饲料中粗蛋白质测定

操 作 步 骤
（七）蒸馏装置的洗涤

操 作 步 骤


蒸汽发生器加入三分之二蒸馏水，同时加入甲 基红指示剂数滴，硫酸数滴，加热，在蒸馏过 程中注意此溶液为橙红色，否则补加硫酸 接通电源，将蒸汽发生器蒸馏中的水煮沸（提 问），连接冷凝装置中的冷却水（下进上出）。 蒸馏装置的洗涤 向凯氏定氮器的反应内室中 加入适量蒸馏水，通入蒸汽，煮沸3-5分钟， 冲洗。
★蒸馏装置的准备
蒸 馏
操 作 步 骤
★量取20毫升硼酸溶液（20毫升量杯量取）
于锥形瓶中，放在冷凝管下端，使末端浸入 硼酸溶液中。
操 作 步 骤
蒸 馏

蒸 馏
★用移液管（漂 洗3次）准确移取 10毫升试样液， 从玻璃杯入口处 放入反应内室中， 用少量蒸馏水 （10ml左右）冲 洗入口，洗液入 反应室，塞好玻 璃塞。

方纸快：
仪 器 设 备
（十四）药勺、洗瓶


药勺：用于固体试剂 及饲料样品的取出 洗瓶：盛蒸馏水
仪 器 设 备
五、试样的选取与制备



选取试样：按照饲料样本的采集原则选 取试样 试样的制备：“四分法”缩至200克 粉碎：全部通过0.44mm筛（40目） 装瓶：装入样品瓶，贴上标签备用
六、步骤----（一）凯氏烧瓶的准备 （两个平行样）
2号：
100/ 10 ×100%＝62.13%



★重复性：试样取两个平行样，其算术 平均值为结果。 CP在25%以上，允许相对偏差为1% CP在10-25%之间，允许相对偏差为2% CP在10%以下时，允许相对偏差为3% 相对偏差=│测定值-平均值│/平均值
平均值、相对偏差计算

◆蒸汽发生器



平底烧瓶 打孔胶塞 丁形玻璃管 胶管
仪 器 设 备
◆凯氏定氮器


小玻杯、玻璃塞 反应室：内室、外室、 进汽管或废液虹吸管、 蒸汽进汽管 废液排除管
仪 器 设 备
◆冷凝器


双层套管：内管、外 管 乳胶管：连接冷凝水， 下进上出
仪 器 设 备
（十三）称样纸

长纸条：
操 作 步 骤
★移液管漂洗
蒸 馏
操 作 步 骤
操 ★加试样液：准确移取10毫升试样液，从玻璃 作 杯入口处放入反应内室，用少量蒸馏水（10ml 步 骤 左右）冲洗入口
蒸 馏
★加碱
蒸 馏

操 作 步 骤
用量杯量取10毫升氢 氧化钠溶液，加至入 口处，小心提起玻璃 塞，使之快速流入反 应室，迅速塞好玻璃 塞，在入口处加水密 封。
▲试样消煮液的转移

操 作 步 骤
旋摇
▲定容
试 样 消 煮 液 的 转 移 与 定 容

操 作 步 骤
用蒸馏水稀释到容量瓶容积的2/3时，将 容量瓶直立旋摇，稀释至标线时，等候 1~2分钟，控制洗瓶逐滴加水至刻度处， 摇均备用。
▲定容
容量瓶容积2/3时 直立旋摇
操 作 步 骤
▲定容 (100ml)
操 作 步 骤
样品的称量

记录：
⑴称样纸+样品重（m1） 1号：0.8835g 2号：0.9112g（取四位小数） ⑵回称纸重（m2） 1号：0.5833g 2号：0.5842g（取四位小数） ⑶计算试样质量（m） m= m1 —m2 1号：0.3002g 2号：0.3270g（取四位小数）




V1--滴定空白时消耗盐酸标准溶液体积，ml
C --盐酸标准溶液浓度，mol/L M--试样质量，g V--试样分解液总体积， ml Vˊ--试样分解液蒸馏用体积， ml 0.0140-- 1.00 ml盐酸标准溶液[c（HCl）= 1.00 00 mol/L]相 当的、以克表示的N的质量 6.25--N换算成蛋白质的平均系数 c=0.0213
（七）移液管

