猫泛白细胞减少症、杯状、疱疹、冠状病毒、血巴尔通体PCR检测方法
猫细小病毒 PCR 检测方法
猫细小病毒PCR检测方法1 范围本标准规定了猫细小病毒PCR（polymerase chain reaction）的实验条件、操作步骤、结果判定。
本标准适用于猫细小病毒（猫泛白细胞减少症病毒）的检测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1猫细小病毒 Feline panleukopenia virus，FPLV属细小病毒科，细小病毒亚科，牛犬细小病毒属成员，又称猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性胃肠炎病毒或猫瘟病毒。
4 实验条件4.1 试剂4.1.1 要求除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化试剂，水为符合GB/T 6682要求的灭菌双蒸水或超纯水。
4.1.2 试剂4.1.2.1 核糖核酸酶（20mg/mL）。
4.1.2.2 10%十二烷基磺酸钠溶液。
4.1.2.3 10mg/mL蛋白酶K。
4.1.2.4 Tris-盐酸饱和酚（pH7.6）。
4.1.2.5 酚-氯仿-异戊醇混合液（25：24：1）：在一灭菌棕色瓶中按25：24：1比例分别加入酚、氯仿、异戊醇。
4.1.2.6 3mol/L乙酸钠（pH5.4）。
4.1.2.7 琼脂糖。
4.1.2.8 10μg/μL溴化乙锭（ethidium bromide， EB）：溴化乙锭20mg、加灭菌双蒸水至20mL 充分溶解混匀而成。
4.1.2.9 50×TAE缓冲液：羟基甲基氨基甲烷（Tris）242g、冰乙酸 57.1mL、0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（pH8.0）100mL，加灭菌双蒸水至1000mL充分混匀。
4.1.2.10 加样缓冲液：聚蔗糖25g、溴酚蓝0.1g、二甲苯青0.1g，加灭菌双蒸水至100mL充分溶解混匀而成。
猫泛白细胞减少症病毒VP2基因快速检测方法的建立与应用
猫泛白细胞减少症病毒VP2基因快速检测方法的建立与应用邱杰;温肖会;翟少伦;吕殿红;宁章勇;魏文康【摘要】为了调查猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)在猫群中的流行情况,根据GenBank已登录的FPVVP2基因序列设计PCR引物,建立了FPV PCR快速检测方法,并对3004份猫样品进行了检测.结果显示,该方法扩增的VP2基因片段为468 bp左右,检出的最小基因组DNA浓度为6.19× 10-8 μg/μL,检出DNA浓度低于1fg/μL,从3004份样品中检测出13份猫泛白细胞减少症病毒核酸阳性样品.本研究针对FPV VP2基因建立的PCR快速检测方法可作为FPV临床早期诊断及快速筛查手段.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2015(023)002【总页数】5页(P21-25)【关键词】猫泛白细胞减少症病毒;VP2基因;PCR【作者】邱杰;温肖会;翟少伦;吕殿红;宁章勇;魏文康【作者单位】华南农业大学兽医学院,广州510642;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640;华南农业大学兽医学院,广州510642;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2猫泛白细胞减少症（feline panleukopenia，FP）也称猫瘟热、猫细小病毒病，是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline panleukopenia virus，FPV）引起的一种高度接触性急性传染病。
该病在自然条件下可感染猫科、浣熊科和鼬科等家猫、野猫及野生动物包括动物园国家保护动物（如虎、狮、豹、浣熊等），感染比较普遍[1]；传播性极强，感染动物可通过粪便、呕吐物、鼻涕、唾液、尿液排出病毒从而污染食具、笼子、垫物和周围环境，妊娠母猫也可垂直传播给胎儿，跳蚤和吸血昆虫可成为传播媒介；致病性极强，妊娠母猫胎儿畸形胎甚至流产，死亡率高且无任何前驱症状[2]。
猫泛白细胞减少症、杯状、疱疹、冠状病毒、血巴尔通体PCR检测方法
10报告根据检测结果，出具报告。
附录A（规范性附录）猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1型病毒的多重PCR检测采用PCR方法，特异性扩增猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫1型疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列，用于猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1型病毒的多重检测。
A.1RNA和DNA的提取按照试剂盒说明书分别提取病毒RNA和DNA。
将RNA反转录为cDNA。
将提取的DNA和反转得到的cDNA于-20℃保存、备用。
A.2PCR反应以FCV的cDNA和FPV、FHV-I的DNA混合物作为多重PCR的模板进行PCR扩增，扩增引物见表1，PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，30个循环；72℃10min。
