SDS-PAGE原理及结果技巧分解
SDS-PAGE操作方法
SDS-PAGE操作方法SDS-PAGE教程1 SDS-PAGE原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS （十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。
当分子量在15 KDa 到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K –bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。
如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature 上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。
现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。
你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！SDS-PAGE各试剂配制方法30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
sds-page电泳的基本原理
SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析技术，通过电泳分离蛋白质样品的方法得到了广泛的应用。
本文将着重介绍SDS-PAGE电泳的基本原理。
一、SDS-PAGE电泳的概念SDS-PAGE是一种已经被广泛应用的蛋白质分离技术，它的全称是聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。
这种电泳技术利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过直流电场将蛋白质样品分离出不同电荷和大小的蛋白质成分。
二、SDS-PAGE电泳的原理1. 聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳中所使用的凝胶是由聚丙烯酰胺构成的。
聚丙烯酰胺凝胶具有一定的孔隙结构，可以根据蛋白质的大小和电荷来调整孔隙的大小，从而实现不同大小的蛋白质的分离。
2. SDS处理SDS是指月桂基硫酸钠，它是一种阴离子表面活性剂。
在SDS-PAGE 电泳中，将样品中的蛋白质经过SDS处理后，蛋白质表面都会均匀地吸附一定数量的SDS分子，并且使蛋白质呈负电荷。
这样，所有的蛋白质分子都会带有类似的电荷密度，可以消除蛋白质的本身的电荷特性，使蛋白质在电场作用下只受到电场力的作用，而不受到其他因素干扰。
3. 蛋白质分离将经过SDS处理的蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，然后通过电泳进行分离。
经电泳分离后，蛋白质会根据其大小和电荷迁移到不同位置，从而使不同的蛋白质分离开来。
三、SDS-PAGE电泳的应用SDS-PAGE电泳技术在生物化学和分子生物学研究领域应用广泛。
它可以用于研究蛋白质的分子量、纯度和比例，也可以用于检测蛋白质的存在和表达水平，同时还可以用于鉴定蛋白质的异构体等。
四、SDS-PAGE电泳的发展SDS-PAGE电泳技术自问世以来，经过不断的改进和完善，在蛋白质分离和分析领域一直处于领先地位。
未来，随着科学技术的不断进步，SDS-PAGE电泳技术也将会迎来新的发展，并在更广泛的领域得到应用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE测定蛋白质分子量
02 实验材料
所需的试剂和溶液
丙烯酰胺（AA）：用于制备凝胶，是聚合反应 的单体。
甲叉双丙烯酰胺（MBA）：交联剂，增加凝胶 的交联度。
N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）：催化剂， 加速交联聚合反应。
所需的试剂和溶液
过硫酸铵（APS）
引发剂，产生自由基，引发聚合反应。
SDS
十二烷基硫酸钠，用于变性蛋白质并促使其 带负电荷。
发展新型分离技术
随着生物技术的不断发展，可以发展新型的蛋白质分离技术， 如二维电泳、毛细管电泳等，以提高蛋白质分离的分辨率和准
确性。
应用多维度分析
在后续实验中，可以将SDS-PAGE与其他蛋白质分析技术相结 合，如质谱技术、免疫学检测等，进行多维度分析，更全面地
了解蛋白质的性质和功能。
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白质带负电荷，从而在电场中向正极移动。
聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，能够根据蛋白质分子量的不同
03
对其进行分离。
蛋白质的分子量测定
