总氮量的测定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
关闭冷凝水。 3.取干净的移液管吸NaOH和硼酸，用后分开放置，
不可混用。 4.控制微量滴定管的阀门，使HCL溶液逐滴加入，不
可太快。 5.加样前稍冷却凯Leabharlann Baidu定氮仪，否则样品易倒吸出来。
结果分析与讨论
（3）定容：消化完毕，待冷却后将凯氏烧
瓶上的漏斗插入干净的50mL容量瓶中把消 化液倒入，再分数次加蒸馏水洗涤烧瓶一 并倒入容量瓶中，第一次倒入水时要摇容 量瓶，避免容量瓶局部过热而破裂。并把 漏斗外面冷凝的硫酸也洗入容量瓶中，最 后定容（注意不要定容过量）。
2. 蒸馏：
（1）反应室的洗涤：
a.使蒸汽发生器中的水至排水口高度，将蒸馏 水从加样漏斗加入反应室至1/3-1/2高度.
关闭冷凝水，打开三个自由夹，稍冷却定氮仪， 用胖肚吸管取消化液 5ml ，从进样漏斗注入，
夹紧3个自由夹，加5mL的30% NaOH于漏斗中， 略开1缓慢流入，余少量,再加少量蒸馏水做水封。
先打开冷凝水（慢，以免逸出），再加热蒸馏。 当三角瓶内溶液由紫变绿时，计时，蒸馏3min，移 开三角瓶，使冷凝管口离开液面1cm，再蒸馏1min 后，用洗瓶冲洗冷凝口，取下锥形瓶。
CH2NH2COOH + 3H2SO4 → 2CO2 ↑+ 3SO2 ↑ + 4H2O + NH3
2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4
2.蒸馏：
浓碱可使消化液中的(NH4)2SO4分解，游离 出NH3,游离出的NH3借水蒸汽蒸馏到已滴入指示 剂呈紫色的硼酸溶液中,当NH3与H3BO3生成 (NH4)3BO3后，溶液为碱性，逐渐由紫—浅绿。
三. 操作步骤: 1.样品的消化:
（2）消化：在凯氏烧瓶瓶颈上面1／3处夹
一个试管夹，瓶口放一小漏斗，置通风橱 内的电炉上加热消化。在消化开始时应控 制火力，防止消化液形成的泡漠冲到瓶颈， 待H2SO4开始分解放出白烟后加大火力。消 化完全溶液应无色，冷却后变成浅绿色。
三. 操作步骤:
1.样品的消化:
（1）样品的称量及试剂的加入:用电子分析
天平称量已洗净干燥的50mL凯氏烧瓶的质量(放于 烧杯中,瓶颈不能碰天平门),去皮重。准确称入约 80-100mg的样品（样品直接加到瓶底，不要粘在瓶 颈上）。再称入0.3g的催化剂（K2SO4:CuSO =3:1)。 另做一个空白对照：称入0.3g催化剂，后加入 0.1mL的蒸馏水（由于电炉太少，每个实验台做一 份）。在每个烧瓶中加入5.0mL的浓H2SO4和一个玻 璃珠。
蒸馏完毕，立即清洗反应室,方法如(1)所述。
（3）空白对照处理
方法如前所述。空白对照的蒸馏洗涤、加样与 样品的实验步骤相同，但硼酸溶液不一定会变绿， 只要掌握与样品同样的时间，结束反应。
3.滴定： 记录微量滴定管中的液面刻度，用
标准HCl溶液逐滴滴定三角瓶中收集的氨， 硼酸指示剂溶液由绿变淡紫色，半分钟内 不变色为滴定终点。
实验三 总氮量的测定
------微量凯氏(Kjeldahl)定氮法测定豆粉蛋 白质含量
凯氏定氮法简介
凯氏定氮法（Kjeldahl method，全称凯耶达尔定 氮法）是一种常用的确定 有机物 (如蛋白质、核酸 及氨基酸等)中氮含量的检 测方法。这种方法是由丹 麦化学家凯耶达尔在1883 年发明的。
出待测物中的总氮量。
实验试剂和仪器
HCl标准溶液（0.01 mol.L-1 ）
H3BO3溶液(2%) H2SO4(浓) NaOH溶液(30%)
K2SO4(固体) CuSO4.5H2O(固体) 甲基红----次甲基蓝指示剂
移液管 酸式滴定管 容量瓶 天平
凯氏定氮装置
三. 操作步骤:
1.样品的消化:
四. 计算：
C： 标准盐酸溶液摩尔浓度（约0.01 mol/L) V1：滴定样品消耗的盐酸体积 V2：滴定空白消耗的盐酸体积 m：样品重量（g) 0.014:与1.00 mmol盐酸标准溶液相当的氮的质量，g/mmol
样品中蛋白含量（%）=总氮量×6.25
注意事项
