩功能和舒张功能障碍。
（二）心力衰竭时神经内分泌变化1.交感神经系统激活心力衰竭时，心肌收缩力减弱、心输出量下降，交感神经系统活性会反射性增高。
这些变化在心衰早期可起到一定的代偿作用，但长期的交感神经系统的激活可使心肌后负荷及耗氧量增加，促进心肌肥厚，诱发心律失常甚至猝死。
此外，高浓度的去甲肾上腺素尚可直接导致心肌细胞凋亡、坏死，使病情恶化。
2.肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）激活心力衰竭时，肾血流量减少，RAAS被激活，RAAS的激活在心功能不全早期有一定的代偿作用，长期的RAAS 激活，使全身小动脉强烈收缩，促进肾上腺皮质释放醛固酮而致水钠潴留、低钾，增加心脏的负荷而加重心力衰竭。
基因表达知识点
基因表达知识点基因表达是指基因通过转录和翻译过程将DNA中的遗传信息转化为蛋白质的过程。
在这个过程中，细胞利用DNA中的基因来合成不同的蛋白质，从而实现细胞的功能和特性。
了解基因表达的过程和知识点对于理解细胞生物学以及基础医学研究都非常重要。
本文将逐步介绍基因表达的主要知识点。
1.基因的结构和功能–基因是DNA分子中的一段特定序列，它包含了编码蛋白质所需的信息。
–基因由启动子、外显子、内含子和终止子等不同区域组成。
–基因的功能是编码蛋白质，这些蛋白质对于细胞的结构和功能起着关键作用。
2.转录的过程–转录是指DNA信息被转录成RNA的过程。
–转录由RNA聚合酶酶依据DNA模板合成RNA分子。
–转录过程包括启动、延伸和终止三个阶段。
3.RNA的结构和功能–RNA是由核苷酸组成的核酸分子，与DNA有些许结构差异。
–RNA包括信使RNA（mRNA）、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）等不同类型。
–mRNA携带着基因的信息，tRNA将氨基酸运输到蛋白质合成的位点，rRNA是构成核糖体的主要组成部分。
4.翻译的过程–翻译是指将mRNA上的信息转化为蛋白质的过程。
–翻译由核糖体依据mRNA上的密码子将氨基酸添加到蛋白质链中。
–翻译过程包括启动、延伸和终止三个阶段。
5.蛋白质的结构和功能–蛋白质是由氨基酸组成的多肽链，其结构和序列决定了其功能。
–蛋白质可以参与细胞的结构支持、催化酶反应、传递信号等各种重要生物学过程。
6.调控基因表达的机制–细胞可以通过不同机制调控基因表达，包括染色质重塑、转录因子和miRNA的调控等。
–调控机制的不同可以导致基因表达的变化，进而影响细胞的功能和特性。
总结：基因表达是生物学中的一个重要过程，它使细胞能够利用DNA中的基因来合成蛋白质，从而实现其功能和特性。
通过了解基因的结构和功能、转录过程、RNA的结构和功能、翻译过程以及蛋白质的结构和功能，我们能够更好地理解和研究细胞生物学和基础医学。
基因结构与表达分析的基本策略课件
DNA序列分析—DNA测序，1977 聚合酶链式反应—DNA扩增，1985 DNA重组技术—基因克隆，1973
基因结构与表达分析的基本策略课件
1
主要内容
一、DNA序列分析
二、核酸分子杂交 三、聚合酶链式反应 四、基因芯片和微阵列
五、 Western免疫印迹
基因结构与表达分析的基本策略课件
这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的 墨迹，因此称之为“blotting”, 译为印迹 技术。
基因结构与表达分析的基本策略课件
32
探针技术
用放射性核素、生物素或荧光染料标 记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸 链被称为“探针”。
探针可以与固定在NC膜上的核苷酸结 合，判断是否有同源的核酸分子存在。
基因结构与表达分析的基本策略课件
The Nobel Prize in Chemistry 1993
基因结构与表达分析的基本策略课件
