简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法
(瓶)桶装饮用水铜绿假单胞菌处理方案
（瓶）桶装饮用水铜绿假单胞菌处理方案简介桶装水是现在大多数家庭、单位、乃至校园的首要饮水方法，因而桶装水的安全性尤为重要。
但近来一家媒体计算了广东省和深圳市食药监局在2014-2016年间使用快速水分测定仪对桶装水公司抽检的数据，发现抽检不合格次数超过3次的公司有十家之多，且不合格次数最高居然达9次。
为什么会不合格？根据媒体陈述，桶装水不合格项目包括有铜绿假单胞菌、大肠杆菌、菌落总数、高锰酸钾消耗量、pH值、电导率。
前三个为微生物含量检查，高锰酸钾消耗量则反映水被污染的总体状况。
最新规范《食品安全国家规范包装饮用水》的查验项目中已删除了菌落总数、PH值及电导率三个指标。
在不合格项目里多次呈现了铜绿假单胞菌，它到底是何方神圣？铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌，铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，生长温度在25~42℃之间。
由于其对营养要求不高，因此广泛存在于水、土壤、食品以及医院等环境中。
由于铜绿假单胞菌具有一定的致病性，对抵抗力较弱的人群具有健康风险。
我国最新饮用水标准《食品安全国家标准包装饮用水》明确规定每250mL 水样中不得检出铜绿假单胞菌。
在2017年，全国多家饮用水生产企业生产的饮用水被抽检出铜绿假单胞菌超标，那么，生产企业应如何预防铜绿假单胞菌？饮用水中铜绿假单胞菌是产生的原因分析一般来说，微生物污染食品，通常是两种渠道，一种是原料遭受污染导致，另外一种则是加工过程中遭受污染导致。
铜绿假单胞菌广泛存在于自然界中，包括在土壤中的存在也是非常普遍的，因此，很可能由于水源水遭受铜绿假单胞菌污染，而后期的过滤、灌装又无法消灭铜绿假单胞菌，从而导致成品水中铜绿假单胞菌超标；另外，整个加工过程卫生控制不严格，也会导致铜绿假单胞菌超标。
目前，国内外的研究表明，铜绿假单胞菌不易存在于天然矿泉水的水源中，但水源污染不易发现，只有严重污染时才可被发现，因此，保证水源安全是控制瓶（桶）装饮用水安全的首要环节。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的细菌，它广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和植物表面等。
然而，铜绿假单胞菌也是一种常见的致病菌，它可以导致各种感染，特别是对于免疫系统较弱的人群来说更具威胁性。
因此，为了及时发现和控制铜绿假单胞菌感染，准确快速的检测方法非常重要。
常用的铜绿假单胞菌检验方法包括了生化试验、分子生物学方法和荧光染色法等。
其中，生化试验是最常见的方法之一。
生化试验通过检测铜绿假单胞菌在特定条件下产生的特定酶活性来进行判断。
例如，铜绿假单胞菌可以产生氧化酶、葡萄糖酸激酶和琼脂酶等酶，这些酶的产生可以通过颜色变化或者特定的试剂进行检测。
分子生物学方法是近年来快速发展的一种检测方法，它可以通过检测铜绿假单胞菌的DNA来进行判断。
常用的分子生物学方法包括PCR（聚合酶链式反应）、实时荧光定量PCR和基因测序等。
这些方法可以通过特定的引物和探针来识别并扩增铜绿假单胞菌的DNA，从而进行检测和鉴定。
荧光染色法是一种简单易行的检测方法，它通过使用特定的荧光染料来与铜绿假单胞菌结合，从而进行检测。
荧光染色法可以通过显微镜观察荧光染料的结合情况来判断样品中是否存在铜绿假单胞菌。
这种方法操作简单，结果直观，适用于快速筛查和初步判断。
除了以上几种方法外，还有一些其他的检测方法也可以用于铜绿假单胞菌的检测，如免疫学方法、质谱分析法和电化学法等。
这些方法各有优劣，可以根据实际需要选择合适的方法进行检测。
铜绿假单胞菌的检验方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据需求和实际情况选择合适的方法进行检测。
同时，为了保证检测结果的准确性，还应注意样品的采集和处理过程，并遵循标准操作规程。
只有通过科学准确的检测方法，才能及时发现和控制铜绿假单胞菌感染，保障人们的健康。
211087435_包装饮用水中铜绿假单胞菌的控制措施及检测方法
质量控制包装饮用水中铜绿假单胞菌的控制措施及检测方法支晓红（咸阳市食品药品检验检测中心，陕西咸阳 712000）摘 要：随着商业化饮用水的不断普及，包装饮用水的质量安全越发受到重视。
本文分析了包装饮水易受铜绿假单胞菌污染的现状和超标原因，探讨了针对性的防控措施，研究了铜绿假单胞菌的检测方法，为从事包装饮用水工作的企业和人员提供技术和理论支持。
关键词：包装饮用水；铜绿假单胞菌；控制措施；监测方法Control Measures and Detection Methods of Pseudomonas aeruginosa in Packaged Drinking WaterZHI Xiaohong(Xianyang Inspection and Testing Center for Food and Drug Control, Xianyang 712000, China) Abstract: With the increasing popularity of commercial drinking water, the quality and safety of packaged drinking water has been paid more and more attention. In this paper, the present situation of packaging drinking water easily contaminated by Pseudomonas aeruginosa and the causes of exceeding the standard were analyzed, the corresponding preventive and control measures were discussed, and the detection methods of Pseudomonas aeruginosa were studied, to provide technical and theoretical support for enterprises and personnel engaged in the work of packaging drinking water.Keywords: packaged drinking water; Pseudomonas aeruginosa; quality control; detection method水是人体的六大营养元素之一，是所有生物（包括人类）赖以生存的重要条件。
【微生物检测】GB19298桶装水中铜绿假单胞菌的生化检测!