通过比较标准蛋白的迁移率和已知分 子量的标准蛋白，可以大致测定出待 测蛋白质的分子量。
蛋白质的迁移率与其分子量的对数成 反比，因此可以通过计算待测蛋白与 标准蛋白的相对迁移率来推算其分子 量。
甘氨酸
作为分子量标准品。
Tris-HCl缓冲液
维持电泳过程中的pH值稳定。
所需的仪器和设备
电源
为电泳提供电力。
凝胶板
放置凝胶的框架。
垂直电泳槽
提供电泳所需的基 本结构。
移液器
精确添加试剂和溶 液。
紫外透射仪
检测蛋白质条带。
实验前的准备事项
清洗电泳槽和相关器具，确保无残留物。 准备好所需的试剂和溶液，并确保其在有效期内。
sds-page分离蛋白的原理
sds-page分离蛋白的原理SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种在实验室中常用的生物化学技术。
SDS-PAGE可以用来分离蛋白质，使研究者能够研究它们的结构和功能。
SDS-PAGE的基本原理是利用电泳现象将复杂的混合物分离成单一的组分。
电泳是一种根据物质的电荷、大小和形状利用电场作用通过凝胶进行分离的方法。
SDS-PAGE是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离蛋白质的一种方法。
蛋白质分子因其分子量和分子结构不同，在SDS-PAGE中将被分离为单独的、清晰的带状带。
这些带状带每个代表一个不同的蛋白质。
通过观察这些蛋白质带状带，可以获得蛋白质分子的相关信息，如分子量（MW）和含量。
在SDS-PAGE中，聚丙烯酰胺凝胶被用作固定相。
凝胶是通过将聚丙烯酰胺单体和交联剂混合后形成的。
这种凝胶可以形成微孔和孔径，使凝胶能够分离不同大小的蛋白质分子。
在准备样品时，蛋白质分子通常会在缓冲液中添加SDS (十二烷基硫酸钠）。
SDS是一种表面活性剂，可以使蛋白质分子带有负电荷并具有等电点（pI）价值。
当SDS蛋白质混合物被加入聚丙烯酰胺凝胶电泳电场中时，它们会在电泳作用下向负极移动。
这是因为凝胶的孔径大小使得分子量大的蛋白质分子移动缓慢，分子量小的蛋白质分子移动较快。
SDS-PAGE还需要在样品上和凝胶中加入还原剂和染色剂。
还原剂可以断裂蛋白质分子的二硫键，并使氨基酸带上负电，而染色剂则通过与蛋白质分子中的某些氨基酸或特定结构相互作用来着色。
这些特殊的化学试剂可以使蛋白质更容易在凝胶上定位，并且可以观察到蛋白质分子的相对含量。
总的来说，SDS-PAGE是一种有效的蛋白质分离技术，可以帮助生物学家了解蛋白质分子的研究方向。
任何要研究或描绘蛋白质质量、酸碱平衡、多肽结构或寻找抗原、肽链或酶活性的科学家都需要使用这种技术。
sds-page的分离原理
sds-page的分离原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，其分离原理主要基于蛋白质的大小和电荷差异。
具体而言，SDS-PAGE包括以下几个步骤：
准备样品：将待分离的蛋白质样品加入含有SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂（如2-巯基乙醇）的缓冲液中。
SDS可以使蛋白质带负电荷，并且通过断裂蛋白质的二级和三级结构，使其获得线性结构以便于分离。
加载样品：将经过处理的样品加载到聚丙烯酰胺凝胶的样品孔中。
电泳：应用电场使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中迁移，通常正极位于凝胶底部，负极位于顶部。
由于SDS提供了负电荷，蛋白质在电场作用下向阳极迁移。
同时，凝胶的孔径大小可以根据需要进行调整，以便不同大小的蛋白质能够得到有效分离。
分离：由于蛋白质的迁移速度与其分子量呈反比关系，较小的蛋白质在电泳过程中移动得更快，而较大的蛋白质则移动得较慢。
这样，在电泳过程中，蛋白质会被分离成一个个带状区域，形成所
谓的蛋白质条带。
可视化：完成电泳后，可以使用染色剂（如Coomassie蓝染剂）对凝胶进行染色，使蛋白质条带可见。
通过测量蛋白质条带的迁移距离和参考标准物质的迁移距离，可以计算出待分离蛋白质的相对分子量。
总之，SDS-PAGE利用SDS和电泳技术，根据蛋白质的大小和电荷差异，实现了对蛋白质的分离与分子量的估计。
SDS-PAGE电泳的基本原理和应用
SDS-PAGE电泳的基本原理和应用1. SDS-PAGE电泳的基本原理1.1 电泳原理SDS-PAGE是一种基于凝胶电泳的蛋白质分析技术。
其中SDS是十二烷基硫酸钠（Sodium Dodecyl Sulfate）的缩写，是一种表面活性剂，能够使蛋白质样品中的蛋白质在电场作用下带负电荷，同时也能够给蛋白质提供线性结构。
1.2 凝胶电泳凝胶电泳是一种利用膠體凝膠將生物物质分开的电泳技术。
在SDS-PAGE中，常使用聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）作为电泳介质。
聚丙烯酰胺凝胶是一种聚合物凝胶，通过调整聚丙烯酰胺单体和交联剂的比例，可以调整凝胶的孔径。
