细胞化学染色68627
《细胞化学染色》PPT课件 (2)
PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀， 定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化 铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。
• 试剂：
• 1.固定剂：40%甲醛溶液〔福尔马林〕。
• 2. 工作液配制：
• 蒸馏水
37ml
• 0.2mol/L pH4.7醋酸缓冲溶液 6ml
试剂：
• 1.固定剂：1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液 〔福尔马林〕10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2.a-磷酸萘酚钠溶液：100mg a-磷酸萘酚钠溶于 100ml0.2mol/L〔pH9.1～9.7〕Tris缓冲溶液中，混 匀后4℃保存。
• 3.Tris缓冲溶液〔0.2 mol/L pH9.2〕：Tris粉〔三羟甲 基氨基甲烷〕2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸 0.2ml〔0.167ml〕。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 0.15mol/L〔5%〕硝酸铅
1ml
• 0.1mol/L〔3.2%〕β－甘油磷酸钠 2ml
• 3.稀硫化铵溶液〔临用时现配〕：取硫 化铵水剂0.75ml加蒸馏水至50ml。
• 4.甲基绿溶液：1g甲基绿溶于50ml蒸馏
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。
它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。
因而对于探索细胞内的化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要意义。
血液细胞化学染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基酸、酶)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类,采用的方法通常为化学结合和物理溶解及酶-底物反应。
临床评价:1.细胞化学染色的开展,已有数十年的历史。
其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊，对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助，对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。
2.血液系统各种恶性疾病，特别是急性白血病，因其多为早期分化较差的病理细胞增殖,客观上存在着形态变异、畸形发育，即使是有经验的检验人员仅凭细胞形态也难以避免错误诊断的发生。
如将细胞形态和细胞化学染色相结合，能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型，即为急性白血病FAB 分型。
3.近年来，由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展，进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展，并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段，对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。
如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合，对各种白血病进行分型，即成为白血病的MICM分型诊断。
4.细胞化学染色通常应用在各种血液系统疾病特别是对各种急性白血病的诊断与鉴别诊断中。
但白血病细胞因其呈高度的异质性和多态性，有时即使是同一类型的白血病也可在细胞形态、细胞化学染色结果、细胞免疫表型及分子生物学等方面存在较大的差异。
所以对各类型白血病作一套较完整的细胞化学是补充了单凭形态对细胞辨认的不足。
因此我们在实际工作中若要对各类型白血病作出比较准确的诊断与鉴别诊断，应尽可能采用多项细胞化学染色或双（多）重染色。
细胞化学染色检验方法和要求
定义：
细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一 门科学。它是以细胞形态学为基础，根据 化学反应的原理、应用涂片染色的方法观 察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
各种类型血细胞的化学成分（酶，脂，糖， 蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病 理情况下,血细胞的成分可发生改变.
二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
原理:成熟中性粒细胞内的AKP在PH 9.4~9.6缓 冲
液中能水解基质液中的α-磷酸柰酚，产生α-奈 酚，其与重氮盐偶联，形成不溶性灰黑色偶氮染 料沉淀，定位于酶活性处。
AKP主要存在于中性成熟粒细胞内,其他细胞基 本阴性.