【微生物检测】GB19298桶装水中铜绿假单胞菌的生化检测!
下图是实验过程中见到的比较不干净的桶装水，当然绝大部分的水在CN平板上无菌生长，这些不干净的桶装水也是我做铜绿后续生化的小白鼠。
二、生化反应
1、若CN板上是蓝绿色（如下图）
按照GB8538-2008标准可以直接得出绿色是铜绿假单胞菌，不过新的GB85538-2016增加了绿脓菌素实验(步骤如下图)。
1.1绿脓菌素测定培养基中加入三氯甲烷后的颜色（如下图）
1.2用吸管将三氯甲烷移到另一试管内加入盐酸，振荡，静置（如下图）
1.3蓝色菌落呈粉红色，绿色菌落呈淡粉色，有绿脓菌素存在。
2、若CN板上有荧光（如下图）
按照GB85538-2016标准，产荧光（非蓝绿）要进行产氨实验。
2.1将产荧光的菌落的纯培养物接种到乙酰胺肉汤中36℃培养24h，加入钠氏试剂（如下图）。
3、若CN板上是红褐色
按照GB85538-2016标准，红褐色菌落要进行产氨试验、氧化酶试验。
金氏B产荧光试验。
鉴于本人经验有限，接触样品不多，买的标准菌株也是绿色形态（前面那株蓝色菌落也是样品中发现的，甚是宝贵）。
所以，至今未见过红褐色菌落，若有同行有检出或者见过，还望交流，多加学习。
3.1标准菌株形态（如下图）
3.2产氨实验（同上，略）
3.3氧化酶试验（如下图）
3.4金氏B产荧光试验（如下图）
4、其他
其他非前面三种，则判断不是铜绿假单胞菌。
三、PH对铜绿的影响
曾经请教过一位老师，铜绿在酸性环境下会是红褐色，所以做了不同PH下（拿试纸调试的PH，可能不太严谨）铜绿在CN平板上的形态。
不过还是没有看到红褐色。
两种方法检测桶装饮用水回收桶中铜绿假单胞菌的结果比较
两种方法检测桶装饮用水回收桶中铜绿假单胞菌的结果比较朱伟珍
【期刊名称】《现代食品》
【年(卷),期】2022(28)16
【摘要】参照滤膜法和定性检测法对桶装饮用水回收桶中的铜绿假单胞菌进行检测,同时模拟样品的样液制作设置加标检测。
结果表明,两种方法具有可行性,其中滤膜法更贴合实际使用情况且更能够体现污染程度。
【总页数】4页(P214-217)
【作者】朱伟珍
【作者单位】广东省汕头市质量计量监督检测所
【正文语种】中文
【中图分类】TS275.1
【相关文献】
1.桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染原因及处理方法
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3.桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较
4.包装饮用水中铜绿假单胞菌检测方法的比较分析
5.2019-2021年度镇江市区桶装饮用水中铜绿假单胞菌和大肠菌群的检测结果分析
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包装饮用水中铜绿假单胞菌检测
227科研与教育2020年第3期包装饮用水中铜绿假单胞菌检测钟 杰（深圳市计量质量检测研究院，广东 深圳 518000）摘 要：随着现代生活水平的提高，饮用水安全问题越来越受到关注。
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种极具危害性的致病菌，检测其在饮用水中是否符合规定，对提高包装饮用水品质、普及健康用水理念有很大帮助。
检测方法参考新标准《食品安全国家标准包装饮用水生产卫生规范》（GB 19304—2018）中的铜绿假单胞菌滤膜-过滤法，并将检测出铜绿假单胞菌的水质通过PCR法扩增进行验证实验。
分析实验条件对结果的影响，并将结果与标准规定比对，判断抽取包装饮用水的质量，为消费者生产商提供可靠数据，为相关质量卫生部门加强监督管理提供依据。
关键词：包装饮用水；铜绿假单胞菌；滤膜-过滤法；PCR法中图分类号：R123.1 文献标志码：A 文章编号：2096-3092（2020）03-0227-02随着生活水平的提高，包装饮用水已在人们的日常生活中得到普及。
矿泉水方便易携带且口感好，桶装水便于家庭饮用且健康、安全，这些改变了人们长期以来的饮水习惯。
近年曝光的包装饮用水企业，很多是因为不合乎标准，微生物（铜绿假单胞菌）超标引起水质污染。
造成包装饮用水中铜绿假单胞菌超标的主要原因为水源遭受铜绿假单胞菌污染或生产过程中卫生控制不严格没有及时杀灭病菌，这对抵抗力较弱的人群存在较大健康风险。
因此，及时检测避免其带来经济损失是非常重要的。
为了进一步了解广东省包装饮用水的卫生状况，现随机从市面抽检包装饮用天然矿泉水和饮用纯净水进行检测。
机选取在2017年55批、2018年90批和220批。
1.2 菌株菌体有1～3根鞭毛，运动活泼。
/CN琼脂，乙酰胺肉试剂：萘啶酮酸（CN琼脂配套试剂），甘油，钠氏试剂（乙酰胺肉汤配套试剂），氧化酶试纸。
1.4 评价标准包装饮用矿泉水和饮用纯净水测定方法和标准参考新发行的标准《食品安全国家标准包装饮用水生产卫生规范》（GB 19304—2018）进行。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，常见于土壤、水体和人体的各种环境中。
铜绿假单胞菌在医院感染中占有重要地位，对多种抗生素具有耐药性，且能产生多种外毒素和酶，致病力强。