1.3 SDS-PAGE的步骤SDS-PAGE主要包括以下几个步骤：•准备样品：将待测蛋白质样品添加SDS、还原剂和草酸，使蛋白质样品变性和解离。
•准备凝胶：制备聚丙烯酰胺凝胶，将之倒入电泳槽中，插入电泳板。
•加载样品：将准备好的样品加入凝胶双孔板中，注意标记样品位置。
•电泳：将准备好的样品盖在电泳槽上，接上电源进行电泳分离。
•显色染色：将分离出的蛋白质进行显色染色，以观察结果。
•图像分析：利用成像仪或凝胶图像分析系统对染色的凝胶图像进行定量分析。
2. SDS-PAGE电泳的应用2.1 蛋白质分析SDS-PAGE电泳是蛋白质分析的基础技术，通过对蛋白质样品进行电泳分离，可以获得蛋白质的表观分子质量、纯度和组成信息。
这对于研究蛋白质结构、功能以及与疾病的关系等具有重要意义。
2.2 分子生物学研究SDS-PAGE电泳在分子生物学研究中有多种应用。
例如，可以用于检测基因表达的变化，比较不同条件下的蛋白质组分等。
此外，SDS-PAGE也可以用于鉴定蛋白质的亚细胞定位、研究蛋白质与其他分子（如核酸、小分子化合物等）的相互作用等方面。
2.3 药物研发SDS-PAGE电泳在药物研发领域也有广泛应用。
例如，可以用于药物候选化合物与蛋白质之间的相互作用研究，评估药物的结合能力和亲合力。
SDS-PAGE原理及结果分析技巧课件
蛋白质在电场中会带电并在凝胶中移动，根据蛋白质分子量的不同，分离效果尤为显著。
SDS-PAGE的原理
1
样品处理
将待分离的蛋白样品添加SDS和还原剂，使之均质并去除与蛋白质分子量无关的 影响因素。
2
凝胶制备
制备聚丙烯酰胺凝胶，将凝胶浸泡在缓冲液中，直到完全交换缓冲液。利用缓冲 液在凝胶中形成pH梯度。
蛋白质分析软件
利用软件分析和解析SDS-PAGE 的光密度曲线，获取蛋白质的分 子量和含量等重要信息。
结果分析的基本原则
1 确认实验重复性
结果比较前应该确保实验 的可重复性，包括条件和 等量样品。
2 正确选择染色方法
染色的方法不同会影响蛋 白质条带的清晰度。
3 标准品的鉴定和确定
选择合适的分子量标准品 确定要检测的蛋白质分子 量范围。
结果分析的常见技巧
条带密度
密度越高，代表含量越丰富； 密度越低则代表含量越少。
比较分析
对比两个或以上样品的分离情 况和分子量等信息。
精细分析
利用一些特殊的处理和分析方 法，深入研究某一结果，如半 定量分析、分析带的异质性、 修改成像等。
结果分析的常见问题
条带分离不清晰
检查凝胶和样品的处理，或更换蛋白质分子量标准品。
SDS-PAGE原理及结果分析 技巧
本次课件将介绍SDS-PAGE技术的原理和步骤，并分享结果分析的基本原则、 常见技巧、问题和注意事项。
SDS-PAGE的定义
什么是SDS-PAGE?
SDS-PAGE，即聚丙烯酰胺凝胶电泳，是一种分离蛋白质的常用方法。
SDS-PAGE的作用？
SDS-PAGE可以将复杂的蛋白质混合物分离出各个单一的蛋白质分子，有化分析结果 的象征。
简述SDS-PAGE的基本原理及其应用
简述SDS-PAGE的基本原理及其应用1. SDS-PAGE的基本原理SDS-PAGE（即聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种广泛应用于蛋白质分离和分析的电泳技术。
它基于蛋白质的大小和电荷差异，通过在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳来分离样品中的蛋白质。
SDS-PAGE可以用于定性和定量分析蛋白质样品。
1.1 凝胶制备凝胶是SDS-PAGE分离蛋白质的平台。
最常用的是聚丙烯酰胺凝胶，它通过聚合丙烯酰胺单体形成网状结构。
凝胶可以根据需要选择不同的孔径，从而调整蛋白质的分离范围。
1.2 样品处理在进行SDS-PAGE之前，样品通常需要经过处理。
样品中的蛋白质会被添加一种名为SDS（十二烷基硫酸钠）的阴离子表面活性剂。
SDS会破坏蛋白质的三维结构，并赋予蛋白质一个负电荷。
反应的结果是，蛋白质以线性形式存在，并具有与其分子量成比例的电荷量。
此外，样品通常还需要经过热处理，以打断蛋白质间的非共价连接。
1.3 电泳分离将经过处理的样品加载到凝胶中，然后进行电泳过程。
在电场的作用下，蛋白质带着负电荷向着凝胶的阳极迁移。
由于负电荷的大小与蛋白质的分子量成正比，具有较小分子量的蛋白质会迁移得更远。
凝胶中的孔隙结构会阻碍蛋白质的大规模移动，从而实现了对不同分子量蛋白质的分离。
1.4 染色和成像蛋白质分离完成后，需要对凝胶进行染色来可视化蛋白质条带。
常用的染色方法包括银染和可溶性染料染色。
银染法灵敏度高，可检测到微量的蛋白质。
染色完成后，使用成像设备记录并分析蛋白质条带。
2. SDS-PAGE的应用SDS-PAGE技术被广泛应用于生物学研究和生物工艺领域。
以下是SDS-PAGE 的一些主要应用：2.1 蛋白质分离和纯化通过调整凝胶中的孔径和蛋白质样品的处理条件，可以实现对复杂蛋白质混合物的分离和纯化。
根据分离的结果，可以进一步研究和鉴定感兴趣的蛋白质。
2.2 蛋白质定量SDS-PAGE可以用于蛋白质的定量分析。
通过与已知浓度的标准蛋白质样品进行比较，可以估算未知样品中蛋白质的浓度。
