丙氨酸氨基转移酶的测定
丙氨酸氨基转移酶ALT
丙氨酸氨基转移酶ALT(GPT紫外乳酸脱氢酶法作业指导书1、前言试验名称：丙氨酸氨基转移酶测定，英文名称：ALT，方法：紫外-乳酸脱氢酶法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的丙氨酸氨基转移酶活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中丙氨酸氨基转移酶的活力。
丙氨酸氨基转移酶在肝脏中有较高的浓度，而在肾、心、骨骼肌、胰、脾、肺脏中则含量较少，ALT升高通常是由某些与肝脏有关的疾病引起的，这些疾病包括：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。
在急性病毒性或中毒性肝炎时，ALT明显高于AST，而对于绝大多数的慢性肝炎病人ALT则低于AST，ALT升高也见于广泛损伤和肌肉疾病、伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。
2、测定原理本试验测定原理以IFCC推荐的方法为基础，实验分两步进行测定原理如下：a、样本中的ALT催化丙氨酸氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙柄酸和L-谷氨酸。
b、枘柄酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而合340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定ALT的活力。
L-丙氨酸+α-氧代戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸LDH L-乳酸+ NAD+丙酮酸+NADH3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*40ml R2：4*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400056号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：L-丙氨酸600mmol/l乳酸脱氢酶﹥1820u/lNADH0.26mmol/lTris缓冲液80mmol/l试剂2：Tris缓冲液80mmol/lα-氧代戊二酸36mmol/lEDTA 5.0mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
实验六-血清丙氨酸氨基转移酶的活力测定
（2）样品测定
取2支试管，标记，按下表依次加入试剂。
管号 血清/mL 基质液/mL
2，4-二硝基苯肼/mL
基质液/mL NaOH溶液/mL
对照管 0.10 ——
混匀，37℃水浴30min 0.50
混匀，37℃水浴20min 0.50 5.00
混匀，室温放置10min
测定管 0.10 0.50
0.50
—— 5.00
在505nm波长下用对照管调零，读取测定管的吸光度值， 对照标准曲线求得ALT相应的酶活力单位。
【临床意义】
肝细胞中ALT含量最丰富，，当肝脏疾病导致肝细胞损伤后， ALT即大量释放进入血液中，导致血清中ALT活性明显增高。 故测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死； 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞； 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、
实验六
【实验目的】
掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的原理及操作； 熟悉ALT标准曲线的绘制； 熟悉酶活力概念； 了解赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的评价
【实验原理】
赖氏法：
在37℃、pH7.4的条件下，以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，ALT 催化生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性 的大小；
试管和试管架
【实验方法】
（1试剂。
管号
空白管
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液/mL
0
0.05 0.10
0.15
0.20
0.25
基质液/mL
0.50
0.45 0.40
0.35
0.30
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。
⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。
通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。
(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清。
3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。
因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定-精品文档