阳性程度：
- —— 胞浆中无紫黑色颗粒 + —— 胞浆中有一层棕黑色不透明或局限地 方 有紫黑色颗粒(约1/4) ++—— 胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布整个胞 浆，但较疏松 +++—— 胞浆中颗粒占3/4，颗粒染色浓 ++++——仅见核影，其余均是黑色
原理： 正常人骨髓中的储存铁主要存在于骨髓
小粒和幼红细胞中。骨髓小粒中的含铁血黄素 称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质 结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸 性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞 内铁也可用此法显示。根据反应的强弱了解骨 髓中铁的含量。
细胞内铁：中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗 粒,为铁蛋白. 铁粒幼细胞：胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞. 环铁粒幼红细胞：胞质内有蓝绿色颗粒在6个以 上，并围绕于核周排列成环形者，超过1/2区
4.再障与PNH的鉴别 再障—— NAP增高 PNH —— NAP减低
慢粒与中性粒细胞性类白血病反应的鉴别
三、过氧化物酶染色（POX）
细胞化学染色
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6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
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（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)
至9.2，4℃保存！
（3）作用(基质液): 磷酸萘酚钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
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3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 糖原染色 非特异性酯酶染色 特异性酯酶染色 骨髓铁染色
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（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
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2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色检验
申家辉
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一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
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一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
细胞化学染色
细胞化学染⾊细胞化学染⾊检验前⾔细胞化学是细胞和化学相结合的⼀门科学。
细胞化学染⾊是根据化学反应的原理，应⽤涂⽚染⾊的⽅法，观察细胞的化学成分及其变化的重要⽅法。
在病理情况下，⾎细胞的化学成分可发⽣改变。
因此，细胞化学染⾊不仅对研究⾎细胞的代谢活动、⽣理功能，⽽且对⽣理和病理情况下⾎细胞的化学成分的变化、各种类型⾎细胞的鉴别、某些⾎液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。
研究⾎细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。
下⾯主要介绍⾎液学中常⽤的⼀些细胞化学染⾊⽅法。
瑞⽒染⾊法：瑞⽒染⾊液的配制：瑞⽒染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒⼊洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及⽤完甲醇为⽌。
制配好的染液保存于温室中⼀周便可应⽤。
新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染⾊愈好。
缓冲液的配制及其作⽤:1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏⽔) 30ml1% Na2HPO420ml加蒸馏⽔⾄1000mlPH 6.4~6.8过氧化物酶染⾊⼀、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产⽣新⽣态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀⽽定位于POX活性部位。
⼆、过氧化物酶染⾊法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g95%⼄醇（Ethye alcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏⽔，置于37℃⽔浴箱中促溶。
)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧⽔，吸取⼀滴约0.05ml放⼊50ml蒸馏⽔内，每次⽤时必须新鲜配制。
三、结果判断：细胞质中有蓝⾊颗粒的为阳性细胞。
四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色2011年03月02日老三届极品居认真做事，低调做人。
