生化分析知识点总结

一．氨基酸

1 八种必须氨基酸的英文命名及缩写。

赖氨酸Lysine Lys K

甲硫氨酸Methionine Met M

缬氨酸valine Val V

异亮氨酸isoleucine Ile I

苯丙氨酸phenylaninePhe F

亮氨酸leucine Leu L

色氨酸tryptophan Try W

苏氨酸threonine thr T

2 俩种氨基酸组成多肽时，有几种？

成二肽，有四种

成三肽时，有八种（仅供参考，不一定正确，有不同意见请指出来）。二酶分析

1酶活性的定义，国际常用的单位：

酶活性（enzyme activity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。

酶活性单位：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。

a．国际单位IU（µmol/min）

定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每分钟催化1µmol 底物转变为产物的酶量，为1IU或1U。1IU=1µmol/min。

B．Katal单位（mol/s）

定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的酶量。1Katal＝1mol/s。

IU与Katal单位的关系：1katal = 60×106IU，

1IU = 16.67nkatal

3 酶促反应

酶促反应的历程：延滞期，线性期，非线性期

a．酶促反应式：

B．米氏方程

C ．Km 的含义与意义

．Km 的含义:当Km=[S]时，可见Km 值等于反应速率

达到最大反应速率Vmax 一半时的底物浓度。

Km 的意义：

Km 是酶的一个特征性常数（其他如等电点），

Km 的大小只与酶的性质有关

反映酶对底物亲和力的大小

选择酶的最适底物或天然底物

计算不同底物浓度时的反应程度

鉴别酶的种类

判断可逆反应的速率

判断酶偶联反应的限速反应

计算工具酶的用量

3.两种测定酶活性的方法：

a ．定时法

原理：

定时法是固定时间法的简称，是指测定反应开始后一段时间（t1～t2）产物的增加量或底物的减少量以测定酶活性的方法。该方法一般需要在反应进行到一定时间后用强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止反应。

优点：简单、不需要保温设备、不用考虑酶的活性。

2max V v

缺点：如果不做预试验则无法了解其酶促反应进程（t1-t2）是否为零级反应，故难以确保测定结果的准确性。

b ．连续检测法：

原理：

连续监测法是指在多个时间点连续测定产物（或底物）在线性期内的生成量（或消耗量）即零级反应速率以测定酶活性的方法，又称速率法、零级反应速率法、斜率法。

该方法是在一定的反应时间区段内（至少9～120s ）每隔一定时间（常为2～30s ）读取一次吸光度值，连续测定多点（至少4点），然后对吸光度数据作最小二乘法处理，再用线性期内的数据计算单位时间内的反应速率△A/min ，最后计算出酶活性。

连续监测法的特点：属于即时观测，无需停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂，可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直线的线性期；

连续监测法要求不显色而是直接测定底物（或辅助底物即中间底物）或产物量的变化，因此，可以选择紫外吸收法或生色原显色法；

能够准确地控制温度、pH 值和底物浓度等，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及全自动生化分析仪都能满足这些要求；

测定结果常较定时法高。

u Tu u u V V l t A L U ⋅⋅⋅∆=ε610/

4.固定化酶和游离酶的优点和缺点：

a．固定化酶

优点：增加了酶的活性和稳定性

可回收重复使用，降低了酶耗

酶反应过程便于控制

适用于连续反应

易于反应体系分离

对环境的耐受性增强

缺点：对酶的物理化学性质产生一定的影响。

b．游离酶

优点：易溶于水

于底物的作用面积大，反应充分

活性接近生理状态

缺点：难与底物分离

反应条件控制严格

不能反复利用，易失活

三．蛋白质分析

1. 蛋白质的盐析，变性及二者的区别

盐析：在蛋白质溶液中加入某些无机盐的浓溶液，使蛋白质的溶解度下降而从溶液中析出来的现象。

变性：在热、重金属、酸、碱、某些有机物等作用下，蛋白质的物理性质和生理功能发生改变的现象，称为蛋白质的变性。

蛋白质盐析和变性的区别与对比

2.蛋白质的序列分析：测得的是蛋白质的一级结构。

蛋白质的结构：

一级结构：蛋白质的氨基酸残基的序列，

一级结构的作用力：肽键，S-S键。

二级结构：α-螺旋，β-折叠，β-转角，无规卷曲

二级结构形成的力量：氢键

超二级结构：若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体

是球状蛋白质的折叠单位，在空间上彼此分隔，各自具有部分生

物功能的结构

含100~200个氨基酸残基，

1条长的多肽链首先折叠成几个相对独立的结构域再缔合成三级结构。

三级结构：由若干二级结构单位，完全折叠后可组成一个完整的蛋白质分子，即为三级结构，可具有活性。

三级结构形成的力量：氢键，离子键，疏水键，双硫键

3.蛋白质分子量的测定方法：十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）和凝胶过滤层析法。

a．十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶色谱法：

基本原理：

SDS可以破坏蛋白质中的疏水键和氢键，并按一定比例（1g蛋白质结合1.4g SDS）和蛋白质组成复合物，使蛋白质带的负电荷的量远远超过其本身的电荷量，并与蛋白质的分子量成正比。

2-巯基乙醇破坏了蛋白质二硫键，使蛋白质呈椭圆棒形，其轴长与分子量成正比。

μ＝q/f＝q/6 r ，所有蛋白质的迁移率都相同。

b．凝胶过滤层析法：

原理：蛋白质在凝胶过滤层析柱中的洗脱体积Ve，与其分子量的关系如下式所示：

lgMr＝K1－K2 Ve

在实验中，只要测得几种蛋白质分子量标准物的Ve，并以它们