动物细胞培养和核移植技术ppt
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人教版选修三生物课件：2.2.1动物细胞培养和核移植
有机物：糖、氨基酸、促生长因子
(2)营养
动物血清、血浆：P补46充旁培栏养题液及中小没有知完识全搞清
楚的补成充分合成培养基中所缺乏的营养物质及激素等。
36.5±0.5℃
细胞代谢
7.2~7.4
培养液的PH7
5.应用: 连线表示动物细胞培养的应用及实例
可根据变异细胞占细胞总数的比 例来判断毒性的大小。
3、体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动 物进行了100%的复制吗？为什么？
不是。克隆动物的DNA绝大部分来自供体细胞核，但还有少 量DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞的细胞质。此外， 生物的性状还受环境的影响。
17Biblioteka 思考题1、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操 理由：______________________________ 作过程的不同点？ 胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性较容易。
5胚)体胎细细胞胞是核分移化使植程技度细术低得，胞到恢的复克从其隆全牛瓶能从性生壁较殖容胰方上易式。蛋上脱看白属落于酶下来，便于分装后继续培养。
2、克隆动物遗传物质的来源？
10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型。
归纳：克隆动物的基因型、性别、主要性状、染色体组成均与供核个体相同。
10~50 5)体细胞核移植技术得到的克隆牛从生殖方式上看属于
2.相关概念: (1)细胞贴壁:细胞悬液中分散的细胞_贴__附__在__瓶__壁__上。 (2)细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到_表__面__相__互__接__触__时, 细胞_停__止__分__裂__增__殖__的现象。 (3)原代培养:指动物组织消化后的_初__次__培__养__。 (4)传代培养:贴满瓶壁的细胞,出现_接__触__抑__制__后,需要重新用 _胰__蛋__白__酶__等处理,然后分瓶继续培养,让细胞_继__续__增__殖__的培 养过程。
动物细胞培养和核移植技术课件
过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
项目
植物组织培养
动物细胞培养
结果 获得新个体或细胞产物
大量产生细胞或细胞 产物
用途
①快速繁殖名贵花卉和果 树；②培养无病毒植株、 转基因植物；③大规模生 产细胞产物，如药物、食 品添加剂、香料、色素等
①生产蛋白质制品， 如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等；②检 测有毒物质；
(3)温度和
温度：哺乳动物多以 pHpH： 7.2～7.4
36.5±0.5℃
为宜
(4)气体环境COO2 ：2：细维胞持代培谢养所液必的需p的H
4．应用[连线]
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1．动物核移植的概念和类型 (1)概念： ①供体：动物一个细胞的细胞核； ②受体：去掉细胞核的 卵母细胞 ； ③结果：形成重组胚胎，发育成 动物个体 。 (2)类型：哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细 胞核移植。
2.如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： (1)容器 A 中放置的是动物器官或组织，它一般 取自________________。 (2)容器 A 中的动物器官或组织首先要进行的处 理是________，然后用__________酶处理，这 是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _________________________________________________。
胞质内的遗传物质来自受体卵母细胞，其次生物的性状还
受环境的影响，因此，克隆动物并不是对提供体细胞的动
物进行完全复制。
4.右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述
不．正确的是
(D )
A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的
体细胞
B．个体 2 的遗传性状与提供 c 细胞的羊
动物细胞培养和核移植技术(第1课时)
动物克隆
利用核移植技术可以生产出克隆动物，为科学研究、动物育种和濒危动物保护等领域提供支持。