记住该记住的，忘记该忘记的，改变能改变的，接受不能改变的。
一、概述细胞化学是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。
在细胞形态学的基础上，运用化学反应的原理对血细胞内的各种生化组成及其代谢产物（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。
细胞化学染色临床上主要用于：①辅助判断白血病的细胞类型。
白血病的诊断以形态学为基础，但有时仅采用瑞式染色是难以判断白血病细胞的类型的。
不同的细胞系列，其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。
因此根据细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。
因此临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。
②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。
在病理情况下，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。
如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
③观察疾病的疗效和预后。
当病理状况纠正后，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变。
④发病机制的研究。
细胞化学染色的基本步骤为固定、显示及复染。
1、固定为了保持细胞结构及化学成分的不变，需要对细胞进行固定。
根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖等变成不溶性物质。
固定的方法有物理法和化学法，临床常用化学法固定。
物理法包括干燥和火焰固定，化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。
采用蒸气或液体固定。
（1）蒸气固定：甲醛是常用的固定剂，极易挥发、氧化，常用40％甲醛蒸气固定。
方法为在封闭的玻璃器皿中加入40％甲醛，将涂片血膜朝下，固定5～10分钟。
（2）液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可将两种或两种以上固定液混合，如10％甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等。
(推荐)《细胞化学染色》PPT课件
【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液
▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10ml，溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
▪ 【结果】 ▪ （1）粒细胞系： ▪ 原粒细胞多呈阴性反应，也可弱阳性。
▪ 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感， 但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急 性淋巴细胞白血病可为阳性）。
M1-SBB(+)
M2-SBB(+)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖 、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇 基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO ），与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结 合，形成紫红色染料而沉积于胞浆中。该 反应称为过碘酸一雪夫(PAS)阳性反应。
粒逐渐增加。
▪ 早期原粒细胞一般为阴性，少数细小点状 颗粒代表线粒体被染色
▪ 晚期原粒细胞可出现阳性颗粒，其颗粒限 于胞浆的某一区域。
2. 单核细胞系 阳性，颗粒细小，分布弥散，形状不规则 。原单核细胞为阴性。 3．红细胞系、淋巴细胞系均呈阴性反应 4．尼曼一匹克细胞和戈谢细胞均为阳性 反应。
5．苏丹黑B和过氧化物酶染色临床意义相 似，主要用于急性白血病类型的鉴别。
Hale Waihona Puke ▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色 方法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上 具有重要意义。
《细胞化学染色》课件
标记染色剂
2
于最佳状态以获得清晰的染色结果。
选择适当的染色剂，与细胞内的目标
分子发生特异性反应。
3
洗涤
去除多余的染色剂，减少非特异性背
显微镜观察
4
景染色。
使用显微镜观察和记录染色后的细胞 结构和染色结果。
细胞化学染色的应用领域
1 病理学研究
方法
包括直接染色、间接染色和特殊染色等方法， 根据目的和需求选择适当的方法。
技术
需要合适的实验步骤和条件，包括样品制备、 染色剂选择和显微镜观察。
常用的细胞化学染色方法
伊纳尔反应
用于检测脱氧核糖核酸(DNA)的存在和分布。
酸性磷酸酶染色
用于检测酸性磷酸酶活性和酶的分布。
特殊染色
用于检测细胞中特定结构或分子的存在和分布，如免疫组化染色。
结论及展望
细胞化学染色是一种强大的技术，帮助我们深入了解细胞结构与功能。未来， 随着技术的不断发展和创新，细胞化学染色将在多个领域继续发挥重要作用。
细胞化学染色
细胞化学染色是一种通过特定染色剂使细胞内的化学成分显现的技术。它在 细胞研究和诊断中起着重要的作用，帮助我们更好地了解细胞的结构和功能。
细胞化学染色的定义
目的
通过染色剂将细胞内的特定化学成分显现出 来，例如核酸、蛋白质、多肽等。
原理
染色剂与细胞内化学成分之间的特异性反应， 例如酶活性、酸碱性和亲和性。
通过染色剂对病理变化 进行观察和鉴定，辅助 诊断和治疗决策。
