HPLC法同时检测猪盲肠中的DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)和脱环氧DON
高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇郭健;王郑平;曹阳;尚艳娥;唐雪;李月琪【摘要】本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A快速测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法.玉米样品经磨碎后用水匀浆提取,提取液经过免疫亲和柱净化,超高效液相色谱LC-30A紫外检测器检测.试验结果表明:线性范围0.05～10.00 μg/mL,相关系数大于0.999 9;标准样品的仪器检出限为0.016 μg/mL,仪器定量限为0.05 μg/mL;3个浓度标样的保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.041％～0.043％和0.11％～1.57％之间;玉米样品3个浓度加标回收率在81.2％～90.0％之间.该方法简便快速,且易操作.【期刊名称】《粮食与食品工业》【年(卷),期】2014(021)006【总页数】4页(P87-89,93)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;粮食;超高效液相色谱【作者】郭健;王郑平;曹阳;尚艳娥;唐雪;李月琪【作者单位】国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器事业部分析中心北京100020;岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器事业部分析中心北京 100020【正文语种】中文【中图分类】TS210.7脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），又名呕吐毒素，属于单端孢霉烯族毒素，主要由某些镰刀菌产生［1］。
在自然界中广泛存在，主要污染玉米、小麦等谷类作物，也是食品中常见的真菌毒素［2］。
人和牲畜摄入了被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的谷物以后可产生广泛的毒性效应，不仅引起厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡［3］。
欧盟分类标准脱氧雪腐镰刀菌烯醇为三级致癌物，要求其含量应小于1.0mg／kg［4－5］。
免疫组织化学法定位猪肾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
（ ｏｌｇ ｆ ｔｒｎｒ ｄｃｎ ，ｏｔ ｈｎ ｃ ｌ ｒｌ ｎｖｒｉ ， ｕ ｎ ｚｏ ６ ２；Ｇｏ ｇ ｏ ｇ ｃｔ ｎ ｌ ｏｌｇ ｃｅ ｃ ｎ ｒｄ ） Ｃ ｌ ｅｏ ｅｉａｙＭｅ ｉｉｅ ＳｕｈＣ ｉａＡ ｅ Ｖｅ ｕｔ ａ Ｕ ｉｅｓｔ Ｇ ａ ｇｈ ｕ５ ０ ４ ｎｄ ｎ ａｉ ａ ｌ ｅｏ Ｓ ｉｎ ｅ ｄＴ ａ ｅ ｕ ｙ １ Ｖｏ ｏ Ｃ ｅ ｆ ａ
机 分 为 ２组 ， 组 经 乳 静 脉 注 射 Ｄ 一 ＯＮ， 射 剂 量 为 ７ 注 ５ 体 质 量 ， 一 组 经 乳 静 脉 注 射 生 理 盐 水 。 射 完 成 后 开 始 计 时 ， 观 察 记 录 猪 的 另 注 并 反应 情 况 ， ３ ｎ后放 血 宰 杀 ， 待 ０ｍｉ 并迅 速 取 肾脏 ， 用免 疫组 化 法定 位 肾脏 中 Ｄ 采 ＯＮ的 分布 情 况。 究 结果 显示 ， 研 染毒 剂 量 ７ ５ｗｄｋ ｇ体 质量 组 ， 注后 约 ５ １ ｎ开 始 出现 明显 的异 常反 应 。 静 ～ ０ｍｉ 具体 表现 为 ： 狂躁 不 安 ， 不停 的磨 牙 ， 咀嚼 ， 后 大量 流涎 ， 之 随之 出现 呕 吐等 症状 ． 一过 这 程 的 持 续 时 间对 该 组 猪 来 说 存 在 个 体 差 异 。 疫 组 化 法 定 位 结 果 显 示 ， 肾 小 囊 的壁 层 见 有 ＤＯＮ 的 分 布 免 在 关 键 词 脱 氧 雪 腐 镰 刀 茵 烯 醇 ； 脏 ： ； 疫 组 织 化 学 法 肾 猪 免 中图分 类号 ￥ ５ 文献 标识 码 Ａ ８２ 文 章 编 号 １０ — ７ ９ ２ １ ）６ ｏ ０ 一 ２ ０ ７ ５ ３ （ ０ ０ ｌ 一 ３ ９ ｏ
高效液相色谱法测定粮谷类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
高效液相色谱法测定粮谷类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇王丽君;禹洁;苏阿龙;贾红芳;朱书强【摘要】The deoxynivalenol in cereals samples was extracted by purified water and purified by immunoaffinity column,and the conditions of extraction and purification were optimized.The condition of deoxynivalenol was determined by HPLC.The results showed that filtrate 2 ml was dried at 40 ℃ by termovap sample concentrator,with 1 ml acetonitrile-water (20∶80,V/V) constant volume,and then detected at wavelength of 220 um.The separation effect of chromatographic peak was good.The deoxynivalenol had a good linear relationship in the range of 20-500ng/ml (R2=0.999 8).The limit of detection was 2 μg/kg.The relative standard deviation (RSD) of precision tests results was 2.4％.The recovery rate was 87.6％-98.9％ and the RSD was 2.04％-2.68％,which indicated the method could be used for the quantitative analysis and detection of deoxynivalenol content in cereals since it had the good precision and accuracy.%利用纯水溶解提取粮谷类样品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,经过免疫亲和柱净化,并优化提取净化条件,通过高效液相色谱检测其含量.结果表明,采用2mL滤液上样,经氮吹仪在40℃吹干后,用1mL乙腈-水(20∶80,V/V)定容,在波长220 nm 条件下进行检测,色谱峰分离效果良好.脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量在20～500ng/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 8),检出限2μg/kg,精密度试验结果相对标准偏差(RSD)值为2.4％,回收率为87.6％～98.9％,RSD值为2.04％～2.68％,表明该方法具有良好的精密度和准确性,适用于粮谷类样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的定量分析检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)006【总页数】4页(P179-182)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;粮谷类;免疫亲和柱;高效液相色谱【作者】王丽君;禹洁;苏阿龙;贾红芳;朱书强【作者单位】甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】O657.7脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）是镰刀菌属（Fusarium）产生的一种B型单端孢霉烯族真菌毒素，对动物和人都具有很强的致呕吐能力，因此又被称为“呕吐毒素（vomitoxin）”[1]。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇吸附剂对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及肠道形态的影响