51
The replication of DNA
基因结构与表达分析的基本策略课件
52
原理：PCR是模拟天然DNA复制过 程，利用DNA 聚合酶催化一对引物 间特异DNA片段合成的体外扩增技 术。 其主要热循环过程为：变性、 退火、延伸三个步骤。
（一）PCR技术原理 （二）耐热DNA聚合酶 （三）PCR引物及设计原则 （四）PCR条件的优化 （五）PCR改进技术
（六）其它PCR技术 基因结构与表达分析的基本策略课件
50
（一）PCR技术原理
聚合酶链式反应(PCR) :
Mullis K. 1985年
发明的一种模拟天然
DNA复制过程的核酸
体外扩增技术。
基因结构与表达分析的基本策略课件
基因表达调控PPT课件
1. 顺式作用元件：特异DNA序列 2. 反式作用因子：特定调节蛋白质
14
原核生物
—— 操纵子(operon) 机制
启动序列 (promoter)
编码序列
其他调节序列
蛋白质因子
操纵序列 (operator)
• 可诱导调节：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作 用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物 质的诱导下使基因活化。 例：大肠杆菌的乳糖操纵子 分解代谢蛋白的基因
34
酶合成的诱导操纵子模型
调节基因
操纵基因
结构基因
阻遏蛋白
诱导物
如果某种物质 能够促使细菌产生 酶来分解它，这种 物质就是诱导物。
合时，结构基因不转录。
38
在正转录调控系统中，调节基因的产物是激活蛋白 根据激活蛋白的作用性质分为正控诱导和正控阻遏 • 在正控诱导系统中，效应物分子（诱导物）的存在使激 活蛋白处于活性状态； • 在正控阻遏系统中，效应物分子（辅阻遏物）的存在使 激活蛋白处于非活性状态。
39
40
三、乳糖操纵子（lac operon）
能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。 • A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基
转到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。
43
44
2. 乳糖操纵子的阻遏调控---可诱导调控
无乳糖存在时
阻遏物结合在操纵基因上→阻 止转录过程→基因关闭
45
2. 乳糖操纵子的阻遏调控---可诱导调控
有乳糖存在时
调节基因
操纵基因
结构基因
阻遏蛋白
基因表达与功能分析基本策略共84页文档
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 是活 动。——卢 梭
基因表达(基因工程课件)
目的蛋白质易于分离: 利用亲和层析技术，可以快速 获得纯度较高的融合蛋白。
目的蛋白质表达率高: 与受体蛋白质共用一套表达元件。 目的蛋白质溶解性好：融合蛋白质在胞内形成良好的空
间构象，且大多具有水溶性。 目的蛋白质需要回收：融合蛋白质需要裂解和进一步
分离，才能获得目的蛋白。
目的基因表达
CONTENTS
目 录
01 基因表达载概体念的 概 念 、 种 类
02 基因表达载和体调的控特条点件 、 功 能
03
原核与真质核粒生物基因表达的主要差异
04
基因表达过程
05
影响外源基因表达的因素
03
蛋白质的表达形式
基因表达：指基因携带的遗传信息，经过 转录、翻译、加工修饰等复杂过程，产生 具有生物学功能的蛋白质过程。
mRNA上与核糖体16sRNA结合的序列。
原核生物肽链合成的延长：
1.进位: 氨基酰-tRNA结合到 核糖体A位。
氨基酸2
氨基酸1
2.成肽:转肽酶催化，P位上起 始氨基酰-tRNA上的氨基酸 与A位上氨基酰-tRNA的氨基 形成肽键。
CA A G G A
ACUAGGUUCCUGCUAG
3.转位：转位酶催化，A位的 肽酰-tRNA移入P位。