2 细胞生物学研究
了解细胞结构和功能， 探索细胞内分子的表达 和相互作用。
3 药物研发
评估药物对细胞内目标 分子的作用和影响，辅 助药物研发过程。
《细胞化学染色》课件
细菌和真菌鉴别
染色技术可以用于鉴别不同类型的 细菌和真菌，对于感染性疾病的诊 断和治疗具有重要意义。
寄生虫鉴定
染色技术可以帮助鉴定寄生虫种类 ，对于寄生虫病的诊断和治疗具有 指导作用。
生物学研究中的应用案例
细胞凋亡研究
染色技术可以用于观察细胞凋亡 的过程，有助于研究细胞死亡的
机制。
准确性
染色结果是否准确反映 了细胞内物质的分布和
含量。
重复性
染色结果是否具有可重 复性，即多次实验结果
是否一致。
特异性
染色方法是否能够特异 性的标记目标细胞或组
织。
敏感性
染色方法能否检测到低 浓度的目标物质。
染色结果的解读与解释
01
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03
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了解染色原理
熟悉染色方法的原理，有助于 正确解读染色结果。
识别阳性信号
能够识别出染色结果中的阳性 信号，并判断其强弱和分布情
况。
排除干扰因素
排除非特异性染色、背景干扰 等因素对结果的影响。
比较不同样本
将染色结果与正常或已知样本 进行比较，以判断其差异和意
义。
染色结果的应用与推广
科学研究
染色结果可以为科学研究提供 数据支持，帮助揭示细胞生物
学行为的奥秘。
临床诊断
细胞化学染色的种类与 特点
常用细胞化学染色的种类
酸性品红染色
用于显示RNA，常 用于鉴别细胞质。
苏木精染色
用于显示细胞核， 常用于观察染色体 。
福尔根染色
用于显示DNA，常 用于鉴别细胞核。
甲基绿染色
用于显示DNA，常 用于观察染色体。
伊红染色
用于显示RNA和糖 原，常用于鉴别细 胞质和糖原。
《细胞化学染色检验》课件
样本的保存
样本应保存在适当的温度 和湿度条件下，以确保其 质量和稳定性。
结果的准确性
操作的规范性
在细胞化学染色检验中，应遵循正确的操作步骤和规范，以确保 结果的准确性。
仪器设备的校准
使用的仪器设备应在有效期内进行校准，以确保其准确性和可靠性 。
结果的解读
检验结果应由专业人员进行解读，避免误判或漏判。同时，应定期 对结果进行复核和验证，以确保结果的准确性和可靠性。
目的
细胞化学染色检验主要用于诊断疾病、研究细胞生物学特性、评估治疗效果等 。
历史与发展
历史
细胞化学染色检验技术自19世纪末开始发展，经历了多个阶段，包括手工染色、 半自动染色和全自动染色等。
发展
随着科技的不断进步，细胞化学染色检验技术也在不断改进和完善，如免疫组织 化学染色、荧光染色等新技术的应用，使得检测的灵敏度和特异性得到了显著提 高。
04
结果报告
将分析结果整理成报告，向相 关人员或机构提供准确的实验 数据和结论。
04
细胞化学染色检验应用
在疾病诊断中的应用
肿瘤诊断
通过细胞化学染色检验，可以观 察肿瘤细胞的形态、染色特征和 组织结构，有助于肿瘤的早期发
现和诊断。
感染性疾病诊断
某些细菌、病毒等感染性疾病会导 致细胞发生特异性改变，通过细胞 化学染色检验可以辅助诊断。
染色完成后，进行充分 的洗涤和复染，以提高
染色效果和对比度。
结果观察与解读
01
显微镜观察
使用显微镜观察染色后的样本 ，观察细胞形态、染色情况等 。
02
结果记录
对观察到的染色结果进行详细 记录，包括细胞形态、染色强 度、分布等。
03
细胞化学染色
•【染色方法】
• 1.取新鲜骨髓涂片置浓福尔马林中蒸3分钟。（2 滴） • 2.放入作用液37℃温箱30分钟。 • 作用液配制：取固兰40mg，1%α -萘酚（以50%丙 酮做溶剂）0.8ml，0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （PH7.4）40ml混合，过滤后使用。 • 3.用自来水冲洗，晾干。 • 4.用1%沙黄复染45秒。 • 5.水洗，晾干后镜检。
【正常血细胞的染色结果】
• 细胞中如有蓝黑色即为阳性细胞。根据阳性 颗粒的有无及多少，将染色结果分为（-）、 （+）、（++）、（+++）、（++++）。
阳性反应细胞 阳性强度 阳性特征 阴性反应细胞 部分原粒细胞 嗜碱性粒细胞 大部分单系细胞 淋巴细胞 浆细胞 红系细胞
部分原粒细胞 +~++ 颗粒细小，分布稀疏 早幼粒细胞 ++~++++ 颗粒状或弥散状 中性成熟粒细胞 ++~+++ 同上 嗜酸性粒细胞 ++~++++ 粗颗粒状，密集 少数单系细胞 +~++ 细小，弥散，较少
• 【标本要求】
• 一般用新鲜的骨髓涂片做POX染色； 如果外周血中白血病细胞多而骨髓涂 片不够的情况下，可选择新鲜的血涂 片来做。为了保证酶的活性，片子一 般应在固定后一周内完成染色。
•【染色方法】
• 一、试剂：甲液：联苯胺（0.3g）；95%乙醇 （99ml）；亚硝基氰化钠饱和溶液（1ml） 乙液：3%过氧化氢（0.3ml）；蒸馏水（2ml） 注：乙液必须现配现用（5mlH2O+1滴H2O2） 二、染色：1.滴加甲液在干的涂片上。 2.待30秒后滴加乙液。（比例为2:1） 3.过3-4分钟后用自来水冲洗3-4分钟。 4.复染15分钟。
细胞化学染色名词解释
细胞化学染色名词解释好嘞，今天咱们聊聊细胞化学染色，听起来挺专业吧？别担心，咱们用简单有趣的方式来搞明白它！想象一下，细胞就像一个个小小的宇宙，里面住着各种各样的生物分子，它们有的像明星一样闪闪发光，有的则安静得像在深海里遨游。
可是，眼睛可看不见这些细小的东西，所以咱们需要一些“魔法”，那就是染色技术。
染色其实就是给细胞穿衣服，给它们增添点颜色。
想象一下，细胞本来是透明的，就像一块清水，突然间穿上了五彩斑斓的衣服，哇，那画面美得不要不要的。
细胞化学染色的关键在于，咱们通过不同的染料，把细胞里的一些成分染上颜色，让它们在显微镜下活灵活现。
就好比是给你的照片加滤镜，瞬间变得特别！染色的过程其实也不复杂，先得把细胞从“宿舍”里搬出来，经过一番“洗澡”，然后再涂上染料。
这个染料可不是随便哪个颜色就行，得选对颜色。