移液管：10ml
（八）刻度吸管

刻度吸管：10ml
仪 器 设 备
（九）量杯
量杯： 10ml（量取NaOH溶液） 20ml （量取硼酸溶液）

仪 器 设 备
（十）消煮架

消煮架
仪 器 设 备
（十一）通风橱

内装排气扇，排 除有毒气体
仪 器 设 备
（十二）半微量凯氏蒸馏装置
仪 器 设 备
三、试剂
●硫酸钾（或硫酸钠） ●五水硫酸酮
●混合催化剂：

五水硫酸铜∶硫酸钾 (或硫酸钠)=1∶15 （W/W）研碎混均
●混合指示剂

甲基红0.1%乙醇容液、 溴甲酚绿0.5%乙醇容液， 两溶液等体积混合
●盐酸标准溶液

C(HCl)=0.0213moL/L
盐酸标准溶液配制与标定

操 作 步 骤
蒸 馏 装 置 的 洗 涤
废液排出 同时夹住进气管、废液管，使液 体虹吸到外室，再打开废液管，排出废液。 一般洗涤3次 。

操 作 步 骤
蒸 馏 装 置 的 洗 涤
（八）蒸馏
蒸 馏

操 作 步 骤
仪器准备 锥形瓶：150毫升（装硼酸溶液）洗净烘干 移液管：10毫升（移取试样分解液） 量杯：10毫升（量取氢氧化钠溶液）20毫升 （量取硼酸溶液） 将以上仪器洗涤干净备用
仪 器 设 备
（三）滴定管

滴定管： 酸式，25ml 读数 0.00
仪 器 设 备
（四）锥形瓶：150ml（2个） 锥形瓶：
150ml（2个）
仪 器 设 备
（五）容量瓶：100ml(2个)

容量瓶： 100ml(2个)
仪 器 设 备
（六）凯氏烧瓶

凯氏烧瓶： 100ml(2个)
仪 器 设 备


凯氏烧瓶洗涤干净， 1050C烘箱中烘干（1 小时） 凯氏烧瓶编号备用1号、 2号
操 作 步 骤
样品的称量
（二）样品的称量


天平的准备： 接通电源，预 热20分钟 称样纸约重： 天平调零后， 将称样纸放入 称盘上
操 作 步 骤
样品的称量
样品

鱼粉
操 作 步 骤
样品的称量
称样

称样：称取样品0.2-0.5g(四位 小数)无损的放入凯氏烧瓶中
饲料中粗蛋白质测定 凯氏定氮法
山东畜牧兽医职业学院饲料营养系 饲料营养教研室
一、适用范围
★配合饲料 ★浓缩饲料 ★单一饲料
二、原理


饲料在催化剂的作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸 铵，加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，在用盐酸滴定，测 出含氮量。 CP =含N量×6.25 主要化学反应如下： 2CH3CHNH2COOH+13H2SO4→ (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O (NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO4 H3BO3+NH3→NH4H2BO3 NH4H2BO3+HCl=H3BO3+NH4Cl
平均值＝(61.46%＋62.13%)÷2＝61.79% 相对偏差＝│61.46%－61.79%│÷61.79% ×100% ＝0.53%
作 步 骤
消 煮
操 作 步 骤
消 煮
消 煮
操作步骤
（六）试样消煮液的转移与定容

操 作 步 骤
试样消煮液的转移：
◆100ml容量瓶洗涤干净（并编号与凯氏烧瓶一致）、 漏斗洗涤干净备用。 ◆试样消煮液冷却至室温，用洗瓶加入约20ml蒸馏水， 旋摇，冷却至室温，借助漏斗转移到容量瓶中，多次 反复用少量蒸馏水洗涤凯氏烧瓶与漏斗，洗液全部进 入容量瓶。 注意：每次尽量倒入漏斗中央，少沾内壁。最后凯氏烧 瓶紧靠漏斗内壁，以免最后一滴顺着凯氏烧瓶的外壁 流出。使结果偏低。



称取0.5克蔗糖代替样品，其余步骤同样 品测定。 滴定：空白滴定消耗的0.02mol/L盐酸标 准溶液的体积 V1= 0.25 （两位小数）
八、结果计算
★

粗蛋白(%)=(V2- V1)×c ×0.014 ×6.25/M × V/ Vˊ ×100%
V2--滴定试样时消耗盐酸标准溶液体积，ml


CP(%)= (V2－V1)×c ×0.014 ×6.25/m × V/ Vˊ ×100%＝ (10.15－0.25)×0.0213 ×0.014 ×6.25/0.3002 × 100/ 10 ×100%＝61.46%
1号：

CP(%)=(V2－V1)×c ×0.014 ×6.25/m × V/ Vˊ ×100%＝(11.15 － 0.25)×0.0213 ×0.014 ×6.25/0.3270 ×
★加碱：用量杯量取10毫升氢氧化钠溶液，加 至入口处；小心提起玻璃塞，使之快速流入反 应室。
操 作 步 骤
蒸 馏
★在入口处加水密封 反应室中总液体量不超过反应室的1/3 蒸 馏
操 作 步 骤
★打开进气管
蒸 馏