转录延长：
启动子清除，σ亚基脱落， RNA聚合酶核心酶变构，与 模板结合松弛，沿着DNA模 板前移，在核心酶作用下 NTP不断聚合，RNA链不断 延长。
核心酶
β ωα
α
β’
全酶 σ
原核生物：在同一DNA模板上，有多个转录同时进行（羽毛
状现象），转录尚未完成，翻译已在进行。
真核生物：转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜
基因表达教学课件ppt
翻译的场所
翻译主要在细胞质的核糖体上进行，核糖体是由RNA和蛋白质组成的复合体 。
翻译的起始
起始密码子
翻译的起始信号是mRNA上的起始密码子，它与核糖体上的起始因子结合，起始 翻译过程。
起始因子的作用
起始因子与起始密码子结合后，可以促进核糖体与mRNA的结合，并启动翻译过 程。
02
基因表达研究在农业领域也得到了广泛应用，通过对植物和动物基因表达的研 究，可以更好地了解生长发育和适应环境的机制，提高生产效率。
03
基因表达研究在环境科学领域也扮演着重要的角色，通过对不同生物在相同环 境下的基因表达比较，可以更好地了解生物对环境的适应性，为环境保护提供 科学依据。
基因表达研究的发展趋势
02
基因表达的转录
转录的概述
01
02
03
定义
转录是指将DNA序列转 化为RNA序列的过程。
转录的酶
转录需要RNA聚合酶的 参与。
转录的场所
转录主要发生在细胞核内 。
转录的启动
启动子
转录的启动子是RNA聚合酶识别和结合DNA序列的位点。
转录起始复合物
启动子与RNA聚合酶结合形成转录起始复合物。
转录起始复合物的形成过程
基因表达谱
通过基因表达谱可以了解疾病状态下哪些基因在发生变化，从而 为疾病的诊断提供依据。
生物标志物
一些基因表达产物可以作为疾病的生物标志物，例如：前列腺癌 中的PSA基因。
疾病分型
基因表达数据可以用于疾病的分型，例如：肺癌可以分为鳞状细 胞癌、腺癌和小细胞肺癌。
基因表达异常与疾病的治疗
靶向治疗
基因表达解析
基因表达解析基因表达是指基因在细胞内产生RNA和蛋白质的过程。
通过对基因表达的解析，科学家能够深入了解基因在细胞功能和特性形成中的作用，从而为疾病的研究和治疗提供基础。
本文将介绍基因表达的概念、过程和相关技术，以及基因表达解析在生物学研究中的重要性。
一、基因表达的概念和过程基因是生物体内的一段DNA序列，负责编码蛋白质和调控生物体的生理过程。
基因表达即通过转录和翻译的过程，将基因中的DNA信息转化为RNA和蛋白质。
基因表达的过程分为三个主要步骤：转录、剪接和翻译。
1. 转录转录是指DNA通过RNA聚合酶的作用，合成与DNA相互互补的RNA分子。
在转录过程中，DNA的一个链被选择性地复制为RNA，形成信使RNA（mRNA）。
mRNA是与DNA相互互补的单链RNA，它将DNA中的信息携带到细胞核外，参与到蛋白质的合成过程中。
2. 剪接剪接是指mRNA分子中的内含子（不编码蛋白质的序列）被切除，将编码蛋白质的外显子连接起来的过程。
通过剪接，一个基因可以产生多个不同的mRNA分子，从而编码不同的蛋白质。
这种剪接方式的灵活性使得基因表达更加复杂和多样化。
3. 翻译翻译是指mRNA上的密码子与氨基酸通过蛋白质合成机制进行配对，并将其连接在一起，形成多肽链。
最终，多肽链会进一步折叠成具有特定功能的蛋白质。
翻译过程中需要依赖核糖体和多种蛋白质因子的参与。
二、基因表达解析的相关技术为了深入了解基因表达和探索基因功能，科学家们开发了许多高效的技术方法。
下面将介绍几种常用的基因表达解析技术。
1. RNA测序（RNA-Seq）RNA测序是一种通过高通量测序技术，对转录产物进行全面检测和定量的方法。
通过将mRNA转换为cDNA，随后进行测序，科学家可以获得关于基因表达的全景视图。
这项技术可以识别不同基因的表达水平以及转录本的异质性。
