大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的研制及检测

或Ｓ ａ一５去水梨 醇三油酸酯），Ｔ ｅ 一０聚氧 乙烯 脱水 ｐ ８（ ｎ ｗｅｎ８ （
山梨 酸 ） 甲醛 液 、 硬 脂 酸 铝 。 ； １１ 仪 器 及 设 备 ．５ ． 光 学 显 微 镜 ，温 箱 ， 高 压 灭 菌 锅 ，
组 织粉碎 机 ，离心机 等 由山东农业 大学 动科 院临床 系实
中图分 类号 ：￥ ５ ． ８ ９７ ７ ９
大肠 杆菌 是引起 重要 畜禽疾 病 的病 原菌 之一 ，近年 来 ，随着 大量 高效抗菌 药物 的普遍 应用 ，大肠杆 菌 的抗 药 性 也越 来 越 强 ，这 给 防 治 大肠 杆 菌 病 带来 很 大 的 困
１ ． 细菌计数 （ 注培养法） 检测样 品一 做成８ ．３ ２ 倾 个适当 倍数稀释一选 择最后２ ３ ，每个稀释加 ｌ 于２ 平皿中 ～管 ｍｌ 个
１ ． 细菌培养液 的制备 ．１ ２
制备 ｌＯ 普 通 肉汤培养 基高 Ｏ ｍｌ
粒大小 ： 磅２ ｍｉ冷却 ； 同时 制备 多个 １ ０ 营养琼脂 培 ５ ０ ｎ ０ ｍｌ
２ 试验结果
表 １ 油 乳剂 灭火 苗物理 性 状检查 结果
养基 ，灭菌 备用 。 １ ． 增 菌培 养及 细 菌灭活检验 ．２ ２ 在普通 肉汤培 养 中接
效力检查 。试验 结果表 明，该油乳剂灭活 苗制作 工艺合理 ，性质稳定 ，并 能对 易感 动物 形成有效 保护 ，保护率达９％， ０
在预防鸡大肠肝菌病的发 生 中起重要作 用。
关键字 大肠肝 菌 油乳剂 灭活苗 检测 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ —７ ３２ １）５０ １—２ ０ ７１ ３ （０ ２０ —０ ３０ 后细菌计数。加０５ ．％的福尔马林灭活菌液２ ｈ ４。
项 目 细 菌计数
无菌 检查
扩 散试 验 粘度 检查 稳定性 检 查 颗粒 大 小 不扩 散 ６ ｓ 不分 层 １ ２ｔ －ｇ ｍ
种 大肠杆 菌种液 ，每个 三角 烧瓶接 种５ ｌ ７Ｃ培 养２ ｈ ｍ ，３ ￣ ４
２１ ０ ２年第 ５期 （ 总第 １ ４ ８
试验
大肠杆菌油 乳剂 灭活疫苗 的研制及检测
王照军① 董丽华② 宋倩倩① 王 明权③
（ 山东农业大学动物科技学院 泰安 ２ １１ ② 山东省临清市畜牧 中心 ① ７０ ７ ③ 山 东省 招远 市宋 家兽 医站 ）
摘要 本试验详 细阐述 了大肠杆 菌油乳剂灭活苗的制备过程 ，并对 灭活 苗进行 了无菌检 查，物 理检 查，安全检 查和
验 室提 供 。
１ 方法 ． ２
将 疫 苗滴 于 蒸 馏水 表 面 ，观 察 油 苗扩 撒 程 度 ；粘 度 测 定 ：用 ｌ 直 径１ ｍ ｍｌ ． ｍ吸管 ，室温 垂直放 出０ ｍｌ ２ ． ，记录所 ４ 需时 间；稳 定性 测定 ：油苗经３ ０ ｒ ｉ 离心１ｍｉ；颗 ０ ０／ｍ ｎ ５ ｎ
