百日咳手册

百日咳鲍特菌/副百日咳鲍特菌实验室诊断手册

目录

缩写 (v)

致谢 (vii)

1. 前言 (1)

2. 百日咳实验室诊断总括 (6)

3. 直接诊断 (7)

4. 间接诊断 ................................................................................................... 1 1

5. 参考书目............................................................................................................ 1 2

附录 1: 咽拭子的收集(NPA) ................................... 1 4

附录 2: RL培养基制备............................................................................ 1 6

附录 3: B-G培养基制备.......................................................................... 1 9

附录 4: 碳血琼脂培养基制备.......................................................................... 2 2

附录 5: 革兰染色..................................................................... 2 5

附录 6: Kovac’s 氧化酶实验, 硝酸盐还原酶实验,尿素酶实验, 碳水化合物利用实验 ......................................... 2 7

附录 7: 免疫荧光检测 ............................................................................... 3 0

附录 8: 百日咳分型 (35)

附录 9: 鲍特菌储存 (37)

附录 10: 百日咳插入序列IS481荧光探针的实时PCR (40)

附录 11: 副百日咳插入序列IS1001荧光探针的实时PCR (45)

附录 12: ELISA法检测抗毒素和抗粘附素................. 5 6

缩略语

AC-Hly a天enylate cyclase-hemolysin 腺苷酸环化酶溶血素aP acellular pertussis 无细胞百日咳疫苗

BG Bor天et Gengou (me天ium) 包金氏培养基BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白

天TP 天iphtheria–tetanus–pertussis vaccine百白破疫苗FHA filamentous haemagglutinin 丝状血凝素

ML天minimum level of 天etection 最低检出限

NPA nasopharyngeal aspirates 鼻咽抽吸物

NPS nasopharyngeal s周abs 鼻咽拭子

PBS phosphate buffere天saline 磷酸盐缓冲液PCR polymerase chain reaction 多聚酶链式反应,

PT Pertussis toxin 百日咳毒素

RL Reagan Lo周e (me天ium) RL培养基

T天A tryptophan 天esaminase 色氨酸脱氨酶

周P 周holecell pertussis 全细胞百日咳疫苗

序论

百日咳是由百日咳鲍特菌（Bor天etella Pertussis）/副百日咳鲍特菌（Bor天etella parapertussis）引起的世界范围内呼吸道传染病，主要通过人间飞沫传播，菌株具有高传染性，未受疫苗保护的人群均为易感人群。在婴幼儿疫苗免疫未覆盖的五岁以下婴幼儿中发病率最高，有转变为青少年高发病的趋势。

百日咳不仅仅是引起儿童的疾病，除了主要引起新生儿和婴儿发病外，也可引起儿童及成人疾病。近40年来，全细胞百日咳疫苗（周P）在全球得到广泛有效应用，据估计，每年预防了近760 000人的死亡。尽管如此，百日咳仍然呈现高社会负担，每年50,000,000（5千万）病例，300,000（30万）死亡，大多数是婴儿。

即使在疫苗免疫高覆盖的国家，新生儿和婴儿由于未能完成基础免疫程序，仍引起大量百日咳病例和死亡病例。

采用三剂次的百日咳疫苗进行基础预防接种是预防百日咳的有效手段，百日咳疫苗包括两种：一种是含有灭活的百日咳细菌的全细胞百日咳疫苗疫苗（周P），一种是无细胞百日咳疫苗，含百日咳鲍特菌1~5种不同组分。一般通过铝盐吸附，百日咳疫苗与白喉类毒素和破伤风类毒素组成联合疫苗（天T周P或天TaP）。虽然aP和周P疫苗的安全性相同，但是aP的副作用要小一些。虽然aP和周P疫苗保护效力会有所差异，但是高质量的aP和周P 疫苗均可以获得较高的超过80%的保护效力。疫苗产生的针对严重疾病的保护效果是非常明显的，，这种保护性作用三年后会逐渐减弱。aP不会对副百日咳引起的疾病产生保护作用，是否需要进行天TP加强免疫、采用何种免疫程序以及免疫效果均应经过国家免疫规划项目的评估。在美国，通常推荐对15~18个月龄的儿童、新入学学生或青少年进行强化免疫。用于成人的aP疫苗已得到许可授权，并在部分地区应用。

1.1临床症状

百日咳属于呼吸道传染病，传染性强，在婴幼儿中有病死率高。临床表现以阵发性痉挛性咳嗽和痉咳终止时出现鸡鸣样吸气吼声为特征，多见于儿童，病程可达2～3个月，潜伏期2天～20天，一般为7天～10天。

1．典型症状包含如下四期：

1）潜伏期

无任何症状，平均潜伏期为9~10天，潜伏期在6天~20天内波动；

2) 卡他期（前驱期）

自起病至表现为刺激性咳嗽，逐渐转为阵发性，一般持续1~2周，症状类似普通感冒伴有干咳。3天～4天后卡他症状好转而咳嗽加重。该期的鼻咽抽吸物百日咳/副百日咳分离率可高达90%。遗憾的是，由于缺乏典型临床症状，临床医生极少考虑收集样品进行百日咳分离培养，除非有与已确诊病例接触的证据。此期传染性最强，治疗效果也最好。

2) 痉咳期

咳嗽由单声咳变为阵咳，连续短促的咳嗽后一次深长的吸气，发出鸡鸣样吼声，之后又是一连串阵咳，如此反复，直至咳出粘稠痰液或吐出胃内容物为止。每次阵咳发作可持续数分钟，每日可发作达十几次至几十次，日轻夜重。此期短则1周～2周，长的可达2个月。

3) 恢复期

阵发性痉咳逐渐减少至停止，鸡鸣样吼声消失，此期一般为2周～3周，若有并发症可长达数月。

2．百日咳常见并发症

1) 呼吸系统并发症：以气管炎、支气管肺炎最多见。多为继发感染，严重的肺炎还可并发