因此，对于铜绿假单胞菌的检验方法十分关键。
一、样本采集与保存铜绿假单胞菌的检验样本主要包括病人的分泌物、组织、血液和环境中的物品等。
在采集样本前，应做好手部消毒，并使用无菌的采样器具进行采集。
分泌物样本应用拭子进行擦拭，血液样本应用无菌注射器采集，组织样本应用无菌手术器械进行切取。
采集的样本应放入无菌容器中，并迅速送至实验室进行检验。
如果无法立即送检，应将样本保存在4℃的冰箱中，避免细菌的繁殖。
二、铜绿假单胞菌的培养与鉴定1. 培养条件铜绿假单胞菌在常规的培养基上生长良好，如血琼脂、肉汤琼脂、MacConkey琼脂等。
其中，肉汤琼脂是常用的选择，其成分为牛肉膏和琼脂，可提供足够的营养物质供细菌生长。
在培养前，应先将琼脂烧开，然后冷却至50℃左右，将琼脂倒入培养皿中，使其凝固。
2. 鉴定方法铜绿假单胞菌的鉴定主要包括形态学观察、生理生化试验和分子生物学检测等。
（1）形态学观察：铜绿假单胞菌在琼脂培养基上生长出大片绿色的菌落，有金属光泽，边缘清晰。
菌落直径一般在2-3mm左右，表面光滑，整体呈圆形或不规则形状。
（2）生理生化试验：铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性菌，对氧耐受性强，可在无氧和有氧条件下生长。
其产生的酶包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，可以通过相关的生化试验进行检测。
（3）分子生物学检测：通过PCR方法对铜绿假单胞菌的特异基因进行扩增和检测，可以快速准确地鉴定出铜绿假单胞菌。
三、铜绿假单胞菌的药敏试验铜绿假单胞菌对多种抗生素具有耐药性，因此，进行药敏试验可以指导临床的抗菌治疗。
常用的药敏试验方法有纸片扩散法和肉汤稀释法。
纸片扩散法是将含有不同抗生素的纸片放置在琼脂培养基表面，待细菌生长后，观察菌落周围的抗生素是否产生抑制圈，从而判断细菌对抗生素的敏感性。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌是一种常见的病原微生物，能够导致各种感染，特别是对于免疫系统较弱的人群来说，其感染风险更高。
因此，对于铜绿假单胞菌的检验方法的研究和应用变得尤为重要。
本文将介绍铜绿假单胞菌检验的方法及其应用。
铜绿假单胞菌检验的方法主要包括菌落观察、生化试验、药敏试验和分子生物学检测等。
首先，菌落观察是最常用的初步检验方法之一。
铜绿假单胞菌在琼脂平板上形成绿色或蓝绿色的菌落，且菌落边缘呈波浪状，这是其独特的特征。
通过肉眼观察菌落形态、颜色和大小等特征，可以初步判断样品中是否存在铜绿假单胞菌。
生化试验是进一步确认铜绿假单胞菌的重要手段。
目前常用的生化试验包括氧化/发酵试验、淀粉酶试验、蛋白酶试验等。
氧化/发酵试验通过观察菌落是否产生酸或气泡来判断铜绿假单胞菌的代谢类型。
淀粉酶试验通过观察淀粉琼脂平板上菌落周围是否出现透明带来判断铜绿假单胞菌是否产生淀粉酶。
蛋白酶试验通过观察蛋白琼脂平板上菌落周围是否出现透明带来判断铜绿假单胞菌是否产生蛋白酶。
通过综合分析不同的生化试验结果，可以对铜绿假单胞菌进行进一步的鉴定和确认。
药敏试验则是评价铜绿假单胞菌对不同抗生素的敏感性的重要方法。
常用的药敏试验方法有纸片扩散法、肉眼法和微量稀释法等。
这些方法通过将不同浓度的抗生素施加到含有铜绿假单胞菌的琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况来评价其对抗生素的敏感性。
根据不同抗生素对菌落生长的影响，可以确定铜绿假单胞菌的药敏性，从而指导临床治疗。
近年来，随着分子生物学技术的发展，分子生物学检测方法也逐渐应用于铜绿假单胞菌的检验中。
常用的分子生物学方法包括PCR、实时荧光定量PCR和基因测序等。
这些方法通过检测铜绿假单胞菌特定基因的存在与否，来确认其存在与否。
与传统的菌落观察和生化试验相比，分子生物学检测方法具有更高的灵敏度和准确性，可以快速、准确地检测铜绿假单胞菌。
铜绿假单胞菌检验方法的研究和应用对于预防和控制感染病的传播具有重要意义。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌是一种常见的细菌，它可以引起各种不同类型的感染，包括呼吸道感染、尿路感染和伤口感染。
对铜绿假单胞菌进行准确快速的检验方法非常重要。
下面是关于铜绿假单胞菌检验方法的10条详细描述：1. 纽氏培养基：铜绿假单胞菌最常用的培养基是纽氏培养基。
纽氏培养基含有较高浓度的铜离子，可以抑制大多数细菌的生长，但对铜绿假单胞菌有很好的选择性。
2. 确认试验：最常用的确认试验包括青绿葡萄糖琼脂糖（MAC）培养基、氧化还原试纸和革兰染色。
在MAC培养基上生长的铜绿假单胞菌形成带绿色金属光泽的菌落。
3. 氧化还原试纸：铜绿假单胞菌可以分解葡萄糖产生酸性产物，将氧化还原试纸变为黄色。
这是一种快速简便的检验方法，适用于大量样品的检测。
4. 青绿葡萄糖琼脂糖（MAC）培养基：这种培养基可以选择性地促进铜绿假单胞菌的生长。
MAC培养基含有大量的胆盐，可以抑制大多数细菌的生长。
5. 硝酸盐还原试验：铜绿假单胞菌可以对硝酸盐进行还原，将硝酸盐转化为亚硝酸盐和氮气。
这是一种可靠的检验方法，可以用来区分铜绿假单胞菌和其他细菌。