１ ． 培 养基 ．２ １
麦康 凯琼脂 ，普通 肉汤 ，普通 琼脂等 培
５ ，接 种 于 普 通 营养 琼 脂 及 厌 氧 肉汤 中 ，３ ￣ 养 ｍｌ ７Ｃ培
２ｈ ４ ，观察有无细 菌生长 。（ ）安全检验 。取 健康的２ 日 ２ ０ 龄ＡＡ肉鸡５ 只、家兔 ２ 只肌 内注射２ ｌ ｍ ，又取 同样 数量 的 肉鸡 和家兔 腹腔注 射２ ，并做对 照组 ，饲养 １ｄ ｍｌ ５ ，观 察 肉鸡家 兔 临床表现 。（ ）效力检 验 。取 油苗肌 肉注射 ２ ３ Ｏ 日龄雏鸡 １ 只 ，０１ｒｌ ０ ． ｎ 只，另设 ｌ只对 照 ，２ ｄ ３ ／ ０ ５ 以后，用 以上致病性大肠杆菌血清型 １８ １ ９ 只，腹腔注射，观 ０ ～ ０ ＋／
ｌ１ 大肠杆 菌样 品 来 自山东聊城临清市５ 肉仔 鸡养 ＿． １ 个
殖 场 的 大 肠 杆 菌 病 病 死 鸡 ， 无 菌 采 取 心 、 肝 、脾 病 料 ，
剂 ，以Ｔ ｅ一０ ｗｅｎ８ 为水 相乳化剂 。将油相 与水相 按一定３１ ：
比例混合 ，组织 捣碎机高速 １０ ０／ ｉ搅拌５ ｎ ，经４ ｈ ００ｒ ｎ ｍ ｍｉ ８
灭 活 制 成 油 乳 剂 疫 苗 ，抽 检 、 分 装 备用 。
于 麦康 凯琼脂培 养基划 线分 离纯化 培养 ；并通 过试 管凝 集 试验确 定其血清 型主 要为０３，Ｏ ８ ７，扩大培养 作 ２ ６，０ ８ 为大肠杆菌种液 。
１ ． 油 苗品质 检 查 （ ）无 菌 检验 。取 油乳 剂疫 苗 ．５ ２ Ｉ
数。
１ － 油 乳 剂 的 配 制 及 灭 活 疫 苗 的 制 备 白 油 佐 剂 配 制 ．４ ２ 方 法 ： 白油 ：ｐｎ８ ：ｗｅｎ８ ＝ ０７６２４ 合 再 加 总 重 量 Ｓ ａ一０Ｔ ｅ一０ ９ ：．：．混
１ 材料方法
１１ 材 料 ．
２ ％的硬脂酸铝混合均匀 ，１６Ｃ高压灭菌及为 白油佐剂 。 １＂ 本试验制备 的油乳剂为单 向性 油包水型（ ｏ ， 以１ 号 白 ｗ／ ） ０ 油 为 油相 ，以Ｓ ａ一０ 油相 乳 化剂 ，硬 脂酸 铝 为稳 定 ｐ ８为 ｎ
察 １ｄ （ ）物 理 性 状 检 查 油 苗 滴 于 蒸 馏 水 表 面 试 验 ： ５。 ４
养基 ，购 白天津英博伦生化试剂有 限公 司。 １１ 试验 动物 家兔和健 康鸡 ， 由山东农业 大学 动科 ．． ３ 院畜牧场提供 。
１１ 试 剂 １ 号 医 用 白 油 ； Ｓ ａ一０去 水 梨 醇 单 油 酸 酯 ） ．４ ． ０ ｐ ｎ８ （
一
难 。因此研 制大 肠杆菌 不 同血清型 的油 乳剂疫 苗特别 是
自家灭 活疫苗 ，越来越 受到 重视 并被广 泛的采 用 。本 试 验 对致病 性大 肠杆菌 进行 了培养 ，研制 了大肠 杆菌 油乳 剂灭活疫苗 ，对油乳剂疫苗 的制备 、检测作 以阐述 。
加 营 养琼脂 培 养基 （ ６ 取 个平 皿） ７ 一３ ℃，２ ｈ 养一 计 ４培