1.开、关冷凝水要慢，以免水溢出浇灭酒精灯。 2.打开自由夹2、3，排外层蒸气发生器中的水时，要
一. 目的： 学习凯氏定氮法的原理和
操作技术。
二. 原理：
凯氏定氮法用于测定天然有机物 （蛋白质、核酸及氨基酸等）的含氮 量。
1.样品的消化：
含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的C、H两元素 被氧化为CO2和H2O，而N则转变为NH3,并进一步与H2SO4作 用生成(NH4)2SO4。此过程称为“消化”。但由于这个反 应较慢，通常加入K2SO4或Na2SO4以提高反应液的沸点， 并加入CuSO4作为催化剂以加快反应的进行。下面以Gly 为例，将消化的过程表示如下：
b.接通冷凝水，用酒精灯加热至沸腾，将酒精 灯移开片刻，反应室中的水即自动吸出。反 复洗涤3～4次。然后加热蒸馏数分钟（开冷 凝水），待有水滴从冷凝管下端出来时，用 广泛试纸测试冷凝水是否为中性偏酸（pH6 左右)说明已洗干净,若偏碱还需再洗涤数次 直至pH6左右。
（2）加样：取洗净的锥形瓶，加入10mL 2%硼酸和 1滴混合指示剂，摇匀呈紫色。将冷凝器出口浸入 硼酸溶液中。
凯氏定氮法的普遍适用性、精确性和可重复 性已经得到了国际的广泛认可。它已经被确 定为检测食品中蛋白质含量的标准方法。
蛋白质（%）=总氮量（%）*K
K为换算因数，理想状态下的蛋白质中的氮 含量约为16%，所以测量值乘以6.25即为蛋 白质量。
凯氏定氮法存在的缺陷
这种方法并不能给出真实的蛋白质含量， 因为所测定的氮可能不仅仅是由蛋白质转化 来的。三聚氰胺，含氮量为66％，一种含氮 量较高的化学物质，被添加到了食品中以伪 造较高的含氮量。
(NH4)2SO4 + 2NaOH = NH3↑+ Na2SO4 + 2H2O
3NH3 + H3BO3 = (NH4)3BO3
凯氏定氮仪
3.滴定：
蒸馏使硼酸溶液中H+浓度降低,用标准浓 度的HCl溶液滴定至恢复溶液中原来的H+浓度 为止（溶液颜色由浅绿恢复为淡紫色）。
(NH4)3BO3 + 3HCl = H3BO3 + 3NH4Cl 最后根据所消耗的标准HCl的摩尔数计算
不可混用。 4.控制微量滴定管的阀门，使HCL溶液逐滴加入，不
可太快。 5.加样前稍冷却凯Leabharlann Baidu定氮仪，否则样品易倒吸出来。
结果分析与讨论
（3）定容：消化完毕，待冷却后将凯氏烧
瓶上的漏斗插入干净的50mL容量瓶中把消 化液倒入，再分数次加蒸馏水洗涤烧瓶一 并倒入容量瓶中，第一次倒入水时要摇容 量瓶，避免容量瓶局部过热而破裂。并把 漏斗外面冷凝的硫酸也洗入容量瓶中，最 后定容（注意不要定容过量）。
2. 蒸馏：
（1）反应室的洗涤：
a.使蒸汽发生器中的水至排水口高度，将蒸馏 水从加样漏斗加入反应室至1/3-1/2高度.
关闭冷凝水，打开三个自由夹，稍冷却定氮仪， 用胖肚吸管取消化液 5ml ，从进样漏斗注入，
夹紧3个自由夹，加5mL的30% NaOH于漏斗中， 略开1缓慢流入，余少量,再加少量蒸馏水做水封。
先打开冷凝水（慢，以免逸出），再加热蒸馏。 当三角瓶内溶液由紫变绿时，计时，蒸馏3min，移 开三角瓶，使冷凝管口离开液面1cm，再蒸馏1min 后，用洗瓶冲洗冷凝口，取下锥形瓶。
CH2NH2COOH + 3H2SO4 → 2CO2 ↑+ 3SO2 ↑ + 4H2O + NH3
2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4
2.蒸馏：
浓碱可使消化液中的(NH4)2SO4分解，游离 出NH3,游离出的NH3借水蒸汽蒸馏到已滴入指示 剂呈紫色的硼酸溶液中,当NH3与H3BO3生成 (NH4)3BO3后，溶液为碱性，逐渐由紫—浅绿。
三. 操作步骤: 1.样品的消化:
（2）消化：在凯氏烧瓶瓶颈上面1／3处夹
一个试管夹，瓶口放一小漏斗，置通风橱 内的电炉上加热消化。在消化开始时应控 制火力，防止消化液形成的泡漠冲到瓶颈， 待H2SO4开始分解放出白烟后加大火力。消 化完全溶液应无色，冷却后变成浅绿色。
三. 操作步骤:
1.样品的消化:
