介绍一种PAS与免疫组化双重染色技术2

介绍一种P AS 与免疫组化双重染色技术

陈水平,郑　伟,肖志芸

关键词:胃肿瘤;免疫组织化学;双重染色中图分类号:R 73512;R 44618 文献标识码:B 文章编号:1001-7399(2006)04-0497-01

收稿日期:2005-09-06　修回日期:2005-11-09作者单位:福建医科大学病理学系,福州　350004作者简介:陈水平(1970-),女,实验师

用过碘酸-无色品红法与免疫组化SP 法双重染色可同时显示胃肿瘤中癌细胞成分及组织中腺体所分泌的黏液成分,能更好的进行鉴别诊断。

1　材料与方法

1.1　材料　胃癌标本26例,经10%福尔马林固定,常规脱

水、透明、切片石蜡包埋,切片厚3～4μm 。

1.2　试剂　(1)015%过碘酸水溶液:过碘酸015g,蒸馏水

加至100m l 。(2)无色品红液:碱性品红1g,蒸馏水200m l,

1mol/L 盐酸20m l,偏重亚硫酸115g,活性碳115g 。(3)免

疫组化试剂:一抗(鼠抗人)CK 、生物素标记的二抗与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物色素混合液(SP )试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3　方法　,先按SP 法进行免疫组化

染色。(1)高温修复(柠檬酸)2m in,冷却,P BS 浸洗3m in ×3次。(2)3%的H 2O 237℃孵育10m in,P BS 浸洗3m in ×3次。(3)正常羊血清37℃孵育10m in 。(4)滴加一抗

37℃孵育60m in,P BS 浸洗5m in ×3次。(5)滴加二抗37℃孵育10m in,P BS 浸洗5m in ×3次。(6)滴加三抗37℃孵育10m in,P BS 浸洗5m in ×3次。DAB 显色5～10m in,自来水冲洗3m in 。接着按过碘酸-无色品红法染中性

黏液:015%过碘酸水溶液氧化10m in,流水冲洗2m in,入无色品红液于暗处加盖作用10～20m in,流水冲洗2m in,May 2

er 苏木精复染2m in,水洗,1%盐酸分化,流水冲洗10m in 。95%乙醇脱水,中性树胶封固。2　结果

胃腺癌细胞胞质CK 阳性,呈棕黄色;中性黏液呈紫红色,胞核呈蓝色(图1)。

3　讨论

P AS 染色可鉴别胃黏液腺癌与未分化癌,前者呈紫红色

阳性反应,后者为阴性;在胃癌黏膜表面上皮和癌组织内

P AS 均呈阳性,也可证明癌细胞是否浸润间质[1]

。

免疫组化

图1　胃腺癌组织,癌细胞胞质CK 呈阳性,棕黄色;中性黏液为紫红色阳性,过碘酸-无色品红法+SP 法

染色中CK 主要标记胃肠道上皮,用于诊断胃肠道腺癌。胃肿瘤鉴别诊断往往既要P AS 染色又要CK 染色,而后2张进行对照鉴别。我们在同一张胃癌切片上先按SP 法进行CK 的免疫组化染色后,再进行P AS 特殊染色,则在同一张切片上显示两种不同的阳性成分,其阳性表达无异于连续切片中单独做P AS 特殊染色和单独按SP 法进行CK 的免疫组化染色的染色结果,这样的一张显示两种不同阳性成分的切片能更好地在镜下对胃癌进行鉴别诊断。

免疫组化染色过程中,高温修复应在高压锅出蒸汽2

m in 后移开热源,放置2～3m in 后迅速冷却。如果修复时间

过长,则易出现非特异性染色。一抗的孵育条件37℃孵育

60m in,温度不可过高或时间过长。DAB 显色时间应以显微

镜下观察阳性细胞显色为准,显色太久易造成切片底色过深,影响而后进行特殊染色效果,不利于诊断。

过碘酸-无色品红法能很好显示糖原及中性黏液,不过,我们稍进行改良,不经015%偏重亚硫酸钠处理及天青石蓝液、橙黄G 液染色,这样染色步骤简便且对比清晰。

有关双重染色方法已有文献报道[2]。本实验结果表明:经免疫组化的抗原修复、抗原抗体反应、DAB 显色等过程后再进行P AS 特殊染色,并不影响组织内黏液成分的染色结果。经P AS 特殊染色续染后,也不影响免疫组化染色效果,且对比更好,此方法可用于胃癌的鉴别诊断。参考文献:

[1]　凌启波,主编.实用病理特殊染色和组织化学技术[M ].广

州:广东高等教育出版社,1989:72-73.

[2]　杜　娟,钟延丰,杨京平,等.免疫组织化学与特染结合双重染

色方法在神经病变诊断中的应用[J ].中华病理学杂志,

1997,26:314.

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794・临床与实验病理学杂志　J C lin Exp Pathol 2006Aug;22(4

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