2. 基因芯片技术基因芯片是由数千至数百万个探针组成的玻璃片或硅片，每个探针都针对一个特定的基因或DNA片段。
基因表达调控精选全文
四、基因表达受顺式作用元件和反 式作用因子共同调节
➢ 一般说来，调节序列与被调控的编码序列位于同一 条 DNA 链 上 ， 称 为 顺 式 作 用 元 件 (cis -acting element)。
➢ 有一些调节序列远离被调控的编码序列，实际上是 其他分子的编码基因，只能通过其表达产物来发挥 作 用 。 这 些 蛋 白 质 分 子 称 为 反 式 作 用 因 子 (transacting factor)。反式作用因子的编码基因与其作用的 靶基因之间不存在结构的关联。
目录
（二）有些基因的表达受到环境变化的诱导 和阻遏
➢ 在特定环境信号刺激下，相应的基因被激活， 基因表达产物增加，即这种基因表达是可诱 导的，称为可诱导基因。
➢ 可诱导基因在一定的环境中表达增强的过程， 称为诱导(induction)。
➢ 如果基因对环境信号应答时被抑制，这种基 因是可阻遏基因。
➢ 可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为阻 遏(repression)。
目录
操纵子（operon）：在原核生物中，若干 功能相关的结构基因串联在一起，其表达 受到同一调控系统的调控，共同组成一个 转录单位，这种基因的组织形式称为操纵 子。
目录
一、操纵子是原核基因转录调控的基本 单位
原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现
启动子 (promoter)
编码序列
其他调节基因
目录
2. CAP的正性调节
+ + + + 转录
DNA
CAP P O Z Y A
CAP的活性依赖cAMP,cAMP水平与葡萄糖水平相关：
CAP CAP CAP CAP 无葡萄糖，cAMP浓度高
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Western blot基本程序
1. 蛋白质样品的制备 2. SDS-PAGE分离 3. 蛋白质转膜 4. 特异抗体（即第一抗体）与膜上的蛋白质（抗原）印
迹杂交 5. 再经偶联了可检测标记信号的第二抗体（即抗抗体，
商品试剂盒中多采用偶联辣根过氧化物酶的Ig） 6. 最后经与酶的底物反应而显影、成像，经扫描后获取
26 第二十六章 基因表达及功能 分析基本策略
目录
一、通过检测mRNA 揭示基因转录水平的表达特征
根据分析方法的原理和功能特性，可将基因表达分析分为:
封闭性系统研究方法:例如DNA微阵列、Northern印迹、实 时RT-PCR等方法，其应用范围仅限于已测序的物种，只能 研究已知的基因。 开放性系统研究方法: 如差异显示PCR、双向基因表达指纹 图谱、分子索引法、随机引物PCR指纹分析等，可以发现 和分析未知的基因。 这里主要针对已知基因的常用表达分析方法做一介绍。
➢ 该方法适合对待测样品进行初步筛选，目前已广泛被 实时定量PCR替代。
目录 目录
2．实时定量PCR
➢ 常用于mRNA的定量分析 ➢实时定量PCR (Real-time Quantitative Polymerase chain
Reaction,RQ-PCR)是定量分析mRNA的最通用、最快速、 最简便的方法，该方法是对PCR反应进行实时监测，具 有很高的灵敏度和特异性。
（ribonuclease protection assay，RPA）
➢ 可用于mRNA定量和RNA剪接分析 ➢ 是 一 种 基 于 杂 交 原 理 分 析 mRNA 的 方 法 ， 既 可 对
mRNA进行定量分析又可研究其结构特征，灵敏 度和特异性都很高。
目录 目录
核糖核酸酶保护实验原理示意图
目录 目录
目录 目录
（一）基于杂交原理的方法可检测mRNA表达水平 1．Northern印迹（Northern blot）
➢ 既可分析mRNA表达又可验证cDNA新序列 ➢ 是一种基于RNA-DNA杂交原理建立的一种RNA分析