表A.1多重PCR引物序列Primers Sequences(5'-3')LengthFPV ATGGTTGGTGACTCTTTGTTT392bpTACATTTGATTGACACTTCCCFCV AACCTGCGCTAACGTGCTT922bpCAGTGACAATACACCCAGAAFHV-I GACGTGGTGAATTATCAG290bpCAACTAGATTTCCACCAGGA.3PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
附录B（规范性附录）猫冠状病毒RT-PCR检测方法采用RT-PCR方法，特异性扩增猫冠状病毒ORF1b基因片段，用于猫冠状病毒的检测。
B.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。
B.2PCR反应引物上游引物序列（5’-3’）：GTGATGCTATCATGACTAG下游引物序列（5’-3’）：CACCATTACAACCTTCTAAB.3PCR反应条件95℃预变性2min；95℃变性30s，48℃退火35s，72℃延伸45s，30个循环；72℃延伸5min。
用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒[发明专利]
![用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a8affd3e78563c1ec5da50e2524de518964bd319.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010844841.6(22)申请日 2020.08.20(71)申请人 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所地址 100091 北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人 梁瑞英 梁琳 崔尚金 翟志安 赵静杰 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人 黄爽(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01)(54)发明名称用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒(57)摘要本发明提供一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒。
所述试剂盒中包含扩增目的基因VP2的引物对(SEQ ID NO:1‑2)以及检测目的基因的Taqman探针(SEQ IDNO:3)。
本发明还提供猫泛白细胞减少症病毒的实时荧光定量PCR检测方法，该方法能够快速、灵敏地检测出猫泛白细胞减少症病毒，提高了检测结果的准确性，对于临床样品的快速诊断具有重要意义。
权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图2页CN 111961756 A 2020.11.20C N 111961756A1.猫泛白细胞减少症病毒检测引物，其特征在于，包括序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO:2所示的反向引物。
2.与权利要求1所述引物配套使用的探针，其特征在于，探针序列如SEQ ID NO:3所示，探针序列的5′端具有荧光基团，3′端具有淬灭基团。
3.含有权利要求1所述引物和/或权利要求2所述探针的检测试剂或试剂盒。
4.猫泛白细胞减少症病毒检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物和权利要求2所述探针。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、DNA聚合酶、可溶性镁盐、PCR反应缓冲液、阳性标准质粒中的至少一种。
同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立
同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立王翀;刘大飞;刘春国;柴洪亮;张洪英;程景;吕健;华育平;曲连东【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2014(036)001【摘要】为建立检测多种猫科病毒的多重PCR方法,本研究参照GenBank中登录的猫细小病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫疱疹病毒(FHV-Ⅰ)的TK基因序列设计合成3对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了可以同时扩增FPV (392 bp)、FCV (922 bp)和FHV-Ⅰ (290 bp)的多重PCR方法.该检测方法结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测出以上3种病毒,FPV、FCV和FHV的最低检出限分别为1015 TCID50、101.9 TCID50和101.2 TCID50.