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman） 分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。，要求各S管和U管进行双管平行操
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序
丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。
采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。
主要用于肝脏等疾病的诊断。
实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。
样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。
反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。
技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。
线性范围：450U/L ±10%。
准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。
精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。
储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。
启用后可稳定30天。
混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。
ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。
【检验医学】丙氨酸氨基转移酶活性测定
◈⊃ ► ◄ ■
临床意义
▪ 胆道疾病：胆囊炎、胆道结石、胆管炎、癌性肝外胆道 梗阻等，ALT轻度或中度增高。
▪ 心血管疾病：急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭合并肝 淤血，ALT轻度或中度增高。
◈⊃ ► ◄ ■
临床意义
▪ 生物参考区间: 男5～40U/L 女5～35U/L
▪ 轻度增高（50-100U/L）轻微肝损伤指征。见于各 种类型的轻型肝炎、肝脏轻度物理损伤或化学中毒、 脂肪肝、肝硬化、慢性迁延性肝炎。
▪ 中度增高（100-500U/L）病因与ALT明显增高基 本相同，但病情较轻，还可见于慢性活动性肝炎、 严重胆道梗阻伴肝细胞损伤、原发性肝癌、肝脓肿、 肝硬化活动期多。
毒性、中毒性、肝休克等。酒精性肝中毒应低 于此值。 ALT降低：磷酸吡多醛缺乏症
◈⊃ ► ◄ ■
注意事项
▪ 血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清 中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨的条件下，亦消耗 NADH，使结果偏高。
▪ 血清不宜反复冷冻保存，以免影响酶的活性。 ▪ 标本应避免溶血，红细胞内的ALT的含量高于血清
▪ 试剂主要成分：
▪ R1： Tris 缓冲液（PH=7.5）100mmol/L
L-丙氨酸
500mmol/L
LDH
>1200U/L
▪ R2： α-酮戊二酸
15mmol/L
NADH
0.18mmol/L
▪ 2.试剂的储藏和稳定性：试剂在2-8℃避光保存，可稳 定至有效期；启用后在2-8℃稳定4周；若试剂混浊或 以水为空白在340nm处吸光度值小于1.0时，则不能使 用。
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。
丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶I（NADH）被氧化为氧化型辅酶I（NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。
根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。
试剂内不含磷酸弼哆醛。
1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H，侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W∕V）的氯化钠溶液稀释样本。
6 .2.单位换算：ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7. 2若试剂浑浊，或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。
8.试剂性能指标8.1 试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8. 2装量：不低于标识值。
8. 3试剂空白吸光度：在34Onnl处，光径ICnI时，空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。