技术
目录 目录
Northern
印 迹 分 析 原 理 示 意 图
目录 目录
2．核糖核酸酶保护实验
目录 目录
目前有5种技术用于实时定量PCR：
其中最经济、简便的技术是利用荧光染料（如SYBR Green ）与双链DNA分子结合发光的特性，指示扩增产 物的增加；
其他4种方法都是以荧光染料标记的寡核苷酸为探针 与正确的扩增子杂交，包括5’核酸酶法（即人们熟知的 TaqManTM）、分子信标、ScropionsTM和探针杂交法， 它们拥有更强的特异性，可以避免对PCR后溶解曲线的 需求，以及后续的Southern杂交或对扩增子的测序鉴定， 但是成本较高。
➢虽然原位杂交在功能性方面提供的信息较少，但是该 技术还是被广泛用于组织中的基因表达分析，这是因 为其较高的稳定性、较广泛的靶点和组织适用性。
目录 目录
（二）两种变换的聚合酶链式反应是常用的 mRNA检测方法
1．反转录PCR
➢ 可用于mRNA的半定量分析
➢ 反转录PCR（reverse transcription-PCR，RT-PCR） 是一种简单、快捷地对RNA进行定性、定量分析的方 法 。 它 是 以 mRNA 为 模 板 ， 体 外 扩 增 cDNA ， 再 以 cDNA为模板进行特定基因转录产物的PCR扩增。RTPCR技术一般用于RNA的定性分析；如果设置阳性参 照，则可对待测RNA样品进行半定量分析。
目录
SYBR Green
PCR
实 时 定 量 分 析 原 理 示 意 图
目录 目录
二、通过蛋白质检测揭示基因 翻译水平的表达特征
（一）采用特异抗体经Western印迹可直接 测定基因编码多肽
Western印迹（Western blot）是一种免疫印迹技术， 其基本原理与核酸分子杂交相似，只是以偶联标记物的抗 体分子作为探针，检测转移到固相支持物上的蛋白质/多肽 分子。当在蛋白质水平上检测特定基因的表达活性时，最 常用的方法就是利用Western印迹对细胞或组织的总蛋白质 中的特异蛋白质进行定性和半定量分析。
3．原位杂交（in situ hybridization，ISH）
➢ 可对mRNA进行区域定位
➢ 是 利 用 杂 交 原 理 建 立 的 组 织 原 位 mRNA 检 测 技 术 ， 可 对细胞或组织中原位表达的mRNA进行区域定位。同 时也可作为定量分析的补充。
➢ 通 过 设 计与 目 标 mRNA 碱 基 序 列 互 补的寡 核 苷酸序 列 ， 标记后作为探针；该探针能够特异性地与目标靶序列 杂交，检测标记信号来确定基因在组织和细胞内表达 的区位信息。
免疫印迹信息
目录
（二）酶联免疫吸附分析与Western印迹原理 相似但形式不同
酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）也是一种建立在抗原-抗体反应基础上的蛋白 质分析基本方法。
该方法不需经电泳分离待检样品蛋白质，而是预先将样品 包被在支持体上，以后反应过程与Western印迹大致相同—— 顺序结合（即“吸附”）特异抗体（一抗）及与酶连接的第二 抗体（也可预先包被抗体，“吸附”抗原），再进行酶-底物 反应。反应后通过专门的酶标仪测定、记录数据。
免 疫 组 织 化 学 （ immunohistochemistry ） 与 免 疫 细胞化学（immunocytochemistry）原理相同，都是利 用标记的特异性抗体通过抗原-抗体反应和显色反应， 在组织或细胞原位检测特定抗原（即目标蛋白质）的 方法，简称为免疫组化实验。近年来由于荧光标记抗 体的广泛应用，这两种方法又被统称为免疫荧光法。
目录 目录
酶联免疫吸附分析
特点：
具有特异性； 灵敏度很高； 稳定、操作简便，标本用量少，适于大规模筛查， 尤其适用于检测体液中微量的特异性抗体或抗原； 既可以做定性试学等领域。
目录 目录
（三）免疫组化实验可对组织/细胞 表达的蛋白质进行原位检测