以该方法对黑龙江省各地区收集的120份血清进行检测,其中FPV、FCV和FHV-Ⅰ的阳性率分别为5％(6/120)、2.5 ％(3/120)和4.1％(5/120),证明该方法可以用于3种病毒的检测,具有良好的特异性和敏感性.【总页数】3页(P31-33)【作者】王翀;刘大飞;刘春国;柴洪亮;张洪英;程景;吕健;华育平;曲连东【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;黑龙江省农产品质量检验检测中心,黑龙江哈尔滨150090;国家知识产权局专利审查协作北京中心,北京100193;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立 [J], 岳丰雄;崔尚金;冉多良;戚亭;周盛华2.同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立 [J], 刘大飞;马旭青;刘大程;华育平;曲连东;张洪英;姜一曈;杨天阔;林欢;刘春国;柴洪亮;王翀;崔英玲;姜晓飞3.同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立[J], 刘大飞;华育平;曲连东;张洪英;姜一曈;戚亭;程景;刘立奎;林文君;柴洪亮;杨天阔;王翀4.山东部分地区猫细小病毒、疱疹病毒、杯状病毒流行情况调查 [J], 曲雪婷;王森;原昆鹏;崔月瑛;齐昊南;孙强;张本清;陶春霖;尹燕博5.同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪细环病病毒1型和2型的多重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立[J], Pérez L J;刘丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
X1-2019猫杯状病毒与猫疱疹病毒双重巢氏RT-PCR检测方法
1.X1-2019猫杯状病毒与猫疱疹病毒双重巢氏RT-PCR检测方法
2.X2-2019鸭坦布苏病毒血凝抑制抗体检测方法
3.X3-2019羊传染性脓疱病毒微滴数字PCR检测方法
4.X5-2019基于新城疫病毒V蛋白鉴别感染与免疫的间接ELISA方
法
5.X7-2019塞内卡病毒荧光RT-PCR检测方法
6.X8-2019猪圆环病毒3型荧光PCR检测方法
7.X9-2019布鲁氏菌荧光PCR检测方法.
8.X12-2019动物源性细菌药物敏感性试验肉汤稀释法执行标准
9.X16-2019布鲁氏菌病抗体荧光免疫分析法
10.X20-2019猪伪狂犬病毒抗体荧光免疫层析检测法
11.X22-2019猪圆环病毒2型抗体荧光免疫层析检测法
12.X24-2019口蹄疫病毒O、A和Asia1型分型荧光RT-PCR检测方法。
猫杯状病毒纳米PCR检测方法的建立
Abstract： In order to improve feline calicivirus (FCV) detection efficiency,a pair of specific primers for FCV detection were designed based on the conserved region of the reference FCV genome se quences from GenBank with Primer Premier 5. 0. The nano-PCR assay was established for FCV detection. The results showed that the nan〇-PCR assay had good specificity with no cross reaction with other common feline disease viruses. The lowest detectable limit of the assay,which was 10 times higher than that of conventional PCR,was 5.4X 10-3 pg//^L of the standard template,suggesting that the assay was with good sensitiveness. The sensitivity test was repeated 3 times with good repeatability. In conclusion,the established FCV nano PCR method had the advantages of good specificity, sensitivity and repeatability, which can be used as a powerful technical method for laboratory diagnosis of FCV infection.
pcr检测猫咪操作流程
pcr检测猫咪操作流程
PCR（聚合酶链式反应）是一种用于检测DNA的技术，可以在短时间内扩增目标DNA片段，是一种非常常用的分子生物学技术。
在兽医领域，PCR技术也被广泛应用于疾病的诊断和研究，其中包括对猫咪的检测。
PCR检测猫咪的操作流程一般包括以下几个步骤：
1. 样本采集：首先需要采集猫咪的样本，可以是口腔拭子、血液、尿液等。
在采集样本时要注意避免污染，保证样本的纯净性。
2. DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，可以使用商业提取试剂盒或自制提取试剂进行提取。