脱氧雪腐镰刀菌烯醇吸附剂对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及肠道形态的影响邓波;万晶;徐子伟;吴杰【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2014(000)005【摘要】本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ deoxynivalenol，DON）污染饲粮中添加DON吸附剂对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及肠道形态的影响。
选取120头（36±4）日龄断奶仔猪，随机分为3组（每组4个重复，每个重复10头猪），分别为阴性对照（ NC）组、DON组（阳性对照）、DON＋吸附剂（ DON＋AD）组，试验期28 d。
结果表明：1）试验1～14 d，DON组较NC组平均日增重（ADG）下降21．24％（P＜0．05），料重比（F/G）上升15．15％（P＜0．05）；DON＋AD组较DON组ADG提高17．11％（P＜0．05），F/G下降10．53％（P＜0．05）。
试验15～28 d及试验全期各组间ADG和平均日采食量均无显著差异（ P＞0．05）。
2） DON组较NC组血清总蛋白含量显著下降（ P＜0．05），葡萄糖含量显著上升（ P＜0．05），DON＋AD组较NC组血清葡萄糖、尿素氮含量显著下降（ P＜0．05）。
3） DON组较NC组血清肌酸激酶、谷丙转氨酶活性显著提高（ P＜0．05），而加入吸附剂后血清肌酸激酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性则恢复到正常水平。
4） DON组较NC组空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度分别下降21．18％和17．97％（P＜0．05），DON＋AD组较DON组空肠绒毛高度增加16．49％（P＜0．05）。
因此，DON污染饲粮降低了试验1～14 d断奶仔猪的生长性能，添加DON吸附剂能够改善DON对断奶仔猪生长性能的不利影响，并缓解DON对断奶仔猪所产生的肠道损伤。
%This study was conducted to investigate the effects of deoxynivalenol ( DON) adsorbent on growth performance, serum biochemical indexes and intestinal morphology of weaner piglets fed DON-contaminated diets.One hundred and twenty weaner piglets a t (36±4) days of age were randomly allocated to 3 groups (4 replicates per group and 10 piglets per replicate): negative control ( NC) group, DON group ( positive con-trol) and DON+adsorbent ( DON+AD) group.The trial lasted for 28 days.Results showed as follows:1) on 1 to 14 days of experiment, compared with NC group, average daily gain ( ADG) in DON group was reduced by 21.24%( P<0.05) and feed/gain ( F/G) was increased by15.15%( P<0.05) .ADG in DON+AD group was higher by 17.11%than thatin DON group ( P<0.05) and F/G was lower by 10.53%than that in DON group ( P<0.05) .On 15 to 28 days of experiment and during the whole trial period, ADG and average daily feed intake were no significant differences among all groups ( P>0.05) .2) Compared with NC group, the ser-um total protein content in DON group was significantly decreased ( P<0.05) and glucose content was signifi-cantly increased ( P<0.05) .In DON+AD group, serum glucose and urea nitrogen contents were significantly decreased compared with NC group ( P<0.05) .3) Compared with NC group, the serum activities of creatine kinase (CK) and glutamic-pyruvic transaminase (GPT) were significantly increased (P<0.05), while after adding the adsorbent, the serum activities of CK, GPT and glutamic-oxal( o) acetic transaminase ( GOT) were returned to normal level.4) Compared with NC group, the villous height and villous height/crypt depth of je-junum inDON group were decreased by 21.18%and 17.97%( P<0.05) , respectively, and DON+AD group had a 16.49%higher jejunum villous height than DON group (P<0.05).It is concluded that the growth per-formance of piglets fed DON-contaminated diets on 1 to 14 days of experiment is reduced, while DON adsor-bent may improve the growth performance of weaner piglets and can alleviate intestine damage induced by DON.【总页数】8页(P1294-1301)【作者】邓波;万晶;徐子伟;吴杰【作者单位】浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 310021;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 310021; 浙江师范大学化学与生命科学学院，金华321004;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 310021;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州 310021; 浙江师范大学化学与生命科学学院，金华 321004【正文语种】中文【中图分类】S828【相关文献】1.基于LTQ-Orbitrap检测粮食及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇 [J], 黎永乐;李苑雯2.谷氨酸对脱氧雪腐镰刀菌烯醇刺激下的断奶仔猪生长性能、血常规及血清生化指标变化的干预作用 [J], 吴苗苗;肖昊;印遇龙;李丽立;李铁军3.脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染饲粮对断奶仔猪血液生理生化指标的影响及竹炭和竹醋液的干预作用 [J], 蒋竹英;范觉鑫;陈明洪;李丽立;王升平;印遇龙;李铁军4.植物炭黑对饲喂脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染饲粮断奶仔猪生长性能、血清抗氧化指标和肠道二糖酶活性的影响 [J], 吴杰;邓波;陈雪颖;王翰阳;徐子伟5.脱氧雪腐镰刀菌烯醇对断奶仔猪生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平的影响[J], 朱电锋;张娅菲;储小燕;陈晓芳;刘秦;冯士彬;李玉;吴金节;王希春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇检验
脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇检验(一）理化性质单端孢霉素是由镰刀菌属产生的一类真菌代谢产物，又称单端抱霉烯族化合物，分子中只含有C、H、O三种元素。
谷物中自然污染的单端孢霉烯族化合物分离属于A、B两型，化学结构式如下： A、B两型单端孢霉烯族化合物结构中含有12,13-环氧环，认为是其毒性的化学基础。
单端泡霉烯族化合物经过体内代谢，脱去环氧环结构，生成一类脱环氧单端孢霉烯族化合物，其毒性将大大降低。
B型单端孢霉烯族化合物去环氧环结构后，其结构式如下：结构式中R1、R2、R3、R4取代基不同，则得到不同的单端孢霉烯族化合物和脱环氧单端孢霉烯族化合物。
频繁的有：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)、(nivalenol, NIV)、脱环氧雪腐镰刀菌烯醇(de-epoxy nivalenol,de-epoxy NIV)、脱环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇(de-epoxy deoxynivalenol, de-epoxy DON)等。
DON和NIV的结构都属于单端孢霉烯族化合物中的B型，它们的化学基本结构及理化性质，见表9-2。
表9-2 DON、NIV 化合物的化学基本结构及理化性质 (二)主要来源 DON、NIV主要是雪腐镰刀菌污染玉米、小麦、大麦、燕麦等谷类植物而产生的代谢产物，其对谷物的污染率和污染水平居单端孢霉烯族化合物之首，且常与其他真菌毒素共存，在赤霉病麦中可检出高含量的DON。
(三)毒性与危害 DON,NIV的毒性主要表现为强细胞毒性和胚胎毒性，低剂量接触则表现为肠胃功能紊乱、免疫系统伤害。
猪对该类化合物最敏感，食用霉变的玉米饼、小麦等饲料能引起食欲缺乏、呕吐、全身无力等症状，故又称呕吐毒素。
DON可以引起人类食管癌,IgA肾病、克山病、大骨节病等，而NIV在急性毒性、细胞毒性、皮肤毒性等其他生物作用方面均比DON强10倍。
在谷物中NIV常与DON一起被检出。
(四)分析办法食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的分析办法有免疫亲和层析净化高效液相色谱法(GBIT 23503)，谷物及其制品中DON的测定办法是薄层色谱法和免疫测定法(GBIT5009.111)。
体外大鼠肠道菌群代谢脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
体外大鼠肠道菌群代谢脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究冯培生;沈建忠;吴海霞;李林霞;戴燕玉;刘凯丽;王莹;张素霞【摘要】Deoxynivalenol (DON) is a prevalent trichothecene contaminant, which is harmful to human and animal health. In this study, we identified the metabolites of DON produced by intestinal microflora of rats using ultra performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry (UPLC-Q/TOF-MS). By quantitative analysis of DON using triple quadrupole mass spectrometer, we found that the transformation capability of caecum was much stronger than that of colon and rectum, and no metabolite was found in the microflora culture media of small intestine after 24 h incubation at 37 ℃ in anaerobic condition. In microflora culture media of large intestine, only de-epoxy-DON (DOM) was found, and transformation capability of caecum was much stronger than other sections of large intestine.%运用超高效液相色谱串联四级杆/飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)识别和确定脱氧雪腐镰刀菌烯醇( Deoxynialenol,DON)在大鼠肠道菌群体外代谢模型中的代谢产物,同时运用高效液相色谱串联三重四级杆质谱定量分析DON含量变化,比较各段肠管中厌氧菌群的代谢能力.结果表明,DON不能被大鼠小肠菌群代谢,而能被其大肠菌群代谢为脱环氧代谢产物脱环氧-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deepoxy-deoxynialenol,DOM).定量测定结果显示,大肠中盲肠菌群代谢能力最强.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】5页(P119-123)【关键词】体外代谢;肠道菌;大鼠;脱氧雪腐镰刀菌烯醇;超高效液相色谱串联四级杆/飞行时间质谱【作者】冯培生;沈建忠;吴海霞;李林霞;戴燕玉;刘凯丽;王莹;张素霞【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193;中国农业大学动物医学院,北京100193【正文语种】中文脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynialenol，DON)，化学名为3α，7α，15-三羟基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮，俗称呕吐毒素，属于B型单端孢霉烯醇类毒素。
猪对DON的天然敏感性
猪对DON的天然敏感性作者：王晶晶来源：《国外畜牧学·猪与禽》2016年第01期霉菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）已被认为是家畜饲料的重要污染物。
即使是低浓度的污染，它也能影响动物的健康，大概是因其能引起动物的厌食而为人们所熟知。
因此，霉菌毒素的风险管理至关重要。
中图分类号：S816 文献标识码：C 文章编号：1001-0769（2016）01-0024-03脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）主要是由一些植物病原体镰刀菌产生的B 型单端孢霉烯。
这种真菌几乎可以感染所有类型的植物，DON经常在用作动物饲料的谷物商品中被检测到。
在全球的温带地区，DON是谷物中最普遍的霉菌毒素之一。
霉菌毒素调查显示，全球各地均会出现高浓度的DON污染。
研究发现，在2013年检测的共1 729份样本中，中国的小麦样本（平均浓度超过1 800 μg/kg）和欧洲的玉米样本（980μg/kg）的DON水平最高，该水平对猪有严重影响。
由于猪日粮中可能含有高比例的玉米和小麦，猪可能会非常频繁地接触这种霉菌毒素。
1 作物生物气候学的变化影响植物中DON产生的因素有若干。
宿主最容易受到真菌感染的时期是花开期，在该时期花朵完全开放，随后很快会凋谢。
温暖潮湿的环境，以及频繁地降雨均有利于真菌的生长、感染和疾病的发展。
例如，预测模型显示，到2040年加拿大的玉米和小麦的开花时间点会比往年更早。
已知在开花前较高的湿度会加剧真菌感染和霉菌毒素污染。
