条件性骨细胞Tsc1基因敲除小鼠的初步研究

广东医学 2019 年 9 月第40 卷第 18 期 Guangdong Medical Journal Sep. 2019, Vol. 40, No. 18

・2563・

基石出硏究

条件性骨细胞Tscl 基因敲除小鼠的初步研究：

胡乐，刘文张武镐张月

南方医科大学基础医学院（广东广州510515）

【摘要】目的 构建骨细胞九cZ 基因条件性敲除小鼠，并进行表型鉴定，为进一步研究TSC1在骨细胞 中飽作用奠定基础。方法 利用Tscl"和DMP\-Cre *转基因小鼠进行饲养和杂交;对繁殖产生的第1代

小鼠进行基因型鉴定,获得Tscl 问-DMPl-Cre * ,待其成年后，同Tsc 严皿小鼠合笼，得到第2代小鼠，通过 PCR 鉴定出基因型为Tscl" DMP1 - Cre * ；此为本实验所需要构建模型小鼠。应用H-E 染色、光学显微

镜观察10周龄小鼠骨细胞的改变。结果2种转基因小鼠繁殖产生的第2代小鼠基因型符合孟德尔遗传定

律，交配后获得Tsc 严皿DMP1 - Cre *小鼠。TscZ 基因通过Cre/loxP 系统被成功敲除。结论 该方法成功构

建可以在骨细胞条件性敲除九“基因的小鼠，并进行敲除后鉴定。

*国家自然科学基金青年科学基金资助（编号:31600964）

△通信作者。张武镐，E-mail ： smuzhangwj @ qq. com ；刘文，E- mail : 1402241007 @ qq . com

【关键词】TSC1； Cre/loxP 系统；条件性敲除；骨细胞

【中图分类号】R394.3；Q812

【文献标志码】A

DOI ： 10.13820/j. cnki. gdyx. 20186808

A preliminary study of conditional osteocyte Tscl knockout mice. HU Le , LIU Wen , ZHANG Wu - ju, ZHANG

Yue. School of Basic Medical Sciences , Southern Medical University , Guangzhou 510515 , Guangdong , China

Corresponding author : ZHANG Wu -ju, E - mail : smu^iangivj@ qq. com ； LIU Wen, E - mail : 1402241007@ qq. com

[Abstract ] Objective To generate and phenotypic identify osteocyte Tscl conditional knockout mice, and to lay a

foundation for further study on the role of TSC1 in osteocyte. Methods

心小"°〃处 and DMP1 - Cre * transgenic mice

were bred and hybridized. The genotypic identification of the first generation offspring was performed , and Tscl^ox/ ~ DMP1 -

Cre + mice were acquired. After crossing with Tscl fl ，＞x/^ox mice, mice with Tscl^7^ DMP1 一 Cre + were identified using PCR. The morphologic changes in osteocyte of Tscl Jlox/flox DM P l - Cre + mice and wild type ( WT) mice aged 10 weeks

were observed using H-E staining and optical microscope. Results The genotype of the second generation offspring re ­produced by two kinds of transgenic mice was in accordance with Mendel's law of inheritance , and Tscl^^ DMP1 一 Cre + mice were generated. Tscl gene was successfully knocked out by using Cre/loxp recombination system. Conclusion

Homozygous mice with osteocyte Tscl gene conditional knockout are successfully generated , which serve as ideal model for functional study of TSC1.

[Key words ] TSC1 ； Cre/loxP recombination system ； conditional knockout ； osteocyte

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mechanistic tar ­get of rapamycin , mTOR ）是一种至少由2个明显的 多蛋白复合体组成的高度保守的丝氨酸-苏氨酸类

激酶，是调节细胞生长、代谢、增殖、凋亡的重要因

素⑴。结节硬化症基因1（ tuberous sclerosis com-

plex,TscZ ）突变会造成结节硬化症（TSC ）,这是一种

严重的常染色体显性遗传病，因此Tscl 基因的功能

受到了广泛的关注[2-3]o TSC1是mTOR 的上游抑 制因子⑷。有研究表明，7WZ 基因缺失，会导致多 种严重疾病，且不同模式动物上不同细胞缺失，会导 致不同疾病。小鼠乳腺上皮Tscl 基因的缺失会抑

制乳腺导管发育⑸，小鼠软骨细胞Tscl 基因缺失会

导致小鼠软骨发育不良、体长缩短⑷。TscZ 基因敲

除显著促进猪颗粒细胞增殖，抑制细胞凋亡切。小 鼠Tscl 基因缺失导致耳蜗毛细胞早发性死亡，从而 加速听力丧失，其耳蜗表现出氧化应激和抗氧化防

御功能受损的特点⑻。但TSC1在骨细胞中的作用

很少被了解。为了进一步了解TSC1的作用，本课 题组从2015年2月至2018年8月，利用Cre/loxP 位点特异性重组酶系统，构建条件性骨细胞Tscl 基 因敲除小鼠,为后续研究提供动物模型。

1材料与方法

1.1材料

1. 1. 1 实验动物 Tsc 严曲（品系号：Tscl < tmlDjk >/j - 005680）小鼠购自美国Jackson 实验

莹,DMP1 - Cre + （品系号：Tg （ Dmpl - cre ） ljqfe/