提取的DNA应该是高质量的，避免有降解或污染。
3. PCR反应设置：根据需要检测的目标基因设计引物，设置PCR反应体系，包括引物、DNA模板、酶和缓冲液等。
确保反应体系的配比准确，避免引物浓度过高或过低。
4. PCR扩增：将反应体系放入PCR仪中进行扩增，根据引物的特性和目标基因的大小设置PCR程序。
通常包括变性、退火和延伸等步骤，确保扩增的效果。
5. PCR产物检测：扩增结束后，可以通过琼脂糖凝胶电泳或实
时荧光PCR等方法检测PCR产物，确认是否成功扩增目标基因。
6. 结果分析：根据PCR产物的大小和数量，可以判断猫咪是否携带目标基因或疾病。
对结果进行分析和解读，为后续的诊断和治疗提供参考。
总的来说，PCR检测猫咪的操作流程相对简单，但需要严格控制每个步骤的条件和质量，确保结果的准确性和可靠性。
通过PCR 技术，可以快速、准确地检测猫咪的基因信息，为兽医诊断和治疗提供重要参考。
猫泛白细胞减少症传染-猫咪猫泛白细胞减少症的病因及防治
猫泛白细胞减少症传染-猫咪猫泛白细胞减少症的病因及防治猫咪猫泛白细胞减少症的病因及防治猫泛白细胞减少症猫泛白细胞减少症又称猫瘟热或猫传染性肠炎。
是由猫瘟热病毒引起的菹及猫科动物的_种急性高度接触性的病毒性传染病。
可发生于猫类、浣熊类和貂类身上,它是猫咪最重要的传染病。
(1)病原。
猫泛白细胞减少症病毒属于细小病毒科、细小病毒属,是一种单股DNA病毒,该病毒对酸、碱、、氯仿、高温有-定的耐授受力。
的甲醛和次氯酸能有效地将其杀灭。
它在环境中非常稳定,在室温下可生存好几年。
猫泛白细胞减少症病毒只有一个血清型,所以使用疫苗可以获得长期有效的免疫力(2)流行病学。
本病冬末至春李多发,各种年龄的猫咪均可感染,病猫和病愈后的带毒猫是本病的传染源。
猫感染猫泛白细胞减少症病毒早期,病毒就可随粪、尿、唾液和呕吐物排出体外。
在急性期蚤类和各种吸血昆虫也能传播病毒。
在康复一年的猫咪的排泄物中有的仍能化验到病毒。
在自然情况下,本病主要通过直接接触或消化道传染。
多数情况下1岁以下的幼猫较易感。
尤其对于未注射疫苗的小猫咪来说,猫泛白细胞减少症通常是致命的。
猫泛白细胞减少症病毒还可由猫妈妈传染给它的子官里正在发育着的小猫。
(3)症状。
根据临床症状可分为三个类型,最急性型、急性型和亚急性型最急性型和急性型猫咪常突然死亡,无明显症状。
而亚急性型症状较典型,许多成年猫感染猫泛白细胞减少症病毒后开始并不表现出任何症状。
严重脱水使猫的体温低于正常值,变得十分虚弱甚至整日昏睡。
感染了猫泛白细胞减少症病毒的猫非常容易受到继发细菌的感染。
猫泛白细胞减少症和自身的抵抗力有关,特别是在营养不良,体弱及绝育手术后易感。
怀孕母猫如果感染猫泛白细胞减少症病毒则可能引起流产或产下死胎。
妊娠母猫是通过胎盘垂直传播给胎儿的。
出生前感染病毒的小猫,由于小脑损伤会出现步态不稳,不协调并且伴随着颤抖。
(4)病理变化。
主要病变为小肠黏膜水肿、回肠有明显的出血性肠炎,肠系膜淋巴结出血肿胀。
河南省商丘市猫泛白细胞减少症的病原PCR检测及VP2基因序列分析
河南省商丘市猫泛白细胞减少症的病原PCR检测及VP2基因序列分析麻冰洁;刘容序;李治利;李梦丹;秦清明【期刊名称】《现代畜牧科技》【年(卷),期】2024()6【摘要】猫泛白细胞减少症(FP)是由猫细小病毒(FPV)引起的一种急性高度接触性传染病,为了解商丘市FPV的遗传变异情况,从该市2家宠物医院采集18份疑似FPV样品,通过DNA提取及PCR特异性检测提取出14份阳性样品,对该14份阳性样品进行细小病毒结构蛋白2(VP2)基因进行PCR扩增,测序和遗传进化分析。
结果表明,该14份阳性样品中有12个毒株与中国FPV(G1)MF541135毒株关系亲密,其同源性均与参考株FPV(G1)MF541135的同源性最高,该12份阳性样品均属于G1型;另外2个毒株FPV-SQ-09、FPV-SQ-12与参考株CPV(MW182708)关系亲密,且同源性较高。
遗传进化树显示,FPV G1型均来源于中国,研究的大部分阳性样品VP2基因有亚洲起源的特征。
该文为研究FPV在商丘地区的传播和宠物疫病防控提供理论依据。
【总页数】5页(P82-86)【作者】麻冰洁;刘容序;李治利;李梦丹;秦清明【作者单位】信阳农林学院动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S858.293【相关文献】1.虎源猫泛白细胞减少症病毒VP1、VP2和NS1基因的克隆与序列分析2.传染性法氏囊病病毒 RT-PCR 检测及 VP2基因序列分析3.猫泛白细胞减少症病毒VP2基因快速检测方法的建立与应用4.北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析5.辽宁沈阳株猫泛白细胞减少症病毒VP2基因扩增及生物信息学分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用
猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用郭嘉宁;郭金凡;周华波;曾昊;余良政;刘林林;陈建材;龙剑明;欧阳康;韦祖樟;黄伟坚;陈樱【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2022(54)6【摘要】为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus,FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。