气候变化还似乎会对真菌种群的迁移产生影响，目前主要是从欧洲南部国家（如玉米中的环珠状镰刀菌）转移到北部国家，结果导致其他霉菌毒素的形成。
人们已经观察到，由于侵袭力不同，优势镰刀菌种群正在取代其他种群。
美国的霉菌也在发生种群迁移，从而导致产生的DON水平有所差异。
2 隐蔽型霉菌毒素在对抗镰刀菌方面，不仅在植物之间，而且在同一植物的各品种之间也有巨大差异。
玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定能力验证
玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定能力验证作者：王蓓蓓朱联旭李崇勇刘欣来源：《安徽农业科学》2022年第01期摘要 [目的]通過实验室能力验证活动分析了影响玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）检测结果的主要因素。
[方法]依据GB 5009.111—2016第二法：免疫亲和层析净化HPLC法检验并优化前处理条件。
[结果]采用5倍稀释浓度提取1 h和3 mL/min的净化速度，能力验证样品中DON含量为571 μg/kg，RSD为0.25%。
[结论]通过了中国食品药品检定研究院组织实施的NIFDC-PT-228《玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》能力验证，与中国食品药品检定研究院统计Z比分值为0.70，能力验证结果为满意，细化完善了国标测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇的操作，为广大检验检测人员提供参考。
关键词脱氧雪腐镰刀菌烯醇;能力验证;玉米粉;高效液相色谱法中图分类号 TS 201.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2022）01-0177-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.01.047Proficiency Testing for Determination of Deoxynivalenol in Corn FlourWANG Bei-bei1，2， ZHU Lian-xu3， LI Chong-yong1 et al（1. Hanzhong Testing and Inspection Center for Food and Drug Control， Hanzhong，Shaanxi 723000;2. College of Biological Science and Engineering， Shaanxi University of Technology， Hanzhong， Shaanxi 723000;3. Zhenba County Market Supervision Administration，Zhenba， Shaanxi 723600）Key words [Objective]Through a laboratory proficiency testing activity， the main factors affecting the detection results of deoxynivalenol in corn flour were analyzed. [Method]According to the second method of the national standard GB5009.111-2016 to check and optimize the pretreatment conditions.[Result]Under the conditions of extraction at 5 times of dilution concentration for 1 h and 3 mL/L flow rate，the DON content in the ability verification sample was 571 μg/kg， RSD was 0.25%.[Conclusion]Passed the NIFDC-PT-228 “Deoxyniv alenol Determination of Deoxynivalenol in Corn Flour” proficiency test organized and implemented by the China Institute for Food and Drug Control， and the Z score with the organizer was 0.70. The proficiency test results were satisfactory， and the national standard determination of deoxynivalenol has been refined and perfected to provide a reference for the majority of inspection and testing personnel.Key words Deoxynivalenol;Proficiency testing;Corn flour;High performance liquid chromatography基金项目汉中市地产食品质量监控与品质提升创新团队基金项目（201902）。
高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的不确定度分析
Uncertainty analysis of deoxynivalenol content in grain determined by HPLC
代入工作曲线计算 得出的峰面积（ bx + a）
27． 517 47
峰面积（ y） 28． 627 80
［y － （ bx + a） ］2 1． 238 902 564
0． 8
55． 439 48
56． 592 14
1． 328 625 076
1． 0
69． 401 85
70． 269 00
0． 751 949 122
Vol． 22，2015，No． 1
粮食与食品工业
Cereal and Food Industry
标准与检测
高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇含量的不确定度分析
贾寅 北京市粮油食品检验所 （ 北京 100162）
摘 要： 根据 JJF 1059—1999《测量不确定度评定和表示》提供的不确定度分析思路，对高效液 相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量进行不确定度分析，为建立有效的质量控制方法 提供参考。结果表明： 本试验的扩展不确定度为 0． 063 mg / kg，从不确定度的各个分量比较，影响 高效液相色谱测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的不确定主要来自其测量的重复性。
∑j = 1［yj
－（ n
bxj －2
+
a）
］2
为标准溶液峰
高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄ ｗａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎｉ ｎ ｇ ｄｅ ｏｘ ｙｎ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎｏ ｌ ｉ ｎ ｇ ｒ ａ ｉ ｎ ｂ ｙ ｈｉ ｇ ｈ ｐｅ ｒ —
ｗｉ ｔ ｈ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｎ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｏ ｌ ａ ｒ ｅ
为三级致癌物要求其含量应小于10mk我和柱使约23ml空气进入柱中准确加入1mlgg国食品安全国家标准食品中真菌毒素限量的甲醇以每秒滴的流速洗脱洗脱液氮吹至干gb127612011中规定玉米等谷物及其制品中呕吐毒用05ml流动相涡旋溶解经022m针式滤器素限量为
高效液 相色谱法测 定粮食中的 脱氧 雪腐镰 刀菌烯醇
ａ ｎ ｄ Ｄｅ ａ ｋ ａ ｒ ｅ ａ ｕｎ ｄｅ ｒ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｃ ｏｎ ｃ ｅ ｎｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎｓ ａ ｒ ｅ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ０． ０ ４１ ｔ ｏ ０． ０ ４ ３ ａ ｎｄ ０ ．１ １ ｔ ｏ １ ． ５ ７ ．
