多糖类药物分析
多糖类药物提取方法及抗病毒活性分析
多糖类药物提取方法及抗病毒活性分析摘要：本文首先从动物多糖、植物多糖、微生物多糖、海藻多糖等方面阐述多糖类药物种类，并从抑制病毒吸附干扰病毒复制、增强免疫力刺激干扰素产生等方面分析多糖类药物抗病毒机理，然后阐述多糖类药物提取流程、提取方法、杂质去除、分离提纯等工序，最后从结构测定困难、作用机制复杂、天然多糖纯化困难等方面阐述多糖类药物抗病毒活性分析存在的问题。
关键词：多糖类药物；提取方法；抗病毒活性引言：多糖类是构成生命的四大基本物质之一，广泛存在于自然界各处，在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、免疫促进等方面发挥着生物活性作用，因此多糖类药物开发一直是各大药厂的研究重点。
但是多糖类药物提取方法没有有效地去除其中的杂质，导致其组分的理化性质没有得到要求。
优化多糖类药物提取方法，提高其抗病毒活性，是药厂的必然选择。
一、多糖类药物种类及抗病毒机理（一）多糖类药物种类1.动物多糖动物多糖主要来自于动物结缔组织基质和细胞间质等脊椎动物组织胞外空间的特征组分，肝素、硫酸软骨素等药物便是动物多糖的代表，前者具有抗凝血、抑制疱疹病毒等作用，后者具有抑制人体免疫缺陷病毒的作用[1]。
2.植物多糖植物多糖主要来自于高等植物的根、茎、叶、皮、种子和花，中草药药理作用明显，上品中草药基本无毒副作用，中品中草药毒副作用较小，下品中草药毒副作用可以使用其他药物监制，中草药中植物多糖分布广泛。
其中黄芪多糖是植物多糖中的代表，该多糖类药物具有抑制乙肝血清标志物和抑制多株疱疹病毒的作用[2]。
3.微生物多糖微生物多糖主要来自于昆虫及甲壳动物的壳真菌、细菌的胞内胞外等，由于微生物具有培养容易的优点，一般来说微生物多糖主要从菌体或者培养液中提取。
微生物多糖提取后所蕴含的蛋白质和色素等杂质较少，因此药厂生产微生物多糖比较简单，其提取工艺适合大规模生产。
灵芝多糖是微生物多糖中的代表，在抗病毒和抗肿瘤等方面均可以起到重要效果[3]。
植物多糖的研究现状的研究报告
植物多糖的研究现状的研究报告植物多糖是从植物中提取的一种多糖，是一种有机大分子物质，具有高度的生物活性和药用价值。
近年来，植物多糖的研究受到了广泛的关注，也在国内外得到了广泛的应用。
植物多糖的种类很多，在不同的植物中含量和种类也会有所不同。
随着技术的不断发展，越来越多的植物多糖被发现和提取出来。
植物多糖在抗氧化、免疫调节、降血糖、抗癌等方面具有显著的药用效果，因此对植物多糖的研究和开发具有很大的意义。
目前，关于植物多糖的研究主要集中于以下几个方面：1.提取和纯化方法的改进植物多糖在植物中的含量通常很低，而杂质又很多，因此要提取出纯度高的植物多糖是一项技术难点。
目前，以超声波辅助提取、离子液体等为代表的新型提取技术正在逐步发展，可以有效提高多糖的提取率和纯度。
2.药用活性成分的研究植物多糖的药用效果主要与其分子结构、分子量、空间构象等有关。
因此，通过分析不同来源植物多糖的化学性质和生物功能，在深入研究其机制的基础上，努力筛选和开发具有高药用活性的植物多糖成分。
3.多糖药物的开发近年来，越来越多的植物多糖被用于研制药物，如多糖肽药物、多糖胶束等。
多糖药物具有良好的生物相容性、低毒性、高效性等优点，可望成为新型药物的重要领域。
总之，植物多糖的研究在不断深入，为我们了解植物多糖的药用价值、开发新药提供了新的思路和方法。
通过深化对植物多糖的研究，可以挖掘出更多的药用活性成分和制备更先进、更有效的多糖药物，为人类健康事业做出更大的贡献。
植物多糖的相关数据：1. 提取率和纯度：在以超声波法提取 Artemisia annua 中polysaccharide 的研究中，可以实现的最大提取率为26.71%，最高纯度为74.34%。
2. 含量：植物多糖的含量因植物种类和部位不同而异。
如在当归中，多糖含量为8.08%，而在灵芝中为1.96%-8.19%。
3. 药用效果：植物多糖具有很强的生物活性和药用效果，如提高免疫力、抗氧化、调节血糖、抗癌等。
糖 类 药 物
常见的交换剂为DEAE-纤维素
电泳、超滤法、亲和色谱、制备性高压液 相色谱、活性碳柱色谱
.