SDS-PAGE原理、方法详解
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）一、材料准备（1）丙烯酰胺单体（Arc）：在交联剂作用下形成聚丙烯酰胺（2）N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）：交联剂（3）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：阴离子去污剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。
由于SDS带有大量负电荷，当与蛋白质形成复合物后好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖，即消除了蛋白质分子之间电荷差异。
配制方法：10g SDS，用双蒸水溶解并定容至100ml，室温保存。
（4）10%过硫酸铵（Ap）：引发剂。
配制方法：0.1 g过硫酸铵溶解于1ml双蒸水中。
过硫酸铵会缓慢分解，应新鲜配制。
（5）N、N、N’、N’－四甲基乙二胺（TEMED）：其碱基催化AP产生氧自由基，激活单体形成自由基，发生聚合。
配制方法：原液使用。
应使用电泳级TEMED。
（6）30%丙烯酰胺凝胶贮液（Arc-Bis贮液）配制方法（50mL体系）：14.55 g丙烯酰胺＋0.45 g N，N-甲叉双丙烯酰胺，先用40ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至50 ml，0.45μm滤膜过滤。
用棕色瓶储存于4℃（丙烯酰胺单体贮液在储存过程中因光和碱催化发生脱氨反应，会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸，储存液应测定pH值不超过7.0。
丙烯酰胺单体贮液应在暗色瓶中保存，每隔数月须重新配制。
丙烯酰胺具有很强的神经毒性和致癌性，并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量时必须戴手套和面具。
）（7）分离胶缓冲液（pH8.8的Tris-HCl缓冲液）：1.5M Tris-HCl，pH8.8。
配制方法：9.08 g Tris溶解在40ml 双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值8.8，再用双蒸水加至50ml。
4℃保存。
（8）浓缩胶缓冲液（pH6.7的Tris-HCl缓冲液）：1.0M Tris-HCl，pH6.8。
配制方法：6.06 g Tris溶解在40 ml双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值6.8，再用双蒸水加至50 ml。
SDS-PAGE原理步骤详细介绍含图片业内借鉴
专业课件
7
蛋白质-SDS胶束的特点 （1）形状像一个长椭圆棒 （2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS 胶束基本上是相同的 （3）长轴的长度则与亚基分子量的大 小成正比
专业课件
8
胶束在SDS-PAGE系统中的电泳迁 移率不再受蛋白质原有电荷的影响， 而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即 蛋白质或亚基分子量的大小。
当蛋白质的分子量在15KD— 200KD之间时，电泳迁移率与分子量 的对数呈线性关系
专业课件
9
3、影响SDS电泳的关键因素 （1） 溶液中SDS单体浓度 大多数蛋白质与SDS结合的重量比 为1：1.4 （2） 样品缓冲液的离子强度 低离子强度的溶液中，SDS单体才 具有较高的平衡浓度
专业课件
10
（3） 二硫键是否完全被还原 当二硫键被彻底还原后，蛋白质分
专业课件
2
一、SDS-PAGE的基本原理
（一）蛋白质分子的解聚 样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子
去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的 电泳迁移率主要取决于亚基分子量的 大小，而电荷因素可以被忽略
专业课件
3
1、SDS
阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂
断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构
专业课件
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三、方法 1、分类 （1）根据对样品的处理方式的不同
还原SDS电泳 非还原SDS电泳 带有烷基化作用的还原SDS电泳
专业课件
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（2）根据缓冲系统和凝胶孔径的不同
