还原能力测定原理

还原能力测定

抗氧化剂（还原剂）是通过自身的还原作用，给出电子而清除自由基的，还原能力越强，抗氧化性越强。实验中，样品的抗氧化剂能使铁氰化钾的三价铁还原成二价铁（亚铁氰化钾），二价铁（亚铁氰化钾）进一步在和三氯化铁的反应下生成在700nm处有最大吸光度的普鲁士蓝（Fe4[Fe(CN)6]3 ），因此测定700nm处的高低可以间接反映抗氧化剂的还原能力大小，吸光度越大，还原能力越强。

配置不同浓度的样品溶液梯度（如50、100、250、500、1000PPm，过小时吸光度数值小，误差较大），依次加入一定量磷酸缓冲液（保证溶液反应的PH环境，如2.5ml pH=6.6）、一定量和浓度的铁氰化钾溶液（与样品中的抗氧化剂反应生成二价铁，如2.5ml 1% m/v ），混合均匀，将该体系置于一定温度下（比如：50℃,不能过高，不然会使物质失活，适当加热可以保证反应程度和时间）恒温水浴放置一定时间（如30min，以反应充分为宜），取出加入三氯乙酸溶液（铁氰化钾溶液为黄色，猜测用三氯乙酸与反应剩余铁氰化钾生成沉淀，离心除去，排除对吸光度数值的影响），混匀，置于离心机内3000转离心10min（离心机使用时一定保证对侧样品等重），取一定量上清液于另一试管中，加入二次水和三氯化铁溶液（3K4Fe(CN)6 + 4FeCl3 → Fe4[Fe(CN)6]3 + 12KCl ，黄色晶体亚铁氰化钾放进三氯化铁的溶液中，产生颜色很鲜艳的蓝色沉淀，即普鲁士蓝，测定吸光度时要摇匀，且普鲁士蓝耐热性在140℃，光照下较稳定，不用避光），混匀后用分光光度计在700nm下测定溶液吸光度。

设置：

实验组（A i）:样品+缓冲液+铁氰化钾+三氯乙酸+DW+三氯化铁

对照组 (Ao)：DW+缓冲液+铁氰化钾+三氯乙酸+DW+三氯化铁

空白组 (A j): 样品+缓冲液+DW(加入量=铁氰化钾+三氯乙酸+DW+三氯化铁的总量)

注：实验组全加，对照组去除样品的影响，空白组去除反应试剂的影响（如铁氰化钾+三氯乙酸+DW+三氯化铁），所有反应溶液均需要在要求的环境下反应，及每个组都需加缓冲液。

消除效率（%）=〖1-〔A i-A j〕/Ao〗*100%

2012年10月28日