通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。
结果显示:能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。
用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。
结果表明:研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为早期治疗提供了有力的检测工具。
【总页数】6页(P113-118)【作者】郭嘉宁;郭金凡;周华波;曾昊;余良政;刘林林;陈建材;龙剑明;欧阳康;韦祖樟;黄伟坚;陈樱【作者单位】广西大学动物科技学院;南宁市华波宠物医院;广西南宁神九生物制品有限责任公司【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.猫杯状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用2.同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立3.山东部分地区猫细小病毒、疱疹病毒、杯状病毒流行情况调查4.猫冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立5.上海市宠物猫杯状病毒、疱疹病毒及流感病毒的分离与鉴定因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猫疱疹病毒和猫泛白细胞减少症病毒混合感染的诊断
猫疱疹病毒和猫泛白细胞减少症病毒混合感染的诊断李浩运;吕艳丽;解启宝【摘要】猫细小病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒是小动物临床诊疗中较为常见的传染性病毒,多发于幼龄动物,在多猫环境中极易出现交叉感染.论文所述为8只成年猫组成的多猫家庭,其中1只猫因尿闭,于医院输液1周后出现打喷嚏、流鼻涕等呼吸道症状,回家后次日其余7只猫均出现类似症状.之后,病情进一步发展为高热、呕吐以致食欲废绝,在外院先后被诊断为猫传染性鼻支气管炎或猫杯状病毒感染,在1只猫出现死亡后来中国农业大学动物医院就诊.结合病史、临床症状及血常规、猫三联抗体、猫细小病毒荧光定量PCR等检查结果,最终确诊为猫疱疹病毒和猫瘟病毒混合感染.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】3页(P134-136)【关键词】猫瘟;猫杯状病毒;猫疱疹病毒【作者】李浩运;吕艳丽;解启宝【作者单位】中国农业大学动物医学院动物医院,北京 100193;中国农业大学动物医学院动物医院,北京 100193;中国牧工商(集团)总公司,北京 100070【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1;S858.2932017年6月初，中国农业大学动物医院(下称我院)接诊2只临床症状为打喷嚏、流鼻涕、流眼泪、流涎，且因食欲废绝而插鼻饲管饲喂的病猫，其中1只猫精神高度沉郁，呼吸急迫。
患猫在外院被诊断为鼻支气管炎或猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)感染，同群饲养的猫已经死亡2只，来我院就诊的当天又死亡1只。
综合病史、临床症状和实验室检查结果，最终确诊为猫疱疹病毒(Feline herpesvirus,FHV)和猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)混合感染。
1 既往病史猫主人共养8只猫，年龄在7岁～8岁，均未免疫疫苗。
1个月前(2017年5月1日)，其中1只名为黑黑的猫因尿闭到当地动物医院输液治疗，1周后(2017年5月7日)出现打喷嚏、流鼻涕等症状，次日家中另外7只猫均出现类似症状，去当地医院被诊断为鼻支气管炎，给予抗生素和干扰素治疗。
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10报告
根据检测结果，出具报告。
附录A
（规范性附录）
猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1型病毒的多重PCR检测
采用PCR方法，特异性扩增猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫1型疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列，用于猫泛白细胞减少症病毒、杯状病毒、疱疹1型病毒的多重检测。
A.1RNA和DNA的提取
按照试剂盒说明书分别提取病毒RNA和DNA。
将RNA反转录为cDNA。
将提取的DNA和反转得到的cDNA于-20℃保存、备用。
A.2PCR反应
以FCV的cDNA和FPV、FHV-I的DNA混合物作为多重PCR的模板进行PCR扩增，扩增引物见表1，PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，30个循环；72℃10min。
表A.1多重PCR引物序列
Primers Sequences(5'-3')Length
