游离锌离子形态学检测方法探究

游离锌离子形态学检测方法探究【摘要】目的:使用ivZnSAMG、ZnSeAMG、iZnSAMG、TSQ荧光、Zinquin荧光对海马苔藓游离锌离子进行染色和比较。方法: ivZnSAMG：采用Na2S溶液灌流的锌离子结合方式；ZnSeAMG：采用事先注射硒酸钠的体内锌离子结合方式；iZnSAMG：采用取动物新鲜组织浸泡在浸染液中的锌离子结合方式；以上三种方法处理后均采用相同的AMG孵育显色。TSQ、Zinquin荧光 :均为新鲜组织取材，液氮处理后荧光下观察。结果：在小鼠海马，所有染色方法均能标记出苔藓纤维的染色，各种染色在苔藓纤维标记有细节上的差异。所有染色方法中特异性最高的是ZnSeAMG；但其敏感性相对较差。而ivZnSAMG的敏感性最高，而其特异性则相对较差。结论：本实验中使用的游离锌离子染色方法都能成功的对游离锌离子进行标记，而这些染色方法的特异性和敏感性各有不同，对染色细节的雕琢能力也各有不同，因此可以根据这些方法的各自特点在实验选取适合的方法。

【关键词】游离锌离子；N(6methoxy8quinolyl)

p toluene sulfonamide (TSQ)荧光技术；金属自显影；Zinquin 荧光技术；苔藓纤维

ＡｂｓｔｒａｃｔObjective:To compare the difference dying results of the free zinc in the hippocampus mossy fiber between the different methods such as Na2SAMG、ZnSeAMG、iZnSAMG、TSQ

fluorescence and Zinquin fluorescence. Method: Na2SAMG：zinc was combined with sodium sulphide perfusion; ZnSeAMG：zinc was combined with injection sodium selenite in advanced；iZnSAMG：the animal's fresh tissue immersed in the Timm's immersion fluid. Aboved three methods were followed by the same AMG method. TSQ、Zinquin fluorescence :the animal's fresh tissues were observed under the fluoresence microscope after the frozen in the liquid nitrogen. Results: In the hippocampus of the mice, the mossy fiber could be stained by all of the aboved methods. However there were some differences between them in details. Among all of the methods mentioned above, the ZnSeAMG method had the most specificity and the lowest sensibility but the ivZnSAMG method on the contrary properly. Conclusion:All of the above methods could catch the zinc, but the specificity and sensibility are different respectively. Therefore these different methods are used in the different experiments with the different destination.

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ free zinc; N(6methoxy8 quinolyl)p toluene sulfonamide (TSQ) fluorescence; AMG (autometallography); Zinquin fluorescence; mossy fiber

目前，检测锌离子的手段很多，其中检测细胞内外游离锌离子的形态学手段主要有两种，即金属自显影术(autometallography, AMG)和；N(6methoxy8quinolyl)p toluene sulfonamide (TSQ)和Zinquin锌荧光探针技术。Timm创始了著名的硫化银染色法，该方法是将“物理显影”的知识转而应用到重金属组织化学上。“物理显影”是19世纪由一位摄影家发明的，并由Liesegang作为一种组织化学工具应用到组织学中，目的是使在银盐中暴光的组织中的银颗粒放大。自从Timm引入了“某些金属硫化物可以通过物理显影被银放大”的观念，许多科学家应用了这一方法，并试图改进这一技术，而且已经发现了新的可以被银放大的金属微晶。在20世纪80年代早期，Timm 的硫化银法是成功的锌特异性显示法［1］。同时，出现了硒技术，该技术可以在体内含锌神经元终末产生硒化锌和逆向轴突示踪含锌神经元［1-3］。由于人们对银放大过程的逐渐理解，在组织化学领域，'金属自显影术'逐渐替代了'物理显影'这一名词。AMG技术也演化出多种类型的2价金属离子追踪技术［4］。但无论AMG技术如何演化，其根本原理仍然是使用银颗粒对2价离子化合物进行包裹，并对2价金属离子信号进行放大进而进行观测。本实验采的硫化钠技术、硒技术就是从上述AMG方法中演化而来［4］。此前，我们曾应用AMG技术报道了锌离子在脉络丛、视网膜、脊髓、小脑等部位的分布情况［5-9］。海马是神经系统内含锌最多的通路之一［4］，因此本实验采用海马做为锌离子染色的材料。