比如说，某些染料专门爱上细胞膜，染上后细胞膜就变得鲜亮无比；而有的染料则是对细胞核情有独钟，染上去后，细胞核瞬间成了瞩目的焦点。
哈哈，真是个“爱情故事”！每种染料都有自己的“情缘”，挑对了，细胞就会像明星一样闪耀。
你可能会想，这样染色有什么用呢？嘿嘿，别小看它，染色可是生物研究的好帮手！通过观察染色后的细胞，科学家能更清晰地看出细胞的结构和功能，甚至能发现细胞是否健康。
就像医生给病人做检查，只有通过显微镜看清楚，才能知道细胞是不是“病了”。
染色后的细胞，仿佛在显微镜下开了“演唱会”，各种细节都能看得一清二楚。
还有一点不得不提，染色技术的应用简直是广泛得让人惊讶。
从基础研究到临床诊断，染色都起着至关重要的作用。
比如，癌症的早期筛查就离不开这种技术。
科学家们可以通过染色判断细胞是否发生了变化，早发现早治疗，真是为生命争分夺秒。
想想看，这种技术就像是细胞界的“侦探”，为我们揭开细胞的秘密。
说到这里，可能有小伙伴会问，染色是不是有很多不同的方法呀？当然！这就像调味料一样，适合你的就是最好的。
有些染色方法简单易行，像用水彩画涂鸦；而有些则复杂得像高难度的舞蹈，需要精细的操作和高端的设备。
临床血液学检验造血检验基本方法细胞化学染色检验[可修改版ppt]
![临床血液学检验造血检验基本方法细胞化学染色检验[可修改版ppt]](https://img.taocdn.com/s3/m/72d40d23172ded630b1cb6d9.png)
② 骨髓细胞内铁：铁粒幼红细胞的阳性率为19%~44%， 以I型为主，少数为II型
4. 临床应用：用于贫血的诊断及鉴别诊断
贫血
细胞外铁
细胞内铁
缺铁性贫血
阴性
明显减低或为0
铁粒幼细胞性贫血
明显增多
骨髓增生异 常综合征 （MDS）
【复习：外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）】
『问题』 ① 在瑞氏染色下，能不表否能现较，为准未嗜完多确全色地成红区熟细的胞别红成细熟胞在红瑞细氏胞染色与下未完 全成熟的红细胞（网织红细胞）
② 网织红细胞手计工活数体有染哪色法两和种仪方器法法？在手工操作法中，我 们染色及观察的是哪种化学物质 RNA
α-萘酚＋磷酸钠
＋ 坚牢蓝RR
不溶性棕黑色沉淀
1 2 3
新鲜血片
固定液30s， 水洗待干
作用液5～15min， 水洗，待干
作用液需要新鲜配制： α-磷酸萘酚钠溶液1.5ml，在37℃ 预热5min＋坚牢蓝RR1.5mg 3
1％藏红花3min， 水洗，待干
4
2. 正常血细胞的染色结果
① 阳性反应呈棕黑色颗粒，定位于成熟中性粒细胞胞质 内。其他细胞呈阴性
图 NAP染色（慢粒血片）
图 NAP染色（类白血片）
（三）急性白血病形态学分型的细胞化学染色 『急性白血病细胞分型的常规细胞化学染色』
① 过氧化物酶（POX）染色/苏丹黑B（SBB）染色 ② 特异性酯酶（NAS-DCE）染色 ③ 非特异性酯酶（α-NAE/ α-NBE/ NAS-DAE / ANAE等）
3. 参考值：阳性率＜40％，阳性积分14～113。各实验室之 间可有较大差异，应建立各实验室的参考值
【收藏】检验科必须掌握的几种细胞化学染色
【收藏】检验科必须掌握的几种细胞化学染色一、细胞化学染色概念：细胞化学染色以细胞形态学为基础，结合运用化学、生物化学、免疫化学等技术，对血细胞的化学成分作定性、定位、半定量分析的方法。
二、细胞化学染色研究的临床应用1、辅助判断急性白血病的类型2、提供诊断与鉴别诊断依据三、细胞化学染色的基本方法:包括固定、显色反应、复染等步骤1、固定：保持细胞结构和化学成分不变。
包括液体固定、蒸汽固定。
2、显色反应通过不同的化学反应，将被检测的物质以稳定的有色沉淀显示出来，显色方法：偶氮偶联法、联苯胺法、普鲁氏蓝反应、过碘酸-雪夫反应、金属沉淀法等。
3、复染使细胞的结构和化学染色结果显示出来。
1.细胞核复染常用苏木素、甲基绿、中性红、沙黄2.细胞质复染常用：伊红、亮绿等。
下边就由小编带领大家了解下在咱们检验工作中常用到的几种染色方法：1：过氧化物酶染色2：特异性酯酶染色3：非特异性酯酶染色4：糖原染色5：中性粒细胞碱性磷酸酶染色6：骨髓铁染色一、髓过氧化物酶染色(POX)POX是中性粒细胞中含量最多的一种蛋白其主要成分是髓过氧化物酶（MPO)。
结果判定：（杆状及分叶呈强阳性是染色成功的标志，阳性颗粒呈蓝绿色或蓝棕色定位于胞浆中。
）临床意义▲正常分布1.粒系：早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈不同程度阳性；嗜碱阴性，嗜酸阳性。
2.单核系：阴性或弱阳性，颗粒细小，弥散分布。
3.淋巴系、红系、巨核系、浆细胞系均为阴性。
判断急性白血病的类型pox计数100个未知细胞（白血病细胞）,并计算其阳性率。
Pox阳性率＞3%：M3 ＞M2 ＞ M6＞M4 ＞ M1 ＞ M5Pox阳性率＜3%：急淋▲鉴别诊断1.急淋与急非淋相鉴别：原幼淋呈阴性，粒细胞及单核细胞呈阳性2.急单与组织细胞白血病和恶组的鉴别:单核细胞呈弱阳性反应，异常组织细胞过氧化物酶呈阴性反应成熟粒细胞过氧化物酶活性变化:1：活性增高:见于再障,感染,急淋,慢淋2：活性减低:见于急粒,慢粒,急单,MDS,放射病及退化性中性粒细胞。
细胞化学染色(lishai)
正常血细胞的染色反应
淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。 巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应 的程度随细胞的发育成熟而增强。
临床意义
◆红细胞系统疾病
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中 幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些 红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。
◆白细胞系统疾病
ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或 块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状