8. 6准确度：相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度：在34Onrn处，光径ICnl时，测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度：CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。
标曲线血清丙氨酸氨基转移酶测定(赖氏法优选PPT文档
【实验要求】
掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定（赖氏法）的 原理
操作方法及标准曲线的绘制； 了解试剂的配制和临床意义。
【实验原理】
L-丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶 混合37℃水浴30分钟
1份4N 氢氧化钠和9份蒸馏水混合均匀，即可使用
（alanine aminotransferase，ALT，）催化下生 L-丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT，）催化下生成丙酮酸和L-谷氨酸，加入2，4-二硝基苯肼终
止酶反应，并与丙酮酸生成丙酮酸-2，4-二硝 以空白调零，测定管吸光度减去对照管吸光度的差值为标本的吸光度，用该值在标准曲线上查得ALT的卡门单位。
或者以对照管调零，直接读出测定管吸光度值，用该值在标准曲线上查得ALT的卡门单位。 混合37℃水浴30分钟
基苯腙，苯腙在碱性条件下显红棕色，在波长 以吸光度值为纵坐标，卡门氏单位为横坐标，各标准管的吸光度值对活性单位作图，即为标准曲线。
3. 标本的测定 按表2操作。
表二： 一些药物和毒物可引起ALT活性升高 如氯丙嗪、异烟肼、利福平、奎宁、地巴唑、水杨酸制剂、乙醇、铅、汞、四氯化碳、有机磷等。
混合37℃水浴30分钟
或者以对照管调零，直接读出测定管吸光度值，用该值在标准曲线上查得ALT的卡门单位。
以空白调零，测定管吸光度减去对照管吸光度的对差照值为管标本的吸光度，用该值样在标品准管曲线上查得ALT的卡门单位。
混合37℃水浴30分钟
（了3解）试骨剂骼的肌配疾制病和基多临质发床性意液肌义（炎。、ul肌）营养不良等。
250
掌混握合血 37清℃丙水氨浴酸30氨样分基钟品转移（酶u测l）定（赖氏法）的原5理0
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
丙氨酸胺基转移酶测定
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1检测原理
丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化L-丙氨酸转氨基到α-酮戊二酸（α-KG）形成L-谷氨酸和丙酮酸盐。形成的丙酮酸盐在乳酸脱氢酶（LDH）作用下还原为乳酸盐，同时伴随还原的烟酰胺-腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化。
L-丙氨酸+α-KGALTL-谷氨酸+丙酮酸盐
4.4.2双向条形码标本分离血清后直接运行仪器。
4.4.3运行：输入完毕后按F3:LOAD LIST，确认样品已经装载在样本盘上，按Run键，仪器开始进行样品检测。
4.4.4检验后标本保存
标本检验完成后用采血管原盖盖紧，保存于标本冷藏库内，按日期放好，保存期为7天。
5校准程序
5.1校准品准备和储存
直接使用，2~8℃保存。
7性能参数
本法线性范围为0~1000U/L,对于超过测定线性范围的结果，用酶稀释液对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
8生物参考区间
30~65U/L。
9临床意义
ALT主要存在于肝肾、心组织细胞内，只有少量释放入血液中，所以血清中此酶活性很低当这些组织病变时，细胞内的酶大量释放入血液中，使血清中该酶的活性增多。
Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。
丙氨酸氨基转移酶检测
丙氨酸氨基转移酶检测1 检验目的规范丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法酶动力学法3 检测原理在ALT的催化下，丙氨酸的氨基转移到a-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD＋。
NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与样品中ALT的活力成正比，在340nm处测定NADH 下降的速率，即可计算出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH+H+ L- L-乳酸 + NAD+4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：20～25℃稳定1天4～8℃稳定7天-20℃稳定1周5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围≤41U/L9 患者结果可报告区间4～800U/L。
10 警告/危急值未规定。
11 性能指标11.1 线形上限：△A/min为0.40，800U/L。
11.2 精密度：批内、批间CV分别为7.3%、9.2%.11.3 准确度:不准确度≤15%.11.4 总胆红素达到180umol/L时不会有明显干扰；中、重度脂血明显干扰。
12 干扰因素及变异的潜在来源12.1 血清中含有酮酸能消耗NADH，使结果偏高；血清中谷氨酸脱氢酶增高时，在有氨存在的条件下，亦消耗NADH，使结果偏高。