多糖的含量测定与结构分析
显色试剂一硫酸法
硫酸－蒽酮 （620nm） 苯酚－硫酸（490nm） 两种方法都是测总糖的，多糖被硫酸水解为单糖，然后单 糖在硫酸作用下脱水生成糠醛。 糠醛与蒽酮作用行测一 种蓝绿色的络合物，在620nm处有最大吸收。 糠醛与苯酚 作用形成橙黄色化合物，在490nm处有最大吸收。 二者的 颜色深浅与糖含量呈正相关。
.
生产工艺
在动物体内，肝素与蛋白质共价结合形成 肝素－蛋白复合物。
这种复合物无抗凝活性，随着蛋白质的去 除，其活性方能显示出来。
典型的粘多糖提取步骤
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肝素钠的提取分离两大生产工艺
碱性热水或沸水来提取肝盐解法
使用蛋白水解酶使其断键解离 酶解法
DNS法
其利用S，5一二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热 后还原成棕红色氨基化合物，在540nm处有特征吸收。
.
高压电泳、纸色谱、薄层色谱、高效液相 色谱、旋光测定、凝胶色谱、高效凝胶渗 透色谱（HPGPC）等。
HPGPC测定多糖的纯度和分子量具有快速、 高分辨率和重现性好的优点，在国内外已得 到广泛应用。
.
多糖的提取
脱脂：动植物多糖及微生物细胞
内多糖的组织细胞多有脂质包围， 甲醇、1：1的乙醇乙醚混合溶液、 石油醚。
脱色：含色素较高的根、茎、叶、
果实类，需进行处理。
.
稀碱液提取法 难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液（胶类）
水提法 易溶于温水、难溶于冷水和乙醇
.
粘多糖提取
粘多糖与蛋白质结合于细胞中，
因此使糖-蛋白质间的结合键断裂，促使多 糖释放。方法有：
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量一、本文概述多糖作为一种重要的生物大分子，广泛存在于自然界中，具有多种生物活性，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。
因此，对多糖的纯度及分子量的准确测定对于其研究和应用具有重要意义。
高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography，HPGPC）是一种常用的多糖纯度及分子量测定方法，具有操作简便、分辨率高、重现性好等优点。
本文旨在介绍HPGPC法测定多糖纯度及分子量的原理、实验步骤、数据处理及注意事项，以期为多糖的研究和应用提供参考。
二、实验材料与方法1 多糖样品：选择待测定的多糖样品，确保其来源清晰，无杂质污染。
2 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）柱：选择适当型号的HPGPC柱，以适用于待测多糖样品的分子量范围。
3 流动相：通常选用适当的溶剂或缓冲液作为流动相，以保证多糖样品在色谱柱上的良好分离。
4 检测器：使用示差折光检测器（RI）或紫外检测器（UV）等，以监测多糖样品在色谱柱上的分离情况。
5 其他试剂与仪器：包括样品制备所需的试剂、色谱仪、注射器、进样针等。
1 样品制备：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液，以便进行后续分析。
2 色谱条件优化：通过预实验，优化色谱条件，包括流动相的选择、流速、柱温等，以获得最佳的分离效果。
3 进样与分离：将制备好的多糖样品溶液通过注射器注入HPGPC 仪中，通过色谱柱进行分离。
在分离过程中，利用检测器监测多糖样品的分离情况。
4 数据收集与处理：收集分离过程中的数据，利用相应软件对数据进行处理和分析，包括分子量计算、纯度分析等。
5 结果评价：根据分析结果，评价多糖样品的纯度及分子量分布情况，为后续研究提供依据。
通过以上实验材料与方法，可以高效地进行多糖纯度及分子量的测定，为后续多糖的结构研究、质量控制等提供重要支持。
三、实验结果与讨论在本研究中，我们采用了高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）对多糖样品的纯度和分子量进行了测定。
右旋糖苷类药物对比
l 规 格: 500ml
右旋糖苷类药物对比
复方右旋糖酐70滴眼液（无注射剂）
主要成份为：右旋糖酐70 、羟丙甲基纤维素2910。 l 分子量：分子量重均分子量为：64000～76000
右旋糖苷类药物对比
右旋糖苷类药物对比
右旋糖酐20
适应证 用于休克、各种血栓性疾病及突发性耳聋。 药理作用 具有改善微循环，提高血浆胶体渗透压和
渗透性利尿作用。类似右旋糖酐40。
右旋糖苷类药物对比