6. DNA测序：DNA测序是一种高精度的检验方法，可以确定铜绿假单胞菌的基因组序列。
这种方法可以帮助研究人员了解铜绿假单胞菌的遗传变异和抗药性。
7. PCR扩增：PCR扩增是一种灵敏的检验方法，可以在短时间内扩增出铜绿假单胞菌特定的基因片段。
这种方法可以用来快速诊断铜绿假单胞菌感染。
8. 醇溶液试验：铜绿假单胞菌可以在醇溶液中产生绿色素，这是一种特殊的代谢产物。
醇溶液试验可以帮助确定铜绿假单胞菌的鉴别。
9. 体外抗生素敏感性试验：铜绿假单胞菌对某些抗生素具有抗药性。
体外抗生素敏感性试验可以确定细菌对不同抗生素的敏感性，从而指导治疗选择。
10. 荧光PCR：荧光PCR是一种结合了PCR扩增和荧光探针技术的检验方法。
它可以在一步骤中扩增并定性检测铜绿假单胞菌的DNA。
这种方法具有高度灵敏性和特异性，适用于临床样本的快速检测。
桶装水铜绿假单胞菌污染及检测方式
现阶段，人们对于桶装饮用水的需求量不断增加，饮用水安全问题受到了人们的高度关注。
国家标准对桶装水中铜绿假单胞菌作出了不得检出的要求，但是在近几年间有多个地区出现了桶装水中铜绿假单胞菌严重超标的问题。
铜绿假单胞菌属于水源性致病菌,属于条件致病菌的一种，在水、人体皮肤、空气、呼吸道或者肠道等空间内均可存活，免疫力低的人群误饮受其污染的水以后，有较大的可能感染相关疾病。
1 桶装水铜绿假单胞菌出现的主要原因1.1 水源水污染因素因为水源水污染是导致桶装水污染的主要诱因之一，桶装水的主要原料为自来水、河流水、湖泊水或者泉水。
近几年，我国经济市场快速发展，未经处理达标的现代工业废水或者生活污水的排放会对水源水造成污染，如果水源水在受到污染并且没有通过后续清除流程，则很可能会造成连续污染现象。
例如：部分桶装矿泉水在其生产期间为了保证水体中的矿物质含量，不会使用精滤装置进行处理，就给了铜绿假单胞菌的污染机会[1]。
1.2 卫生意识不强，生产设备消毒不彻底部分企业设备陈旧、生产工艺简陋，对于铜绿假单胞菌的控制力度不足，水源水存在污染的可能性很高。
因为用于生产的主要仪器设备有很多接口，在正式生产期间容易出现交叉污染的情况，此时病菌会进入到最终产品中。
因为铜绿假单胞菌能够黏附于管道、贮水池或者增压泵中，并在其中繁殖，通过简单的冲洗不能彻底清除。
与此同时，如果正在使用的生产设备存在未经定期消毒、消毒不彻底的情况，也有可能造成铜绿假单胞菌污染，其中，消毒剂不合格造成污染的可能性也很高。
在上述内容之外，采用传统消毒方式，利用臭氧浓度低或者短时间冲洗并不能达到完全杀灭的效果，如此周而复始，水源水污染程度会不断加剧[2]。
1.3 包装材料的消毒清洗不到位对桶装清洁以及消毒处理不到位被视为成品水受到污染的最主要原因。
时下多数桶装水产品的制造商存在回收水桶的情况，而水桶自身的特殊结构非常不利于消毒工作的展开，同时消毒效果也会因此受到影响。
简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法
THEORY | 理论论究Mar. 2019 China Food Safety ·77·引言铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），也称为绿脓杆菌，属于假单胞菌属。
广泛分布于自然界（土壤、空气、水源等）及正常人皮肤、肠道和呼吸道，大小为（1.5~3.0）μm×（0.5~0.8）μm，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。
该菌在普通培养基上生长良好，专性需氧，菌落形态不一，多数直径在 2~3 mm，边缘不整齐，扁平湿润。
在血琼脂平板上形成透明溶血环。
铜绿假单胞菌是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。
目前检测铜绿假单胞菌的标准中采用的主要是传统生化方法，包括分离培养、生化鉴定等，不能实现大批量水样的快速检测。
近几年，随着科技的发展，检测铜绿假单胞菌的方法多种多样，本文对近年铜绿假单胞菌检测技术进行综述，为铜绿假单胞菌的快速、准确检测研究技术提供参考。
铜绿假单胞菌检测技术国标滤膜法检测桶装水中铜绿假单胞菌的方法是GB 8538-2016《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》。
铜绿假单胞菌产色素分为三种：产绿脓菌素，产青脓素，产红脓素；铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长；具有氧化酶，可以使细胞色素C 氧化，再由氧化型细胞色素C 使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物：可以产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物；根据这些生化特性，通过滤膜过滤将铜绿假单胞菌富集到CN 琼脂上，再用生化试剂管进行生化鉴定。
也可以用VITEK 2 Compact 全自动细菌鉴定系统用于微生物鉴定，准确率高，可用于微生物实验室的日常检测工作。
