农残样品色素的去除

由于酸性农药（如2,4-D、灭草松等）会和氨基型吸附剂（如NH2、PSA）等发生结合而导致回收率降低，因此，对于分析含有这类目标化合物时，最好的分析方法是跳过d-SPE直接进LC-MS/MS进行ESI-分析。可采用Nicarbazin（尼卡巴嗪）作为内标。

2.5 d-SPE引入GCB（石墨化碳黑）的作用

2.5.1 色素存在对结果的影响

GCB是将炭黑在惰性气氛下加热到2700℃-3000 ℃而制成。石墨化碳黑表面是由六个碳原子构成的平面六角形。多用于农残样品中色素的去除。起初活性炭被广泛用于色素的去除，但是活性炭由于吸附性太强（不可逆吸附），导致很多农药回收率偏低。近年来，活性炭已经使用的很少，慢慢的被石墨化碳黑所取代。

由于石墨化碳对于片状化合物的特殊选择性，使用石墨化碳黑时可能也导致片状农药（百菌清、克菌丹等）的回收率降低，可以考虑通过在萃取液中加入甲苯来提高该类农药的回收率（乙腈甲苯比率一般为3：1）。

小提示：

Anthracene（蒽）与石墨化碳黑之间会形成非常强的吸附，可用来验证石墨化碳黑对平面农药的吸附程度，如果蒽的回收率在70%以上，说明平面型农药没有明显损失。

同时，可以通过萃取液的颜色来判定石墨化碳黑是否造成平面型农药的损失。经验显示，如果萃取液呈淡黄色时，即说明平面型农药的损失不明显。

2.5 d-SPE引入C18E的作用

一些样品中（如鳄梨、花生、橄榄油等）含有较多的脂肪，由于脂肪在乙腈中的溶解度有限，所以会导致部分脂溶性好的农药（如HCB、DDT等）的回收降低。如何克服脂肪造成的实验结果偏低，可以通过下面两个步骤去除样品中的脂肪。

2.5.1 冷冻除脂：将萃取液或净化后样品放入冰箱冷冻1h以上（或冷冻过夜）。

2.5.2 反相吸附剂吸附去除：在萃取液中加入C18E或C8吸附剂，吸附去除脂肪。

小提示：

如果目标分析物中含有非极性非常强的农药（如HCB、DDT等）农药时，脂肪的存在会导致内标TPP和这类农药的提取效率上的差异，这类农药由于损失的更多而导致结果偏低。对于这种现象，可以通过将内标延迟到分析前内标的方式来避免；同时，可以加入质控内标（PCB138或PCB153，Kow分别为6.83和7.75）验证整个处理过程中这类农药的损失，如果质控内标回收率在70%以上的，则说明该类农药无明显损失。

2.7 为什么选用乙腈作为萃取溶剂

2.7.1 常用提取溶剂优缺点

2.7.2 提取液的干净程度

2.7．3 回收率参数

在回收率方面，对于非极性农药来说，乙腈与乙酸乙酯没有明显的区别，但是乙腈可以提供更稳定的结果（RSD更小）；对于极性农药（拒嗪酮、甲胺磷、乙酰甲胺磷等）来说，乙腈的提取效率要高很多。

三、Welchrom® QuEChERS产品选择指南

3.1 萃取盐析包选择指南

3.1.1 Welchrom® QuEChERS萃取盐析包产品目录

3.1.2 不同萃取盐析方法比较

结论：

实验数据显示，采用经典QuEChERS方法时，对于酸或碱敏感的农药的萃取效率通常很低，当样品的基质环境在pH值（5-5.5），这类农药可以获得一个更稳定的结果。因此，在AOAC和EN方法中，分别采用了乙酸钠和柠檬酸缓冲盐体系来保证样品基质环境的pH值（5-5.5），这样既可以保证碱不稳定的农药（如克菌丹、灭菌丹和对甲抑菌灵等）的回收，也可以保证酸不稳定的农药（如拒嗪酮、二氧威等）的回收。

对于一些基质非常酸的样品（pH <3），即使采用缓冲体系萃取盐时，整个样品的pH仍然低于5，这时可以加入5N的NaOH溶液来改善萃取效果。

柠檬、黑加仑等样品，加入600 μL的5N NaOH溶液

●木莓、山莓等，加入200 μL的5N NaOH溶液

结论2

●相比较于缓冲体系，非缓冲体系可以提供一个更干净的萃取液；

●采用非缓冲体系会导致百菌清等碱性敏感的农药没有一个稳定的回收；

3.2 d-SPE净化管选择指南

3.2.1 d-SPE净化管产品目录

3.2.2 根据样品类型推荐使用的d-SPE净化产品

五、 QuEChERS方法应用的扩展

虽然QuEChERS刚开始时是针对水果、蔬菜中多农残提取的一个方法，但是现在它已经在越来越多的基质（谷物、香料）得到应用，同时，它已被采用在越来越多领域（比如，兽