FPV ATGGTTGGTGACTCTTTGTTT392bp
TACATTTGATTGACACTTCCC
FCV AACCTGCGCTAACGTGCTT922bp
CAGTGACAATACACCCAGAA
FHV-I GACGTGGTGAATTATCAG290bp
CAACTAGATTTCCACCAGG
A.3PCR产物
1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
附录B
（规范性附录）
猫冠状病毒RT-PCR检测方法
采用RT-PCR方法，特异性扩增猫冠状病毒ORF1b基因片段，用于猫冠状病毒的检测。
B.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成
按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。
B.2PCR反应引物
上游引物序列（5’-3’）：GTGATGCTATCATGACTAG
下游引物序列（5’-3’）：CACCATTACAACCTTCTAA
B.3PCR反应条件
95℃预变性2min；95℃变性30s，48℃退火35s，72℃延伸45s，30个循环；72℃延伸5min。
B.4PCR产物
PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为417bp。
附录C
（规范性附录）
猫白血病病毒巢式RT-PCR检测方法
采用巢式RT-PCR方法，特异性扩增猫白血病病毒基因片段，用于猫白血病病毒的检测。
C.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成
按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。
C.2PCR反应引物
C.2.1第一次反应引物
上游引物序列（5’-3’）：ACAGCAGAAGTTTCAAGGCC
下游引物序列（5’-3’）：GACCAGTGATCAAGGGTGAG
C.2.2第二次反应引物
上游引物序列（5’-3’）：GCTCCCCAGTTGACCAGAGT
下游引物序列（5’-3’）：GCTTCGGTACCAAACCGAAA
C.3PCR反应
C.3.1第一次PCR反应
以制备的cDNA为模板，进行第一次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
C.3.2第二次PCR反应
以第一次PCR产物为模板，进行第二次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
C.4PCR产物
PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为601bp。
附录D
（规范性附录）
猫免疫缺陷病毒巢式RT-PCR检测方法
采用巢式RT-PCR方法，特异性扩增猫免疫缺陷病毒pol基因片段，用于猫免疫缺陷病毒的检测。
D.1病毒RNA的提取和cDNA第一链的合成
按照病毒RNA提取试剂盒操作方法进行RNA的提取，按照cDNA第一链合成试剂盒操作方法将RNA反转录为cDNA，得到的cDNA于-20℃保存、备用。
D.2PCR反应引物
D.2.1第一次反应引物
上游引物序列（5’-3’）：TGGCCWYTAWCWAATGAAAARATWGAAGC
下游引物序列（5’-3’）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC
D.2.2第二次反应引物
上游引物序列（5’-3’）：TGAAAARATWGAAGCHTTAACAGAMATAG
下游引物序列（5’-3’）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC
D.3PCR反应
D.3.1第一次PCR反应
以制备的cDNA为模板，进行第一次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
D.3.2第二次PCR反应
以第一次PCR产物为模板，进行第二次PCR反应，条件如下：95℃预变性2min；95℃变性45s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸7min。
D.4PCR产物
PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为578bp。
附录E
（规范性附录）
猫血巴尔通体PCR检测方法
采用PCR方法，特异性扩增猫血巴尔通体16S rDNA基因片段，用于猫血巴尔通体的检测。
E.1DNA的提取
按照DNA提取试剂盒操作方法进行，提取的DNA于-20℃保存、备用。
E.2PCR反应引物
上游引物序列（5’-3’）：TCACAATGGACGAAAGTCTG
下游引物序列（5’-3’）：CCAAACATCTCAAGACACGAG
E.3PCR反应
以提取的DNA为模板，进行PCR反应，条件如下：
95℃预变性2min；95℃变性15s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min。
E.4PCR产物
PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,目的片段大小为711bp。
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