实验四 光电比浊法检验pH对微生物的影响

比浊法--在一定浓度范围内，菌悬液中细胞 浓度与液体光密度成正比，与透光度成反 比。菌数越多，透光量越低。通过光电比 色计600nm测定光密度或透光率反映细胞 的浓度。常用于观察和控制培养过程中微 生物菌数的消长情况。如细菌生长曲线的 测定和发酵罐中的细菌生长量的控制等。 培养液的色调不宜过深，同时菌悬液浓度 必须在107/ml以上才能显示可信的混浊度。 其优缺点与直接测数法相同。
三、实验器材
1．菌种：大肠杆菌培养液
2．仪器、材料：722s分光光度计，试管，吸 水纸，无菌吸管，无菌生理盐水等。
三、实验器材
培养基配置:牛肉膏蛋白胨液体培养基，牛 肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，水1L，用 1mol/L NaOH和1moll/L HCL分别调制3、5、 7、9、11，每pH样品配200ml分装在20个大 试管内，每管8ml。
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二、基本原理（二）
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌 体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。 在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光 度成反比，与光密度成正比，而光密度或 透光度可以由光电池精确测出。 用一系列已知菌数的菌悬液测定光密 度，作出光密度－菌数标准曲线。然后， 以样品液所测得的光密度，从标准曲线中 查出对应的菌数。
四、操作步骤
1．标准曲线制作 （1）编号 取无菌试管6支，分别编号为1、2、3、 4、5、6。
（2）测OD值以无菌生理盐水作空白对照，不同浓度 的菌悬液摇匀后于600nm波长测定OD值。
(3)以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细胞数 为横坐标，绘制标准曲线。 2．样品稀释 待测样品如果浓度较高，可以统一 稀释相同倍数。600nm波长测定光密度。
四、操作步骤
无菌操作吸取0.3ml的菌悬液，接种于装有8ml不 同pH的牛肉高蛋白胨液体大试管中。 将接种大肠杆菌的8支试管置于37℃室温保持2448h。 将上述试管取出，利用722型分光光度计测定培养 物在OD600nm值。 测OD值以无菌空白培养基为对照，不同浓度的菌 悬液摇匀后于600nm波长测定OD值。 以光密度(OD)值为纵坐标，以每pH处理为横坐标， 绘制标准曲线。
光电比浊法检验pH对 微生物的影响
一、实验目的及要求
1.了解pH对微生物生长的影响，确定微生物 生长所需要最适pH值条件。
2.了解光电比浊计数法的原理。 3.学习、掌握光电比浊计数法的操作方法。
二、基本原理(一)
pH对微生物生命影响通过几方面：
1）蛋白质、核酸等生物大分子所带电荷发生变 化从而影响活性； 2）引起细胞膜电荷变化，导致微生物细胞吸收 营养物质能力改变； 3）改变环境中营养物质的可给性及有害物质的 毒性。 pH在7.3附近最合适。在4-9范围内生长较合适。
五、实验报告
1.结果
测定的结果以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细
胞数为横坐标，绘制标准曲线。
2．思考题 (1)光电比浊计数这种计数法有何优缺点? (2)光电比浊计数在生产实践中有何应用价值?