3、临床主要用途不同：
l 低分子右旋糖酐（40） l 适应症1、体克 用于失血、创伤、烧伤等各种原因引起的休克和中
毒性休克。 2、预防手术后静脉血栓形成 用于肢体再植和血管外科手术等预防术 后血栓形成。 3、血管栓塞性疾病 用于心绞痛、脑血栓形成、脑供血不足、血栓闭 塞性脉管炎等。 4、体外循环时，代替部分血液，预充人工心肺机，既节省血液又可 改善循环。
右旋糖酐铁注射液（联想蔗糖铁注射液）
l 分子量为 165，000（16万左右） l 药理作用：通过直接向体内补充铁（III） 以改
善因铁缺乏而引起的贫血 l 适应症：适用于不能口服铁剂或口服铁剂治疗
不满意的缺铁病人。
右旋糖苷类药物对比
2、药代动力学特性不同
l 总结：输注1小时后，中、低、小分子右旋糖酐分别自尿 中排出为30%、50%、70%左右；24小时后分别排出60%、 70%、80%左右。
一、认识右旋糖苷
右旋糖苷类药物对比
右旋糖酐是多糖类药物中的一种
从化学结构看，糖是一大类多羟基醛或酮的化合物，依据 其结构特点分为：
多糖类药用辅料的应用及其质量分析进展
海 藻敝 其 盐
从 褐藻 或 细 菌 中提 取 出 的 天 海藻 酸及其 盐具 有 与 多价 阳 离 子发 生 盐 酸环 丙沙 星 海藻 酸／ 壳 聚 糖双 层膜 然 多 糖 胶凝 反 成 凝胶 的 特 性
－
［
2
］
5 氟 尿 嘧啶 壳 聚 糖 ／果 胶 微 凝 胶 果 胶 从植物 细胞 壁 中 提取 的 非 淀 形成 凝胶 不 会被 胃 肠 道 消 化 液 消 化 纖性 多糖 可在 结肠 中 ■ 麵
．
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ
：
ｉ ｄｅ ｓ ｐ ｏ ｌｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈａｒ
；
ｐ
ｈ ａ ｒｍａ ｃ ｅｕ ｔｉ
ｃａ ｌ ｅｘ ｃｉ
ｐｉ ｅ ｎｔ ｓ ａｐ ｐ ｌ
；
ｉ
ｃａ ｔ ｉ ｏｎｓ
；
ｑ
ｕ ａｌ ｉ ｔ
ｙ
ａｎａ ｌ
ｙ
ｓ
ｉｓ
多 糖 是 由 糖 昔键 结 合 的 糖 链 至 少 要 超过
＾
－
从魔 芋 块 茎 中 提 取 的 天 然
，
［
4
］
’
、
、
、
，
［
5
］
酶酶解 环 合而得 贿 空 腔 賊 两雑 复 合物
，
壳 聚 糖 甲 壳 素 在 械性条 件 下 部 分或 碱性 多 糖 具有 良 好 的 生 物 相 容性 高 酸 胺酵 0 羧 甲 基 壳 聚 糖 纳 米 完全 去 乙 酷化 制 得 的 高 分子 电荷 密度 和 點 膜點附性粒 子 聚 阳 离子 多 糖 透 明 质 酸 高等 动 物 细 胞 外基质 优越 的 保 湿 性 能 良 好 的 透 皮 吸 收 促 Ａ ＤＡ ＭＴ Ｓ 5 抑 制 剂 透 明 质 酸凝胶
茯苓多糖的含量测定分析
乙型链球菌
(1) - + + + + + (2) - - + + + + -
白喉杆菌
(1) - - - - - + (2) - - - - + + -
福氏痢疾杆菌
(1) (2) -
+
+ +
+ +
+ ++ +-
3 讨论 血竭在云南省几家药厂生产 。广西也有一二家
药厂生产 , 他们的原料取自云南或云南境外 。国产 血竭供应全国 , 在云南临床应用 20 多年 , 疗效确 切 。已证实该中药具有止血 、活血 、化瘀 、收敛 、 止痛 、生肌等功能 。通过动物等试验证实具有抗炎 作用 ; 对血小板聚集 , 血栓形成具有抑制作用 ; 有 止血和抑菌作用 。此外血竭毒性极小 , 按卫生部规 定 , 测定最大耐受量〔6〕, 小鼠 1d 内以最大溶量 ig3 次 , 日剂量 24g/ kg 体重 , 无任何毒性反应 。长期 毒性 3 个月没有任何毒性反应 。
1999 年第 20 卷第 1 期 云 南 中 医 中 药 杂 志
·33 ·
(100mg/ ml) 受试液 , 混匀后取出 2ml , 放入第 2 管
中 , 依次类推 , 直到第 5 管 , 取出 210ml 弃去 , 使
成 1∶2 , 1∶4 , 1∶8 , 1∶16 等各种浓度 , 第 6 管不加
致谢 : 熊郁良 、王琬瑜 、高菊珍 、薛音欢参与小部 分工作 。
参考文献 1 徐叔云 、卞如濂 、陈修主编 1 药理实验方法学 1 北京 :
人民卫生出版社 , 第 2 版 , 19911723～724 2 李仪奎 、王钦茂 1 中药药理实验方法学 1 上海 : 上海
糖类药物
（二）多糖的纯化
（1）乙醇沉淀法
此法是制备粘多糖最常用的方法。供乙醇沉淀的多糖溶 液浓度以1%-2%为佳。同时向溶液中加入一定浓度（如5%） 可有助于多糖的析出。
（2）分级沉淀法