转基因动物
利用核移植技术可以生产出转基因动物，用于药物研发、生物反应器生产和人类疾病模型等方面。
人类疾病研究
通过核移植技术可以生产出人类疾病模型动物，为研究人类疾病的发生、发展和治疗提供有力支持。
基因编辑
利用核移植技术结合基因编辑技术，可以对动物基因进行精确的编辑和改造，为基因治疗和遗传疾病研究等领域提供新的手段。
细胞分离与传代
血球计数板法
流式细胞仪法
MTT法
Trypan blue染色法
细胞计数与活力检测
利用血球计数板对细胞进行计数，通过显微镜观察计数板上的细胞数目。
利用流式细胞仪对细胞进行计数和活力检测，可以快速准确地检测大量细胞。
通过检测细胞代谢产物来评估细胞活力，常用的试剂是MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）。
核移植技术的展望
02
应用于再生医学和疾病治疗
核移植技术有望在再生医学和疾病治疗领域发挥重要作用。例如，通过将患者的细胞核移植到去核的卵母细胞中，可以生成具有患者特异性的人工胚胎干细胞，用于治疗各种遗传性疾病和罕见病。此外，核移植技术还可以用于生产转基因动物、制备细胞疗法等。
03
加强伦理和法规监管
随着核移植技术的不断发展和应用，伦理和法规监管也需要不断加强和完善。这可能涉及到制定更加严格的法律法规和技术标准，以确保技术的合理和合法应用，并保护人类的生命健康和伦理道德。
动物细胞培养的定义
动物细胞培养技术广泛应用于生物学、医学、农业和工业等领域，用于研究细胞生物学、药物筛选、疫苗研制等方面。
动物细胞工程(课件)-高二生物人教版(2019)选择性必修3
已成功的动物细胞融合实例：
生物种类 酵母菌—鸡 人—胡萝卜 人—小鼠
细胞来源
成功年代
原生质体—血红细胞
1975年
腹水癌细胞—原生质体
1976年
纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年
一、动物细胞融合
概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞 的过程。
结果： 形成单核的杂交细胞 原理： 细胞膜的流动性
4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
维持培养液的pH
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
培养结果 培养目的
植物组织培养
细胞的全能性
固体培养基
蔗糖 植物激素
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基
葡萄糖 动物血清
细胞株、细胞系 获得细胞或细胞
2、保护濒危物种；
3、医药卫生领域生产 医用蛋白质及组织器官 的移植；
4、了解胚胎发育和衰 老过程；追踪研究疾病 的发展过程和治疗疾病；
体细胞核移植技术存在的问题：
1、成功率比较低（平均不到10%）； 2、大多存在健康问题； 3、克隆动物食品安全问题。
此外，体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体 属于无性繁殖，产生的后代无更大变异性，而环境是 多变的，易造成该个体适应能力降低，易被淘汰。
细胞群
产 生
化学性质单一、 特异性强的抗体 （单克隆抗体）
二、单克隆抗体
1975年，两位科学家创 造性地解决了这个问题
1984年两人因此获得诺 贝尔生理学﹠医学奖
科勒
米尔斯坦
一个(免疫过的)B细胞 一个骨髓瘤细胞
人教版教学课件动物细胞培养和核移植技术2
2.体细胞核移植技术的应用前景
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物
课堂小结
动物细胞培养过程 两个过程
核移植技术
自学达标练习
1. 2007年高考．（8分）[生物-现代生物科技专题]
继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生 物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学 家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以 合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答： （1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常 显微注射 。 用方法是 （2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入 。 受精卵 中， 原因是 受精卵具有全能性， 可使外源基因在相应 组织细胞表达
3.现在对于克隆人的观点各不相同,你 支持克隆人吗?说出你的看法.
课堂作业
完成自主学习丛练习书2.2.1的所 有 利用网络查找有关动物细胞工程 前景的资料
根据动物细胞核仍具有全能性 的特点,怎样将动物细胞的全能性 表达?