实时荧光定量PCR 检测外毒素 A 基因在铜绿假单胞菌中高度保守，根据简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法GenBank 中铜绿假单胞菌外毒素A 基因片段序列，设计特异性引物及TaqMan 探针，并利用实时荧光 PCR 技术，对目标靶序列进行特异性扩增，建立了一套检测食品中铜绿假单胞菌的方法，特异性试验和灵敏性试验良好，该检测方法具有特异、快速的特点，能够满足检测要求，为食品中铜绿假单胞菌的快速检测奠定了基础。
包装饮用水中铜绿假单胞菌检验析释
包装饮用水中铜绿假单胞菌检验析释作者：刘小根许春兰金元宝来源：《食品界》2017年第12期铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性条件致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线灯理化因素具有较强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。
近年来，铜绿假单胞菌污染桶装水的情况报道较多，是市面上包装饮用水最容易出现的质量问题；2016年江西省瓶（桶）装饮用水不合格率高发，主因是铜绿假单胞菌超标严重，该项目政府抽检不合格率为21.93%，远超其他抽检项目，质量安全问题十分严重，主要原因是生产企业没有做好日常生产过程的微生物监控，生产过程的消毒效果缺乏准确的验证方法，使得生产的产品质量失控。
GB8538-2016食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法是国家最新公布的针对包装饮用水铜绿假单胞菌的检验方法，检验程序如下：标准的检测过程写的比较精炼，对于一般生产企业的检测人员来说在实际的检测过程中，会遇到比较多的问题，以下来对其中的可能的检测难点一一说明并推荐相应的解决办法。
操作步骤：1.水样过滤。
取好的水样需在100级的洁净工作台用0.45um的滤膜进行抽滤，将微生物截留在滤膜上，再将滤膜贴在CN琼脂培养基上进行培养，应避免在滤膜和培养基之间夹留气泡。
这个步骤中有两个方面检测方法中未说明，一是采用何种滤器和如何灭菌，二是滤膜如何灭菌。
包装水生产企业可以购买专用的不锈钢滤器，一般材质是不锈钢的，可以用牛皮纸包好后直接放入灭菌锅内进行灭菌；也可以购买常见的砂芯过滤器（如津腾），同样可以用牛皮纸包好后放入灭菌锅灭菌；如果需要使用的滤器数量较多，介绍可以采用75%酒精全浸泡的方式灭菌，浸泡后放置在已灭菌容器中在洁净工作台晾干。
使用前先用无菌水抽滤一次以避免酒精残留影响检测结果。
浸泡半分钟以上即可起到灭菌效果。
通过使用添加了标准菌绿脓杆菌（ATCC27853）的生理盐水（高含量）和无菌生理盐水交叉过滤共6次，滤器灭菌方式分别采用灭菌锅高温灭菌和75%酒精全浸泡灭菌，CN琼脂培养后结果均符合要求：添加了标准菌的生理盐水样品在CN琼脂上生长良好，两种灭菌方式数量没有明细区别，特征符合；无菌生理盐水样品在CN琼脂上未发现有菌落生长（见图1）。
铜绿假单胞菌检测方法
铜绿假单胞菌检测方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体和植物表面等环境中。
它是一种致病菌，可以引起多种感染疾病，尤其是对免疫系统较为薄弱的人群造成危害。
因此，及早检测和准确诊断铜绿假单胞菌的存在至关重要。
一、培养法检测。
1. 样品采集，从疑似感染部位采集分泌物、组织或体液样品，如痰液、伤口分泌物、尿液等。
2. 培养基选择，选择适合铜绿假单胞菌生长的培养基，如Pseudomonas Agar Base等。
3. 培养条件，在适宜的温度和湿度条件下进行培养，通常在37摄氏度下培养24-48小时。
4. 观察结果，观察培养皿上是否有铜绿色的细菌克隆形成，这是铜绿假单胞菌的特征之一。
二、生化试验检测。
1. 氧化酶试验，使用氧化酶试纸涂抹样品，观察是否产生紫色反应。
2. 发酵试验，利用不同的碳源进行发酵试验，观察铜绿假单胞菌对不同碳源的利用情况。
3. 硝化还原试验，观察铜绿假单胞菌是否具有硝化还原能力。
三、分子生物学检测。
1. PCR法，利用聚合酶链式反应（PCR）技术，选择特异性引物扩增靶基因，如16S rRNA基因等。
2. 基因测序，对PCR扩增产物进行测序分析，确认靶基因序列是否与铜绿假单胞菌相符。
四、质谱法检测。
1. 蛋白质质谱，利用质谱技术对铜绿假单胞菌的蛋白质进行分析，寻找特异性蛋白质标志物。
2. 代谢产物质谱，分析铜绿假单胞菌代谢产物的质谱图谱，寻找特异性代谢产物。
以上是目前常用的铜绿假单胞菌检测方法，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际检测中，可以根据具体情况选择合适的方法进行检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，为了避免检测过程中的污染和误差，操作人员需要严格按照操作规程进行操作，并做好实验室卫生和消毒工作。
总之，对于铜绿假单胞菌的检测工作，需要综合运用多种方法，以提高检测的准确性和可靠性。
只有及时有效地检测到铜绿假单胞菌的存在，才能采取针对性的治疗措施，保障患者的健康和安全。
包装饮用水中铜绿假单胞菌检测