检验科生化丙氨酸氨基转移酶ALT测定的标准操作规程
丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+L-乳酸+ NAD+一、试剂1.试剂本科使用上海科华生物工程股份有限公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下:2.校准血清使用上海科华生物工程股份有限公司提供的多项校准血清或采用因数法。
按照说明书提供的样本和试剂比例计算理论因数。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
三、操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
生物化学实验2.血清丙氨酸氨基转移酶测定.专科
一、实验目的
1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定的原理和 方法
2.熟悉722G型可见光分光光度计的使用
二、实验原理
血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊 二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
在足量底物作用下，生成产物越多表明酶活力越大， 酶浓度越高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代 表血清ALT活力的大小
三、试剂和仪器
(一）试剂 1、 小牛血清 2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液 0.4mol/L NaOH
(二）仪器 722G型可见光分光光度计、恒温水浴箱
四、操作步骤
1.标准曲线的绘制（不做）。 2.血清ALT活力测定 取两支试管按下表操作：
试剂（ml）
测定管
对照管
血清
0.1
0.1
ALT底物液
实验二
血清丙氨酸氨基转移酶测定
血清丙氨酸氨基转移酶测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）是体内最重要的转 氨酶之一，正常情况下，丙氨酸氨基转移酶主要存 在于各组织细胞中（以肝细胞中含量最多，心肌细 胞中次之），只有极少量释放入血，所以血清中此 酶活力很低。当这些组织病变、细胞坏死或通透性 增加时，细胞内的此类酶即可大量释放入血液中， 使血清中该酶活力显著增高。因此在患各种肝炎急 性病、药物中毒性干细胞坏死等疾病时，血清丙氨 酸氨基转移酶活力明显增高。
•从标准曲线上查出酶活力单位。
本法正常值：0~30单位。
注意事项
• 加完试剂需要将试管内溶液混匀 • 注意水浴的温度及时间 • 分光光度计的正确使用
• 【临床意义】
• 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
丙氨酸氨基转移酶ALT测定方法概述ALT测定谷氨酸酶电极法
该法的缺陷是存在内源性丙酮酸和GLDH的干扰，采用双试剂底物 启动模式可以消除部分干扰，延长延滞期也可以消除部分干扰，但关 键还是要求用高纯度的试剂(不含杂酶)和无氨蒸馏水。
IFCC推荐法建议试剂中添加5’一磷酸毗哆醛，这与我国推荐方 法不同。添加5 磷酸毗哆醛的目的是使脱辅基的酶恢复酶活性，对肿 瘤化疗病人和肾病病人(有一部分脱辅基的酶)来说，与不含有辅酶的 试剂相比测得结果有明显差别。‘
逆向反应法： 优点： NADH用量少，试剂成本低，反应
速率快，灵敏度高。 缺点：丙酮酸和NADH的稳定性差；过量丙
酮酸对LD的抑制作用大。
AST
L-天冬氨酸 ＋ α-酮戊二酸
草酰乙酸 ＋ L-谷氨酸
草酰乙酸 ＋ NADH ＋ H+ MD
L-苹果酸 ＋ NAD+
该方法也是属于酶偶联法，以苹果酸脱氢酶(MD)作指示酶， 连续监测 NADH在340 nm的吸光度下降速度来计算酶活性。 该法是我国检验学会的推荐方法。
(三)方法学评价
AST测定方法及评价基本与ALT相同。 IFCC推荐法用MD作指示酶，由于产物草酰乙酸不稳定， 易转变为丙酮酸，故试剂中加人LD，实质是两个指示酶， 但通常将LD作为辅助助酶。 该法预孵育期较长，达90s，目的是在预孵育期将内源性 的丙酮酸转化为乳酸，减少内源性丙酮酸的干扰。
CK pH6.5
磷酸肌酸 ＋ ADP
肌酸 ＋ ATP
ATP ＋ 葡萄糖 HK 6-磷酸葡萄糖 ＋ ADP
G-6-PD
6-磷酸葡萄糖＋NADP+
6-磷酸葡萄糖酸＋NADPH ＋ H+
(三)方法学坪价
酶偶联连续监测法反应速率快，不需做血清空白，故在 临床广泛使用。该法测定中的影响因素如下:
丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒原理
丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒原理一、引言丙氨酸氨基转移酶（AST）是一种肝脏和心肌细胞内特有的酶，它能够催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转移反应。
AST测定是临床上常用的一种生化指标，可以反映肝脏、心肌等组织的损伤情况。
AST测定试剂盒是一种用于测定血清或血浆中AST活性的试剂盒。
二、试剂盒组成AST测定试剂盒通常由以下几种试剂组成：1. 丙氨酸氨基转移酶底物液：含有适量的丙氨酸和α-酮戊二酸作为底物，以及其他辅助成分。