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１ ．Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｇｒ ａ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ Ｏｉ ｌ（ Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ １ ６ ２ ） ２ ．Ｓ ｈ ｉ ｍａ ｄ ｚ ｕ（ Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）Ｌｉ ｍｉ ｔ ｅ ｄ，Ａｎ ａ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ（ Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ ０ ）
脱氧雪腐镰刀菌烯醇的代谢特征
污染风险。
2 DON的生化性质
DON 又 名 呕 吐 毒 素， 属 单 端 孢 霉 烯 族 类 毒 素[1] ，化学名称为 12，13-环氧-3，7，15-三羟基单 端孢霉-9-烯-8 酮- ，物理状态为无色针状结晶， 为极性化合物，易溶于水和极性有机溶剂（图 1）。 由于 在 DON 350 ℃高温下化学性质仍稳定，不受 加工和烹饪过程影响而遍及整个食物链[2，20]。 这 类小倍半萜类化合物 C12 和 C13 位置上的环氧基 团对于 DON的毒性至关重要，它可能与细胞中蛋 白质的氨基、羧基和羟基相互作用，结合核糖体引
1 DON的污染分布特征
DON对以谷物为基础的食物和饲料的污染是
一个全球性问题。 在欧洲针对饲料样品中 DON
污染调查研究发现，约有 的 57% 饲料样品存在
污染 且污染水平为 DON ，
91 ～5 000 μg /kg[17] 。
针对 82 个 3 种不同基质（母猪饲料、小麦和玉米）
的饲料样品调查研究表明，有 67 种受到 污 DON
关键词： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇；毒物动力学；代谢
中图分类号：S811.2
文献标识码：A
文章编号：1006 -267 X（ 2016 ） 03 -0641 -11
呕吐毒素对畜禽肠道健康的影响及相关研究进展
基金项目:广东省重点领域研发计划项目“无抗饲料生物合成关键技术研究与应用”(2019B020218003)作者简介:杨俊(1987-),男,博士,主要从事猪营养与饲料科学研究,E-mail:*******************通讯作者:郭吉余,副研究员,E-mail:**************.cn[摘要]呕吐毒素是饲料原料中最为常见,对畜禽健康危害最大的一种霉菌毒素,其给畜牧业生产造成极大经济损失。
大量研究结果发现,动物肠道可能是呕吐毒素进入机体内产生毒理作用的重要靶器官,因此,呕吐毒素诱导的动物肠道健康损伤也成为目前的一个研究热点。
本文结合近年来国内外相关研究进展,综述了饲料中呕吐毒素污染对畜禽肠道健康的影响与毒理机制,以及相关防治措施,为饲料生产及畜禽健康养殖提供一些参考。
[关键词]饲料;呕吐毒素;畜禽;肠道健康[中图分类号]S816.3[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2021)09-0087-06呕吐毒素对畜禽肠道健康的影响及相关研究进展杨俊1,赵小刚1,张桂红2,郭吉余1*(1.广东海大集团股份有限公司畜牧水产研究中心,农业农村部微生态资源养殖利用重点实验室,广东广州511400;2.华南农业大学兽医学院,广东广州510642)DOI :10.15906/11-2975/s.20210917脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON )由于能导致动物产生呕吐反应,而被称为呕吐毒素。
DON 是一种B 类单端孢霉烯族毒素,主要由禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌及雪腐镰刀菌等镰刀菌属真菌代谢产生,并广泛分布于霉变的小麦、大麦、玉米等谷物中,是我国饲料原料中常见的一种霉菌毒素。
不同动物对DON 敏感度不同,猪是对DON 最为敏感的动物之一,其次为啮齿类动物、家禽及反刍动物(Prelusky 等,1994)。
动物长期采食低浓度DON污染饲粮会产生食欲下降、采食量及饲料利用率降低等症状,从而导致生产性能下降,而摄入高浓度的DON 污染饲粮则会导致动物肠道屏障破坏、免疫功能紊乱、生殖系统损伤,并出现呕吐、腹泻甚至死亡等症状,严重破坏生产性能,损害机体健康(Prelusky 等,1994)。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)理化检测方法的研究
样 品 Ｄ Ｎ毒索 （ Ｏ 层析 纯 ） ，自制 。Ｄ Ｎ标 准品毒 索 （ Ｏ 纯
Ｙ Ｎ Ｊ ｎ，ＺＨＡＮＧ Ｈｏ ｇｙｎ ，Ｚ Ｉ ｕ ｎ －ｉｇ ＨＡＮＧ Ｈａ－ｉ ｌｂｎ‘，ＨＥ Ｃ ｅ ｇ ｈ ａ ｈｎ －ｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｅ ｒ ａ ｄ ｉｅ ａｊ ｇＡ ｒ ｕｔｒｌ ｎｖｒｔ， ａｊ ｇ２０９ ， ｈｎ ） Ｃ ｌｇ ｆ ｔ ｉ ｒ Ｍｅｉｎ ，Ｎ ｎｉ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｓｙ Ｎ ｎｉ １０ ５ Ｃ ｉ ｅ Ｖ ｅｎ ｙ ｃ ｎ ｃ ｕ ｅｉ ｎ ａ
Ａｂ ｔａ ｔ ｈ ｙｒ ｈｏ ａ ｇａｈ ｔｏ （ Ｌ ，ｈｇ－ｅ ｏｍ ｎｅｌ ｕ ｈｏ ａｏｒ ｈ Ｈ Ｌ ｓｒ ｃ ：Ｔ ｉ ｌ ｅ ｒｍ ｔ ｒｐｙｍｅ ｄ Ｔ Ｃ） ｉ ｐｒ ｒ ａｃ ｉ ｉ ｃｒｍ ｔｇ ｐ ｙ（ Ｐ Ｃ）ａ ｄｇｓｃｒｍ ｔ ｒｐｙｍ ， ｎａ ｃ ｏ ｈ ｈ ｆ ｑｄ ａ ｎ ａ ｈ ａ ｇａｈ－ ｓｓ ｏ ｏ ￥
醇 （ Ｏ ）毒索，结合现有的标准检测法 ，我们建立并 比 ＤＮ ｊ
较 了 ， Ｃ、Ｈ Ｌ ｒ Ｌ Ｐ Ｃ、Ｇ ＣＭＳ等方法 。
对 Ｄ Ｎ的迁移值 （ Ｏ 附）的报道，说法不一 ，差别很大。 本试验结合 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ方法 ，确定了展开剂氯仿：甲醇 （０ １） ９ ：０
展开 Ｄ Ｎ毒索 的 附 值 。这样可 以大大方便通过薄层层 析进一 Ｏ
关键词 ：脱氧雷腐镰刀菌烯醇；检测； Ｌ ；Ｈ Ｌ ；Ｇ － Ｓ Ｔ Ｃ Ｐ Ｃ ＣＭ 中豳分类号 ：￥１ ８６ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：０ ２ ￣１ ０ ２ ０ ）０ ＯＯ －３ ５ ９ ３ （ ０６ １－Ｏ ６０
仔猪的肠道健康和肠道营养
影响仔猪肠道健康的因素：1.日粮抗营养因子日粮抗营养因子包括豆粕中的胰蛋白酶抑制因子、凝集素、抗原蛋白、棉粕中的棉酚、植酸等等，其中豆粕中的抗原蛋白是造成仔猪肠道功能损伤的主要原因。
球蛋白和β-伴球蛋白是豆粕中两种最重要的抗原蛋白，前者刺激肥大细胞释放组胺，引起上皮细胞通透性增加和黏膜水肿；后者引起肠道形态变化，表现为肠道绒毛萎缩、脱落。
2.病原微生物新生幼畜的胃肠道是无菌的，随后母源性和外部环境的微生物定植于肠道中，构成一个相对稳定的微生态系统。
猪肠道内大约有14个属的400~600种微生物，数量达到1014个，是体细胞的10 倍。
仔猪断奶后，乳酸杆菌、福特氏乳酸菌和嗜酸乳酸杆菌的数量显著降低，其原因为需要复杂营养供应的乳酸菌受到了断奶后仔猪采食量下降的影响；另一方面，日粮组分的变化，如日粮中含有的抗营养因子，造成了肠道受损伤和炎症，增加了被外部病原微生物感染的机会。
3.饲料加工调制断奶仔猪由采食母乳到采食饲料，经历一个巨大的转变，饲料加工处理方式不同，对仔猪肠道健康影响也不同，如原料熟化与否，颗粒料与粉料及固态料与液态料等。
从消化率的角度出发，谷物和植物性饲料（玉米、豆粕、大豆、小麦）至少需要50％以上的熟化处理，以保证对淀粉的糊化和对抗原的灭活效果。
经过熟化和制粒后，可以减少日粮抗营养因子、病原微生物等的数量，从而减少对肠道黏膜的过敏反应与损伤。
有报道不同料形对断奶仔猪消化生理的影响，与粉料相比，颗粒料可显著提高仔猪日采食量，提高内源酶的活性；与固态料相比，液体料可显著降低仔猪的腹泻，提高小肠绒毛的高度。
