志贺氏菌的检验

（三）结果报告 综合生化试验结果判定菌型并作出报告
三、志贺氏 菌的检验
GB/T4789.5GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
（一）实验内容 样品处理→→选择性增菌 选择性增菌→→选择性平板分 样品处理 选择性增菌 选择性平板分 生化学试验→→结果报告 离→→生化学试验 生化学试验 结果报告
第一次 样品处理和增菌培养
预先准备并灭菌的器材 规格名称 • 1、18×180mm试管 • • • • 数量 6支
麦康凯琼脂平板
菌落为粉红色，半透明的， 菌落为粉红色，半透明的， 可能为志贺氏菌
EMB平板照片及原理 平板照片及原理
菌落为无色半透明状， 菌落为无色半透明状， 可能为志贺氏菌
大肠杆菌
第三次 初步生化试验
（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或 、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板 上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体 各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经 36℃培养18～24h，分别观察结果。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福 结果 氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力
第四天、 第四天、进一步的 生化试验
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气 (福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动 力的菌株，可做进一步的生化试验和生化 分型实验。
（一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和 鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以 及水杨苷和七叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
HE平板原理及反应 平板原理及反应 发酵乳糖的肠杆菌
不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色 可能就是志贺氏菌
SS平板原理及反应 平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能 是志贺氏菌了 大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒 • （一）传染源 • 食物、病人、粪便、苍蝇等 食物、病人、粪便、
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素： 致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、 侵袭力、菌体内毒素、外毒素 临床症状 A、急性细菌性痢疾： 、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型
（三）生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏 、发酵葡萄糖，产酸不产气， 菌外，均不发酵乳糖。 菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、 不产生 2S， 不分解尿素 ， V-P试验阴性 ， 试验阴性， 、 不产生H ， 不分解尿素， 试验阴性 不能利用柠檬酸盐。 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性，靛基质不定。 、甲基红阳性，靛基质不定。 5、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、 、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、 鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。 鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。
第二次 接种选择性平板进行分离培养
（一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂 琼脂 平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或 平板 EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 结果 酵乳糖的菌落

2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶 酌情 7 、不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 酌情
（一）样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌 液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min。 （二）增菌培养 放于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微 混浊时即应中止培养。
葡萄糖半固体原理及结果。 葡萄糖半固体原理及结果 三糖铁（ 三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 ）
2－志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌 － － －
1. 铜绿假单胞菌 2. 志贺氏菌 3. 枯草芽孢杆菌
在志贺氏菌检验中可弃去的培养物： 在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：
（1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 ） 表面上呈现蔓延生长的培养物 发酵乳糖、 （2）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物 ） 发酵乳糖 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长 ）不分解葡萄糖， 的培养物。 的培养物。 （4）产气的培养物 ） （5）有动力的培养物 ） （6）产H2S的培养物 ） 的培养物
志贺氏菌的检验
一、生物学特性 （一）形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、 革兰氏阴性短杆菌、无荚 无芽胞，无鞭毛， 膜，无芽胞，无鞭毛， 有菌毛 2~3um*0.5~0.7um
（二）培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度 ℃，PH6。 、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃ 。 4~7.8 2、 在普通琼脂和 平板上 ， 能形成圆形 、 平板上， 、 在普通琼脂和SS平板上 能形成圆形、 微凸、 光滑湿润、 无色半透明、 边缘整齐、 微凸 、 光滑湿润 、 无色半透明 、 边缘整齐 、 在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙 、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明， 而扁平， 平板上可迟发酵乳糖， 而扁平 ， 在 SS平板上可迟发酵乳糖， 菌落 平板上可迟发酵乳糖 呈玫瑰红色。 呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
（二）生化分群试验
接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到： 5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质 试验。 见P167：根据不同生化反应结果，可分为A群（痢 疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍 氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。
各项生化试验现象
• 葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者 不生长或生长极微小的菌落。 • 西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色 转为蓝色，阴性者不生长。 • 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。 • pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。 • KCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。 • 水杨苷和七叶苷：阳性者产气。
志贺氏菌在TSI生长的结果（现象） 志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： TSI生长的结果 斜面产碱仍为红色或粉红色； （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； 底层产酸不产气，变黄色； 不产H 不出现黑色。 （3）不产H2S，不出现黑色。 志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长： 志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生 无动力。 长，无动力。