分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2020.24.052包装饮用水中铜绿假单胞菌检测Detection of Pseudomonas aeruginosa in Packaged Drinking Water◎ 李亚娟1,2（1.吉林省梅河口市市场监督管理局，吉林 梅河口 135000；2.梅河口市食品药品检验检测中心，吉林 梅河口 135000）LI Yajuan1,2(1.Meihekou City Market Supervision Administration, Meihekou 135000, China;2.Meihekou Inspection and Testing Center for Food and Drug Control, Meihekou 135000, China)摘 要：随着现代生活水平的逐步提高，饮水问题也逐渐受到人们的重视。
铜绿假单胞菌是一种极具危害性致病菌，检测应用水中铜绿假单胞菌是否符合相关的规定，对于提高饮用水品质、推广健康饮水有着重要的意义。
本文参考新的饮用水检测标准，通过PCR法进行验证试验，分析实验条件对结果的影响，将实验结果与标准规定比较，判断测试的饮用水的质量，为消费者提供可靠的数据，为相关的质量卫生加强监督管理部门提供水质检测依据。
关键词：包装饮用水；铜绿假单胞菌；检测Abstract：With the gradual improvement of modern living standards, people pay more attention to the problem of drinking water. Pseudomonas aeruginosa is a kind of extremely harmful pathogenic bacteria. It is of great significance for improving the quality of drinking water and popularizing healthy drinking water to detect whether the applied water meets the relevant regulations. The detection method refers to the new standard water quality and is verified by PCR. Analyze the influence of experimental conditions on the results, compare the experimental results with the standard regulations, judge the quality of tested drinking water, provide reliable data for consumers, strengthen supervision and management for related quality and hygiene, and provide practical evidence.Keywords：packaging drinking water; Pseudomonas aeruginosa; detection中图分类号：TS275.1铜绿假单胞菌是对人体造成危害的主要病菌之一，别名绿脓杆菌，广泛存在于自然水源、空气以及正常人的皮肤角质层上、呼吸道、肠道等地方，该病菌在正常量时对人体没有伤害，但在特定的条件下，一旦超过人身体正常的稳态调节范围，会导致一些疾病产生，因此仍属于致病菌种的分类范围。
桶装水中铜绿假单胞菌检测和解决办法
桶装水中铜绿假单胞菌检测和解决办法摘要：铜绿假单胞菌经过水源水消毒，管道消毒和臭氧消毒后，其活力会大大降低，处于非可培养状态，导致传统方法培养不出和检测结果的假阴性。
本文通过对检测方法的分析，提出一种可以彻底杀灭铜绿假单胞菌的方法。
关键字：桶装水；铜绿假单胞菌；检测；解决铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。
近年来，随着全球范围内桶装饮用水消费量的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注。
目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，PCR 和环介导等温扩增技术（LAMP）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快速检测中。
本文在分析检测方式的基础上提出彻底解决的办法。
一．铜绿假单胞菌的传统检测方法参考《饮用天然矿泉水检验方法》 GB/T8538-2008/54 铜绿假单胞菌-滤膜法和ISO16266：2006（E）水质-铜绿假单胞菌的检测和计数－滤膜法进行检验。
具体步骤：将250 mL水样用孔径为0.45 μm的滤膜过滤，并将滤膜移至 CN 琼脂选择性培养基上，36 ±1 ℃℃恒温培养 48 h。
铜绿假单胞菌在 CN 琼脂出现的菌落形态有 3 种：有脓青素产生的蓝/绿色、无荧光的菌落，直接判为检出；产生有荧光素的黄色菌落，进一步做产氨(乙酰胺肉汤)试验确认，产氨试验阳性的判为检出；产生红脓素的红褐色、无荧光的菌落，要继续做氧化酶试验、产氨试验、荧光(金氏 B 斜面)试验，若氧化酶阳性、产氨试验阳性结果判为铜绿假单胞菌检出。