4.霉菌毒素霉菌毒素是产毒霉菌在粮食或饲料上生长繁殖过程中产生的有毒二次代谢产物，对动物肠道健康影响很大。
试验标明，镰刀霉菌毒素中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和玉米赤霉烯酮（ZEN）可造成新生仔猪肠上皮细胞氧化损伤，并抑制其增殖，导致细胞膜完整性受损，抑制消化酶的活性及对营养物质的吸收。
液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)又名呕吐毒素，是一种单端孢霉烯族毒素。
主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生。
DON污染粮谷的情况非常普遍。
世界各地均有报道，特别在中国、日本、美国、阿根廷和南非。
在我国胃癌、食管癌等恶性肿瘤高发区．DON是居民饮食中主要的污染霉菌毒素之一。
DON主要在田间侵染小麦、玉米等谷类作物，当人摄入了被DON污染的食物后。
会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
DON化学名称为3，7，15一三羟基一12，13一环氧单端孢霉一9一烯一8一酮，为无色针状晶体。
熔点为151。
153℃。
其化学性能非常稳定，具有较强的热抵抗力和耐酸性．在pH值10．O条件下。
100℃加热60min部分被破坏，120℃加热30 min和170℃加热15 min完全被破坏【”。
目前，测定粮谷作物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法很多，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、酶联免疫法(ELISA)等。
本文采用了液相色谱法，使用海能LC7000液相色谱仪配紫外检测器和C18亲水性分离柱，不仅获得了准确的测定结果．而且极大地提高了工作效率。
l 材料与方法1．1仪器海能LC7000液相色谱仪(配备紫外检测器)，7mILOGY呕吐毒素专用净化柱TC—T200，C18亲水性分离柱，旋转蒸发仪，高速均质机，真空泵，小型粉碎机。
1．2试剂乙腈(Merck，色谱纯)，甲醇(Merck，色谱纯)，呕吐毒素标准品(FERMENTEK LTD)。
1．3 操作步骤(1)提取称取粉碎过筛样品25．O g于均质杯中，加入100 mL y(乙腈)：y(水) =84：16提取液，于高速均质机上均质4 min，静置。
(2)净化浓缩取2 mL样品提取液上清液到净化小柱顶端，向下推活塞，使溶液全部过柱，收集净化后溶液放入100 mL标准磨口蒸发瓶中．取出注射器，加入8 mL y(乙腈)：y(水)=84：16提取液到柱顶端，将溶液彻底过柱，合并净化液，于60℃减压蒸干。
猪胃组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液质联用检测
猪胃组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液质联用检测卢培成，剡海阔1，曾振灵1，贺利民1，梁梓森1，范小龙1，邓衔柏1，邹新华2（1.华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2.八维生物科技有限公司，江西赣州341200）摘要：以脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素（Deoxynivalenol，DON）为检测对象，建立了一种检测猪胃组织中DON的液质联用分析方法。
样品经乙腈∶水(80∶20，V/V)提取，varian Bond Elut Mycotoxin净化柱净化后，收集提取液并于45℃水浴氮气吹干，乙腈∶水(20∶80，V/V)溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤后，以反相C18柱为色谱柱，甲醇、纯水溶液梯度洗脱为流动相，电离离子源电离后质谱检测。
结果显示，DON在2～100ng/mL范围内线性关系良好(r2>0.99)；检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为2μg/g和5μg/g；低、中、高浓度（5、20、50μg/g）的回收率分别为71.8%、89.5%、87.4%，RSD分别为6.75%、9.82%、6.39%。
表明该方法操作简单，灵敏度高，适用于猪胃组织中DON的检测。
关键词：液相色谱-质谱联用；猪；胃组织；脱氧雪腐镰刀菌烯醇中图分类号：S852.6文献标识码：A文章编号：1004-874X(2011)09-0114-03Detection of deoxynivalenol in gastric tissueof pig by LC-MS/MS methodLU Pei-cheng1,YAN Hai-kuo1,ZENG Zhen-ling1,HE Li-min1,LIANG Zi-sen1,FAN Xiao-long1,DENG Xian-bo1,ZHOU Xin-hua2(1.College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou510642,China;2.Ba-wei Biotechnology company,Ganzhou341200,China)Abstract:The appropriate method of liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS/MS)was built for detecting deoxynivalenol (DON)in gastric tissue of pig.The DON was extracted by the solution that acetonitrile∶H2O(80∶20,V/V)cleaned up by varian Bond Elut Mycotoxin clean-up column,evaporated to dryness at45℃water bath by nitrogen,dissolved by acetonitrile∶water(20∶80,V/V)solution and filtrated through0.22μm micromembrane.After that,the deoxynivalenol mycotoxin were separated in a Reversed-phase C18 chromatographic column with mobile phase of methanol and ultra-pure water and ionized by the chemical ionization.The signals of the mycotoxins were detected by mass spectrometry to qualification and quantization.The results showed that good linear correlations between the peak area and toxin concentration were found;the linear range for DON was2～100ng/mL(r2>0.99);limit of detection(LOD)was2μg/ mL and limit of quantitation(LOQ)was5μg/mL;the recoveries of low,medium and high concentration:5μg/g,20μg/g and50μg/g were 71.8%,89.5%and87.4%,respectively;RSD were6.75%,9.82%,6.39%,respectively.The results indicated that this method was not only quantitatively accurate,but also high sensitive and convenient for operation,and suitable for detection of gastric tissue deoxynivalenol.of pig.Key words：LC-MS/MS;pig;gastric tissue;doxynivalenol镰刀菌毒素是一类非蛋白的萜烯及甾类化合物，由分布极为广泛的镰刀菌代谢生成，主要污染玉米、小麦、燕麦等农作物及动物饲料。