连续电泳 不连续电泳
（3）根据电泳的形式
圆盘电泳 垂直电泳
平板电泳 水平电泳
专业课件
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专业课件
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专业课件
sds-page的原理,说明其在物质分离与检测的步骤
序一：认识SDS-PAGESDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质电泳技术，可以对蛋白质进行分离和检测。
它通过凝胶的孔隙大小和电泳的受力使蛋白质在凝胶中进行分离，是生物化学实验中的重要手段。
今天我们就来深入探讨SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤。
序二：SDS-PAGE的原理在SDS-PAGE技术中，其原理主要包括两个方面：SDS和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
1. SDS的作用SDS是一种阴离子表面活性剂，它的主要功能是将蛋白质变性并赋予负电荷。
蛋白质经过SDS处理后，其构象被完全展开，获得了相同的质量比电荷的分布，使得蛋白质在电泳过程中只受到电场的作用而不再因其本身的结构而迁移速度有差异。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶是一种网状结构的凝胶，其孔隙大小可以根据需要调整，能够使蛋白质根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。
序三：SDS-PAGE在物质分离与检测中的步骤1. 样品处理需要将待测样品进行SDS处理，在加热的条件下，SDS可以使蛋白质获得带负电的线性结构，这样可以消除蛋白质的构象差异，从而在电泳过程中只受到电场的作用而进行迁移。
2. 样品加载处理好的样品需要被加在SDS-PAGE的凝胶孔中，然后进行电泳操作。
3. 电泳电泳的原理是利用电场的作用，使具有电荷的离子或分子在电场中移动。
在SDS-PAGE中，蛋白质通过受到电场的作用，根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。
4. 凝胶染色蛋白质在凝胶中分离后需要进行染色，通常使用银染或共染技术，使蛋白条带清晰可见，便于进一步的分析。
序四：SDS-PAGE的个人观点和理解通过对SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤的了解，我深刻认识到这一技术在蛋白质研究领域中的重要性。
SDS-PAGE能够对蛋白质进行高效分离和定量，为蛋白质的性质和功能研究提供了有力的手段。
SDSPAGE-原理和方法
1
样品制备
将蛋白质样品加入SDS洗涤溶液，并
凝胶制备
2
加热变性。
制备聚丙烯酰胺凝胶，并加入
TEMED和过硫酸铵。
3
电泳
将样品加载到凝胶槽中，施加电场进 行电泳分离。
SDSPAGE的实验材料和仪器
材料
SDS洗涤溶液、聚丙烯酰胺凝胶、TEMED、 过硫酸铵等。
仪器
电泳槽、电源、显色剂。
SDSPAGE的优缺点
优点
简单易行、灵敏度高、分辨率好。
缺点
只适用于单一参数（分子质量）的分离。
结论和展望
SDSPAGE作为一种常用蛋白质分离技术，具有广泛的应用前景。未来的发展 方向是提高分辨率、扩大分离范围、提高自动化程度。
SDSPAGE的数据分析和结果解 释
通过比较不同样品的蛋白条带迁移距离、形状和密度，可以判断蛋白质的分 子质量、纯度和含量。
SDSPAGE的应用领域和意义
1 生物医学研究
用于研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
2 医学诊断
3 生物工程
用于检测蛋白质异常，如肿瘤标志物的检测。
用于蛋白质表达、纯化和检测。
SDSPAGE-原理和方法
SDSPAGE是一种常用的蛋白质分离和定量技术，利用电泳原理将蛋白质按照 分子质量大小分离出来。本节将介绍SDSPAGE的原理、步骤和方法、实验材 料和仪器、数据分析和结果解释、应用领域和意义以及其优缺点。
SDSPAGE的定义和原理
SDSPAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种电泳技术，使用聚 丙烯酰胺凝胶和SDS洗涤溶液，以分子质量为基准将蛋白质分离和定量。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS—PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。
该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。
SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中.SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略.蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材:试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50％甘油，2ml 10％的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0。
9ml蒸馏水。
可在4℃保存数周,或在－20℃保存数月。
2。
凝胶贮液：在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0。
8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。
过滤后置棕色瓶中,4℃保存，一般可放置1个月。
3。
pH8。
9分离胶缓冲液：Tris 36。
3g ，加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解，调pH8。
9，定容至100ml, 4℃保存。
4。
pH6.7浓缩胶缓冲液: Tris 5。
98g ，加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。
5. TEMED（四乙基乙二胺)原液6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制）7。
pH8。
3 Tris—甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6。
0g，甘氨酸28。
8g，加蒸馏水约900ml，调pH8。
3后,用蒸馏水定容至1000ml。
置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
器材：电泳仪，电泳槽,水浴锅，摇床。
SDS-PAGE-精心总结
Ø 易燃，有腐蚀性，请注意防护。
Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
过硫酸铵 分子式: (NH4)2S2O8 分子量: 228.20
性状：过硫酸铵是一种白色、无味晶体，常作强氧化剂使用，也可用作单体聚合引发 剂。它几乎不吸潮，由于能达到很高的纯度而具有特别好的稳定性，便于储存。另外， 它还具有使用方便、安全等优点。 储存及使用注意事项： 过硫酸铵属于非易燃品，但由于能释放氧而有助燃作用，因此必须在一定条件下 储存。首先必须存放在干燥、密闭的容器中，其次应避免阳光直射、热源、潮湿等不 利因素。另外，一些杂质如脏物、铁锈、少量金属以及还原剂可能引起过硫酸铵的分 解，在存放和使用过程中也必须注意。由于潮湿的过硫酸铵粉末及其水溶液有漂白和 轻微的腐蚀作用，因此使用过程中应避免眼睛、皮肤和衣物直接与其接触。 过硫酸铵的应用：过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。须 新鲜配制。 过硫酸铵是乳胶或丙烯酸单体聚合液、醋酸乙烯、氯乙烯等产品的引发 剂，同时也是苯乙烯、丙烯腈、丁二烯等胶体发生共聚作用的引发剂。
盐键
疏水作用 氢键
?
二. 实 验 过 程1.装配装置源自实验过程2. 凝胶配制
分离胶 (10%.5ml) 下胶 H2 O 30%Acr 2.6ml 1.7ml 3.0mol/L pH=8.8 Tris -HCl 0.6ml
*Acr有神经毒性
浓缩胶 (5%.3ml) 上胶 0.7ml 1.5ml 0.5mol/L pH=6.8 Tris -HCl 0.75ml
四.思考题
在不连续体系 SDS-PAGE 中 , 当分离胶加完后 , 需
在其上加一层水,为什么? 电极缓冲液中甘氨酸的作用? 在不连续体系 SDS-PAGE 中 , 分离胶与浓缩胶中 均含有TEMED和AP,试述其作用? 样品液为何在加样前需在沸水中加热几分钟?
SDS-PAGE原理及结果分析技巧ppt课件
电泳的应用
测定分子量
蛋白质分子量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值 线性相关：若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图， 可以获得一条标准曲线，而从未知蛋白质在相同电泳条件下的迁移率即可 在标准曲线上求得其分子量。
注意：①SDS单体的浓度，为保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为 1:4或1:3； ②样品缓冲液的离子强度；③二硫键是否完全被还原，许多蛋白质是由 亚基或两条以上肽链组成的，这一类蛋白质，测定时只是它们的亚基或单条肽链的 分子量；④使用软件分析需要图片调正；⑤上样量少，条带越宽分析偏差（偏小） 越大。
不连续系统具有对样品的浓缩效应
• • • • pH值的不连续 缓冲液离子成分的不连续 电位梯度的不连续 凝胶浓度的不连续以及电压的不连续.