利用动物体细胞核移植技术
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物
资料分析
1.烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康 皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病 人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一 想如何来治疗该病人？
取该患者的皮肤进 行细胞培养,获得足 量的细胞后再移植
2.“人耳鼠”再出风头
人耳鼠
2001年，一只特别的活老鼠在 北京引起轰动——这是有着一对红 眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的 小白鼠。值得一提的是，这只小白 鼠的背上，竟长着一只几乎与身子 一般大小的“人耳”。这只老鼠背 上的“人耳”是由上海市第九人民 医院副院长、整复外科主任曹谊林 教授利用组织工程技术复制出来的。 在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20 万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。
动物细胞培养和核移植技术-课件
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易 于帖附。
强调三：接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
P46讨 论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
2.2 动物细胞工程
动物细胞工程常用的技术
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易 于帖附。
强调三：接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
P46讨 论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
2.2 动物细胞工程
动物细胞工程常用的技术
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术（第一课时）课件课件
4.动物细胞培养的条件
（1）无菌无毒 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液 的 环 境：中换添培加养抗液以生清素除防代止谢培产养物过，程防中止污对染培；养定细期胞更
造成危害。
（2）营
养： 液无机盐、微量元素）等； 通常还需加入血浆、血清等天然成分。
动物细胞培养材料？
6.简述动物细胞培养的操作过程。
一、动物细胞培养
1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出
相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,
放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和 增殖。
2、原理：细胞增殖
3、过程
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶）
单个细胞
加培养液
■当贴壁细胞分裂生长到
表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这 称为细胞的接触抑制。
因此，瓶壁上的细胞层数 是一层（或单层）！
（3）.原代培养：动物组织消化后的初次培养（分瓶之前）
（4）.传代培养：贴满瓶壁的细胞要重新用胰蛋白酶处理，
然后分瓶继续培养，这个过程称传代培养（分瓶培
养的过程）。 （5）.细胞传代培养代数有什么特点？
【问题导学】
同学们阅读P44-46内容，思考以下问题 1. 什么是动物细胞培养？该技术实施的原理是什么？ 2. 为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散
？如何处理？
3.用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物 质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？
4.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 5.为什么要选择动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做
点，能无限增殖
★ 板书设计
一、动物细胞培养
1.概念：
2.原理：
3.过程：
动物细胞培养和核移植技术PPT
2．2 动物细胞工程
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
课标领航
1．简述动物的细胞培养及条件。
2．举例论证动物细胞培养技术的应用及意义。
3．简述动物核移植的过程及意义。 【重点】 程。 【难点】 原代培养和传代培养的概念。 动物细胞培养的过程；动物核移植的过
情景导航 克隆羊多利的诞生，为动物细胞工程的发
基础自主梳理
核心要点突破
知能过关演练
基础自主梳理
一、动物细胞培养的概念 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织， 单个 细胞，然后，放在适宜的培养基 将它分散成______ 中，让这些细胞生长和增殖。
二、动物细胞培养的过程
1．流程图：
原代 培 动物组织― ― →单个细胞―→细胞悬液―→_____
1．过程
2．用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内 的细胞，目的是为了保证细胞正常的遗传基础。
减数第 3．接受细胞核的卵母细胞必须体外培养到_______ 二次分裂中 期，原因是此期细胞核的位置靠近第 ____________
一极体，用微型吸管可将二者一并吸出，并且此时
使细胞核的全能性表现出来的物质已近成熟。 七、体细胞核移植技术的应用前景 遗传改良 进程，促 1．在畜牧生产中，可加速家畜_________ 进优良畜群繁育。
制，细胞在培养瓶壁上只能形成单层细胞，A错；
克隆培养法中细胞都是由一个细胞经过有丝分裂而
2．培养过程
动物细胞培养的过程如下所示：
特别提醒 用胰蛋白酶处理组织块，可使细胞分散开，这样做 的目的是使细胞与组织液充分接触，这也说明了细
胞间的主要物质是蛋白质，但是由于细胞膜的主要
成分之一也是蛋白质，因此要控制好处理的时间， 不能太长，否则会损伤细胞。由于多数动物细胞培 养的适宜pH为7.2～7.4，因此不能使用胃蛋白酶分 散细胞。
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
课标领航
1．简述动物的细胞培养及条件。
2．举例论证动物细胞培养技术的应用及意义。
3．简述动物核移植的过程及意义。 【重点】 程。 【难点】 原代培养和传代培养的概念。 动物细胞培养的过程；动物核移植的过
情景导航 克隆羊多利的诞生，为动物细胞工程的发
基础自主梳理
核心要点突破
知能过关演练
基础自主梳理
一、动物细胞培养的概念 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织， 单个 细胞，然后，放在适宜的培养基 将它分散成______ 中，让这些细胞生长和增殖。
二、动物细胞培养的过程
1．流程图：
原代 培 动物组织― ― →单个细胞―→细胞悬液―→_____
1．过程
2．用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内 的细胞，目的是为了保证细胞正常的遗传基础。