（1）样品的称量及试剂的加入:用电子分析
天平称量已洗净干燥的50mL凯氏烧瓶的质量(放于 烧杯中,瓶颈不能碰天平门),去皮重。准确称入约 80-100mg的样品（样品直接加到瓶底，不要粘在瓶 颈上）。再称入0.3g的催化剂（K2SO4:CuSO =3:1)。 另做一个空白对照：称入0.3g催化剂，后加入 0.1mL的蒸馏水（由于电炉太少，每个实验台做一 份）。在每个烧瓶中加入5.0mL的浓H2SO4和一个玻 璃珠。
蒸馏完毕，立即清洗反应室,方法如(1)所述。
（3）空白对照处理
方法如前所述。空白对照的蒸馏洗涤、加样与 样品的实验步骤相同，但硼酸溶液不一定会变绿， 只要掌握与样品同样的时间，结束反应。
3.滴定： 记录微量滴定管中的液面刻度，用
标准HCl溶液逐滴滴定三角瓶中收集的氨， 硼酸指示剂溶液由绿变淡紫色，半分钟内 不变色为滴定终点。
实验三 总氮量的测定
------微量凯氏(Kjeldahl)定氮法测定豆粉蛋 白质含量
凯氏定氮法简介
凯氏定氮法（Kjeldahl method，全称凯耶达尔定 氮法）是一种常用的确定 有机物 (如蛋白质、核酸 及氨基酸等)中氮含量的检 测方法。这种方法是由丹 麦化学家凯耶达尔在1883 年发明的。
出待测物中的总氮量。
实验试剂和仪器
HCl标准溶液（0.01 mol.L-1 ）
H3BO3溶液(2%) H2SO4(浓) NaOH溶液(30%)
K2SO4(固体) CuSO4.5H2O(固体) 甲基红----次甲基蓝指示剂
移液管 酸式滴定管 容量瓶 天平
凯氏定氮装置
三. 操作步骤:
1.样品的消化:
四. 计算：
C： 标准盐酸溶液摩尔浓度（约0.01 mol/L) V1：滴定样品消耗的盐酸体积 V2：滴定空白消耗的盐酸体积 m：样品重量（g) 0.014:与1.00 mmol盐酸标准溶液相当的氮的质量，g/mmol
样品中蛋白含量（%）=总氮量×6.25
注意事项
1.开、关冷凝水要慢，以免水溢出浇灭酒精灯。 2.打开自由夹2、3，排外层蒸气发生器中的水时，要
一. 目的： 学习凯氏定氮法的原理和
操作技术。
二. 原理：
凯氏定氮法用于测定天然有机物 （蛋白质、核酸及氨基酸等）的含氮 量。
1.样品的消化：
含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的C、H两元素 被氧化为CO2和H2O，而N则转变为NH3,并进一步与H2SO4作 用生成(NH4)2SO4。此过程称为“消化”。但由于这个反 应较慢，通常加入K2SO4或Na2SO4以提高反应液的沸点， 并加入CuSO4作为催化剂以加快反应的进行。下面以Gly 为例，将消化的过程表示如下：
b.接通冷凝水，用酒精灯加热至沸腾，将酒精 灯移开片刻，反应室中的水即自动吸出。反 复洗涤3～4次。然后加热蒸馏数分钟（开冷 凝水），待有水滴从冷凝管下端出来时，用 广泛试纸测试冷凝水是否为中性偏酸（pH6 左右)说明已洗干净,若偏碱还需再洗涤数次 直至pH6左右。
（2）加样：取洗净的锥形瓶，加入10mL 2%硼酸和 1滴混合指示剂，摇匀呈紫色。将冷凝器出口浸入 硼酸溶液中。
凯氏定氮法的普遍适用性、精确性和可重复 性已经得到了国际的广泛认可。它已经被确 定为检测食品中蛋白质含量的标准方法。
蛋白质（%）=总氮量（%）*K
K为换算因数，理想状态下的蛋白质中的氮 含量约为16%，所以测量值乘以6.25即为蛋 白质量。
凯氏定氮法存在的缺陷
这种方法并不能给出真实的蛋白质含量， 因为所测定的氮可能不仅仅是由蛋白质转化 来的。三聚氰胺，含氮量为66％，一种含氮 量较高的化学物质，被添加到了食品中以伪 造较高的含氮量。
(NH4)2SO4 + 2NaOH = NH3↑+ Na2SO4 + 2H2O
3NH3 + H3BO3 = (NH4)3BO3
凯氏定氮仪
3.滴定：
蒸馏使硼酸溶液中H+浓度降低,用标准浓 度的HCl溶液滴定至恢复溶液中原来的H+浓度 为止（溶液颜色由浅绿恢复为淡紫色）。
(NH4)3BO3 + 3HCl = H3BO3 + 3NH4Cl 最后根据所消耗的标准HCl的摩尔数计算