加样
—
浓缩胶
加电场， 样品浓缩 在界面上 (5%, pH6.8)
分离胶
(8-15%, pH8.8)Fra bibliotek电泳结束
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电泳的应用
测定蛋白质分子量（亚基）；结合凝胶过滤层析 可用来测定蛋白质的分子量和聚合状态 分析纯度 测定蛋白质的含量 蛋白质水解分析 鉴定修饰（糖基化） 分离纯化 结合Western Blot、免疫共沉淀等方法可用来鉴别 蛋白质相互作用
PAGE 电泳原理
分子筛效应: 分子大小和形状 电荷效应：大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下
带有负电荷，表面负电荷多的蛋白质迁移快，反之则慢
（强阴离子去污剂SDS使蛋白结构松散，并带上大量负电荷， 导致本身电荷差别消失，因此SDS-PAGE分离蛋白主要依 赖分子大小，而非电荷或形状）
SDS-PAGE原 理及结果分析 技巧
sds-page原理
sds-page原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离
和纯化技术。
其原理基于蛋白质在电场中的迁移速度与其分子量成反比的特性。
首先，将待测蛋白质样品经过还原剂（如巯基乙醇）和SDS （十二烷基硫酸钠）处理，使蛋白质在溶液中全部变成带负电荷的复合物。
SDS具有两个主要功能：一是在蛋白质分子表
面均匀地吸附SDS分子，使蛋白质带有大量负电荷；二是通
过SDS分子的疏水尾部与蛋白质间的相互作用，使蛋白质变
为线性构象。
然后，将经过处理的样品加入含有聚丙烯酰胺的凝胶电泳胶质中。
聚丙烯酰胺经过电极电解质反应形成网状物质，构成凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶可以形成一系列孔隙，这些孔隙可以按照分子量的大小分离蛋白质。
在电泳进行时，电场的作用下，带负电的蛋白质复合物会向着电极迁移，迁移的速度与蛋白质分子量成反比。
较小分子量的蛋白质移动速度相对较快，而较大分子量的蛋白质移动速度相对较慢。
因此，蛋白质在凝胶中的分离程度与其分子量有关。
在电泳完成后，可以通过染色（如银染、荧光染等）或利用特定的蛋白质探针（如抗体或荧光标记探针）来检测和可视化分离的蛋白质。
然后，可以根据蛋白质的迁移距离和已知分子量蛋白质的迁移距离之间的关系推断待测蛋白质的分子量。
总之，SDS-PAGE通过利用电场迁移速度与蛋白质分子量之间的关系，实现了对蛋白质样品的分离与纯化。
它是一种简便、快速且广泛应用的分析方法，在生物学和生物化学领域中具有重要作用。
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE一. 实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。
在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。
由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。
蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。
基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。
二. 试剂器材30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制；注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；电泳缓冲液(1L)：称取试剂Tris 3.03g和甘氨酸 14.4g置于500mL烧杯中，向烧杯中加入约400mL双蒸水充分溶解，再加入10%SDS溶液1.0mL，以双蒸水定容至1L (自然pH值为8.3，无需再调)，4℃ 贮存，可重复使用5-6次；2×加样缓冲液(10mL)：取下列试剂置于10mL塑料离心管中0.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH6.8) 2.0mL10%SDS溶液 4.0mL甘油 2.0mL巯基乙醇 2.0mL溴酚蓝 0.02g，混匀后1mL分装，-70℃可贮存6个月；10%AP：称取(NH4)2S2O3 1.0 g，溶于10.0mL双蒸水中，分装成每份1mL，-20℃贮存；TEMED：分装成每份1mL，4℃避光贮存；水饱和正丁醇(100mL)：在玻璃瓶中加入50mL双蒸水和50mL正丁醇，振摇。
sds-page测定蛋白质相对分子质量原理
sds-page测定蛋白质相对分子质量原理
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种常用的蛋白质分析技术，用于测定蛋白质的相对分子质量。
SDS-PAGE原理基于以下几个关键步骤：
1. 蛋白样品的准备：将待测蛋白样品与SDS（十二烷基硫酸钠）混合，使蛋白质表面被负电荷包裹。
2. 样品加载和电泳过程：将蛋白样品加载到聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）中的孔洞中。
通常采用垂直电泳方式进行，将正电极和负电极连接至凝胶两端，通过电场使蛋白质向电泳方向迁移。
3. 分子分离：在电泳过程中，由于SDS的存在，样品中的蛋白质被完全解聚并带负电荷，使每个蛋白质分子的移动速率只与其相对分子质量成正比。
较小的蛋白质能够在凝胶中更快地迁移，较大的蛋白质则移动速率较慢。
4. 染色和可视化：电泳结束后，使用染色剂（如Coomassie蓝染色剂）将蛋白质染色，使其可见。
通过测量蛋白质在凝胶上的迁移距离，可以估计蛋白质的相对分子质量。