过氧化物酶染色
Peroxidase stain, POX
染色原理（四甲基联苯胺法）
H2O2
溶酶体颗粒中的ＰＯＸ
H2O＋O2
四甲基联苯胺
O2
联苯胺蓝
O2
联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠
蓝色物质
（沉淀）
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程 度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而 细） 其他血细胞 阴性
细胞化学染色的基本步骤 固定
显示
保持细胞结构及化学成分不变，并使血 膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏
形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质
复染
既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果
细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色
（SBB) 过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
PAS临床意义
MA 幼红细胞呈阴性反 应
AML-M6 幼红细胞呈阳性反 应
ALL
AML-M6
AML-M6 PAS(+)
细胞化学染色
分布 急单——原幼单可阳性，细颗粒 巨核细胞——粗颗粒或块状强阳性，协助
ANLL〔M7〕的诊断
(二)红细胞系统
1.红白血病〔M6〕，MDS有核红可阳性 2.各类贫血的鉴别：
缺铁贫、地贫——幼红可呈〔+〕 AA、溶贫、巨幼贫——〔-〕
(三)其他：
帮助确认一些特殊细胞
细胞外铁反响强度的判断标准：
显微镜检查
肉眼观察 ————————
———————
着色程度
形态
小 分布情况
————————— ———————
阳性 显色不明显 淡染 稀疏
++++
Hale Waihona Puke +++
++
+
--
环形铁粒幼细胞
环形铁粒幼细胞
参考值
1、细胞外铁：〔＋〕～〔＋＋〕
2、细胞内铁：观察100个幼红细胞,计 算出铁粒幼红细胞百分比,阳性率为12 ％～44％,无环形铁粒幼红细胞和铁粒红 细胞。
阳性程度参考标准:
-:无颗粒沉着 +/-:颗粒细小,分布稀疏 +:颗粒较粗,常呈局灶性分布 ++:颗粒粗大,分布较密,占胞浆1/2-2/3 +++:颗粒粗大,成团块状分布 ++++:颗粒布满整个细胞,可覆盖胞核
正常情况下：
粒系：原粒——早幼粒—中幼粒—成熟粒细胞 多数〔-〕 〔+〕 阳性程度逐渐增强 嗜酸阳性最强；嗜碱〔-〕
• 对急淋和急非淋做出判断，阳性率大于5% 诊断为髓系，小于3%不能排除淋巴系。
• 区别小型原始粒细胞和原淋 • 鉴别急性非淋巴细胞性白血病的各亚型
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M1-SBB(+)
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M2-SBB(+29)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
• 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
• 5、金属沉着法
• 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 （显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
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• （三）细胞化学定量
• 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅， 人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
（一）四甲基联苯胺法 • 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 化合物沉着于细胞质内。
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【试剂】 • 1%TMB • 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 • 1%过氧化氢溶液 • 稀过氧化氢溶液 • 瑞氏染色液
1/4有致密的颗粒。 （++）颗粒较少，或胞质面积的1/2出现黑色颗粒。 （+++）颗粒较密，或胞质面积的3/4出现黑色颗粒。 （++++） 颗粒极密，颗粒间无间隙。
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• 【临床意义】
• 1. 粒细胞系
• 早幼粒及以下阶段随着细胞成熟，阳性颗 粒逐渐增加。
• 早期原粒细胞一般为阴性，少数细小点状 颗粒代表线粒体被染色
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• （5）过氧化物酶染色 • 主要用于鉴别急性白血病类型， • 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， • 故有助于区别M3和M5型。 • 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
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AML-M1
• 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
• 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低， 又反映了细胞受色的强弱。