减数第 3．接受细胞核的卵母细胞必须体外培养到_______ 二次分裂中 期，原因是此期细胞核的位置靠近第 ____________
一极体，用微型吸管可将二者一并吸出，并且此时
使细胞核的全能性表现出来的物质已近成熟。 七、体细胞核移植技术的应用前景 遗传改良 进程，促 1．在畜牧生产中，可加速家畜_________ 进优良畜群繁育。
制，细胞在培养瓶壁上只能形成单层细胞，A错；
克隆培养法中细胞都是由一个细胞经过有丝分裂而
2．培养过程
动物细胞培养的过程如下所示：
特别提醒 用胰蛋白酶处理组织块，可使细胞分散开，这样做 的目的是使细胞与组织液充分接触，这也说明了细
胞间的主要物质是蛋白质，但是由于细胞膜的主要
成分之一也是蛋白质，因此要控制好处理的时间， 不能太长，否则会损伤细胞。由于多数动物细胞培 养的适宜pH为7.2～7.4，因此不能使用胃蛋白酶分 散细胞。
【课件】动物细胞培养和核移植技术课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选修3
6．我国科学家利用基因编辑技术获得一只彻底敲除BMAL1基因（控制 生物节律的核心基因之一）的猕猴甲，发现其出现睡眠紊乱的症状。将
该猕猴的体细胞核植入去核的卵母细胞中得到重组细胞，然后培育重组
A 细胞得到了五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴。相关叙述不正确的是（ ）
A．五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴DNA完全相同 B．克隆猴的胚胎发育过程中会发生细胞凋亡 C．重组细胞需要物理或化学方法激活，使其完成细胞分裂和发育过程 D．通过上述技术可批量制备疾病动物模型用于科学研究
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
传代培养
50代细胞
无限传代
思考：
（1）为什么要将组织块分散成单个细胞培养？ 分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代
谢废物，利于继续培养。
（2）动物细胞培养能否最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体。
思考：
（3）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 胰蛋白酶除了消化细胞间的蛋白外，长时间的作
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分 有 _动__物__血__清_________等。在此瓶中培养一段
时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到1这0 时的培养称为__ 。 原代培养
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 胰蛋白酶 处理，然后配置成 细胞悬液 ，再分
装。
学习活动三：
③若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分
析其原因是_卵___母__细__胞___的__细___胞__质___中__的___遗__传___物__质___会__对___克__隆__动___物__的___性__状___产__生__影_。响 ④与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得 也证明了__动__物__已__分__化__体_细__胞__的__细__胞__核__具__有__全__能__性_____。
课件3：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
10代细胞
遗传物质 细胞株 未改变
动物细胞培遗养传不物能质 细胞系 最终培养成已生改物变体
50代细胞 无限传代
传代培养
一、动物细胞培养过程
7、什么是原代培养、 传代培养？为什么要进 行传代培养？
原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养
传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养
进行传代培养的原因： 接触抑制
细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从 瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分 离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这 个过程称传代培养
培养的细胞→细胞分散→继续培养
细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，
能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。
细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带
6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出 生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的 组织细胞 D
A.容易产生各种变异
B.具有更强的全能性
C.取材十分方便
D.分裂增殖的能力强
谢谢
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4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间
的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因 此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
一、动物细胞培养过程
5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组 织做动物细胞培养材料？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞 分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。
巩固练习：
1.用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述
正确的是 C
A．都需用培养箱
B．都须用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全能性
动物细胞培养和核移植技术课件
(3)如何区分原代培养与传代培养？ 答案 ①原代培养：通常将动物组织消化后的初次培养称 为原代培养。 ②传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处 理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖，即为传代培养。
2．条件 (1)无菌、无毒的环境：培养液应进行_无__菌___处理。 (2)营养：合成培养基的成分为糖、__氨__基__酸___、促生长 因子、无机盐、微量元素、_血__清___、血浆等。 (3)温度和 pH：适宜的温度为__3_6_._5_±_0_.5__℃_____；pH 为 _7_._2_～__7_._4___。 (4)气体环境：_空__气___ 95%和 CO25%的混合气体。
【归纳提炼】 1．不同层次的克隆
