叶绿素的测定

叶绿素的测定

实验原理：

紫外-可见吸收光谱是由于价电子的跃迁而产生的，是研究物质电子光谱的分析方法。这种方法可以对物质进行定性分析及结构分析，可以测定一此物理化学常数，如分子质量、络合物的化学式和电离常数等;还可以进行定量分析，如测定血清中磷、镁等微量元素的含量，测定多种维生素的含量和进行药物分析。

主要仪器及试剂：

紫外-可见分光光度计，石英比色皿抽滤装置，滤膜，具塞玻璃离心管，水浴锅，离心机:转速3000 ~ 4000 r/min

碳酸镁悬浊液:ω(MgCO3)= 1%,1.0 gMgCO3100 mL纯水

丙酮溶液:ψ(C3H6O)= 90%,900 mL丙酮加100 mL纯水

盐酸溶液:c(HCl)=0.1 mol/L。8.5 mL浓盐酸加入500 mL纯水,冷却后稀释至1000 mL。

实验步骤

将一定量水样用玻璃纤维膜过滤,收集藻类,使用反复冻融法对藻类细胞进行破碎,用90%丙酮溶液提取叶绿素,根据叶绿素光谱依次测定750 nm、664 nm、647 nm、630 nm波长下的吸光度,计算叶绿素含量。

注意：所有玻璃仪器应该清洗干净,尤其避免酸性条件下引起的叶绿素a的分解。

具体步骤：

1.滤膜过滤

每种测定水样取300 mL ,加入0.6 mLMgCO3悬浊液,用滤膜过

滤。提取

将滤膜转移至具塞试管,加少量碳酸镁粉末和10 mL 已水浴加热至50℃的90%丙酮溶液。塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物,充分震荡,避光提取4 h 。

2.离心

提取完毕后,离心管置于离心机上4000 r/min 离心20 min ,取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管中,塞紧塞

子,4000 r/min 再离心10 min 。记录提取液的体积。

3.测定吸光度

移入3cm比色皿中,以90%的丙酮溶液做为空白,分别在665 nm 、649 nm波长处测定吸光值。

实验结果计算：

将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95（A665）－6.88

（A649）；Cb=24.96（A649）－7.32（A665）。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。