2. 缓冲液：用于调节反应体系pH值，保证反应体系稳定。
3. 样品稀释液：用于将样品稀释至适宜范围内，以保证测得准确结果。
4. 阻断液：用于阻断某些干扰因素对反应结果的影响。
5. 标准品或对照品：用于建立标准曲线或验证试剂盒性能。
三、AST测定原理AST测定的原理是利用丙氨酸氨基转移酶催化底物丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转移反应，生成谷草酰乙酰胺和丙酮酸。
在这个过程中，丙氨酸氨基转移酶被消耗掉，因此反应体系中AST的活性与底物转化速率成正比。
在试剂盒中，标准品或对照品已知AST活性值，可以用于建立标准曲线。
通过将不同浓度的标准品或对照品加入反应体系中，并测量其吸光度值，可以得到标准曲线。
然后将待测样品加入反应体系中，同样测量其吸光度值，并根据标准曲线计算出样品中AST的活性值。
四、操作步骤1. 取出所需试剂，并根据说明书调制好缓冲液、底物液等试剂。
2. 将标准品或对照品按照说明书要求加入反应孔中。
3. 加入待测样本和阻断液。
4. 加入缓冲液和底物液，开始反应。
5. 反应一定时间后，加入停止液终止反应。
6. 测量吸光度值，并根据标准曲线计算出样品中AST的活性值。
五、注意事项1. 严格按照说明书要求操作，避免误差。
2. 注意试剂的保存条件和有效期。
3. 样品的采集、保存和处理要符合规范，避免样品污染和变质。
4. 注意试剂盒中含有有毒或刺激性物质，操作时需佩戴防护手套等个人防护用品。
六、总结AST测定试剂盒是一种常用的生化检测试剂盒，能够快速、准确地测定血清或血浆中AST活性。
实验二十 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶
实验二十赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶【原理】利用比色分析原理将样品显色与丙酮酸标准品配制成的系列标准液比较，．求出样品中 ALT 活性。
【试剂】1. 0.lmol ／ L 磷酸二氢钾溶液称取 KH 2 P0 4 13.61g ，溶解于蒸馏水中，加水至 1 000ml ，4 ℃保存。
2. 0.lmol ／ L 磷酸氢二钠溶液称取 Na 2HP0414.22g ，溶解于蒸馏水中，并稀释至 1 000ml ，4 ℃保存。
3. 0.lmol ／ L 磷酸盐缓冲液 (pH7.4) 取 420ml 0.1mol ／ L 磷酸氨二钠溶液和 80ml0.lmol ／ L 磷酸二氢钾溶液，混匀，即为 pH7．4 的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴， 4 ℃保存。
4. 基质缓冲液精确称取 D-L- 丙氨酸 1．79g ，α- 酮戊二酸 29.2mg ，先溶于 0.lmol ／ L 磷酸盐缓冲液约 50ml 中，用 lmol ／ L NaOH 调 pH 至 7．4 ，再加磷酸盐缓冲液至 lOOml ， 4 ～ 6 ℃保存，该溶液可稳定 2 周。
每升底物缓冲液中可加入麝香草酚 0.9g 或加氯仿防腐，4 ℃保存。
配成 200mmol ／L 丙氨酸与 2.0mmol ／ L α - 酮戊二酸基质缓冲液。
5. 1.0mmol ／ L 2,4- 硝基苯肼溶液称取 2,4- 二硝基苯肼 (AR)19.8mg ，溶于 l.0mol ／ L 盐酸100ml ，置棕色玻璃瓶中，室温中保存，若有结晶析出，应重新配制。
6. 0.4mol ／ L NaOH 溶液称取 NaOH 1.6g 溶解于蒸馏水中，并加蒸馏水至 100ml ，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长期稳定。
7. 2.0mmnol ／ L 丙酮酸标准液准确称取丙酮酸钠 (AR)22 ． 0mg ，置于 100ml 容量瓶中，加 0.05mo1 ／ L 硫酸至刻度。
丙酮酸不稳定；开封后易变质 ( 聚合 ) ，相互聚合为多聚丙酮酸，需干燥后使用。
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丙氨酸氨基转移酶的测定
丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定主要通过肝功能检查进行，其参考值范围为0~40U/L。
在测定前，患者需要空腹12小时，不过不同年龄及人群参考范围没有明显差异。
当丙氨酸氨基转移酶数值偏高时，通常提示肝脏受到损害。
这可能是由多种原因导致的，如不良饮食习惯、过度劳累、药物因素等。
如果同时伴随肝区不适、全身乏力、食欲下降等情况，可能存在病毒性肝炎、脂肪肝、肝硬化等疾病。
丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理是催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
具体来说，ALT催化丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸上，生成丙酮酸和NADH，然后NADH在LDH的催化下生成NAD+。
在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比，因此可以通过检测NADPH的氧化速率来确定ALT的活性。
总的来说，丙氨酸氨基转移酶的测定对于评估肝脏功能具有重要意义。
如果检测到肝脏功能受损，建议前往医院就诊，由专业医生进行评估和治疗。