操 作 步 骤
打开进气管，进入蒸 汽加热，然后夹住排 废液管。使反应室液 体沸腾。（注意：不 超过反应室体积）
操 作 步 骤
准备10ml刻度吸管，洗涤干净备用。 移取10ml硫酸放入凯氏烧瓶中：将刻度吸
管放入凯氏烧瓶颈上部，微微松开食指缓缓放 出硫酸，并不断转动烧瓶。 注意：凯氏烧瓶口与硫酸瓶口靠近，食指紧按 刻度吸管管口，勿使硫酸外滴到他处。

★加入硫酸的操作

硫酸移取
操 作 步 骤
（五）消煮
消 煮

●硼酸

2%硼酸溶液：2克硼酸 溶解在100ml水中(W/V)， 需加热溶解。加入混合 指示剂0.25%（V/V）， 摇均，硼酸溶液呈淡紫 红色
●NaOH

40% NaOH溶液(M/V)
●蒸馏水
四、主要仪器设备--（一）分析天平

分析天平：感量0.0001g
仪 器 设 备
来自百度文库
（二）电炉

电炉：变阻电炉，可调整温度
蒸 馏
★降低锥形瓶，使冷凝管末端离开硼酸液面， 再蒸馏１分钟，蒸馏水冲洗冷凝管末端。
操 作 步 骤
蒸 馏
（九）滴定

操 作 步 骤
酸式滴定管的准备 ★检查与试漏 ★涂油 ★洗涤 ★用盐酸标准溶液润洗 ★装入盐酸溶液 ★排气泡
滴 定
★酸式滴定管的准备
操 作 步 骤
滴 定
记录初读数（两位小数） 1号 0.05 ml 2号 0.20 ml （两位小数） 用标准盐酸溶液滴定锥形瓶里的硼酸溶 液，边滴边摇，由蓝色变为灰红色为滴 定终点。 记录终读数（两位小数） 1号 10.20ml 2号 11.35ml （两位小数）
★夹住排废液管
蒸 馏
操 作 步 骤
★蒸馏过程
蒸 馏

操 作 步 骤
硼酸溶液吸收氨液， 由红色变为蓝色，计 时，蒸馏四分钟，降 低锥形瓶，使冷凝管 末端离开硼酸液面， 再蒸馏１分钟，用蒸 馏水冲洗冷凝管末端， 洗液流入锥形瓶，蒸 馏结束。 排除废液 并冲洗。
操 作 ★反应室液体沸腾。（注意：不超过反应室） 步 骤 硼酸溶液吸收氨液由红色变为蓝色
方法： ⑴将盛有样品的长纸条放入粗 天平上约重。 ⑵再将盛有样品的长纸条放 入电子天平上称重
操 作 步 骤
样品的称量
⑶凯氏烧瓶横置，小心将盛有样品的长纸条放入凯氏烧瓶中，凯 氏烧瓶竖立样品倒入凯氏烧瓶底部，勿使样品倒入凯氏烧瓶颈部。
操 作 步 骤
样品的称量
⑷再将凯氏烧瓶横置，水平移出长纸条，放入天平回称纸重

浓HCl 1.7ml/1000ml水，C(HCl)=0.0200moL/L （密度1.18，质量分数36） 标定基准物质：无水碳酸钠 高温电炉270-3000 C灼烧40-50分钟（瓷坩埚） 称重0.O400g/份（ 3份）放入洗涤干净烘干的锥形瓶中，溶于 50ml水。 混合指示剂 5-10滴 用C(HCl)=0.0200moL/L滴定 终点由绿变为暗红色 C(HCl)= m/(V1-V2)/0.05299
操 作 步 骤
（三）加入混合催化剂

称样纸约重（粗天平）
操 作 步 骤
混 合 催 化 剂

粗天平称取混合催化剂6.4g

混合催化剂放入凯氏烧瓶中：
凯氏烧瓶横置，小心将盛有混合催化剂的纸条放入凯氏 烧瓶中，凯氏烧瓶竖立混合催化剂倒入凯氏烧瓶底部
混 合 催 化 剂
操 作 步 骤
（四）加入硫酸


滴 定
滴 定
★滴定终点：灰红色
灰红色
滴定过量：红色
滴 定
★滴定终点：比较
操 作 步 骤
滴 定
操 作 步 骤 计算盐酸标准溶液用量： V2=初读数-终读数 1号： V1-2=10.20-0.05=10.15(ml) 2号： V2-2=11.35-0.20=11.15(ml)

七、空白测定
操 作 步 骤
将凯氏烧瓶放入 通风橱内的消煮 架上，倾斜60度 左右。打开排风 扇，排出有害气 体及酸雾。

电炉加热：
开始小火，待样品焦化泡沫消失， 再加强火力(酸雾在颈部2/3处泠凝)直至 呈透明的蓝绿色，再继续加热2h。消煮 过程中要不断转动凯氏烧瓶，以使焦化 的样品浸入硫酸溶液加速消煮过程。 消煮过程溶液颜色的变化： 黑色→深褐色→浅褐色→黄色→黄绿色 操 →蓝绿色→蓝色