免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究摘要利用免疫组织化学法研究了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)在猪脾脏分布定位,为DON体内残留及DON对免疫系统影响进一步研究提供依据。
选用10 头健康阉公猪,随机分为二组,一组经乳静脉注射DON标准品,注射剂量为75 μg/kg体重,另一组经乳静脉注射相当体积生理盐水。
注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30 min后放血宰杀,并迅速取脾脏,4%多聚甲醛固定,经脱水、包埋及切片后,采用免疫组化法定位脾脏中DON的分布情况。
免疫组化法定位结果显示,在75 μg/kg体重给药组中,脾组织中的血管壁周围见有DON阳性反应颗粒,而对照组未见阳性反应颗粒。
关键词脱氧雪腐镰刀菌烯醇;脾脏;猪;免疫组织化学法TheResearchofLocatingDONinSpleenofPigwithImmunohistochemicalLU Pei-chengHE Li-minNIU Geng-zhiYAN Hai-kuoMA Yong-jiangFAN Xiao-long LI Yu-guDENG Xian-bo *(College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou Guangdong 510642)AbstractThe distribution and location of deoxynivalenol in spleen of pigs by immunohistochemicalwasstudied, which provided a bisis for the residue of DON in the body and the effect of DON on the immune system. In the research,ten healthy clean pigs were used and divided into two groups randomly. One group were given DON standard by breast vein for the dose 75μg/kg b.w., normal saline was injected at the same dosage in the other group. Counted time after the intravenous administration, observed and noted the response,pigs were killed after 30 minutes, took spleen tissue sample quickly, fixed with 4% paraformaldehyde, dehydrated, embedded and sliced, then the immunohistochemical was used to locate the distribution of DON in spleen. The result of the study showed that DON positive particles were found in the spleen tissue around the blood vessel while in the control group no positive particles were saw.Key wordsDON;spleen;pig;immunohistochemical脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),又称作呕吐毒素(vomitoxin,VT),属单端孢霉烯族类,其中DON对谷物的污染率和污染水平居于镰刀菌毒素之首,人畜误食后会出现呕吐、腹泻、腹痛等症[1-2],也是中国恶性肿瘤高发区居民粮食优势污染霉菌毒素之一[3-4]。
免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
统 影 响 进 一 步研 究提 供 依 据 。 用 ｌ 选 Ｏ头 健 康 阉 公 猪 ， 机 分 为 二 组 ， 组 经 乳 静 脉 注 射 ＤＯＮ标 准 品 ， 射 剂 量 为 ７ ｇｋ 随 一 注 ５￣ ／ ｇ体 重 ， 一 组 经 另 乳 静 脉 注 射 相 当体 积 生 理 盐 水 。 射 完 成 后 开 始 计 时 ， 观 察 记 录 猪 的 反 应 情 况 ， ３ 注 并 待 ０ｍｉ 放 血 宰 杀 ， 迅 速 取 脾 脏 ，％ 多聚 甲醛 固定 ， ｎ后 并 ４ 经脱水 、 包埋 及 切 片 后 ， 用 免 疫 组 化 法 定 位 脾 脏 中 Ｄ 采 ０Ｎ 的 分 布 情 况 。 疫 组 化 法 定 位 结 果 显 示 ， ７ ｇｋ 免 在 ５Ｉ ／ｇ体 重 给 药 组 中 ， 组 织 中 的 ｘ 脾 血 管 壁 周 围见 有 Ｄ０ 阳性 反 应 颗 粒 ． 对 照 组 未 见 阳 性 反 应 颗 粒 。 Ｎ 而
ｇｏ ｐ Ｃｏ ｎ ｅ ｉ ｆｅ ｈ ｎ ｒｖ ｎ ｕｓａ ｍｉｉｔａｉｎ ｏ ｓ ｒ ｅ ｎｄｎ ｔｄｔ ｅｒｓ ｏ ｅｐ ｇ ｒ ｉ ｅ ｆｅ ０ ｍｉｕ ｅ ，ｏ ｐ ｅ ｎｔｓｕｅｓｍｐ ｅ ｒ ｕ ． ｕ ｔｄ ｔ ｍｅａｔｒｔ ｅｉｔａ ｅ ｏ ｄ ｎ ｓｒ ｔ ， ｂ ｅ ｖ ｄ ａ ｏｅ ｈ ｅ ｐ ｎｓ，ｉ ｓｗｅ ｅｋｌ ｄ ａｔｒ３ ｎ ｔ ｓ ｔｏｋｓ ｌｅ ｉｓ ａ ｌ ｏ ｌ ｑ ｃ ｌ。 ｘ ｄｗｉｈ４％ ｐ ｒｆｒ ｌｄ ｈ ｄ ， ｅ ｙ ｒｔｄ， ｍｂ ｄ ｅ ｎ ｌ ｅ ，ｈｅ ｈ ｍｍｕｎ ｈｉｔｃ ｅ ｃ ｌｗａ ｓ ｄｔ ｏ ａｅｔ ｉｔ ｂｕｉｎ ｏ ｕｉｋｙ ｆ ｅ ｔ ｉ ａ ａｏｍａ ｅ ｙ ｅ ｄ ｈ ｄ ａｅ ｅ ｅ ｄ ｄａ ｄ ｓｉ ｄ ｔ ｎ ｔｅｉ ｃ ｏ ｓｏ ｈ ｍｉａ ｓｕ ｅ ｏｌｃ ｔ ｄｓｒ ｔ ｆＤＯＮ ｈｅ ｉ ｏ ｉ ｐ ｅ ｎ Ｔｈ ｅ ｕｔｏ ｅ ｓｕ ｙｓ ｏ ｄｔ ａ ｎｓ ｌｅ ． ｅｒ ｓ ｌ ｆｔ ｔ ｄ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｈ ＤＯＮ ｐ ｓｔｖ ａ ｔ ｌｓｗｅ ｅｆ ｕ ｄｉ ｈｅｓ ｌｅ ｉｓ ｅａ ｏ ｎｄｔｅｂ ｏ ｄｖ ｓｅ ｉ ｎｔ ｏ ｔｏ ｏ ｐ ｏ ｉｉｅｐ ｒｉ ｅ ｒ ｏ ｎ ｎｔ ｐｅ ｎ ｔｓｕ ｒｕ ｈ ｌｏ ｅ ｓ ｌ ｃ ｗｈｌ ｉ ｈｅｃ ｎｒｌｇ ｕ ｅ ｒ
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· 287 ·2012年 第37卷 第10期收稿日期：2012-04-16 *通讯作者基金项目：国家自然科学基金项目(30871750)；公益性行业(农业)科研专项(201203037)。
作者简介：崔莉(1983—)，女，山东聊城人，博士研究生，研究方向为食品质量与安全。
崔 莉，刘 阳*(中国农业科学院农产品加工研究所，农业部农产品加工综合性重点实验室，北京 100193)摘要：以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol ，DON)及其代谢产物脱环氧DON(DeepDON)为检测对象，建立了一种同时检测猪盲肠内容物中2种毒素的高效液相色谱分析方法。
样品经乙腈提取后，分别采用吸附剂：木炭粉末+氧化铝+硅藻土(7+5+3，w+w+w)和Bond Elut Mycotoxin 多功能净化柱对DON 和DeepDON 进行净化，HPLC 检测，采用C 18色谱柱，乙腈/甲醇/水(5/5/90，v/v/v)为流动相，流速1.0 mL/min ，检测波长220 nm 。
结果显示DON 和DeepDON 在0.5~10 μg/mL 范围内线性关系良好(R 2=0.9999，0.9998)。
