实验九 分光光度计的使用

实验九分光光度计的使用
【目的】
了解分光光度法的基本原理，熟悉721分光光度计的操作方法，为今后使用该仪器奠定基础。

【原理】
有色溶液颜色的深浅与其中呈色物的含量成正比关系。

在定量分析中，利用比较有色物质溶液的颜色深浅来测定物质含量的分析方法称比色法。

被测物质中，有的本身就是有色物质，但多数被测物质本身无色或颜色很浅，须加入某些化学试剂使测物质与之发生反应生成有色物质。

物质的颜色是由于物质吸收某种波长的光线以后，通过或反射出某种颜色的结果。

当一定波长的单色光通过该物质的溶液时，该物质都能有一定程度的吸光作用，单位体积内的溶液中该物质的质点数越多，对光线吸收越多。

因此，利用物质对一定波长光线吸收的程度测定物质含量的方法，称为分光光度法。

分光光度法依据Lambert-Beer定律。

设一束单色光I0射入溶液，由于部分光线被溶液吸收，通过的光线为I t，则I t/I0之比为透光度，若透光度T（%）。

则
T= I t/I0×100% （1）
透光度（T）的倒数（1/T）反映了物质对光的吸收程度。

在实际应用时，取（1/T）的对数值，做为吸光度用A表示，即
A=Lg（1/T）=-LgT （2）
吸收度（A）又称消光度（E）或光密度（OD）。

根据Lambert-Beer定律推导，当一束平行单色光通过均匀、无散射现象的溶液时，在单色光强度、溶液温度等条件不变条件下，溶液对光的吸收度（A）与溶液的浓度（C）及液层厚度（L）的乘积成正比。

即
A=KCL （3）
在实际比色时，标准溶液与被测溶液使用相同的比色杯，即液层厚度（L）相同。

K 为常数。

测定同一种物质时，K标=K测。

所以，将比简化为仅是溶液对光吸收度（A）与其浓度（C）之间的关系。

即溶液的浓度越大，吸光度越大。

可以通过测定吸光度求知某一溶液的浓度。

设：测定管的吸光度和浓度分别为A测和C测，标准管吸光度和浓度分别为A标和C标，
根据（3）式A=KCL得知：
A测：A标= C测：C标
则 C测= A测/ A标×C标
上式中C标为已知，A测与A标可在比色时读出数值，把这些数值代入公式，即可求出测定管浓度。

【721-分光光度计的使用】
1．接通电源，打开开关关指示钮，打开比色箱盖。

2．选择所需渡长、转动灵敏度旋钮选择适宜灵敏度。

3．转动手0旋钮，使检流针指针对T为0，将空白液、标准液、测定液分别倒入3个比色杯中，将比色杯放入比色盒，再将比色盒放入比色箱中，使空白液对准光路，合上比色箱盖。

4．转动100旋钮，使检流针指针T为100%（A为0）。

预热20分钟，观察指针是否稳定。

5．预热后，反复几次调节T=0、T=100%即开盖调“0”，闭盖调“100”。

6．轻轻拉动比色槽拉杆，先后将标准液、测定液对准光路，分别纪录A标数值和A测数值。

7．比色完毕，关闭电源拔下插头，恢复各旋钮至原来位置，取出比色杯，合上比色箱盖，套上布罩。

将比色杯洗净后倒置晾干。

8．计算根据记录的A测、A标和已知的C标3个数值，按
C测= A测/ A标×C标公式算出C测数值。

【操作练习】
配制不同浓度的重铬酸钾溶液（比色时选用单色光波长为440nm）
选择一中间浓度作标准液，其余的为测定液，蒸馏水为空白液。

逐一测定A值，并分别计算出各测定液浓度。