不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不 同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的 粘多糖。 （3）季铵盐络合法（p388） 利用粘多糖与一些表面活性剂络合成难溶季铵盐。 （4）离子交换层析法 主要利用阴离子交换剂。
第三节 重要糖类药物生产工艺
一、D-甘露醇
（一）结构与性质 又名己六醇，为白色针状晶体，略有甜味，不潮解；易溶于 水。
（二）生产工艺
1、提取法 （1）工艺路线
（2）工艺过程 ①浸泡提取、碱化、中和 自来水室温浸泡2-3h，浸泡 液用30%NaOH调pH10-11，静置8h，凝集沉淀多糖类粘性 物；虹吸上清液，用1∶1 H2SO4中和至pH6-7，进一步除去 胶状物，得中性提取液。 ②浓缩、沉淀 浓缩中性提取液，除去NaCl和胶状物，直 到浓缩液含甘露糖30%以上，冷至60-70℃加入2倍体积95% 乙醇，搅拌均匀，冷至室温离心收集灰白色松散沉淀物。 ③精制 沉淀物悬于8倍体积95%乙醇中，搅拌回流半小 时，冷却过夜，离心得粗品甘露醇，含量70%-80%。重复 一次，经乙醇重结晶后，含量＞90%，氯化物含量＜0.5%。 重溶于蒸馏水中，加入1/8-1/10活性炭，80℃保温0.5h，滤 清。清液冷却至室温得结晶，抽滤，洗涤得精品甘露醇。 ④干燥、包装 结晶甘露醇于1 糖类药物
糖类药物主要有：
单糖 如葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和维生素C等； 低聚糖 如蔗糖、麦芽糖乳糖、乳果糖，多糖如右 旋糖苷、香菇多糖、茯苓多糖等； 糖的衍生物 如6-磷酸葡萄糖磷酸肌醇等。 糖类药物研究的最多的是多糖类药物，一般都是天 然动植物组织内直接提取，如黄芪多糖、人参多糖、 麦麸多糖、银耳多糖、灵芝多糖、云芝多糖、酵母多 糖、硫酸软骨素、透明质酸、几丁质、胎盘脂多糖等。
白术多糖结构-概述说明以及解释
白术多糖结构-概述说明以及解释1.引言1.1 概述白术多糖是一种来源于白术植物的多糖类化合物。
白术又被称为“中药之宝”，在中医领域有着广泛的应用。
而白术多糖作为白术的主要活性成分之一，已经引起了越来越多的研究兴趣。
白术多糖的结构复杂且多样，主要由多种糖类组成，如葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖等。
这些糖类通过特定的化学键连接在一起，形成不同种类的多糖结构。
这些结构中可能还存在有其他化学官能团的修饰，如乙酰基、硫酸基等，从而增加了多糖的多样性和功能多样性。
白术多糖的结构与它的生物活性密切相关。
多糖结构的不同部分可能与不同的生物分子相互作用，从而发挥不同的生理效应。
例如，白术多糖的某些结构可能具有抗氧化、免疫调节、抗菌等功能。
因此，研究白术多糖的结构是理解其生物活性及其在医学和保健品领域的应用价值的重要基础。
本文将重点介绍白术多糖的结构特点及其相关的研究进展。
在正文部分，我们将详细阐述白术多糖的结构要点，并探讨这些结构与其生物活性之间的关系。
结论部分将对已有的研究进行总结，并展望未来在白术多糖结构研究领域的发展方向。
通过对白术多糖结构的深入研究，我们有望进一步挖掘其潜在的医疗和保健功能，并为中药白术的合理应用提供科学依据。
文章结构部分的内容可以写成如下形式：1.2 文章结构本文按照以下结构进行叙述和分析：1. 引言：介绍本文的研究对象——白术多糖，并总述本文的目的和架构。
2. 正文：详细描述白术多糖的结构要点，主要包括以下内容：2.1 白术多糖的结构要点1：介绍白术多糖的基本组成和化学性质，以及其在生物体内的分布和功能。
2.2 白术多糖的结构要点2：探讨白术多糖的分子结构和化学键的连接方式，同时分析其结构与功能之间的关系。
3. 结论：对以上内容进行总结，并展望白术多糖结构研究的未来发展方向。
通过以上结构的布局，本文将全面系统地介绍白术多糖的结构特点，帮助读者更好地理解和认识该物质。
同时，通过对其结构与功能的分析，有助于进一步研究白术多糖的药理活性和医学应用价值。
多糖结构分析
一：多糖中的单糖组分分析一般对多糖进行完全水解，水解条件：封管0.5~3M硫酸或1~6M盐酸，80℃~100℃水解2.5~8h 即可。
或控制水解条件，进行逐步水解，如封管0.025M硫酸，100℃水解15min，30min，45min 等，水解液用碳酸钡或氢氧化钡中和，滤液浓缩后可用纸层析、薄层层析、气相层析或高压液相层析等鉴定。
二：相邻单糖基连接方式分析将甲基化多糖水解得到甲基化的单糖，而此单糖上甲基化之羟基所在的碳原子就是连接键所在。