(1)分子水平：如DNA复制。 (2)细胞水平：动物细胞培养。 (3)个体水平：“多利”羊的诞生。 2．动物细胞核移植的条件及结果 (1)核移植一般选择去核的卵母细胞，因为卵母细胞体 积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营 养条件。一般不选择生殖细胞作为供核细胞，因为生殖 细胞与正常体细胞相比，遗传物质减半。
【归纳提炼】 动物细胞培养与动物组织培养的比较
【活学活用】
1．判断下面关于动物细胞培养的叙述的正误。
(1)动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性
()
(2)需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理 ( )
(3)原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制的细胞
()
(4)恒温条件下，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而
5．应用 (1)加速家畜_遗__传___改良进程，促进优良畜群繁育。 (2)增加濒危动物数量，保护_濒__危___物种。 (3)生产医用蛋白。 (4)作为_异__种__移植的供体。 (5)用于组织器官的移植。
课件9：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
ห้องสมุดไป่ตู้2. 原理
细胞增殖
3. 材料
用培养的动物细胞与组织大多数取自动物胚胎 或出生后不久的幼龄动物的器官或组织。
4.动物细胞培养的过程
（1）原代培养 （2）传代培养
（1）原代培养
胚胎或幼龄动物器官组织
定义：人们通常 将动物组织消化 后的初次培养称 为原代培养。
取出组织
剪碎
胰蛋白酶处理
单个细胞
原代培养
。
（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要 注意选择抗生素的 种类和剂量 ，以保证抗生素对肝
脏无害。
08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到 细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这种 现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的细胞 层数是 单层 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理，可用的酶是 胰蛋白酶 。
10代细胞
传
少数
代 培
继续传代培养少部分细胞获得不死性，
40-50代细胞
养
细胞突变，遗传物质已经改变，等同于
少数
癌细胞。
无限传代
5.动物细胞培养条件
（1）无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
（2）营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
（3）温度和PH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4
细胞悬液
转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细 胞。有接触抑制现象)。
图示
强调一：细胞贴壁
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
细胞增殖
3. 材料
用培养的动物细胞与组织大多数取自动物胚胎 或出生后不久的幼龄动物的器官或组织。
4.动物细胞培养的过程
（1）原代培养 （2）传代培养
（1）原代培养
胚胎或幼龄动物器官组织
定义：人们通常 将动物组织消化 后的初次培养称 为原代培养。
取出组织
剪碎
胰蛋白酶处理
单个细胞
原代培养
。
（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要 注意选择抗生素的 种类和剂量 ，以保证抗生素对肝
脏无害。
08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到 细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这种 现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的细胞 层数是 单层 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理，可用的酶是 胰蛋白酶 。
10代细胞
传
少数
代 培
继续传代培养少部分细胞获得不死性，
40-50代细胞
养
细胞突变，遗传物质已经改变，等同于
少数
癌细胞。
无限传代
5.动物细胞培养条件
（1）无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
（2）营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
（3）温度和PH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4
细胞悬液
转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细 胞。有接触抑制现象)。
图示
强调一：细胞贴壁
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
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1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵 母细胞 细胞比较大，易操作 2、原因？ 细胞质中含有使体细胞核全能性表达
出来的物质
3、克隆过程运用的技术手段？ 动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植 4、多利的大部分性状与谁一样？
白面绵羊
5、结论？高度分化的体细胞核具有全能性
体细胞核移植技术的应用前景
原 代 培 养
细 胞 贴 壁
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
传代培养
动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血
浆等。）
3、温度和PH
补充合成培养基
36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。中缺乏的物质
体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性困难
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 卵细胞 莉
细胞拆合技术
乳腺细胞
羊
细胞质
细胞核
的
培 育
细胞核移植
融合后的卵细胞卵裂早胚胎胚胎移植过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
多莉羊
体细 卵母 胞取 细胞 核 去核
MⅡ期（减Ⅱ中） 的卵母细胞
电激 使两细胞融合
或核移植
重组细胞
重组胚胎 新个体
显微操作仪
显微操作示意图
（2）核供体细胞的准备
在核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整 的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组；
其次，供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下， 产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一 样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全 过程。