二．铜绿假单胞菌 PCR 检测方法将 250 mL 水样用孔径为 0.45 μm 的滤膜过滤，将滤膜转移至 100 mL LB 肉汤（内含 0.02 g 溴化十六烷基三甲胺和 1.5 mg 萘啶酮酸），选择增菌 18 h 后，吸取 1 mL 增菌液，煮沸法提取 DNA。
桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较
1403桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较张淑红，吴清平，徐晓可，张菊梅，潘宝怡、彭飞艇（广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,广东省微生物研究所，广东广州 510070）摘要：分别采用传统国标GB/T 8538-2008方法、基于OprL 基因的PCR 方法和环介导等温扩增(LAMP)方法检测桶装水中的铜绿假单胞菌，比较三种方法的检测效果。
结果显示，采集的46份市场水样中，用传统GB8538-2008方法检出了3份阳性样品，检出率为6.5%，检测时间至少2天；而PCR 和LAMP 方法都检出4份阳性样品，检出率为8.7%，并且可在24 h 内报告结果。
PCR 和LAMP 方法与传统方法相比具有快速灵敏等优点，可用于大批量水样的快速检测和结果初筛。
关键词：铜绿假单胞菌；传统方法；PCR ；LAMP 文章篇号：1673-9078(2011)11-1403-1405Comparison of Detection of Pseudomonas aeruginosa in Bottled WaterZHANG Shu-hong, WU Qing-ping, XU Xiao-ke, ZHANG Ju-mei, PAN Bao-yi, PENG Fei-ting(Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology, State Key Laboratory of Applied Microbiology (Ministry-Guangdong Province Jointly BreedingBase ),South China Guangdong Institute of Microbiology, Guangzhou 510070, China)Abstract: Three methods including traditional method GB/T 8538-2008, PCR assay based on OprL gene and LAMP assay were used todetect the Pseudomonas aeruginosa in bottled water and the results were compared. It was found that 3 bottled water samples (6.5%) were positive detected by GB8538-2008 method, while 4 bottled water samples were detected positive by both PCR and LAMP methods with the positive rate of 8.7%. As for the test of time, the traditional method need at least 2 days to finish, compared to less than 24h using PCR and LAMP methods. Therefore, PCR and LAMP assays were more rapid and sensitive than traditional method, which may be used for rapid detection of large quantities of water samples.Key words ：Pseudomonas aeruginosa ; Traditional Method; PCR; LAMP铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[1~3]。
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的病原菌，广泛存在于自然环境中，尤其在水体和土壤中较为常见。
它是一种革兰阴性杆菌，具有极强的耐受性和适应性，可在各种环境条件下生存和繁殖。
铜绿假单胞菌具有多种致病因子，可引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染、创伤感染等，对免疫力较低的人群尤为危险。
铜绿假单胞菌的检验方法主要包括传统的实验室培养和分子生物学方法。
下面将介绍几种常用的铜绿假单胞菌检验方法。
1. 培养方法铜绿假单胞菌的培养常用的培养基有MacConkey琼脂、Eosin Methylene Blue琼脂、香槟琼脂等。
这些培养基能够选择性地培养铜绿假单胞菌，并通过它们的特殊染色反应来区分铜绿假单胞菌与其他细菌。
