高效液相色谱紫外法测定血清犬尿氨酸及色氨酸及其临床应用

ａｎｄ
ＫＴ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ
ｐｅｒｓｏｎｓ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ｃｈｒｏｎｉｃ
ｒｅｎａｌ
ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ
ｍｍｏｌ／Ｌ
ｔｈｅ
ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｔ
ａ
２．７％（ｖ／ｖ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｓ
ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｗｏｒｋｅｄ ａｔ
２２５ｎｍ．Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ａｓｓａｙ ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｗｉｔｈｉｎ １ ０ ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｓｅｒｕｍ ｂｙ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ（ＫＶＮ）ａｎｄ ｔｒｙｔｏｐｈａｎ（ｎ冲）ｉｎ
２．Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ＫＹＮ
ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＬＣ．ＵＶｌ． ａｎｄ
量显著升高、ＴＲＰ含量显著降低，且ＣＲＹ组血清ＫＹＮ和ＴＲＰ含量
与肾功能状态、某些血液学参数有一定相关性；尿毒症患者血液透析 治疗后血清ＫＹＮ含量显著降低，ＴＲＰ无明显变化。 结论： １．本文建立的ＨＰＬＣ－－ＵＶ法可同时测定血清ＫＹＮ和
ＴＲＰ，方法简单、快速、灵敏、特异、准确，适宜于临床与科研工作。 所建立的血清ＫＹＮ含量和ＫＴ比值范围可为相关疾病和基础研究工 作提供参考依据。 ２．ＣＲＦ患者外周血存在较为严重的犬尿氨酸代谢紊乱，且与肾功
ｇｌｏｍｅｒｕｌｌｕｒｅ（ＣＲＦ）．
ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ
ａ
Ｍｅｔｈｏｄｓ：
１．Ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ
ｉｓｏｃｒａｔｉｃａｌｌｙ ｅｌｕｔｅｄ ｕｓｉｎｇ
ｂａｓｅ—ｄｅａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ １５
能水平及ＣＲＹ的某些临床症状密切相关，血液透析可显著改善尿毒
症患者外周血犬尿氨酸的代谢失衡。
ＩＪ
中文摘要
关键词：高效液相色谱法，犬尿氨酸，色氨酸，慢性肾功能衰竭， 慢性。肾小球肾炎，尿毒症，血液透析
硕士学位论文
英文摘要
ＡＢＳＴＲＡＣＴ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ：
１．Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ
ａ
ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ
结果：１．血清标本内的ＫＹＮ和ＴＲＰ均分离良好，保留时间分 别为３．５０和８．１０分钟。ＫＹＮ线性范围为０．０９８～４９１ａｍｏｌ／Ｌ，最低检 测浓度为０．０２肛ｍｏｌ／Ｌ；平均回收率为９６．０２％，日内ＣＶ为２．３７％，日 间ＣＶ为３．６６％。ＴＩ冲的线性范围为４．９～４９０ｕｍｏｌ／Ｌ。最低检测限为 ０．２０｝．ｔｍｏｌ／Ｌ，平均回收率为９９．２９％，日内ＣＶ为１．５０％，日间ＣＶ为
Ｓｈｉｅｌｄ
Ｃ１８色
谱柱（１５０ｍｍ×３．９ｍｍ ｉ．ｄ．，５９ｍ）分离：流动相为１５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸钠 一乙酸（含２．７％乙腈，ｐＨ ３．６）溶液；流速１．０ ｍｌ／ｍｉｍ紫外检测波 长２２５ｎｍ；室温下测定；１０分钟内完成分析测定。ＫＹＮ和ＴＲＰ峰采 用峰保留值比较法和叠加法定性分析，用外标法测峰面积进行定量分 析。同时探讨了检测波长、流动相种类、流动相中有机相的比例以及 蛋白沉淀剂等因素对分离度和灵敏度的影响，考察了其它５种氨基 酸、多巴胺类物质对待测组分的可能干扰。 ２．测定健康成人（ｎ＝８６例）血清ＫＹＮ和ＴＲＰ含量，并计算 ＫＴ比值，以９５％可信限界定相应参数的范围。 ３．测定慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者（ｎ＝３５例）、慢性肾小球 。肾炎（ＣＧ）患者（ｎ＝３０例）血清ＫＹＮ、ＴＲＰ、肌酐（Ｃｒ）、尿素（Ｕｒ） 及其它相关血液学参数，探讨慢性。肾病患者不同阶段血清ＫＹＮ和 ＴＲＰ含量变化及其在相关肾病的鉴别诊断、治疗监测等方面的意义。 同时测定尿毒症血液透析患者在接受血液透析前、后血清ＫＹＮ和 ＴＲＰ含量变化，探讨血液透析在纠正尿毒症患者外周血犬尿氨酸代谢 失衡中的价值。
中文摘要
摘要
目的：１．建立一种简单、快速的反相高效液相色谱一紫外检测
法（｝玎，ＬＣ—ｕｖ）测定血清中的犬尿氨酸（ＫＹＮ）和色氨酸（ＴＲＰ）。 ２．用该方法建立正常人血清ＫＹＮ含量和ＫＴ比值（ＫＹＮ／ＴＲＰ） 参考值范围，并初步探讨测定血清ＫＹＮ和ＴＲＰ含量在慢性肾功能衰 竭、慢性肾小球肾炎等疾病中的临床意义。 方法：１．血清标本与等量５％（Ｖ／Ｖ）高氯酸溶液混合处理去除 蛋白后离心取上清液２０９ｌ直接进样分析。用Ｓｙｍｍｅｔｒｙ
ｖａｒｉｏｕｓ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｐｔｉｍａｌ ａｓｓａｙ
ｏｎ
ｏｐｅｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ａｓ
ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，ｔｈｅ
ｔｏ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｓｕｃｈ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ
ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ｐｒｅｃｉｐｉｔａｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ． ２．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＫＹＮ ｂｙ ａｎｄ ＴＲＰ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｃｏｎｔｒｏｌｓ
２．６５％。其它氨基酸如苯丙氨酸（Ｐ咖）、酪氨酸（ＴＹＲ）、犬尿喹啉
酸（ＫＹＮＡ）不Ｉ－－些含有苯环结构的生物活性物质如５。羟色胺（５．ＨＴ）， 肌酐（Ｃｒ）在本文的色谱条件下对ＫＹＮ和ＴＲＰ的测定均无干扰。 ２．８６例健康成人血清ＫＹＮ浓度为０．３６４～３．０２２１ａｍｏｌ／Ｌ，ＴＲＰ 浓度为３４．６４２４６２．２７０ｐ．ｍｏｌ／Ｌ，ＫＴ比值为１１．００８～４７．５２８。不同年龄 组之间，血清ＫＹＮ、ＴＲＰ含量及ＫＴ比值差异均无统计学意义 （Ｐ＞０．０５）；性别之间，血清ＫＹＮ、ＴＲＰ含量及ＫＴ比值差异均有统 计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ３．与正常对照组相比，ＣＲＦ组、ＣＧ组患者血清ＫＹＮ含量显著 升高、ＴＲＰ含量显著降低；与ＣＧ组相比，ＣＲＹ组患者血清ＫＹＮ含