总结：SDS-PAGE利用SDS使蛋白质解聚并带负电荷，在电泳过程中按照相对分子质量的大小分离蛋白质，通过染色和测量蛋白质的迁移距离来估计其相对分子质量。
sds实验过程及原理
sds实验过程及原理【本篇提要】1、SDS-PAGE实验了解与原理2、SDS-PAGE实验所用试剂或溶液3、SDS-PAGE实验步骤【分述如下】一、SDS-PAGE实验了解与原理（一）相关概念理解SDS-PAGE，即sodium dodecyl sulfate-polyarcylamide gel electrophoresis，即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
它是一种根据蛋白质分子量分离样本中蛋白质的技术。
1、SDS十二烷基硫酸钠，一种阴离子表面活性剂，SDS可使蛋白质带负电荷，并线性化为多肽。
多肽在电场作用下向阳极移动。
由于电荷相同，因此蛋白质的分离完全与它们的分子量有关。
电泳中，分子量越小的多肽移动的越快，因为它们遇到的阻力更小。
2、PA聚丙烯酰胺，多肽电泳分离的介质，就是凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶是通过使用少量的交联剂（如N，N-’亚甲基双丙烯酰胺）使单体丙烯酰胺聚合而成。
丙烯酰胺（Acrylamide）和双丙烯酰胺（Bis-acrylamide）共聚形成丙烯酰胺的直链与双丙烯酰胺的相互联结形成三维网络结构。
丙烯酰胺和双丙烯酰胺的比例决定了凝胶的孔径。
（二）实验原理二、SDS-PAGE实验所用试剂或溶液（一）电泳缓冲液电泳缓冲液的成分是Tris-Glycine(pH8.3)：SDS lg，Tris 3g，Gly 14.4g，加超纯水溶解并定容到1000mL。
4℃冰箱保存。
（电泳缓冲液含有上述提到的SDS，用于改变蛋白质电荷，促使其线性化。
）（二）制备聚丙烯酰胺凝胶的试剂1、制备上层胶（浓缩胶）上层胶的孔径较大，一般对于所有分子量的蛋白质阻滞作用相同，因此蛋白质迁移速率相同。
（1）上层胶（浓缩胶）溶液（2）上层胶（分离胶）缓冲液(1.5mol／L)Tris 6.06g，加超纯水溶解，6mol/L HCl调pH6.8，并定容到100mL。
4℃冰箱保存。
实际实验中，可以购买上层胶溶液和下层胶缓冲液。
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不连续系统具有对样品的浓缩效应
• • • • pH值的不连续 缓冲液离子成分的不连续 电位梯度的不连续 凝胶浓度的不连续以及电压的不连续.
加样
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浓缩胶
加电场， 样品浓缩 在界面上 (5%, pH6.8)
分离胶
(8-15%, pH8.8)
电泳结束
+Байду номын сангаас
电泳的应用
测定蛋白质分子量（亚基）；结合凝胶过滤层析 可用来测定蛋白质的分子量和聚合状态 分析纯度 测定蛋白质的含量 蛋白质水解分析 鉴定修饰（糖基化） 分离纯化 结合Western Blot、免疫共沉淀等方法可用来鉴别 蛋白质相互作用
PAGE 电泳原理
分子筛效应: 分子大小和形状 电荷效应：大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下
带有负电荷，表面负电荷多的蛋白质迁移快，反之则慢
（强阴离子去污剂SDS使蛋白结构松散，并带上大量负电荷， 导致本身电荷差别消失，因此SDS-PAGE分离蛋白主要依 赖分子大小，而非电荷或形状）
优点：
• 凝胶孔径可调节（改变单体和交联剂的浓度），因此可根据被分 离物的分子量范围选择合适的浓度 • 灵敏度可达1mg • 分辨率高，可分离大小相差仅3%的多肽。尤其在不连续凝胶电泳 中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体 • 无电渗作用，只要纯度高，操作条件一致，样品分离重复性好 • 凝胶透明，有弹性，机械效能好 • 化学性能稳定，与分离物不发生化学反应; 对pH和温度变化较稳定
SDS-PAGE原理及结果分析技巧
20161111
聚丙烯酰胺凝胶
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（acrylamide,Acr）和交联剂 N’N’-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide, Bis）以29:1的比 例在聚合剂过硫酸铵(ammonium persulfate，APS)和催化剂 TEMED的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。
电泳的应用
测定分子量
蛋白质分子量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值 线性相关：若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图， 可以获得一条标准曲线，而从未知蛋白质在相同电泳条件下的迁移率即可 在标准曲线上求得其分子量。
注意：①SDS单体的浓度，为保证蛋白质与SDS的充分结合，它们的重量比应该为 1:4或1:3； ②样品缓冲液的离子强度；③二硫键是否完全被还原，许多蛋白质是由 亚基或两条以上肽链组成的，这一类蛋白质，测定时只是它们的亚基或单条肽链的 分子量；④使用软件分析需要图片调正；⑤上样量少，条带越宽分析偏差（偏小） 越大。
测定分子量
非还原/还原蛋白质状态的比较：为什么要用还原性电泳测分子量？
测定分子量
测定分子量
测定分子量
测定分子量
测定分子量
纯度分析
含量测定
含量测定
含量测定
蛋白质水解分析
蛋白质水解分析
组分分析
谢谢！