高碘酸氧化是定量反应，Smith降解是将高碘酸氧化产物进行还原，酸水解或部分水解，从高碘酸的消耗量和不同产物的生成，便可进行糖苷键位置的判断-产物中若有一分子比例的甲酸生成而消耗两分子比例的高碘酸根时，表明多糖的非还原末端或非末端部分有1-6苷键相连的单糖基存在；产物中若有赤藓醇生成，则提示有1-4结合苷键；若有甘油生成，有1-6、1-2结合的苷键或有还原性末端葡萄糖基等；若产物中能检出单糖，如葡萄糖、半乳糖、甘露糖等，则有1-3苷键存在。
结合¹³C-NMR确定连接位置。
三：端基碳苷键构型分析1：酶解实验：不被淀粉酶水解的多糖，无α-苷键，与纤维素酶有作用者，存在β-苷键。
2；IR：α-型差向异构体的C-H键在844±8cm‾¹处有一个吸收峰；β-型的C-H键在891±7cm‾处有一个吸收峰。
但是，海藻糖、阿洛糖和异阿洛糖的α-型和β-型同时存在的情况下，就不能以次来判断。
3：¹H-NMR：端基碳的δ值大于5.00ppm者，糖苷键为α-型，小于5.00ppm者，则为β-型。
4；¹³C-NMR：α-型连接的C₁化学位移在97-101ppm，β-型的在103~105ppm。
对甘露聚糖不能用化学位移判断α-型或β-型。
可用裂分常数决定，一般¹Jｃ-ｈ=170HZ，为α-型，160HZ 者为β-型。
五味子多糖的研究概况分析
五味子多糖的研究概况分析近年来，五味子多糖被越来越多的科学家和医学专家所关注和研究。
五味子是一种中药材，被用于治疗多种疾病和症状。
而五味子多糖则是五味子中的一种活性成分，具有很强的药用价值和生物学功能。
五味子多糖是一种多糖类物质，由多种单糖分子组成，其中主要成分为葡萄糖、甘露糖和木糖。
目前的研究表明，五味子多糖具有多种生物学功能，包括免疫系统调节、抗氧化、抗肿瘤等。
因此，五味子多糖成为了研究的热点。
免疫系统调节是五味子多糖的一种重要功能。
五味子多糖可以促进免疫系统的功能，增加人体免疫细胞的数量和活性，从而提高机体的抵抗力。
此外，五味子多糖也可以增强药物的免疫调节作用，提高药物的疗效，具有重要的临床应用价值。
抗氧化是另一种五味子多糖的功能。
最近的研究表明，五味子多糖可以通过清除自由基和减少氧化应激反应来保护细胞免受氧化损伤。
氧化损伤是引发多种疾病的重要原因之一，如心血管疾病、癌症等。
因此，五味子多糖的抗氧化功能也具有重要的研究和应用价值。
除了免疫系统调节和抗氧化，五味子多糖还具有抗肿瘤作用。
研究发现，五味子多糖可以通过多种途径抑制人体肿瘤细胞的生长和转移，并且可以增强放疗和化疗的疗效。
因此，五味子多糖的抗肿瘤作用受到了广泛关注和研究。
总之，五味子多糖作为一种天然活性成分，具有多种生物学功能，如免疫系统调节、抗氧化、抗肿瘤等。
这些功能为五味子多糖的研究和应用提供了广阔的空间和前景。
未来，我们可以进一步挖掘五味子多糖的潜力，开发新的五味子多糖药物，以期更好地服务于人类健康。
多糖类药物基于理化性质的质量分析
就显得尤为重要 。
１ 多糖类药物简介 多 糖 类 药 物 顾 名 思 义 ， 由多 糖 类 物 质 为 主 要 有 效 成 分 的药 品 的 总 称 。 要 分 为 动 物 多 糖 类 药 物 、 生 物 多 糖 类 药 主 微 物 、 物多糖类药 物等若 干个 大类 。 植 中国药 典 ２ １ ０ ０版 中 收 录 的 多 糖 类 药 物 共 计 多糖类药物 是 目前研 究最 多， 科研方 向最 为全面 ， 临床应用最早也是最为普遍 的一种 药物 ， 中常见的重要药物如 ： 其 肝素 ， 类肝素 ， 透明质酸 。硫 酸软骨素 ， 聚糖 等多种动 物多糖类药物 。 壳 广泛应用于各个 医学 领 域 。 ２ 微 生 物 多 糖 类 药 物 微 生 物 多 糖类 药 物 作 为 近 些 年 ） 的新型科技 ， 因为 与传统 的多糖类药物相 比较具有 易获得 ， 成 分 单 一 有 效 ， 取 简 单 ， 产 周 期 短 等 优 势 。 而 作 为 新 型 提 生 的药物替代产品被广泛应用。 且具 有广阔的发展 前景 。 并 主 要 有 效 成 分 如 ： 旋 糖 酐 类 、 芝 糖 肽 、 菇 多 糖 、 苓 多 左 云 香 猪 糖 、 头菌多糖 、 耳多糖等。 猴 银 ３ ）植 物多糖类药 物 植物 多糖类药物 是我 同研 究最 早， 应用最早 的药物之一 。 中国的古代便对草药进行 了系统 的 研 究 。 中绝 大 多数 有效 成分 便 是 多糖 类 药 物 。 今 植 物 其 至 多 糖 类 药 物 依 然 发 挥 着 不 可磨 灭 的 功 效 ，广 泛 的 应 用 于 各 类 疾 病 的 治 疗 当 中 。 如 ： 参 多 糖 、 五 加 多 糖 、 芪 多糖 、 人 刺 黄 枸杞多糖 、 当归多糖 、 牛膝多糖 、 海藻多糖等 ２ 多 糖 类 药 物 的 质 量 分 析 多 糖 类 药 物 的 质 量 分 析 主 要 以理 化 分 析 为 分 析 手 段 ， 来 评 价 多糖 类 药 物 的 质 量 优 劣 。 如 下分 析指 标 ： 糖 类 药 有 多 物 的结 构 分 析 、多糖 类 药 物 中 的单 糖 组 分 分 析 、分 子 量 测 定 、 苷 键 连 接 方 式 的 测 定 、 苷 键 连 接 位 置 的测 定 、 糖 糖 糖 多 类药物 的的理化性质综合分析 等。
