最新丙型肝炎治疗新进展海南丙肝医院教学讲义PPT

HCV诱导的持续慢性的机理
• 宿主因素，如不能诱发保护性免疫 • 病毒因素，如病毒变异 • 与HCV-RNA整和到宿主基因无关 • HCV诱导的宿主细胞及体液免疫反应不能预防
及清除HCV感染
HCV准基因株(Quacispecies)
• 大多数RNA病毒在复制过程中，易出错 • 在同一个体内很难找到完全相同的RNA基因 • 基因之间关系甚密，这就是所谓准基因株 • 病毒准基因围绕主要基因，数量以主要基因为主 • 感染某一时期，各基因的分布状态代表宿主与病
⑵ 评估HCV基因更大片段的验证性试验
• HCV基因型的筛选试验有 ：
(1)对HCV高度保守的5’-NC区域行限制性片段长度 多
型性分析（RFLP） (2)对HCV-5’NC区域行逆转录斑点杂交分析，又名
LIPA方法 (3)用型特异的引物对HCV核心基因巢式PCR。在临
床应用中RFLP与LIPA差异较小。 (4)病毒蛋白抗原性分型 • 评估HCV基因更大片段的验证性试验-----序列分析
充试验 第三代补充试验（RIBA-3）其特异性更好
HCV-RNA定性试验
• 逆转录PCR • RT-PCR方法各家不一，缺乏标准化 • 有许多因素影响着PCR方法，如标本处理及储存形
式，引物设计、扩增倍数、反应条件、DNA产物的 污染、扩增后产物检测系统等 • 严格的质控、操作人员的熟练程度尤为重要 • 药盒并不能完全保证结果的可靠性
系 • 准基因越复杂，干扰素疗效也越差
HCV准基因株与宿主免疫反应
宿主体液及细胞免疫压力 病毒复制出错 HCV基因变异 逃避宿主免疫系统攻击作用 HCV持续感染
HCV准基因株与宿主免疫反应
• 产生中和抗体 • 中和抗体清除病毒的能力极有限
★ 对所分离的病毒有作用 ★ 对准基因复合体无效
• HCV中和抗体主要作用部位在HVR1区 • HVR1基因的变化是体液免疫作用的结果 • 最近又发现E2保守区（HVR1外区域）分离到中
和抗体
丙型肝炎实验室诊断
• HCV抗体测定
• HCV抗体测定的其他试验 • 分子生物学的检测
★ 定性试验：检测血清中是否有HCV-RNA的存在 ★ 定量HCV-RNA测定：估计患者血清中HCV-RNA含量 ★ HCV-RNA基因分型：确定HCV-RNA基因性质
• 组织培养分离出的病原体对诊断非常有用
毒之间的最佳状态 • 主要基因起主要地位，是由于主要基因复制率较
高之故 • 免疫靶基因不单是主要基因，而是基因的复合体
RNA病毒基因变异生物学作用
• 免疫逃避作用，导致病毒的持续感染 • 耐药病毒株的产生 • 疫苗失败 • 减毒活疫苗恢复致病性等 • HCV-RNA基因复杂程度与相关肝病进展有密切关
• 有些病毒存在着第二高变区(HVR2)，即在 E2/NS1区域近3’-末端处—21nt
基因型(Genotype)
• Okamoto--1,2,3,4型
• Enomoto--PT,K1,K2a,K2b型 • Simmonods--1a,1b,2a,2b型
l HCV至少存在6个基因型 l HCV亚型已超过50个，最常见的为1a,1b,2a,2b亚型1,2,3
筛选试验——HCV抗体测定
第一代HCV抗体
• 抗体检测用酶免疫测定法（EIA）------优点 多，方便、重复性好、成本低
• EIA-1是用HCV-NS4基因段重组抗原，命名为 C100-3--------敏感性及特异性均不理想
• 仅80%患者HCV抗体阳性 • 假阳性很高
筛选试验——HCV抗体测定
型及其亚型分布世界各地： 4型主要分布在非洲，是扎伊尔及埃及的主要基因型
l 5型是南非的主要基因型 l 6型及其亚型主要发现在亚洲
HCV慢性感染与体液免疫
• HCV不能诱导保护性免疫
• HCV感染后恢复期的黑猩猩不能防止8种同种 或异种HCV再感染
• HCV慢性感染的人或黑猩猩可多次发生急性丙 肝或异种HCV重叠感染
HCV-RNA定量试验
• 估价血清中HCV-RNA水平 • 反映感染机体的病毒复制率及清除率 • 在未治疗的慢性丙肝机体内病毒负荷相对稳定 • 目前有二种方法可定量HCV-RNA水平，即靶扩
增技术如定量PCR方法及信号扩增技术如支链 DNA法
HCV基因型测定
• 检测基因型方法一般分为二类 ：
⑴ 检测HCV基因的点突变的筛选试验
丙型肝NC
3010-3033aa
3’NC
341nt C E1 E2/N P7 NS2 NS3 NS4A B NS5A B S1
27.43nt
(A)nor )n
衣壳 高变区 包膜
蛋白
蛋白
疏水膜 解旋酶 疏水 膜蛋白 蛋白
HCV基因结构模拟图
RNA多聚酶
l 3’NCR---高度变异、Poly(u)、Poly(u/c)及98个 • 碱基高度保守区组成 l 5’NCR--340核苷酸组成，形成一个环柄杆结 • 构(stem-loop)
筛选试验——HCV抗体测定
第三代HCV抗体测定
• EIA-3含有重建核心和NS3抗原及NS5抗原
• 敏感性有增加(97%) • 血清阳转时间为2-3周
HCV抗体测定的其他试验
第二代RIBA-----抗HCV补充性试验 • 内含抗原与EIA-2相同 • 但以免疫印迹形式 • 结果可解释为阳性、可疑及阴性 • 高危人群中的抗HCV阳性标本，没有必要行补
第二代HCV抗体
• EIA-2(1992)试验含有NS4、核心及NS3基因抗
原-----代表了多种抗原 • 敏感性及特异性有改善 • HCV血清阳转平均窗口期（window periods）
明显缩短 • 血清阳转的平均时间 EIA-２----１０周左右
EIA-1------16周 • 阳性率为95%
l两端中间为开放读框(ORF)--9000个核苷酸 l E1编码的糖蛋白可能不是单一蛋白，而有二 • 种或更多 l 3’端的ORF编码的非结构蛋白，至少包括6种 • 蛋白，包括蛋白酶、解旋酶、多种RNA聚合 • 酶及调节肽等
l 4a基因产生的调节肽具有多种功能
HCV基因结构的异质性
• E1区域，又称第一高变区(Hypervariable region ,HVR1)—90nt