供体细胞主要有两大类：胚胎卵裂球、体细胞、胚 胎干细胞和胎儿成纤维细胞。
（3）细胞核移植
常用的核移植方法有两种，即胞质内注射和透 明带下注射。胞质内注射是用一个外径5～8μm 的注 核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的方法。 透明带下注射则是把供体细胞核注射在透明带与卵母 细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融 合。
2.2 动物细胞工程
2.2.1 动物细胞培养和核 移植技术
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养的概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相
关的组织，将它离散成单个细胞。然后,放在 适宜的培养基中，让这些细胞在体外生长和增 殖。
原理：细胞增殖
3.动物细胞培养过程：
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶 机械
加培养液
单个细胞
制成
细胞 悬液
剪碎
部分细胞“癌 变”，无限传代
原 代 培 养
细 胞 贴 壁
细胞
50代细胞 剥离、分瓶
10代 细胞
传代培养
4 细胞培养基本器械和要求
培养器皿
3.动物细胞培养过程：
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶 机械
加培养液
单个细胞
制成
细胞 悬液
剪碎
部分细胞“癌 变”，无限传代
葡萄糖、动 物血清
细胞群体
获得细胞 或细胞产物
动物细胞培养技术应用
a、生产生物制品 b、与基因工程相结合 c、有毒物质的检测
1. 什么是克隆？
克隆就是无性繁殖，具体地说，是指 一个共 同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群 遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。 a.分子水平上： 一般指DNA克隆。
b.细胞水平上： 指一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。
c.个体水平上： 指基因型完全相同的两个或一个群体。
动物细胞核移植技术和克隆动物
动物细胞核移植：
是将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞 核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的 胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 分类：
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液 原代培养
遗传物质 未改变
10代细胞 50代细胞 传代培养
遗传物质 已改变
无限传代
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
原理
细胞的全能性
培养基性质
固体培养基
培养基特有成分 培养结果
蔗糖、植物 激素
植物体
培养目的
快速繁殖、培育 无病毒植株等
动物细胞培养
细胞增殖 液体培养基
(2)成块组织使细胞不能与培养液充分接触，不 利于培养。
3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间 的物质是什么成份？
催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋 白质(胶原蛋白等)。
4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂
5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能
6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物 组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？
注意时间的控制
7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织 细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 8、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、 无毒？
易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
一、动物细胞培养 1、过程：
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶 （分解弹性纤维）
4、气体环境：
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
注意关键词:
细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养
有关概念:
• 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为 原代细胞。
• 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配 制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的 培养瓶中继续培养，称为传代培养。
接触抑制
1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程
2、保护濒危物种 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植
体细胞核移植技术存在的问题
在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚， 克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出 现早衰等问题。这些问题尚在研究中。在应用上，生产 克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。
归纳:
• 整个过程用了哪些技术？ –细胞培养、核移植、胚胎移植
• 新生牛的性别、基因？
–性别与供体相同、基因与供体 的基本相同
• 繁殖方式？ –无性繁殖
• 原理？
–动物细胞核的全能性
1、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞 供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
不是
克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但 核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵 母细胞。
定义：细胞从接种 到长满底物表面后， 由于细胞繁殖数量 增多相互接触后， 不再增加。
思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织 做动物细胞培养材料？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。
2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
(1)成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长 和增殖