药 vet drugs，多环芳烃PAHs与抗生素）检测越来越多的不同样品（比如血浆、肉、土壤）。

六、Welchrom® QuEChERS应用实例

Welchrom® QuEChERS方法检测苹果中多农药残留

三仪器条件

四结果

5、这个QueChers产品应该多年前就已经在国外流行了，国内这块展开的工作比较少，不知道安经理能不能给我们大概对比一下用常规SPE和用Quechers产品，每个样品用的成本列一下，毛估估就行了。

答：关于这两个方法成本比较很难，受具体的检测项目、样品是否需要浓缩、您是否使用QuEChERS成品等因素影响。有一个统计数据应该能说明这一个问题，在欧洲2009年的130～150个参加的实验室中有接近有40％是使用QuEChERS方法的检测农药残留。对于私人实验室，由于他们更加考虑成本，QuEChERS的采用率会高至接近70％。QuEChERS 方法带来的样品高通量和有机溶剂的节省也是该方法在国外实验室广泛受关注的原因。Lethony 曾在欧洲做过一个统计，传统的净化方法一个样品大约需要500mL的有机溶剂（Luke方法），而QuEChERS方法只需要10mL或15mL。

、在国内还比较少听说，请问国内有哪些单位在用这个方法？哪些单位比较有可能在未来先开始使用？还有，在国内推广这个技术可能会遇到哪些困难？

答：从目前了解的情况来看，目前国内的部分第三方检测机构、一些质监和疾控在使用该方法，因为QuEChERS方法的突出优势是快速、简单和廉价，这些优势也是这些单位最看重的。其中还有很多的单位购买了我们公司的填料在采用该方法。

10、中华人民共和国农业行业标准NY/T1380-2007，我们实验室有使用过这个方法检测农残，方法与QuEChERS 大致相同，但是实际中样品处理出现了很多问题，回收率，基质效益，色素高，粘稠~~（主要做的是植物提取物的干粉），还希望老师能详细讲解样品处理方面的问题，谢谢。

答：中华人民共和国农业行业标准NY/T 1380-2007中在净化步骤中仅仅使用了PSA和C18E两种填料，PSA有一定的去除色素能力，但是非常的弱，C18E没有去除色素能力，所以对于一些色素含量高的样品，如青椒、青蒜或菠菜等，最终样品萃取液中肯定会非常高，萃取液可能都是墨绿色的，对于这些样品可以加入适量的石墨化碳黑，石墨花坛对于色素的去除能力是目前所有填料中最好的。对于干性样品，不知道您在处理前是否加入适量的水浸泡，加水浸泡一是可以提高部分农药的回收率；二是也可以提高净化效果，降低基质效应。

13、我以前曾使用活性炭去除色素，如文章所言，样品确实有较大损失。因为我在平常的实验中，经常要跟色素打交道（一般是除去色素），看到文章所提到的石墨化炭黑对于样品的死吸附较少（平面型除外），让不自觉地想到，我是不是可以用它作为填料制成柱子或者SPE小柱什么的除去色素？它对水溶性和脂溶性色素“一视同仁”还是有选择性？谢谢

答：月旭公司可以提供石墨化碳黑SPE柱的成品的。

14、这种前处理装置，能否用于果实类和鲜品中药材中农残的测定？

答：药材中农药残留我确实没有做过，药材成分很复杂，净化效果可能会相比较与普通的水果或蔬菜差一点。但是也有报道用于茶叶中的，茶叶也是非常复杂的基质，同时考虑质谱检测器的高选择性，您可以试试，哈哈。

25、还有，这个方法现在进入国标了没有啊？因为国标都有自己的前处理方法，前处理是最最麻烦的了，如果能快速，高效，那实在太好了，能进入国标吗？？？因为现在的检测方法都按照国标进行的。

答：你好，目前QuEChERS这个方法还没有进入国标，但是NY/T 1380-2007方法和QuEChERS方法非常相似，大家可以参考一下。

26、文章中提到的“冷冻除脂：将萃取液或净化后样品放入冰箱冷冻1h以上（或冷冻过夜）”，是指脂肪会析出来？或者形成油滴一类的？用C18来除脂这个很好理解很靠谱，用这个方法感觉是不是粗了一点？

答：一般脂肪在零下8摄氏度会凝固析出，可以通过冷冻离心或过滤的方法去除，这个方法我以前也用过，除脂效果挺好的，就是麻烦了点。

29、文章中的“冷冻除脂：将萃取液或净化后样品放入冰箱冷冻1h以上（或冷冻过夜）”，冷冻时间大于1小时？这种方法感觉上有点粗,冷冻1h和冷冻过夜作出的结果没有区别么?应该具体规定冷冻的温度,时间和有可能影响的因素!!

答：一般脂肪在冷冻条件（零下18摄氏度）下，1h就可以使得其析出。冷冻过夜是考虑放到冰箱后，第二天直接处理，可以省去我们等待的时间。

33、在上面看到您对部分问题的解答,其中对于色素去除剂——石墨化碳黑比较感兴趣，想提几个问题。

石墨化碳黑是粉末状还是颗粒状?在样品前处理时(尤其是去除色素),哪种类型的效果更好? 答：目前我们使用的石墨化碳是细小的颗粒物，颗粒度在120-400mesh之间（看起来也是粉状的，呵呵呵）。在前处理时，如果采用基质分散固相萃取的话，颗粒细点效果应该会