多糖类药物分子量及其分布测定
多糖类药物分子量及其分布测定的意义和方法，各种分子量的介绍，介绍国内外分析方法的建立方法及对比，以低分子肝素为例。
有EP & BP 方法和USP 方法 一、原理•凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography, GPC)测定多糖分子量及分子量分布 •或高效分子排阻色谱（High performance size exclusion chromatography, HPSEC) •检测器：紫外( ultra-violet ， UV , 200～400nm)和 • 示差（refractive index, RI)1. UV 检测器•具有共轭双键的化合物都具有紫外吸收共轭双键→π π 和n → π 电子跃迁，从而导致紫外吸收由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光，经过透镜和遮光板变成两束平行光，无样品通过时，参比池和样品池通过的光强度相等，光电管输出相同，无信号 产生；有样品通过时，由于样品对光的吸收，参比池和样品池通过的光强度不相等，有信号产生。
根据朗伯—比尔 定律，样品浓度越大，产生的信号越大， 这种检测器灵敏度高，检测下限约为 10-10 g ／ml ，而且线性范围广，对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱。
2. 示差折光检测器•示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来检测的。
•凡是具有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种检测器。
•示差折光检测器分为反射式和折射式两种。
•反射式的原理：光在两种不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率成正比。
如果入射角固定，光线反射百分率仅与这两种物质的折射率成正比。
光通过仅有流动相的参比池时，由于流动相组成不变，故其折射率是固定的；光通过样品池时，由于存在待测组分而使折射率改变，从而引起光强度的变化，测量光强度的变化，即可测出该组分浓度的变化。
•示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为10-7g/ml 。
多糖类药物的研究进展
多糖的药理作用
降血糖活性 研究表明，一些多糖能够促进胰岛分泌 胰岛素，影响糖代谢酶的活性，抑制糖 异生，而产生降血糖作用。薏苡仁多糖 能显著降低正常小鼠及四氧嘧啶和肾上 腺素所致的高血糖小鼠的血糖。人参多 糖有降血糖作用。香菇胞外多糖可显著 降低链脲菌素诱导的糖尿病大鼠血浆中 的Glc、总胆固醇和二酰甘油水平。
多糖的分离纯化
除蛋白 传统上有Sevag法、三氟三氯 乙烷法及三氯乙酸－正丁醇法等。另外， 也可以在多糖的水提液中加入中性蛋白 酶和糜蛋白酶，与有机溶剂结合进行脱 蛋白。除蛋白的效果可以用茚三酮反应 检测，结果呈阴性；同时在200～ 280nm处测定除蛋白后样品的紫外吸收 曲线来检测效果，除掉蛋白质的多糖溶 液一般在260～280 nm的紫外吸收峰会 消失，说明多糖不含有蛋白。
糖组学及在生命科学研究中的意义
第二，就像磷酸化一样，糖基化是所有真 核蛋白质翻译后加工的一种形式，但蛋白 质糖基化远较单一结构形式的磷酸化复杂 得多，因此聚糖研究存在各种技术困难， 蛋白质组学中的大多数方法不适用糖基化 研究。第三，按医学观点聚糖研究非常实 用，细胞表面聚糖是生物体所必需的，可 以避免各种微生物对寄主细胞的感染。
多糖的结构分析
化学分析方法 酸水解 鉴定多糖的单糖组成常用的方 法。 甲基化法 阐明单糖的连接方式(键型)、 重复结构中某种单糖的数目、末端糖的 性质及分支点的位置等。 过碘酸氧化 确定多糖中各种单糖的键 型及其比例。 Smith降解 阐明多糖中单糖的部分连接 顺序和键型。
多糖的结构分析
物理分析方法 紫外光谱法 检测多糖中是否含有蛋白质、核酸、多 肽类。 红外光谱法 确定吡喃糖的苷键构型及常规观察其他 官能团。 气相色谱法 分析多糖水解后单糖的组成及比例。 核磁共振光谱法 主要用于确定多糖结构糖苷键的构 型以及重复结构中单糖的数目。 质谱法 鉴定各种甲基衍生物的碎片、确定各种单糖 残基的连接位置。电喷雾电离质谱、基质辅助激光解 吸电离飞行时间质谱和快原子轰击质谱还可以测定糖 链的相对分子质量及糖链的一级结构。