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• 下面介绍几种常用的细胞化学染色方 法
• 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具 有重要意义。
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一、过氧化物酶染色（POX）
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M1 - POX(1+9)
×
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二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
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• 【试剂】 • 1. 10%甲醛液。 • 2. 苏丹黑B乙醇溶液
• 晚期原粒细胞可出现阳性颗粒，其颗粒限 于胞浆的某一区域。
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2. 单核细胞系 阳性，颗粒细小，分布弥散，形状不规则。 原单核细胞为阴性。 3．红细胞系、淋巴细胞系均呈阴性反应 4．尼曼一匹克细胞和戈谢细胞均为阳性 反应。
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5．苏丹黑B和过氧化物酶染色临床意义相 似，主要用于急性白血病类型的鉴别。
丙酮和醋酸等。
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（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。
2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
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• 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
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【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
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• 【临床意义】 • （1）粒系： • POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
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1
• 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
• 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； • 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、
疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。
• 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。
• 碱性粒细胞为阴性。
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（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
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（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
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2
• 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
• 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
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3
血细胞化学染色流程
• （一）固定 • 固定有物理法与化学法， • 物理法为干燥和火焰固定， • 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
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10
• 【操作】 • 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10ml，溶液呈淡棕黄色。 • 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 • 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 • 4. 油镜镜检。
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• 【操作】 • 1．干燥血片或骨髓片在甲醛蒸气中固定。 • 2．自来水冲洗。 • 3．放人染色液中，37 ℃染色30~60min。 • 4．用70%乙醇脱色1~2min，水洗lmin。. • 5．瑞氏染液复染20~30min。
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【结果】
脂类呈黑色或棕黑色颗粒，定位于细胞浆中 （+） 颗粒很小，细小、稀疏，或胞质局部面积的