在培养过程中，需要注意严格控制培养基的温度、湿度和时间，以促进菌落的生长和繁殖。
2. 生化试验生化试验是铜绿假单胞菌鉴定的重要手段之一。
常用的生化试验包括氧化/发酵试验、葡萄糖氧化酶试验、酮酸氧化试验等。
这些试验能够通过菌株对特定底物的反应来判断是否为铜绿假单胞菌。
此外，还可以通过菌株对不同抗生素的敏感性试验来确定其耐药性情况。
3. 分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和基因测序等方法逐渐应用于铜绿假单胞菌的检验中。
通过PCR扩增特定基因片段，如16S rRNA基因，可以快速、准确地鉴定铜绿假单胞菌。
同时，基因测序可以进一步确定菌株的亚型和毒力因子等信息，为临床治疗和流行病学调查提供重要依据。
4. 抗生素敏感性试验铜绿假单胞菌对多种抗生素具有较高的耐药性，因此抗生素敏感性试验对临床治疗具有重要意义。
常用的抗生素敏感性试验包括纸片扩散法（Kirby-Bauer法）和微量稀释法（MIC法）。
通过这些试验可以确定铜绿假单胞菌对不同抗生素的敏感性，从而指导临床医生选择合适的抗生素治疗。
总结起来，铜绿假单胞菌的检验方法主要包括培养方法、生化试验、分子生物学方法和抗生素敏感性试验。
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简述桶装水中铜绿假单胞菌的几种检测方法作者：马慧娟徐慧高宏
来源：《食品安全导刊·中旬刊》2019年第03期
引言
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），也称为绿脓杆菌，属于假单胞菌属。
广泛分布于自然界（土壤、空气、水源等）及正常人皮肤、肠道和呼吸道，大小为（1.5～3.0）μm×（0.5～0.8）μm，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。
该菌在普通培养基上生长良好，专性需氧，菌落形态不一，多数直径在 2～3 mm，边缘不整齐，扁平湿润。
在血琼脂平板上形成透明溶血环。
铜绿假单胞菌是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。
目前检测铜绿假单胞菌的标准中采用的主要是传统生化方法，包括分离培养、生化鉴定等，不能实现大批量水样的快速检测。
近几年，随着科技的发展，检测铜绿假单胞菌的方法多种多样，本文对近年铜绿假单胞菌检测技术进行综述，为铜绿假单胞菌的快速、准确检测研究技术提供参考。
铜绿假单胞菌检测技术
国标滤膜法
检测桶装水中铜绿假单胞菌的方法是GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》。
铜绿假单胞菌产色素分为三种：产绿脓菌素，产青脓素，产红脓素;铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长;具有氧化酶，可以使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物：可以产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，滴加纳氏试剂（碘化汞钾），氨在碱性条件下与碘化汞钾作用，生成红色络合物;根据这些生化特性，通过滤膜过滤将铜绿假单胞菌富集到CN琼脂上，再用生化试剂管进行生化鉴定。
也可以用VITEK 2 Compact 全自动细菌鉴定系统用于微生物鉴定，准确率高，可用于微生物实验室的日常检测工作。
实时荧光定量PCR检测
外毒素 A 基因在铜绿假单胞菌中高度保守，根据 GenBank 中铜绿假单胞菌外毒素A基因片段序列，设计特异性引物及TaqMan探针，并利用实时荧光 PCR技术，对目标靶序列进行
特异性扩增，建立了一套检测食品中铜绿假单胞菌的方法，特异性试验和灵敏性试验良好，该检测方法具有特异、快速的特点，能够满足检测要求，为食品中铜绿假单胞菌的快速检测奠定了基础。
LAMP检测
环介导等温扩增技术（以下简称LAMP）：利用链置换DNA聚合酶在等温条件下进行反应，40min内可完成核酸扩增，检测过程不需要昂贵的仪器设备，简单的水浴锅即可，扩增产物不需要繁琐的电泳过程，快速灵敏，特异性强，成本低，尤其适合大量、即时、现场的病原微生物的初筛，易于在基层推广应用。
酶底物法
酶底物法（Pseudalert）采用特异性固定底物技术，目標细菌产生能够分解 Pseudalert 底物特定的酶，产生荧光，在24 h内即可得到结果，无需进行验证试验，该方法能够较好地弥补传统滤膜法在检测工作中的不足，在美国和欧洲部分地区已经被批准为检验铜绿假单胞菌的标准方法。
结论与展望
近年来瓶、桶装水监测发现各种污染物如铜绿假单胞菌等污染问题逐渐增多，因瓶、桶装水中污染物如铜绿假单胞菌污染引起的食物中毒也时有发生，成为公共卫生的重大隐患。
国标方法作为一种传统、经典的检测方法，与实时荧光定量PCR方法、LAMP方法、酶底物法一起成为食品安全检测的重要工具。
传统方法假阳性率低，但检测周期长。
随着技术研究的不断深入，希望核酸方法、酶底物法能够进一步优化和完善，实现快速、特异、灵敏、高通量，可广泛应用于食品安全检测、检验检疫、卫生防疫、疾病诊断等领域，前景非常广阔。