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生物测定法——肝素测定方法
标准品稀释液的配制:精密量取标准品溶液，按高、中、 低剂量组（ ds1 、ds2、 ds3 ）用0.9%氯化钠溶液配成 三种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值为1:0.7。 供试品稀释液的配制：按供试品的标示量或估计效价 （AT），照标准品溶液与稀释液的配制法配成高、中、 低（ dT1 、dT2、 dT3 ）三种浓度的稀释液。 各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反 应平行线测定法计算效价及实验误差。 可信限率（FL%）不得大于5%。
6
O- （N-）糖苷键型糖蛋白
O-糖苷键
N-糖苷键
7
磷酸乙醇胺残基
磷脂酰肌醇-聚糖的糖 蛋白
8
蛋白聚糖
软骨蛋白聚 糖:聚集体的分
子量非常大（大 约为2×108）， 其中含有透明质 酸、硫酸角质素、 硫酸软骨素、连 接蛋白、核心蛋 白和大量的寡糖 链。
9
多糖组成-单糖
吡喃 呋喃
六员环糖类似于吡喃，所以又称之为吡喃糖，而五员环糖 类似于呋喃，称之为呋喃糖。
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质谱法
质谱技术的基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子间质 量与所带电荷比（m/z)的差异来分离并确定相对分子质量，是 目前测定相对分子质量最精确的方法。 电喷雾离子化（electro spray ionization，ESI）技术 基质辅助激光解析电离（matrix-assisted laser desorption ionization） 飞行时间质谱（time of flight mass spectrometry，TOFMS） 傅里叶变换质谱（fourier transform mass spectrometry， FTMS）
CH2OH O OH OH O
CH2OH 直链淀粉 O OH OH O
O OH
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纤维素
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多糖的理化性质
旋光性 硫酸蒽酮反应（620nm） 硫酸苯酚反应(490nm) 氨基己糖——乙酰丙酮(525nm) 糖醛酸——硫酸咔唑(520nm)
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第二节 多糖的纯度测定
（一）超离心法: 单一区带 （二）电泳法： 单一色带 （三）凝胶色谱法： 单一洗脱峰 （四）旋光法： 均一组分
环化单糖中氧化数最高的碳称为异头碳。在环式结构
中，异头碳是手性碳，所以环化的醛糖或酮糖可以呈现两
种异头构型中的一种，即-或-构型。
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葡萄糖环状结构
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椅式构象
β-D-葡萄糖
α-D-葡萄糖
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直链淀粉是葡萄糖以α-1，4糖苷键结合成的链状化合物
CH2OH O O OH
CH2OH O OH OH O
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糖蛋白有三种主要类型
糖蛋白分为三种主要类型：O-糖苷键型糖蛋白、N-糖 苷键型糖蛋白和连有磷脂酰肌醇-聚糖的糖蛋白。 在大多数的O-糖苷键型糖蛋白中，GalNAc残基通过O糖苷键与一个丝氨酸或苏氨酸残基连接形成，缩写为 GalNAc-Ser/Thr。
在N-糖苷键型糖蛋白中，GlcNAc残基通过N-糖苷键与 一个天冬酰胺残基相连，缩写为GlcNAc-Asn。
3
4
组成分类：
均一多糖 不均一多糖 粘多糖：含氮的不均一多糖 结合糖：肽聚糖、脂多糖、糖蛋白 (glycoproteins)和蛋白聚糖 糖蛋白通过糖肽键(carbohydrate-peptide linkage) 将糖链和肽链两部分连接起来,连接方式主要分 为β -构型的N-糖苷键和α -构型的O-糖苷键.