关键词：猪盲肠；脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)；脱环氧DON中图分类号：TS 207.5 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)10-0287-04Detection of deoxynivalenol and de-epoxy DON in caecum of pig byHPLCCUI Li, LIU Yang *(Institute of Agro-products Processing Science & Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Agro-products Processing Comprehensive,Ministry of Agriculture, Beijing 100193)Abstract: The appropriate method of high performance liquid chromatography(HPLC) was built for detecting deoxynivalenol (DON) and de-epoxy metabolitesin in caecum of pig. The DON was extracted by acetonitrile, DON was cleaned up with mixture of charcoal power, alumina and celite (7+5+3, w+w+w), DeepDON was cleaned up by Varian Bond Elut Mycotoxin clean-up column, then detected by HPLC, adopting C 18 column and acetonitrile-methanol-water (5/5/90, v/v/v) mixture as mobile phase under the condition of flow rate 1.0 mL/min and detection wavelength 220 nm. The results showed that good linear correlations between the peak area and toxin concentration were found: the linear range for DON and DeepDON was 0.5~10 µg/mL(R²=0.9999, 0.9998).Key words: caecum of pig; deoxynivalenol(DON); deepoxy-DONHPLC法同时检测猪盲肠中的DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)和脱环氧DON· 288 ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)是单端孢霉烯族毒素，又名呕吐毒素(Vomitoxin)，广泛存在于受到镰刀菌污染的小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米等谷物及其制品中[1-2]，危害人畜健康。
DON的毒性与动物的种属、年龄、性别、染毒途径等有关，猪比小鼠、家禽、反刍动物更敏感，肠道是DON吸收的主要部位[3]，体内体外实验均表明DON会影响肠道营养吸收，改变肠道细胞功能，危害肠道的屏障作用[4-6]。
DON在体内经消化代谢，会在肠道和瘤胃内菌群的作用下脱去有致毒作用的环氧结构，生成毒性较小的产物脱环氧DON(Deepoxy deoxynivalenol，Deep-DON，DOM-1)[7]。
DeepDON最早在鼠的尿液和粪便中发现，在猪的肠道和粪便中[8-9]、牛饲喂含DON的饲料后所产的奶中也检测到[10]。
目前DON毒素的检测方法研究主要集中在谷物及其制品等基质中，动物组织中同时检测DON 和DeepDON的方法较少，特别近年来尿液、粪便和血浆中研究较多[11-13]，肠道内研究较少。
方法主要包括液相色谱、气相色谱、液质联用和气质联用[14-17]，质谱方法对设备要求较高，且DON毒素的检测最常用的是HPLC法[1]。
因而本研究建立了一种同时检测猪盲肠内容物中DON和DeepDON 的HPLC方法，为进一步研究DON及其结合物的毒性和代谢提供方法支持。
1 材料与方法1.1 材料DON标准品：Sigma公司，纯度≥97.0%，配成0.1 mg/mL的乙腈工作液，-20 ℃保存；DeepDON标准品：Sigma公司，50 μg/mL乙腈溶液，-20 ℃保存；乙腈、甲醇：色谱纯，美国Fisher公司；乙腈：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；纯净水：杭州娃哈哈食品有限公司。
配制磷酸盐缓冲液[18](0.15 mol/L，pH6.4的PBS)：PBS缓冲液中加入0.0125%的微量元素溶液(0.66 g CaCl 2·2H 2O，0.5 g MnCl 2·4H 2O，0.05 g CoCl 2·6H 2O，0.4 g FeCl 3·6H 2O)和11.11%的Na 2S 溶液(2.88 g Na 2S加入到500 mL 0.037 mol/L的NaOH 中)，121 ℃灭菌15 min待用。
1.2 仪器Waters2695高效液相色谱系统、Waters2478紫外检测器、Waters-Empower色谱数据处理软件：美国Waters公司；氮气吹扫仪：杭州奥威仪器有限公司；DGG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱：上海森信实验仪器有限公司；SKY-1102c型全温度恒温摇床：上海苏坤实业有限公司；3K15型离心机：德国Sigma公司；Genius3涡旋混合器：德国IKA公司；Bond Elut Mycotoxin多功能净化柱：安捷伦公司；DONStar TM R免疫亲和柱：Romer公司。
1.3 肠道内容物稀释液的制备新鲜猪盲肠取自北京第五肉联厂，猪宰杀后用棉线扎紧盲肠一端，马上割取盲肠，放入厌氧培养罐，以保证处在厌氧环境中。
每个盲肠的内容物按一定体积比加入PBS缓冲液，过滤混合液，待用。
等体积的滤液灭菌后作为基质对照。
1.4 样品制备与净化实验在充满CO 2的Sekuroka R 厌氧袋中进行，以保证与氧气完全隔离，模拟盲肠内环境，DON 标准品与盲肠内容物滤液在样品管中混合。
按照16:84的比例加入乙腈，振荡提取30 min，10000 r/min离心10 min，经净化处理后，1.5 mL流动相复溶，10000 r/min离心5 min，HPLC检测。
不同净化处理方法：(1)吸附剂净化：滤液按10 mL :1 g的比例，加入不同配比的木炭、氧化铝、硅藻土混合物，振荡30 min，过滤，滤液旋转蒸发浓缩。
(2)多功能净化柱净化：旋转蒸发浓缩，乙腈/水(84:16)复溶，定容至50 mL，取6 mL 过多功能净化柱，净化液于氮吹管中，40 ℃条件下氮气流吹干。
(3)免疫亲和柱净化：旋转蒸发浓缩，乙腈/水(84:16)复溶，定容至50 mL，4 mL滤液过Romer免疫亲和柱，10 mL PBS清洗后，6 mL甲醇洗脱于氮吹管中，氮气吹干。
1.5 液相色谱条件设置Waters2695高效液相色谱系统(Waters2478紫外检测器)；C 18色谱柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈/甲醇/水(5/5/90，v/v/v)；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；紫外检测波长：220 nm。
2 结果与分析2.1 DON及DeepDON净化方法的选择由于肠道内容物基质复杂，样品检测时毒素的提取净化方法非常重要，如果净化不好，杂质过多，影响检测结果，如果净化处理步骤过多，会造成回收率过低。
有关DON毒素的净化方· 289 ·2012年 第37卷 第10期法目前报道较多的为吸附剂、Mycosep 多功能净化柱、Bond Elut Mycotoxin多功能净化柱和免疫亲和柱等。
本研究比较了多种净化处理方法，吸附剂净化成本较低，但操作较繁琐耗时；使用净化柱简便快捷，但成本较高。
Vega等[19]比较了MycoSep TM 225和Bond Elut Mycotoxin 2种多功能净化柱，两者结果没有显著性差异。
本研究选用Bond Elut Mycotoxin净化柱，但实验发现经一次净化柱处理后，检测时杂质干扰严重，因而选择连续过2次净化柱。
回收率实验结果(表1)显示对于DON，在加标量为10 μg的条件下，采用吸附剂：木炭粉末+氧化铝+硅藻土(7+5+3，w+w+w)回收率为75.0%，经Bond Elut Mycotoxin多功能净化柱+免疫亲和柱处理，回收率为69.0%。
由于DON免疫亲和柱为专一性净化柱，对DeepDON的回收率很低，仅为8.7%，因而不可用于DeepDON的净化，采用吸附剂：木炭颗粒+氧化铝+硅藻土(7+5+3，w+w+w)和2次Bond Elut Mycotoxin多功能净化柱处理，对DeepDON的回收率分别达到94.3%和90.2%。
因而对DON选择吸附剂净化处理：木炭粉末+氧化铝+硅藻土(7+5+3，w+w+w)，对DeepDON的净化选择过2次Bond Elut Mycotoxin多功能净化柱。