连接键构型
一种
一种
二肽与双糖
2个相同氨基酸连接形成的二肽仅1种
Ala
Ala
2个相同单糖连接形成的双糖有11种
Glc-Glc α型 1-1连接 三种海藻糖 （α-α，α-β， β-β） 1-2连接 曲二糖 1-3连接 黑曲二糖 1-4连接 麦芽糖 1-6连接 异麦芽糖
β型
槐糖
昆布二糖
纤维二糖
龙胆二糖
生色底物法
抗Xa因子活性测定
以溶液吸收度和浓度的 对数，照生物检定统计 法中量反应平行线测定 法计算出供试品的抗Xa 因子活性 可 信 限 率 (FL%) 不 得 大于10%。
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高效液相色谱法
糖类化合物一般缺乏特征的紫外吸收，为提高其在高 效液相色谱检测中的灵敏度，常常采用衍生的方法使 其成为具有紫外或荧光吸收的衍生物，再进行检测。 包括柱前衍生-HPLC 荧光标记-HPLC 柱后衍生-HPLC 直接HPLC和离子交换色谱法 如2015版《中国药典》中，采用离子交换色谱法对硫 酸软骨素进行含量测定，并以外标法计算待测样品含 量。
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电泳法
随着电泳技术的发展，高效毛细管电泳（ HPCE）越来越多地应用于多糖类化合物的 分离分析中，此法所需样品量小、分析速 度较快且可同时分析多个样品。对于带有 电荷的多糖可直接进行电泳分析，而不带 电荷的多糖也可通过酸性荧光标记试剂衍 生后进行电泳分析。将待测样品与已知分 子量的一系列标准品的电泳结果进行比对 ，可得出待测样品的分子量。
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（2）、部分酸水解、碱水解 选择温和的条件水解多糖，使糖链中某 种类型的键特异性地打断。
（3）、乙酰解 多糖经过乙酰解反应（醋酐、冰醋酸） 可生成乙酰化单糖和寡糖
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（4）、甲醇解
多糖链在80－100℃条件下与无水甲醇反 应能将糖链变成组成单糖的甲基糖苷。
甲基糖苷能转化为三甲基硅醚衍生物或乙 酰基衍生物，进行气相色谱分析。
粘度法：用已知结构相似的多糖决定K值 （ η ＝ K M2），然后测出待测多糖的特 性粘数η ，计算待测多糖的分子量。
超离心法：根据测得的沉降系数计算多糖 的平均分子量。
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高效液相色谱法测定分子量及分布
色谱条件： 凝胶柱（分子量大小），示差折光检测器。 标准曲线： 标准曲线：LogMW = a+b tR MW为重均分子量，tR为保留时间 待测多糖分子量（GPC专用软件）： 重均分子量 Mw=∑(RIiMi)/∑ RIi Mi为供试品在保留时间ti 时的分子量，RIi在第i部分中 被洗脱物质的量（重量）。
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生色底物法原理－肝素、低分子肝素
当蛋白酶（FⅩa）从 生色底物分裂出pNA时， 发色物的产生量与剩余 的酶量成正比，与肝素 效价成反比。
405 nm测定。
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生色底物
Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰； 对-硝基苯胺（pNA）。 酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产 生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。 32
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第四节、多糖的含量测定
比色法（硫酸咔唑法、乙酰丙酮法、 硫酸苯酚法、蒽酮法）
生物测定法（肝素钠）
生色底物法（低分子量肝素钠） 高效液相法（硫酸软骨素）
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乙酰丙酮法（elson-morgan）
——氨基己糖
原理： 氨基己糖在碱性条件下 加热，可与乙酰丙酮缩 合成吡咯衍生物，该衍 生物与对－二甲氨基苯 甲醛反应，反应物呈红 色，于 525nm 测定吸 收度。
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第三节 多糖的分子量测定
凝胶色谱法 粘度法 高效液相色谱 电泳法 质谱法
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凝胶层析法
凝胶层析法：将分子量不同 的蛋白质通过一定孔径的凝 胶固定相，由于各组分流经 体积的差异，使不同分子量 的组分得以分离。 最先淋出的是最大的分子。
Kd = 0， Ve= V0 ； Kd = 1 ， Ve= V0+Vi ； 0＜Kd＜1，Ve=V0+KdVi 。
右旋糖酐(Dextran)，又名葡聚糖，是最早发现的微生物 多糖，也是世界上第一个工业化的微生物多糖。右旋糖酐 是蔗糖经肠膜状明串珠菌产生的右旋糖酐蔗糖酶催化后生 成的高分子葡萄糖聚合物。右旋糖酐注射液可作为抗血栓 药（抗血小板）降低血液黏性，在贫血症方面用于扩增血 容量。 细菌荚膜多糖的临床应用多为疫苗，其对肺炎和流行性脑 膜炎的预防效果十分显著。该多糖一般以2～5种单糖连接 形成的糖链为重复单位，在长链状多糖结构的主链上常常 带有支链。
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色谱条件与系统适用性试验 用强阴离子交换硅胶为填充剂（如Hypersil SAX柱，250 mm 4.6 mm，5 μm），以水为流动相A，以2 mol/L氯化 钠溶液（为流动相B；流速1.0 ml/min，检测波长232 nm。组分流出顺 序为硫酸软骨素B、硫酸软骨素C和硫酸软骨素A，三者色谱峰的分离度 均应符合要求。 含量测定法 取待测品约0.1 g，精密称定后置10 ml容量瓶中加水溶解并 稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，精密量取100 μl，置具塞试管 中，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液800 μl，充分混匀，再加入硫酸软骨素 ABC酶液100 μl，摇匀，置于37℃水浴中反应1 h，取出，100℃加热5 min，用冷水冷却。离心（10000 rpm）20 min后分取上清液，以0.45 μm滤膜滤过，精密量取20 μl注入色谱仪，记录色谱图。另取硫酸软骨 素钠对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以硫酸软骨素A、硫 酸软骨素B与硫酸软骨素C的峰面积之和计算，即得。
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蒽酮法测定糖含量（总糖）
原理：多糖在浓硫酸中 水解后，进一步脱水生 产糠醛类衍生物，与蒽 酮作用形成蓝色化合物， 620nm进行比色测定。